３２ 分析仪器 ２０１０年第５期 ＨＰＬＣ法测定联苯乙酸巴布剂中药物含量 及其体外透皮性能的研究 亚历山大 杜洪光 孙 莺。 谢 昀。 王 丽 王树明 （１．北京化工大学理学院，北京，１０００２９；２．北京康倍得医药技术开发有限公司，北京，１０００８９） 摘要 目的：建立联苯乙酸巴布剂中联苯乙酸含量的ＨＰＬＣ测定方法，研究联苯乙酸巴布剂（ＬＤＨ—Ｃａｔａ— ｐｌａｓｍ）的体外透皮释放性能，并与国外商品样品（卜Ｃａｔａｐｌａｓｍ）进行了比较。方法：高效液相色谱法，色谱柱；Ｗａ— ｔｅｒｓ ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃ】８柱（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５ ｍ）；流动相：甲醇一乙酸铵水溶液（６０：４０）（乙酸调节ｐＨ一３．６）；流速：１．０ ｍＬ／ｍｉｎ，检测波长：２５４ｎｍ，进样量：１０ Ｌ。用离体豚鼠皮肤作为透皮屏障，采用改进的Ｆｒａｎｚ扩散池测定联苯乙 酸巴布剂的体外透皮性能。结果：在ｌ＿２６～２Ｏ．１６ ｂｔｇ／ｍＬ浓度范围内，联苯乙酸浓度与峰面积之间呈良好线性关 系，相关系数ｒ＝０．９９９９；定量限为０．０５／，ｇ／ｍＬ；回收率为９８．７ ～ｉ００．０ 。ＬＤＨ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ与Ｊ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ的 体外透皮方程均符合Ｈｉｇｕｃｈｉ方程（Ｑ—ｋｔ“ ），且两者的体外透皮过程相似，各时间点的透皮速率无显著性差 异。结论：该方法快速、简便，重复性好，可用于联苯乙酸巴布剂的含量测定及其体外透皮释放量的测定。 关键词ＨＰＬＣ法联苯乙酸 巴布剂 体外透皮 １ 引 言 联苯乙酸是一种非甾体抗炎药物＿１］，可以缓解 和消除疼痛、肿胀和炎症，尤其对前列腺素所引起的 肩周炎、腱鞘炎、风湿性关节炎、肌肉疼痛和其它外 吸收检测器，Ｅｍｐｏｗｅｒ色谱工作站；岛津ＵＶ一２４０１ 紫外分光光度计；Ｍｅｔｔｌｅｒ ＡＴ２６１型电子天平；ＴＫ一 ６０Ｂ型Ｆｒａｎｚ扩散池（上海锴凯科技贸易有限公司）。 甲醇（色谱纯，美国Ｈｏｎｅｙｗｅｌｌ Ｂ＆Ｊ公司）；乙酸 铵、冰乙酸、磷酸二氢钾、氢氧化钠、氯化钠（分析纯， 伤疼痛嘲，具有良好的疗效。但是，由于胃肠道消化 液的抑制，联苯乙酸可引起烧心和胃炎等副作用，因 此不宜直接口服，可通过经皮给药系统进行给药，最 常用的剂型是巴布剂 卜 。巴布剂具有给药剂量准 北京化学试剂公司）；纯水自制（使用Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ纯水系 统）；联苯乙酸（批号：０９１２２７）、联苯乙酸精制品（纯 度：９９．９％，批号：０９１２３０）及联苯乙酸巴布剂３批（批 号１００２２３，１００２２５，１００２２７；规格：７０ｍｇ／１４Ｏｃｍｚ）均由 确、药量成分可控并缓释、生物利用度高、使用舒适 方便和副作用小等优点［７］。 北京康倍得医药技术开发有限公司提供；Ｊ—Ｃａｔａ— ｐｌａｓｍ（日本帝国制药株式会社，规格：７０ｍｇ／１４Ｏｅｍｚ）； 关于联苯乙酸原料药及其在人体内和大鼠体内 血药浓度的分析方法已有报道［８ 引，但对联苯乙酸 巴布剂中药物含量的测定未见文献报道。本文建立 豚鼠（雄性，２５０±３０ｇ，北京大学医学部动物中心，许 可证号：ＳＣＸＫ（京）２００５—０００３）。 ２．２溶液的制备 ２．２．１对照品储备溶液的制备 了测定联苯乙酸巴布剂中药物含量的高效液相色谱 法，并通过豚鼠皮肤进行了联苯乙酸巴布剂体外透 皮性能实验 ，对联苯乙酸巴布剂（ＬＤＨ～Ｃａｔａ— 取联苯乙酸精制品２５ ｍｇ，精密称定，置于 ｌＯＯｍＬ容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀， 得对照品储备溶液。 ２．２．２供试品溶液的制备 ｐｌａｓｍ）与日本生产的联苯乙酸巴布剂（Ｊ—Ｃａｔａ— ｐｌａｓｍ）的透皮性能进行了对比。 ２ 实验部分 ２．１仪器与试药 Ｗａｔｅｒｓ Ａｌｌｉａｎｃｅ ２６９０液相色谱仪，２４８７双波长 分别取联苯乙酸巴布剂，剪成细条，置ｌＯＯｍＬ 磨口锥形瓶中，加甲醇ｌＯＯｍＬ，浸泡２４小时；精密 量取浸泡液１ｍＬ至１００ｍＬ量瓶中，加流动相稀释 至刻度，摇匀，经微孔滤膜（０．２￣ｔｍ）过滤，取续滤液， 作者简介：亚历山大，男，硕士研究生。Ｅ—ｍａｉｌ：ａｌｅｘｅｇｅｅ＠ｙａｈｏｏ．ｔｏｍ 通讯联系人：杜洪光，男，教授，博士生导师，主要从事药物新制剂及分析方法的研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｄｈｇ＠ｍａｉｌ．ｂｕｃｔ．ｅｄｕ．ｃｎ ２０１０年第５期 备用。 ２．２．３空白对照溶液的制备 分析仪器 ３３ ｍｍ，５／ｚｍ）；流动相：甲醇一０．０２ｍｏｌ／Ｌ乙酸铵水溶液 （６０：４０，ｖ／ｖ）（乙酸调节ｐＨ一３．６）；流速： 按处方工艺制备不含联苯乙酸的空白巴布剂， １．０ｍＬ／ｍｉｎ；检测波长：２５４ｎｍ；柱温：３Ｏ℃；进样 量：１０１ｚＬ。理论塔板数以联苯乙酸计算为５８００。将 ７．５９￣ｇ／ｍＬ对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液 采用与供试品溶液同样的制备方法制成空白对照溶 液。 ２．３色谱条件与专属性试验 色谱柱：Ｗａｔｅｒｓ ＳｕｎＦｉｒｅ Ｃｌ８柱（１５０ｍｍ×４．６ 分别进样，记录色谱图（见图１），联苯乙酸的保留时间 约为１１．０ ｍｉｎ。 １ ６０ ２．０３００ ４．０５ ０。６ 。００ ７，０。８．０。９．。００１０’０１１‘０１６２￣ｌ如妇ｌ铷 １．０’２肿３．０。０ ４．０。０５丽Ｅ ７．０’０８．０９，’００ １￣００。ｌ洳Ｉ抽ｌ抽１抽ｌ铷０．０１．６０ ２．０３．００ ４，０５０６０ ６．０６ ７．２１０８６０９．０１６０００Ⅲ叫∞１３０ｌ６＾伽ｌ姗 ｔ（ｍｉｎ）（ａ） ｔ（ｍｉⅡ】（ｂ） ｔ（ｍｉｎ】 （ｃ Ｊ ｗ即卯 ２ Ｏ ４ 图１ 联苯乙酸对照品（ａ）、巴布剂样品（ｂ）和空白巴布剂样品（ｃ）的高效液相色谱图 饥 １ ５ ６ ％明 ２ Ｏ ５ ２．４线性关系 精密吸取联苯乙酸对照品储备液，用流动相稀 释成１。２６、２．５３、５，Ｏ６、１０．１２、２０．２４￣ｇ／ｍＬ的系列 表１回收率试验结果 ７ ６ ７ 诣加加 ６ ２ ５ ９ ８ 罟８ ５ 标准溶液。按上述色谱条件依次进样测定，记录峰 面积，以峰面积为纵坐标、浓度为横坐标，用最小二 ９８．７ ９８．９ 乘法进行线性回归，回归方程为：Ｙ一５．６４×１０ Ｘ ５．１２×１０。，ｒ一０．９９９９。 ９８．４ ２．５定量限和检出限 ９９．２ ９９．５ ９９．７ 将联苯乙酸对照品溶液逐步稀释，进样１０“Ｌ， 按Ｓ／Ｎ＝１０和Ｓ／Ｎ一３计算，方法的定量限和检出 限分别为０．０５￣ｇ／ｍＬ和０．０２￣ｇ／ｍＬ。 ２．６重复性试验 ９９．８ ９９．９ 按供试品溶液的制备方法，平行制备６份供试 品溶液，分别进样测定，计算含量的ＲＳＤ值为０．２９ ，１ＯＯ．２ 说明本方法的重复性好。 取两份供试品溶液，在室温下放置０、４、８、１２、 ２．９样品含量测定 ２．７稳定性试验 按上述方法测定了３个批号的联苯乙酸巴布剂 样品，用外标法计算含量，结果如表２所示。 表２联苯乙酸巴布剂含量测定结果 （ 一６） ２４ｈ后进样，按上述色谱条件测定，记录峰面积，计 算ＲＳＤ值为０．３７ 和０．３１ ，表明供试品溶液在 ２４ｈ内稳定性良好。 ２．８回收率试验 按供试品溶液的制备方法，加样制备低中高３ 个浓度的溶液各３份，进样测定，结果见表１。３个 浓度的平均回收率分别为９８．７％，９９．５ ，１００．０ ；ＲＳＤ分别为０．２６ ，０．２５％，０．２１ 。 ３４ ２．１０体外透皮实验 分析仪器 Ｊ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ：Ｑ一０．９７７４。 ２０１０年第５期 １２２．２０ｔ 。一４７．６３，ｒ一 ２．１０．１皮肤的制备 以敲颅法处死豚鼠后，用电动剃刀剃净腹、背部 由拟合结果可知，ＬＤＨ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ与Ｊ—Ｃａｔａ— 的毛，用温水洗净皮肤，立即剥离皮肤，去净皮下 脂肪，浸于生理盐水中，大约１Ｏ分钟后取出，将豚 鼠离体腹部皮肤剪成适当大小的块，固定在Ｆｒａｎｚ 扩散池上部，皮肤角质层面向外，将Ｆｒａｎｚ扩散池加 满生理盐水，排空气泡，置于冰箱中４℃保存，备用。 ｐｌａｓｍ的体外透皮方程均符合Ｈｉｇｕｅｈｉ方程（Ｑ— ｋｔ ）。在２４ ｈ内，ＬＤＨ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ贴剂的透皮量 略高于Ｊ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ贴剂的透皮量。ＬＤＨ—Ｃａｔａ— ｐｌａｓｍ与．卜Ｃａｔａｐｌａｓｍ各时间点的透皮速率无显著 性差异。 ２．１０．２透皮试验方法 将固定好皮肤的Ｆｒａｎｚ扩散池取出，用滤纸吸 干上面的生理盐水，将Ｆｒａｎｚ池内的生理盐水倾倒 干净后，加入磷酸盐缓冲液（ｐＨ６．８）作为溶出介质， 体积１８ｍＬ，注意排空气泡。取联苯乙酸巴布剂 （ＬＤＨ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ）和日本生产的联苯乙酸巴布剂 （卜Ｃａｔａｐｌａｓｍ）进行称重、编号，揭去防粘层，分别贴 于皮肤的角质层面。转子转速为３００ｒ／ｒａｉｎ，在３７± ０．５℃下进行体外皮肤透过量试验。于ｌｈ、２ｈ、４ｈ、 ８ｈ、１２ｈ、２４ｈ分别取样２ｍＬ，经０．２ ｍ滤膜过滤， 取续滤液，待测。取样后更换溶出介质，并注意排空 气泡。 ２．１Ｏ．３体外透皮实验结果 将滤液按上述色谱条件分别进行测定，代入标 准曲线计算单位面积累积透皮量（Ｑ，￣ｇ／ｃｍ ）。以 时间ｔ（ｈ）对两种联苯乙酸巴布剂各取样点的单位 面积累积透皮量（Ｑ，￣ｇ／ｃｍ。）作图，结果见图２。 ４ＯＯ 一 售 ３０ｏ ２００ １００ Ｏ ｔ（ｈ） 图２联苯乙酸ＬＤＨ－Ｃａｔａｐｌａｓｍ与Ｊ－Ｃａｔａｐｌａｓｍ的 透皮释放曲线 纯非线性拟合得到巴布剂体外透皮方程及相关 系数： ＬＤＨ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ：Ｑ一１１９．１５ｔ 一２８．１０， ｒ一０．９７６２； ３讨 论 ３．１样品的处理 实验中对联苯乙酸巴布剂样品的前处理方法进 行了考察，比较了甲醇和乙醇作为提取溶剂，不同溶 剂体积（５０、１００、２００ｍＬ）、不同浸泡时间（１２、２４、 ４８ｈ）对提取结果的影响，结果表明，用甲醇１００ｍＬ 作为提取溶剂，浸泡２４ｈ，可提取完全，且色谱图中 干扰峰少。 ３．２流动相 实验中对流动相进行了考察，比较了甲醇一水、 甲醇一０．１ 乙酸溶液、甲醇一乙酸铵溶液作为流动 相的分离情况，最终选择甲醇一乙酸铵溶液（ｐＨ＝ ３．６）为流动相，联苯乙酸的峰形好，与其它峰分离良 好。 ３．３检测波长 将联苯乙酸对照品的甲醇溶液在１９０￣４００ ｒｉｍ 波长范围内进行紫外扫描，选择了最大吸收波长 ２５４ｎｍ作为检测波长。 ３．４体外透皮性能 ＬＤＨ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ与Ｊ—Ｃａｔａｐｌａｓｍ的体外透皮 方程符合Ｈｉｇｕｃｈｉ方程（Ｑ—ｋｔ 。），且两者的体外 透皮过程相似，各时间点的透皮速率无显著性差异。 参考文献 １ Ｋｏｈｌｅｒ Ｃ，Ｔｏｌｍａｎ Ｅ，Ｗｏｏｄｉｎｇ Ｗ ｅｔ ａ１．Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｆｕｒ— ｓｃｈｕｎｇ，１９８０，３０（４Ａ）：７０２—７０７ ２伍晓春．华西药学杂志，２００５，２０（４）：３２０—３２１ ３ Ｃｈｏｉ Ｙ Ｋ，Ｙｕ Ｈ Ｓ，Ｌｅｅ Ｙ Ｍ ｅｔ ａ１．ＰＣＴ Ｗ０ ２００５／ ０４６６５３ Ａ１ ４ Ｃｈｏｐｄａ Ｇ。Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｅａ１ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ Ｆｏｒ Ｙｏｕ，２００６， ４（１）：ｌ一１０ ５ Ｓｃｈｅｉｎｄｌｉｎ Ｓ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓ，２００４，４（６）：３０８ ３１２ ６ Ｗｏｋｏｖｉｅｈ Ａ Ｍ，Ｐｒｏｄｄｕｔｕｎ Ｓ，Ｄｏｕｂ Ｗ Ｈ ｅｔ ａ１．Ｅｕｒｏｐｅ— ２０１０年第５期 分析仪器 ３５ ｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ， ａｎ Ｊｏｕｒｎａ１ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ１ ａｎｄ Ｂｉ２００６，６４（１）：１—８ ７ Ａｇａｒｗａｌ Ｖ，Ｓｉｎｇｈ Ｓ Ｋ，Ｒｅｄｄｙ Ｉ Ｋ ｅｔ ａ１．Ｄｒｕｇ Ｄｅｖｅｌｏｐ一 ｍｅｎｔ ａｎｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｐｈａｒｍａｃｙ，１ ９９９， ２５（５）：６５９—６６５ １２ Ｋａｔａｇｉｒｉ Ｙ，Ｎａｏｒａ Ｋ，Ｉｃｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａ１．Ｃｈｅｍｉｃａｌ＆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ，１９８９，３７（１０）：２８５８—２８６０ １ ３ Ｎａｏｒａ Ｋ，Ｋａｔａｇｉｒｉ Ｙ，Ｉｃｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａ１．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１９９０，５３０（１）：ｌ８６—１９１ １４ Ｋａｔａｇｉｒｉ Ｙ，Ｎａｏｒａ Ｋ，Ｉｃｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａ１．Ｊｏｕｒｎａ１ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１９８８，４３１（１）：１３５—１４２ １ ５ Ｎａｏｒａ Ｋ，Ｋａｔａｇｉｒｉ Ｙ，Ｉｃｈｉｋａｗａ Ｎ ｅｔ ａ１．Ｂｙｏｉｎ Ｙａｋｕ— ８ Ｃａｒｌｕｃｃｉ Ｇ。Ｍａｚｚｅｏ Ｐ，Ｐａｌｕｍｂｏ Ｇ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉａ， １９９６，４３（５／６）：２６１—２６４ ９ Ｃａｒｌｕｃｃｉ Ｇ，Ｍａｚｚｅｏ Ｐ，Ｐａｌｕｍｂｏ Ｇ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａ— ｔｏｇｒａｐｈｙ，Ｂ：Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９６，６８２（２）： ３１５—３ｌ９ ｇａｋｕ，１９８９，１５（４）：２９２—２９８ １６刘喜全，李强，王树明，等．中国新药杂志，２００７，１６ （１５）：１２０５－１２０７ １０ Ｃａｒｌｕｃｃｉ Ｇ，Ｍａｚｚｅｏ Ｐ，Ｐａｌｕｍｂｏ Ｇ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ＆（７）：１１０７—１１１５ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，１ ９９６，１ ９ １７ Ｍａｈａｊａｎ Ｎ Ｍ，Ｍａｎｍｏｄｅ Ａ Ｓ，Ｓａｋａｒｋａｒ Ｄ Ｍ。Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｊ Ｐｈａｒｍ ａｎｄ Ｔｅｃｈ，２００９，２（２）：１—１６ １１ Ｚｈａｎｇ Ｃ，Ｗａｎｇ Ｌ，Ｙａｎｇ Ｗ ｅｔ ａ１．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａ— ｃｅｕｔｉｃａ１ ａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ａｎａｌｙｓｉｓ，２００９，５０（１）：４１—４５ 收稿日期；２０１０—０５—０５ ＨＰＬＣ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ４－ｂｉｐｈｅｎｙｌａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆｅｌｂｉｎａｃ ｃａｔａｐｌａｓｍ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｋｉｎ ｐｅｒ— ｍｅａｔｉｏｎ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ＬＤＨ。ｃａｔａｐｌａｓｍ．Ａｌｅｘａｎｄｅｒ Ｅ．Ｇｅｏｒｇｅ ，Ｄｕ Ｈｏｎｇｇｕａｎｇ ，Ｓｕｎ Ｙｉｎｇ。，Ｘｉｅ Ｙｕｎ ， Ｗａｎｇ Ｌｉ ，Ｗａｎｇ Ｓｈｕｍｉｎｇ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｂｅｉ— ｊｉｎｇ，１０００２９；２．Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｋａｎｂｅｉｄｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｏ．，Ｌｔｄ，Ｂｅｉｊｉｎｇ，１０００８９） Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ４－ｂｉｐｈｅｎｙｌａｅｅｔｉｅ ａｃｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｆｅｌｂｉｎａｃ ｃａｔａｐｈｌａｓｍ，ａｎｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｋｉｎ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｂｅｙ— ａｖｉｏｒ ｏｆ ＬＤＨ—ｃａｔａｐｌａｓｍ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｕｓｉｎｇ ａ Ｗａ— ｔｅｒｓ Ｓｕｎｆｉｒｅ ｃｏｌｕｍｎ（１５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５ｕｍ）．Ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ａ ｍｉｘｔｕｒｅ ｏｆ ｍｅｔｈａｎｏｌ ａｎｄ ２０ ｍｍｏｌ／Ｌ ａｍｍｏｎｉｕｍ ａｃｅｔａｔｅ（６０：４０）ｂｕｆｆｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ａｄｊｕｓｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ｔｏ ｔｈｅ ＰＨ ｏｆ ３．６．Ｔｈｅ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｗａｓ １．０ ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ２５４ｎｍ，ａｎｄ ｔｈｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ｗａｓ １０ｇＬ．Ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｋｉｎ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｂｅｈａｖｉｏｒ ｏｆ ＬＤＨ—ｃａｔａｐｌａｓｍ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｏｆ ａ ｑｕｉｎｅａ ｐｉｇ ａｓ ｔｈｅ ｔｒａｎｓ— ｄｅｒｍａＩ ｂａｒｒｉｅｒ ａｎｄ ａ ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｆｒａｎｚ ｃｅｌｌ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎＴｈｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｋｉｎ ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｂｅｈａｖｉｏｒｓ ｏｆ ＬＤＨ－ｃａｔａ— 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