饲料中酵母菌的筛选

饲料中酵母菌的筛选

一、

问题的提出：酵母菌单细胞蛋白常用于配制畜类饲料，如何从普通饲料中提取实验所需的酵母菌菌株？

二、

1.实验假设：

认为当前从市场上采集到的饲料标本含有实验所需的酵母菌，且酵母菌在饲料中的含量能够满足普通实验室提取所需的标准

2.理论依据：

（1）饲料样本中通常含有细菌、霉菌、酵母菌、放线菌。

（2）霉菌与放线菌属好氧菌，酵母菌为兼性好痒型，细菌多数好痒，少数厌氧。

（3）酵母菌的培养时间（2~3天）较霉菌（3~5天）和放线菌（5~7天）的培养时间短，较细菌（24h）的培养时间长。

（4）酵母菌能适应pH值（3~7.5）较低的培养基，其他三种菌则不能。

（5）上述四种菌的菌落特征区分度较大。酵母菌菌落表面一般光滑、湿润，有粘稠性，

大多数是乳白色，边缘呈褶皱状，用针不易挑取，且挑起后的菌块不易散开。

三、

实验目标：

获得纯度较高的酵母菌菌种，保存于冰箱中备用。

四、 实验方法

（1）：将购得的饲料用四分法获取样品20~30 g，然后置于研钵中研磨均匀。

（2）： 称取1g饲料，置于PDA液体培养基中（含氯霉素），经28 ℃，24 h，180 rpm 摇床富集培养。

（3）：取1ml 富集培养液，分别进行5个梯度稀释（1∶500，1∶1000，1∶1500 1∶2000 1∶2500）

（4）：用移液分别从每一稀释度各取0.1ml 稀释液，注于平板上，用涂布棒将样品涂布均匀。盖好培养皿，并倒置于28℃恒温箱中培养，每个梯度做三个重复。观察各培养基，直到形成清晰易辨的菌落。

（5）：配置pH=3的PDA固体培养基。

（6）：选定（4）中最接近酵母菌菌落特征的部分，用针尖挑取少量菌块，稀释100倍，点接于（5）中培养基表面，28℃下培养48 h。选取杂质较少的菌落，重复3次培养。

（7） 制取高层琼脂培养基，在普通试管中灌注大约10cm高的琼脂。从（6）中最后一次所得的菌落中选取杂质最少的菌落。稀释100倍后，进行穿刺接种。接种完后，在培养基表面加一层液体石蜡。28℃恒温箱中培养48小时，得到菌落后，重复进行三次。

最终得到的菌落即可认为是纯种酵母菌形成的菌落。即所得菌种为实验所需的酵母菌。

五、

将上述菌种接种在适宜的斜面培养基上，培养至产生大量菌落后注入灭菌的液体石蜡，使其覆盖整个斜面，再直立放置于低温（4～6℃）干燥处进行保存。