ELISA 步骤

准备：拆封后8周用完。

1. Enzyme conjugate 1*：11X +buffer （1:10）

Wash buffer 1X： 21X（50ml）+ MilliQH2O（1L） 2. 计算样本数，取strips：Calibrators，Samples 步骤：

酶标仪，450nm测OD值（30min完成） 加TMB substrate，每孔200ul 室温静置，15min 加TMB终止液，每孔50ul 加Enzyme conjugate 1*，各100ul 摇床（700-900rpm），室温，2h

Wash buffer洗涤6次，每孔350ul，避免浸泡 垂直握住微板，洗瓶冲洗，重复6次

加标准品、样品 各10ul 震荡5s，混合 Mouse IGF-1 ELISA kit

检测范围：62.5pg/ml—4000pg/ml 准备及注意（使用前1-2h内）：

1. 0.01M TBS or 0.01M PBS （pH7.2-7.6） 2. 初次使用前，各种试剂管离心数分钟。

3. 标准品稀释：4000,2000,1000,500,250,125,62.5,0 pg/ml (8 梯度) （稀释后分装，-20

保存，2d内用完）

4. 抗体工作液： 抗体：稀释液=1:99， 每孔100ul， 多配1-2孔。（样品数+10）*2 5. ABC工作液：ABC：稀释液=1:99，每孔100ul， 多配1-2孔。（样品数+9）*2 6. 抗体、ABC和TMB显色液使用前，37度平衡至少30min。 7. 多道移液器 （1 ml）

注意： 避免交叉污染，避免操作过程中酶标板干燥！ 试剂或样品稀释后，不可忘记混匀！

步骤： 计算检测数：总数=（样品数+9）*2，取板。8标+1 TMB空白显色孔。

加标准品、样品 各100ul （TMB空白显色孔不加） 30min后，配抗体工作液，37度平衡

酶标板加盖，37度，90min 甩去酶标板内液体，拍吸水纸,不洗。 加抗体工作液，每孔100ul 37度，60min （TMB空白显色孔不加） 20min后，配ABC工作液，37度平衡

P/TBS洗涤3次，每孔300ul，每次浸泡1min 加ABC工作液，每孔100ul （TMB空白显色孔不加） 37度，30min P/TBS洗涤5次，每孔300ul，每次浸泡1-2min ABC显色液，37度平衡。

加TMB显色液，每孔90ul 37度避光，反应25-30min 加TMB终止液，每孔100ul （蓝色立转黄色） 反应时间：标准品前3-4孔有明显梯

度蓝色，后3-4孔不明显

酶标仪，450nm测OD值 Mouse IGFBP-3 ELISA kit

检测范围：156pg/ml—10ng/ml 准备及注意（使用前1-2h内）：

8. 0.01M TBS or 0.01M PBS （pH7.2-7.6） 9. 初次使用前，各种试剂管离心数分钟。

10. 标准品稀释：10000,5000,2500,1250,625,312,156,0 pg/ml (8 梯度) （稀释后分装，

-20保存，2d内用完）

11. 抗体工作液： 抗体：稀释液=1:99， 每孔100ul， 多配1-2孔。（样品数+10）*2 12. ABC工作液：ABC：稀释液=1:99，每孔100ul， 多配1-2孔。（样品数+9）*2 13. 抗体、ABC和TMB显色液使用前，37度平衡至少30min。 14. 多道移液器 （1 ml）

注意： 避免交叉污染，避免操作过程中酶标板干燥！ 试剂或样品稀释后，不可忘记混匀！

步骤： 计算检测数：总数=（样品数+9）*2，取板。8标+1 TMB空白显色孔。

加标准品、样品 各100ul 酶标板加盖，37度，90min 甩去酶标板内液体，拍吸水纸 30min后，配抗体工作液，37度平衡

加抗体工作液，每孔100ul 37度，60min P/TBS洗涤3次，每孔300ul，每次浸泡1-2min 20min后，配ABC工作液，37度平衡

加ABC工作液，每孔100ul （TMB空白显色孔不加） 37度，30min P/TBS洗涤5次，每孔300ul，每次浸泡1-2min ABC显色液，37度平衡。

加TMB显色液，每孔90ul 37度避光，反应15-20min 加TMB终止液，每孔100ul （蓝色立转黄色） 反应时间：标准品前3-4孔有明显梯

度蓝色，后3-4孔不明显

酶标仪，450nm测OD值