ＬｌＪ东医药２００８年第４８巷第２９期 冰冻切片联合免疫组织化学技术在胸、腹腔 积液细胞诊断中的应用 谢梅，罗。高玟，黄传生，涂侃 （江西省肿瘤医院，江西南昌３３００２９：｝ ［摘要］ 应用冰冻切片联合免零Ｅ组织化学技术（简称联合检测）对１６０例恶性肿瘤患者的胸、腹腔积液进行检 测，并与直接细胞涂片检测结果进行比较。结果联合检测法阳性率为６０．０％，直接细胞涂片法为３６．３％，Ｐ＜ ０．０１。认为联合检测可明显提高胸、腹积液细胞诊断的阳性率及准确性，且操作简单、方便快捷，对肿瘤细胞的诊 断和鉴别诊断具有重要意义，可为临床选择正确的治疗方案提供较为可靠的依据。 ［关键词］ 细胞涂片；冰冻切片；免疫组织化学技术；胸腔积液；腹腔积液 ［中图分类号］ Ｒ４４６ ［文献标识码］ Ｂ ［文章编号］ １００２—２６６Ｘ（２００８）２９－００９５－０２ 胸、腹腔积液是多种恶性肿瘤的首发症状 。 ２００５年１月～２００７年６月，我们应用冰冻切片联合 免疫组织化学技术（简称联合检测 对１６０例肿瘤 ｍｉｎ×２次；⑤ＤＡＢ显色，苏木精复染，乙醇脱水，二 甲苯透明，中性树胶封片。光镜下阅片，ＣＫ、Ｖｉｍ、 ＬＣＡ、ｃａｈｅｒｉｎｉｎ阳性为包膜出现棕黄色颗粒，阳性对 患者的胸、腹腔积液进行检测，并与Ⅱ接细胞涂片检 测结果进行比较。现报告如下。 １资料与方法 照采用公司提供的阳性片，阴性对照采用ＰＢＳ作为 一抗。 １．２．２统计学方法采用ＳＰＳＳ１１．０软件行统计学 １．１临床资料１６０例恶性肿瘤患 ，年龄２８—８０ 处理，率的比较采用 检验，检验水准ｄ＝０．０５。 ２结果 岁，平均５６．５岁；胸腔积液６５例，腹腔积液９５例； 肺腺癌５７例，胃腺癌５３例，卵巢腺癌２５例，非霍奇 金淋巴瘤ｌ５例，恶性间皮瘤１０例。 １．２方法 联合检测法肿瘤细胞阳性９６例（６０．０％），其 中转移癌（ＣＫ阳性，余指标阴性）５８例，淋巴瘤 （ＬＣＡ阳性，余阴性）２８例，间皮瘤（Ｖｉｍ、ｃａｌｔｅｒｉｎｉｎ １．２．１ 积液检测 分别采用直接涂片法及联合检 测法行积液检查。①直接涂片法：Ｉ．又积液２０ ｍｌ，２ ５００ ｒ／ｒａｉｎ离心１５ ｍｉｎ，取沉渣涂片，行ＨＥ染色和 阳性，余阴性）１０例；直接细胞涂片法阳性５８例 （３６．３％），其中转移癌３２例，淋巴瘤１０例，恶性间 皮瘤５例，不能分类肿瘤１１例。联合检测法阳性检 出率明显高于直接细胞涂片法（Ｐ＜０．Ｏ１）。 ３讨论 瑞氏染色，封片，光镜下阅片。②联合检测法：取积 液５０ ｍｌ，２ ５００ ｒ／ｍｉ离心１５ ｍｉｎ，去上清液，用滤纸 条吸尽液体，加人冰冻ＯＣＴ包埋剂。置冰冻切片机 冷冻１０ ｒａｉｎ，取出沉渣及包埋剂混合物，再用ＯＣＴ 目前，临床上常用细胞直接涂片进行胸、腹腔积 液的诊断，但常因积液内肿瘤细胞少、分散；或部分 肿瘤细胞堆积成团造成局部细胞叠加过厚，导致诊 包埋，进行冰冻切片，连续切８片，冷藏保存。取ｌ 片进行ＨＥ染色，封固。其余根据诊断需要按照 Ｍａｘ Ｖｉｎｓｉｏｎ免疫组织化学法进行上皮膜抗原 （ＣＫ）、波形蛋白（Ｖｉｍ）、淋巴细胞共同抗原（ＬＣＡ）、 断的阳性率低 。 冰冻切片技术是一种成熟的病理制片技术，已 广泛用于病理诊断。其与直接涂片法比较，可全面、 间皮细胞（ｅａｌｒｅｔｉｎｉｎ）标记：①３％过氧化氢室温孵育 １５ ｒａｉｎ，消除内源性过氧化物酶，ＰＢＳ洗，ｌ ｒａｉｎ×２ 简单、快捷的收集积液内的肿瘤细胞；切片质量高， 视野清晰，细胞分布均匀，可明显提高肿瘤细胞的阳 性检出率和诊断准确性；而且细胞相对较集中，可明 显节约诊断时间．提高工作效率；特别对于有较大组 织块残存的样本，可重复性切片。采用Ｍａｘ Ｖｉｓｉｏｎ 次；。②滴加正常山羊血清，湿化孵育１５ ｒａｉｎ，以封 闭非特异性抗原，ＰＢＳ洗ｌ ｒａｉｎ×２次；③用加样 加入适当稀释倍数为ｌ：５００的一抗，４℃冰箱过夜， 复温，ＰＢＳ洗１ ｍｉｎ×２次；④滴加Ｍａｘ Ｖｉｓｉｏｎ复合抗 体试剂，入隔水式恒温培养箱３７℃孵育５ ｍｉｎ，洗１ 抗体系统对脱落细胞的冷冻切片进行免疫组织化学 ９５ ｔｌｉ．５￣医药２００８年第４８卷第２９期 染色标记 ，有良好的背景和阳性定位，无其他涂 片方法不能在玻片上对肿瘤细胞准确定位对照的缺 点；其同时对胸、腹腔积液中的肿瘤细胞进行ＣＫ、 ［参考文献］ ［１］Ｒｉｃｈｔｅｒ Ｔ，Ｎａｈｒｉｇ Ｊ，Ｋｏｍｍｉｎｏｔｈ Ｐ．ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｔｏｃａｌ ｆｏｒ ｕｌｔｒａｒａｐｉｄ ｉｍｕｎｏｓｔａｉｎｉｎｇ ｏｆ ｆｒｏｚｅｎ ｓｅｃｔｉｏｎｓ［ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ ｉｍｔｈｏｌ，１９９９．５２（６）： ４６ｌ—４６３． Ｖｉｍ、ＬＣＡ、ｃａｌｒｅｔｉｎｉｎ抗体标记，能区分肿瘤细胞的属 性：转移癌为ＣＫ阳性，淋巴瘤为ＬＣＡ阳性，恶性间 皮瘤为Ｖｉｍ、ｃａｌｒｅｔｉｎｉｎ抗体阳性。 ［２］刘梦海，梁忠泉，袁昌隆，等．痰液和胸腹水沉积物切片在肿瘤脱 落细胞【｝１的应用［Ｊ］．临床．Ｉｊ实验病理学杂志，２００３，１９（４）：４０９－ ４ｌ０． 总之，联合检测可明显提高胸、腹积液细胞诊断 的阳性率及准确性，且操作简单、方便快捷，对肿瘤 细胞的诊断和鉴别诊断具有重要意义，可为临床正 ［３］丁华墅，何向蕾，陈培解．免疫细胞化学在胸腹水细胞学鉴别诊 断巾的应用［ｊ］．临床病理学杂志，２００２。９（４）：２２０－２２２． （收稿日期：２００８－０８－２１） 确选择治疗方案提供较为可靠的依据。 ・经验交流・ 强肾丸辅助治疗慢性肾功能不全５４例疗效观察 段丽梅，王铮。李红 （开封市中西医结合医院，河南开封４７５００３） ２００２年１月～２００７年１２月，我们应用强肾丸辅助治疗 慢性肾功能不全（ＣＲＦ）５４例，现报告如下。 临床资料：１０７例ＣＲＦ患者均符合卫生部“中药新药治 疗尿毒症的临床指导原则”中西医诊断标准、中医辩证（脾 肾气虚、痰浊内盛）标准、纳入病例标准及排除病例标准。其 中男６６例、女４１例，年龄２１—６８（４０．０．４－３．５）岁，住院患者 抗感染、纠正酸碱电解质紊乱等，治疗组口服强肾丸（主要成 分为西洋参、黄芪、山药、白术、白扁豆、川芎、丹参、红花、豆 蔻、大黄等）６ ｇ／次，３次／ｄ；对照组口服尿毒清６ ｇ／次，３次／ ｄ。３０ ｄ为１个疗程，观察３个疗程。观察治疗前后两组肾 功能指标血、尿肌酐（ＳＣｒ、ＣＣｒ）ＢＵＮ及Ｈｂ变化。统计学处 理采用ＳＰＳＳ１１．０软件行ｔ检验和 检验，检验水准ｄ＝ ６２例，门诊患者４５例；原发病为慢性肾小球肾炎４３例，高血 压肾病３Ｏ例，糖尿病肾病３２例，多囊肾２例；病程＜１ ａ ４６ 例，１—２ ａ ３８例，≥２ ａ ２３例；肾功能不全失代偿期６１例，肾 功能衰竭期３１例，尿毒症１５例。将患者随机分为治疗组５４ 例和对照组５３例，其一般资料具有可比性。 方法：两组均予优质低蛋白饮食，结合控制血压、血糖及 ０．０５。参照卫生部中药新药治疗尿毒症的临床指导原则中 的疗效标准判定疗效。 结果：治疗组显效２２例，有效２３例，无效９例，总有效 率为８３．３３％；对照组显效１３例，有效２ｌ例，无效ｌ９例，总 有效率为６４．１５％。两组总效率比较， ＝４．４２，Ｐ＜０．０５。 两组治疗前后肾功能及血红蛋白变化情况见表１。 表１两组治疗前后肾功能及血红蛋白变化（ －－Ｉｓ） 注：与治疗前比较， Ｐ＜０．Ｏ１；与对照组治疗后比较， Ｐ＜０．０５ 讨论：ＣＲＦ以持续肾单位损害，并向终末期肾脏疾病发 展为特点。其治疗原则为阻止或延缓肾脏病进展及控制尿 术、扁豆健脾燥湿，川芎、丹参、红花祛瘀通络，大黄通腑排 毒。诸药协同，以达健脾补肾、化湿解毒，通腑祛瘀之功，以 毒症综合征，避免进一步肾损害。其属于中医“关格”、“虚 劳”、“癃闭”、“水肿”范畴，病位在肾，涉及脾胃、心肺、三焦 等脏腑，以脾肾气虚、湿浊不化、瘀阻脉络为其发病机理，强 肾丸以西洋参、黄芪、山药为主药，培补肾气；辅以豆蔻、白 期改善肾功能、减轻肾损害。本文治疗组有效率高于对照 组，各项指标改善情况亦明显优于对照组，且未发明显毒副 作用。证实强肾丸辅助治疗ＣＲＦ安全有效。 （收稿１３期：２００８－０７－０９）
