【爬片的准备】
1.爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片；
2.应用盖玻片，可根据自己的需要剪裁成合适的大小，以备置于6孔板、12孔板或24孔板；裁剪时可用前护士输液用于打开玻璃安瓶的小沙轮，或者是口腔科的那种小沙轮，轻轻划一下后，稍用力一掰就分开了。
如果接种大皿的话，我一般不将盖玻片切开，直接清洁后放入培养皿中，到染色时再将之切开，这样既保证了细胞均一性，又可同时做几个指标的染色。
3.将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了，如果不干净的话，细胞帖壁不好），放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒。
4.高压后取出放入烤箱中烤干，备用。烤干后可放入超净台中。
5.关于多聚赖氨酸，很多人都将玻片用此处理，以使细胞与玻片结合更牢。但我在做爬片时从来没用过多聚赖氨酸，细胞贴壁仍然很好，且在做后续的免疫细胞化学染色、TUNEL等凋亡检测、免疫荧光等也从未脱过片。
【细胞爬片】
1.胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中。
2.加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的
是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。
3.根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可
4.待细胞贴壁后，可去上清加含药培养基。
5.按照实验设计，作用一定时间后取玻片。取玻片时由于玻片与培养皿底结合较紧，张力较大，我一般将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以了。如果要做诸如24h，48h，72h等这样时间点的实验的话，将所需数量的爬片取出时应用酒精灯火焰烧一下针头和镊子。末取出的可接着继续培养。
【细胞爬片的固定】
细胞爬片取出后，一般用PBS洗2遍，然后再做固定。当然，根据研究目的，PBS洗也不是一定要做的，比如做凋亡的TUNEL染色时就避免洗，因为凋亡的细胞在洗的过程中有可能会脱落。
另外在保存细胞爬片的时候，我一般用培养皿或板，先在皿底放一层面巾纸，然后再放爬片，这样方便做实验时取片。然后盖上盖子，并在盖子上做标记，为避免混淆，可用透明胶带将盖子和皿连在一起。一般-20℃保存2-3个月的片子做免疫组化是没有问题的。
以下为常用的固定液
1. 冷丙酮 可用于一般的免疫组化染色。
将纯的丙酮预先放入冰箱-20℃后便为冷丙酮（放心，丙酮在此温度不会为固体的）细胞爬片取出后，PBS洗2遍，便可加入冷丙酮于-20℃（丙酮有很强的挥发性，注意将含有丙酮和爬片的器皿盖严，防止其挥发）固定10分钟。取出后，室温吹干，然后放入-20℃保存。
2. 多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光以及TUNEL染色。
主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等
室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存。
3. 95％乙醇，可用于免疫组化。
优点：穿透性强、抗原性保存较好。
缺点：但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度
室温固定15分钟后，将表面液体吹干，入-20℃保存。
4. 甲醛(福尔马林)应用最广
优点：形态结构保存好，且穿透性强，
缺点： 甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色； 分子间交联形成
的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。
细胞爬片IHC实验步骤：
1 .将已消毒的盖玻片（需要泡酸）置于培养皿中，按2乘104/ml的细胞密度将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片，爬满后进行免疫细胞组织化学染色鉴定。
2 .PBS清洗标本 2次 各 15min。
3 .4％多聚甲醛固定 15 min。
4 .空气干燥 5min。
5 .PBS清洗标本 2次 各 25min。
6.3%H2O2孵育 15 min。
9. PBS清洗标本 3次 各 2 min。
10.封闭血清孵育（5%正常二抗血清DPBS液） 20min。
11 .一抗孵育（PBS配，滴度1：200，湿盒）4度 过夜或37度 60 min。阴性对照最好用一抗来源血清，否则用PBS液
12. PBS清洗标本 3次 各 5 min。
13 .二抗工作液孵育（湿盒） 37O度30 min。
14 .PBS清洗标本 3次 各 5 min。
15. C液（湿盒） 37度 30 min。
16.PBS清洗标本 3次 各 5 min。
17.DAB显色（避光，镜下观察至棕色 ） 约3~10min。
18.蒸馏水洗 2次 1 min。
19.苏木素复染 0.5~1min。
20.自来水洗 30min。
21.树胶封片，观察！
有些朋友可能没做过细胞爬片的免疫组化染色，等做起来就会发现想的和实际的相差很远，做爬片总是和想象中有差别，实际操作中有很多细节问题处理不好，前功尽弃。
下面以我的失败和成功经验举例：
第一，盖玻片需要过酸，并且自来水、蒸馏水冲洗干净。两张或者以上的玻片很容易因为虹吸作用粘到一起，很容易冲不干净，很容易把两张完全重叠在一起的玻片当成一张，一定要看清楚。晾干片子最好是在消毒饭盒中进行，饭盒底面放上纱布，将玻片斜靠在饭
盒侧壁，玻片正面不要接触纱布，否则会粘上毛毛的。然后高压蒸汽灭菌，烤箱中烤干。
第二，爬片前最好用多聚赖氨酸或者层粘蛋白或者胶原溶液处理玻片，未处理过的细胞不容易贴壁，细胞系还好，原代细胞很少能贴得牢。这一步至关重要，否则在后面用PBS洗片时很容易将细胞洗掉。用这些促进细胞贴壁的溶液处理玻片后，放到培养皿之前需要用培养基冲洗一到三遍！层粘蛋白和胶原还好，多聚赖氨酸有几次我没冲结果细胞全部不贴壁。
第三，传代消化下来的细胞一定不要过多稀释，将浓一点的细胞悬液吹打混匀后滴在玻片上，几个小时后再追加培养基。
第四，玻片在培养皿中容易漂起，如果事先在皿中铺上液体很可能会不容易揭下来，或者揭下来时出印子在镜下很难看。漂起的玻片很容易两面都培养出细胞的，这时背面的细胞必须去除，挺难操作的，用PBS冲洗可能会伤到正面的细胞，用小镊子夹玻片很容易夹碎，也很容易脱落，小心点好。
第五，将玻片拿出后一定要记好哪边是正面，最好做玻片时将玻片切成长方形的。目前市场售的多为18mm x 18mm的盖玻片，或者24mmx24mm的盖玻片，正方形，很难分辨反正面，在某个角上打个缺口，对正方形是不中用的。可以用小砂轮切一下改成长方形，至于在某个角上用砂轮做个标记，理论上很简单，实际操作有难度。
第六，上面步骤都没问题后，玻片就需要进一步处理了，这里有几个细节，分述如下：
1.PBS对玻片是冲洗还是浸泡，我个人认为浸泡好，我吃过冲洗的亏，每一步后都要冲洗2-3次，有时还没等试验做完，大部分细胞已经被冲掉了，呵呵！我当时欲哭无泪啊！
2.4%的多聚甲醛或者别的固定液的温度是多少，有人认为4°C的好，有人认为37°C的好，我个人感觉，娇贵的原代细胞先在常温下固定较好，然后放到4°C冰箱中。我发现直接用4°C的溶液会造成细胞冷休克，从片上脱落。
3.用中性树胶粘盖玻片与载玻片时，尽量少滴树胶，一点点就够了，而且至少半个小时以上才能粘牢，防止在水中脱落。否则盖玻片就会移动，背面会出现树胶的印子，镜下很难看，而且擦不掉的。
4.固定好的片子放到冰箱中保存，我倒没怎么试过，我基本上做好的就直接做免疫组化。
细胞爬片的抗原修复
1.为什么讨论抗原修复的问题？
福尔马林固定时，组织中的许多氨基酸残基在分子内或分子间形成了醛键，使得
不少抗原决定簇被封闭。同时，由于甲醛的聚合作用，使蛋白质分子间相互交联形成大分子网络，也导致了抗原决定簇被掩盖，这就使得相当部分的抗原不能与抗体很好是进行反应。因此，抗原修复也是影响免疫组化染色结果的基本因素。
2. schwann细胞爬片后,我用过4%的多聚甲醛，很好。是爬片，不是石蜡切片对吧，那就不用抗原修复了。
3.我做过的是血管平滑肌细胞的爬片，当时一位临床病理科的老师告诉我用70％乙醇固定，在4度固定12小时以上，做免疫组化比较好，我做着效果还好。关键是配多聚甲
醛挺麻烦，还要60度水浴才溶解，呵呵，本人就图个简单了。
3.不用抗原修复，用1％Triton－PBS孵育可有助于暴露抗原。
4.我现在做的BAX和BCL-2是用丙酮固定,不需要抗原修复,可以直接做组化了,效果还可以.
5.细胞爬片用于免疫组化要不要脱蜡水化？要不要抗原修复啊？？
因为细胞爬片本来就不用石蜡包埋，一般固定之后，可以冻于-20长期保存；实
验时需要水化，一般20分钟左右；抗原修复不是必须的，因为细胞爬片要比组织切片抗原暴露好和保存的好，所以不需要修复。
但我看到过有的病理老师做Tunel时修复了一下，不过没什么影响。个人喜好的问题。
6.冷丙酮固定, 需要多一步tritonX100处理，以便于增加细胞的通透性。
7.细胞爬片的免疫组化是否需要抗原修复，如果需要应该用什么方法？另外免疫组化中应该注意什么问题？是否时间较长就容易出阳性结果？谢谢
Dongwp管理员：用多聚甲醛4度固定，一般不需修复，根据需检测的抗原和抗
原所处的部位而定，4度过夜的一抗孵育条件较易出阳性结果。
Victoh版主:的确不需要。
xiaodonglv0828;不需要抗原修复，抗原修复主要针对的是石蜡切片因固定剂、
石蜡的制作过程对抗原的交联或封闭作用。
8.要用Triton X-100做细胞穿孔的。
9.抗原修复主要针对的是石蜡切片因固定剂、石蜡的制作过程对抗原的交联或封闭作用。单细胞所用的固定剂和石蜡不一样，过程不是很繁琐，固定时间也短，不用修复，但要充分灭活。
10.很多文献都介绍用冷丙酮或乙醇固定。我比较了两者的效果，觉得用80%的冷乙醇固定10分钟，固定效果比较满意。用纯丙酮或乙醇固定，细胞收缩比较明显。
11.直接把培养板取出，吸出培养基，然后用预热的PBS洗三次（5min*3），就用4%的多聚甲醛固定做免疫组化，其余的步骤就没什么特殊了！
12.加不加Triton是和您要染细胞的抗原分布和用途有关：Triton的作用是在细胞膜上打孔，以便抗体进入！
a）如果要染抗原分布在细胞膜上面，那么就不能加Triton；
b）但是如果抗原分布在胞浆或核内，那加入Triton就显得比较重要（虽然细胞
在固定后的通透性较活细胞大，但是还不至于让任何东西都过去！）；
c）另外作电镜时一定不加Triton。
13.DAB显色完，不用酒精脱水，直接封片么？
细胞还可以，但是组织切片的最好还是酒精脱水。这样的观察结果会好一些！
14.聚甲醛固定后，tritonx－100通透，也可以不需要抗原修复的，正如xdb86所言在于你检测的抗原的要求，先不用修复，出不来再试一试！
15.整理过程中一些细胞爬片的小细节技巧
（1）爬片前最好用多聚赖氨酸或者层粘蛋白或者胶原溶液处理玻片，未处理过的
细胞不容易贴壁，细胞系还好，原代细胞很少能贴得牢。这一步至关重要，否则在后面用PBS洗片时很容易将细胞洗掉。用这些促进细胞贴壁的溶液处理玻片后，放到培养皿之前需要用培养基冲洗一到三遍！层粘蛋白和胶原还好，多聚赖氨酸有几次我没冲结果细胞全部不贴壁。
（2）PBS对玻片是冲洗还是浸泡，我个人认为浸泡好，我吃过冲洗的亏
（3）4%的多聚甲醛或者别的固定液的温度是多少，有人认为4°C的好，有人认
为37°C的好，我个人感觉，娇贵的原代细胞先在常温下固定较好，然后放到4°C冰箱中。我发现直接用4°C的溶液会造成细胞冷休克，从片上脱落。
（4）染色滴加抗体时，为了节省抗体，可以先把抗体滴加在干净的载波片上，然
后玻片的细胞面朝向抗体倒扣，同时注意防止气泡 和玻片的正反。一般24毫米的玻片只需要30-50微升抗体。当然如果操作不熟练，抗体又足够，那就直接在玻片的细胞面上加抗体吧 。
16.爬片的前期处理
（1）取干净的盖玻片（剪去一角，以作为正反的标记）若干，用洗衣粉轻轻擦洗后烤干（注意轻柔，不要留下明显痕迹，方便以后观察细胞）。
（2）硫酸重铬酸钾过夜。
（3）取出盖玻片后，用自来水反复冲洗20遍。
（4）用一蒸水漂洗10分钟，三蒸水冲洗3遍。
（5）晾干后泡纯酒精过夜（主要是脱脂，也可用95%酒精），用镊子夹出（不能用手去接触玻片，否则应重新泡酒精脱脂），蒸馏水清洗后自然晾干（烤干容易使玻片留下水迹，而晾干的则清新干净）。
（6）高温高压消毒。
（7）再根据实验要求考虑是否包被多聚赖氨酸。
个人的最后总结：细胞爬片做组化不需要抗原修复，但是需要用tritonx－100通透，如果不放心的话，先不用修复，出不来结果的时候再试一试修复！
细胞免疫荧光步骤：
1.细胞爬片；首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。
爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可，我选择在培养皿中爬。一为节约经费（培养皿可以重复利用）二来觉得培养皿口大，操作比较方便。培养皿消毒同上，消毒时记得消两把镊子
具体操作是：用胰酶消化好细胞，充分吹打，使之成单细胞悬液（注意：这一点很重要，关系到将来爬出来片子的质量）
取出消毒的培养皿，可以先加少量培养基（以使玻片与培养皿紧密接触），将玻片小心放入摆放其中，然后将单细胞悬液一滴一滴的滴到玻片上。最后盖上培养皿置于37度5％CO2的暖箱中培养，根据细胞生长状况，24小时或更长时间适时取出爬片。
爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒钟，然后在4％多聚甲醛中固定15分钟，然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意手法轻柔，要不然掉片很厉害。同时操作过程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功尽弃。
将做好的爬片置于滤纸上晾干，然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中性树胶彻底干了之后才能做后续实验，要不然玻片会掉下来的，就又是前功尽弃了 做好的细胞爬片可以放在－20保存备用，具体能保存多长时间不太清楚，当然尽量早用。
2.4%多聚甲醛固定10min(固定细胞器用预冷的70%甲醇+30%丙酮)；
3.PBS漂洗5min；
4.0.5% Triton 穿孔15min(丙酮固定法不用透化处理)；
5.PBS漂洗2次，每次5min；
6.1%BSA封闭30min；
7.加入1%BSA稀释的一抗，于37℃杂交2h；
8.PBS漂洗2次，每次5min；
9.加入1%BSA稀释的二抗，于37℃杂交1h；
10.PBS漂洗2次，每次5min；
11.5ug/ml DAPI染色2min；
12.抗淬灭封片剂封片。
抗淬灭封片剂:
2.5% DABCO (w/v)
50mM Tris(pH8.0)
90%甘油
1. 细胞爬片可以用含叠氮钠PBS液保存.但不知道具体浓度,请告知.多谢!!
加在液体中作为防腐剂的叠氮钠浓度一般为0.04--0.08%。但是我建议对于细胞爬片，还是尽量快的进行处理，以防不必要的问题！
2. louischen wrote:但我的细胞爬片经过4％多聚甲醛固定，PBS冲洗后直接就放在了－20度，还能用于免疫组化吗？！
应该没有问题，但是还是现作先染好些，以防抗原的丢失
3. mRNA原位杂交经4％多聚甲醛固定,固定液需加DEPC水。其它建议用甲醇固定。－20度保存
4. 如果是4％多聚甲醛固定，然后放在PBS中保存，在4度冰箱里保存两周没问题。时间再长就没试过了。
5. 丙酮中固定5－10分钟，然后风干，放置4度保存过夜应该是没有问题。不要固定过夜，蛋白质固定过度，会影响抗原的暴露，影响免疫组化结果。如果是胞浆或胞核抗原出现假阴性结果，可考虑应用0.5％的triton-100孵育30分钟，渗透细胞膜。如果玻片没有经过特殊处理，不要用其他抗原修复的方法，会造成掉片，我曾有过这方面的体会
6. 丙酮固定后，PBS洗涤3次，即可保存至4度冰箱备用。
7. （1）细胞爬片先用TBS洗3次，每次5分钟
（2）4%多聚甲醛固定，室温，20分钟
（3）70%-80%-90%-95%-100%梯度酒精脱水，通风橱内干燥，-80度保存。2周没有问题的，我保存过2个月都有信号，不过还是保存时间短一点的好
8. 我的心肌细胞爬片用不同浓度的乙醇依次脱水后,就放在室温中,因为是要拍电镜,
但是学校电镜坏了,呵呵,所以放了一个月后去拍,还是很好
9. 细胞爬片用4%多聚甲醛或冷丙酮等固定，用PBS冲洗后，晾干，放在-20度保存一个月没有问题的。
10. 细胞爬片，有机溶剂如4%多聚甲醛或冷丙酮等固定后，轻轻摇动玻片或培养皿等，静置2min左右，弃去固定液，不用PBS洗而是采用空气干燥，干燥后的标本可于-70℃长期保存。解冻时要小心抗原破坏，应先将标本转移于干冰预冷的固定液，然后再将混合液转移至室温下，固定液到达室温时取出标本，再用PBS冲洗，在做以后的步骤。
11. 我也做过细胞爬片的组化染色，不过没有遇到类似的问题。细胞培养好后用PBS洗一遍，然后4%多聚甲醛4度固定15分钟，自然风干。室温保存几周内都可以用的。我想这可能与抗原的类型有关，有的对氧化等损伤比较敏感，有的差一些。最好避光保存在4度，同时尽量隔绝空气。免疫荧光与普通DAB显色差别只再二抗的标记，样品的保存应该是没有多大差别的。
12. 细胞爬片丙酮固定后-20度保存，现在要再做免疫荧光，将保存的爬片拿出37度复温然后常规操作就可以了
13. 爬片做免疫组化的优势在于抗原新鲜，细胞形态保存较好。若爬片需长期保存并出现你这样的问题，原因可能是：1）试验步骤有误，建议重复并加阳性对照片。2）加一抗前处理同石蜡切片，可进行抗原修复，如胰酶消化或热修复。3）因为抗原抗体反应在液相中进行，故对已极度干燥的爬片充分水化很重要。建议试验前用PBS浸泡过夜。
14. 4%多聚甲醛或冷丙酮固定都可以，也有用无水酒精的，固定好后放-20度，2-3
个月是没有问题的。
15. 对于一般的细胞免疫组化，我的做法是：细胞爬片用冰的纯丙酮固定20MIN，再在通风柜将丙酮吹干，—-20度保存，用丙酮固定作用是沉淀蛋白质和糖，穿透性很强，保存抗原的免疫活性好。所以丙酮常用做细胞细胞爬片的固定剂。当然还是要根据你的实验目的决定用那种固定剂。
如：1．多聚甲醛(常用4%)：可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光染色。 主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等
2．乙醇。优点：穿透性强、抗原性保存较好。缺点：但醇类对低分子蛋白质、多肽及胞浆内蛋白质保存效果较差，使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度
3．甲醛(福尔马林)应用最广 优点：形态结构保存好，且穿透性强， 缺点： 甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色； 分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。
16. 4度是不能保存这么长时间（1个月）的，如果抗原已被分解，再修复也没用！
17. 弃去固定液，不用PBS洗而是采用空气干燥，干燥后的标本可于-70℃长期保存。
18. 爬片置于37度PBS中洗三次，每次3到5秒钟，然后在4％多聚甲醛中固定15分钟，然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意手法轻柔，要不然掉片很厉害。同时
操作过程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功尽弃。
将做好的爬片置于滤纸上晾干，然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中性树胶彻底干了之后才能做后续实验，要不然玻片会掉下来的，就又是前功尽弃了 做好的细胞爬片可以放在－20保存备用，具体能保存多长时间不太清楚，当然尽量早用。
19. 固定后放点PBS，然后放在4度冰箱中保存，我最长保存两个月的，然后再做免疫组化，应该没有太大的问题的。
20. 固定后4度可以存放一周，－20度存放半年，我现在也要做这个，实验室老师教的。
21. 四度放1周应该没问题的，你最好放在－２０度，我在－２０度放一个月都还出结果的．很多人作的片子很多，不可能一次作完，一个月没问题．
22. 最佳的固定及保存方法：
(1)中性缓冲福尔马林（不必调pH）：
福尔马林（40%甲醛，用时加入过量碱式MgCO3中和） 10.0ml
Na2HPO4.12H2o 1.9653g
NaH2PO4.2H2O 0.5460g
加0.85 %NaCl溶液溶解，定容至100ml。
（2）细胞固定：待细胞接近长成单层时，用镊子取出盖玻片，迅速于37℃PBS中漂洗2次，每次3-5秒，以清除血清。
（3）将盖玻片投入中性缓冲福尔马林溶液中室温固定30min。
（4）用镊子取出盖玻片，PBS漂洗2次，每次3-5秒，晾干保存于-20℃备用。可长期保存，做实验时，取出片子，入PBS湿润后即可进行你的实验。
可以用于做免疫细胞化学（H.E.)或免疫荧光。（本帖没有加分）
23. 细胞爬片固定以后要放在-20度的冰箱.1个月内可以用.
24. skywalkerzz wrote:过氧化氢处理这一步，用三蒸水稀释商品浓度为30％的过氧化氢，然后室温下玻片放在其中浸泡10min，是不是过氧化氢导致细胞严重脱片？
爬片应该用甲醇/双氧水，你的细胞极可能是过氧化氢导致严重脱片
25. 本人比较喜欢用4%得多聚甲醛，20分钟很好用的。保存的时候注意片子最好晾干，不要挤压，防止粘片和碎裂。
26. 细胞爬片固定好以后，如果要保存，我们的做法是倒掉固定液，PBS漂洗后干片保存在4度，最长半年没问题。
27. 1、用新鲜配制的预冷的4%多聚甲醛缓冲液室温固定15 min，PBS (0.01 mol/l, pH7.4)洗涤3遍后是否就可以进行免疫细胞化学染色了
2、爬片PBS (0.01 mol/l, pH7.4)洗涤3遍后是否能保存，怎样保存？
1、洗过就可以做免疫组化了。
2、固定过后自然干燥，不要洗，-20度保存。做之前再洗。
28. 细胞固定最好用丙酮或酒精，不要用4%多聚甲醛，以免抗原交联，这样组化时不用再抗原修复。细胞固定后可室温保存在丙酮中，不使之干燥。
29. 如果是检测膜上的物质,好象不能用酒精,
30. 适当密度后取出固定(丙酮-20固定10～20min)，再进行免疫染色。
31. 一批细胞爬片,如果细胞爬片是在玻璃上，冷丙酮固定15-20分钟，然后放-20度，没有问题。
如果细胞爬片是在24孔板或6孔板里进行，冷丙酮会腐蚀板子，最好4%多聚甲醛。
32. 细胞爬片用纯丙酮固定10分钟，取出干燥后用锡纸包裹，-70度保存。
33. 4%多聚甲醛固定后PBS水洗，自然干燥后用锡纸包裹，-20度冻存不超过1月。
34. 如果细胞贴壁困难，可将片子先用纯血清挂一层，凉干后再养细胞。
35. 可以买NUNC公司的专用细胞培养用盖玻片，商品名Thermanox™ Coverslips。高分子材料，耐高温灭菌，经过特殊表面处理，细胞容易贴附。可以用剪刀任意裁剪，使
用效果好。
上海生工有现货，不用国外定货。我使用后，觉得效果比玻璃盖玻片效果好很多。
36. 我们通常是把细胞玻片固定好后，用PBS冲洗干净，然后用酒精脱水（80%，90%，100%，100%酒精各一次，每次10分钟左右），然后放在烘箱里烘干，这是就相当于石蜡切片了，可以保存一定的时间。
这个方法我们试过的，保持一段时间后做，效果还是可以的。
悬浮细胞制备细胞爬片
细胞离心，PBS洗3遍，去除血清的影响，洗好后离心，吸弃上清，最后离心管内总共剩含细胞液体500ul左右，枪打匀，用枪转移适量至PLL处理好的载玻片上（悬浮细胞最好处理一下），用枪头平着推开液滴，铺平。自然风干，可以用手来回晃动，加快蒸发，建议时间稍长，15～20min左右。
具体还要自己摸索一下，根据自己细胞情况，数量等调整液体量及时间。
制备悬浮细胞方法同上，调整细胞数在10的6-7次方左右。PLL处理好的载玻片首先在－20℃预冷10分钟，用枪取20-30ul滴在载玻片上，不动它，一张片子可以滴2-3个地方，将滴好的载玻片置于50℃左右烤干，大约10min左右，注意不要烤太久，干了就行，取出后冰丙酮固定即可。
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