维普资讯 http://www.cqvip.com ・１１３２・ 广东医学２００８年７月第２９卷第７期 Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｊｕ１．２００８，Ｖｏ１．２９。Ｎｏ．７ 刺突蛋白亚单位基因疫苗在大鼠体内诱导的 体液免疫反应米 朱志刚 赵子文 柯妙拉 周玲 广东省广州市第一人民医院 血液肿瘤病区，２呼吸内科（５１０１８０）； 中山大学肿瘤防治中心实验研究部 （广州５１００６０） 【摘要】 目的利用重组腺病毒表达ＳＡＲＳ病毒蛋白Ｎ端，研究其在动物体内诱导的体液免疫反应，探讨将 用截短的刺突蛋白ｓ１亚单位（ｓ ）腺病毒载体疫苗（Ａｄ— 其进一步开发为ＳＡＲＳ病毒基因疫苗的可行性。方法结果ｓ ）皮下免疫大鼠［１×１０ ｐｆｕ／（鼠・次），每周１次，连续３周］，用ＥＬＩＳＡ法测定血清中抗ＳＡＲＳ—ＣｏＶ ＩｇＧ水平。 Ａｄ—ｓ 在大鼠体内能诱导产生高滴度的抗ＳＡＲＳ冠状病毒ＩｇＧｓ，ｌｇＧｓ在免疫开始２周出现，在最后一次免 疫１～２周达到最高（最高滴度为１：２ ）。用Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞体外攻击保护试验检测免疫动物血清中ＳＡＲＳ病毒中 和抗体发现，Ａｄ—ｓ 免疫鼠血清能在体外保护Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞免受ＳＡＲＳ病毒攻击，中和滴度达到１：２ 。结论 Ａｄ—Ｓ 能在大鼠体内诱导ＳＡＲＳ病毒特异的保护性体液免疫，有望发展成为一种ＳＡＲＳ基因疫苗。 【关键词】 疫苗／腺病毒载体ＳＡＲＳ冠状病毒刺突蛋白 体液免疫 中和抗体 严重急性呼吸道综合征（ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏ￣ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＳＡＲＳ）是由ＳＡＲＳ冠状病毒（ＳＡＲＳ—ＣｏＶ）感 １．３检测Ａｄ—Ｓ 在大鼠体内的表达大鼠皮下注射 Ａｄ—ｓ 或Ａｄ～ＬａｃＺ（１×１０ ｐｆｕ／只），分别于注射０，８， ２４，４８，７２，１６８ ｈ后取注射部位组织，匀浆。分别用ＲＴ —染引起的一种烈性传染病 。 。实践证实，防治病毒 性疾病最有效的方法是接种疫苗。灭活的全病毒疫苗 是最迅速和方便获得的疫苗 ，它成功地预防了多种 ＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法检测Ａｄ—Ｓ 在大鼠体内的 表达。用ＴＲＩＺＯＬ￣试剂（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）提取总ＲＮＡ，用 ＡＭＶ反转录系统（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）进行反转录，用特异性引 病毒性疾病的传播。然而，部分灭活的全病毒疫苗存在 诱发再次感染的危险，如灭活的麻疹病毒疫苗曾导致大 量接种儿童发生严重的非典型麻疹。研制ＳＡＲＳ基因疫 苗可能是一种更为理想的途径。本研究拟利用重组腺 病毒表达ＳＡＲＳ病毒刺突蛋白Ｎ端（截短的ｓ１亚单 位），研究其在动物体内诱导的体液免疫反应，探讨并将 其进一步开发为ＳＡＲＳ病毒基因疫苗的可行性。 １材料与方法 １．１ 实验动物、细胞株和抗体６～８周龄的Ｗｉｓｔａｒ 物行ＰＣＲ。Ｓ 引物对为Ｐ１（５ 一ＣＧＡＧＴＡＣＡＴＡＴＣＴ－ ＧＡＴＧＣＣ一３ ）和Ｐ２（５ 一ＡＣＧＣＣＡＴＡＧＣＡＣＴｒＡＡＡＧＧ 一３ ）（扩增片段为６２４ ｂｐ），（一ａｃｔｉｎ作为内对照，引 物对为Ｐ３（５ 一ＣＧＴＣＴＩ＇ＣＣＣＣＴＣＣＡＴＣＧＴＧ一３ ）和Ｐ４ （５ 一ＣＣＣＴＣＡＴＡＧＡＴＧＧＧＣＡＣＡＧ一３ ）（扩增片段为 ４１７ ｂｐ）。 组织匀浆加入等体积２倍体积ＳＤＳ上样缓冲液， 大鼠购自中山大学实验动物中心（合格证：医动字第 ２６—２００４Ａ００９号），动物实验均在ＳＰＦ级的动物实验 室（许可证：医动字第２６—２００４Ｂ００６号）中进行。非洲 绿猴肾上皮细胞Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞株（ＣＲＬ １５８６）来自 ＡＴＣＣ，用含１０％ＦＢＳ、２ ｍｍｏＬ／Ｌ谷氨酰胺、１００ Ｕ／ｍｌ 煮沸１０ ｍｉｎ，冰上冷却，离心去残渣，行１０％ＳＤＳ聚丙 烯酰胺凝胶电泳。电泳条带转移至ＰＶＤＦ膜，用含５％ 脱脂奶粉的ＴＩ＇ＢＳ于４￣Ｃ封闭过夜，然后加入兔抗刺突 蛋白抗体（１：１００，Ａｂｇｅｎｔ Ｃａｔ＃ＡＰ６００９ｂ）室温孵育４ ｈ， 用ＴＩ＇ＢＳ洗膜３次，再加入ＨＲＰ标记的抗兔ＩｇＧ （１：１ ０００）室温孵育２ ｈ，洗膜３次后加入ＬｕｍｉＧＬＯ 发光底物（ＮＥＢ公司），１ ｍｉｎ后用ｘ线片感光。Ａｃｔｉｎ 青霉素和１００ ｇ／ｍｌ链霉素的１６４０培养液在３７℃、 ５％ＣＯ，和饱和湿度下培养。本实验所用抗体除有特 别说明外均为Ｓａｎｔａ ｃｒｕｚ公司产品。 １．２病毒ＢＪ０１株ＳＡＲＳ病毒由中国医学科学院病 毒所提供。Ａｄ—Ｓ 为表达ＳＡＲＳ—ＣｏＶ刺突蛋白Ｎ端 截短的ｓｌ亚单位（Ｓ ，１～４９０氨基酸残基）的Ｅ１，Ｅ３ 作为内对照，一抗为小鼠抗ａｃｔｉｎ抗体ｃ一２（１：２００）， 二抗为ＨＲＰ标记的抗小鼠ＩｇＧ（１：１ ０００）。 １．４免疫大鼠及免疫检测 分别以每次每只１× １０ ｐｆｕ的Ａｄ—ｓ 、Ａｄ—ＬａｃＺ和０．１ ｍｌ介质（ＰＢＳ）皮下 注射免疫大鼠（ｎ＝１０／组），每周１次，连续３周（分别 为第０，１，２周）。收集第０，１，２，３，４周的血清，用北京 区缺失的５型腺病毒，Ａｄ—ＬａｃＺ为携带８一半乳糖苷 酶基因的Ｅ１，Ｅ３区缺失的５型腺病毒 。 ，均由中山 大学肿瘤防治中心刘然义博士提供。 华大公司研制的人ＳＡＲＳ～ＣｏＶ抗体（ＩｇＧ）检测试剂盒 进行检测（二抗改为ＨＲＰ偶联的抗大鼠ＩｇＧ，１：５ ０００ ｝， 州市科技攻关计划重点资助项目（编号：２００３Ｚ２一Ｆ００２５） 稀释）（三复孔）。抗体滴度为比阴性对照ＯＤ 。 高 ０．１６的最高稀释倍数。为了检测免疫大鼠体内抗血 清的ｓ 特异性，用Ａｄ—Ｓ 感染的Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞的培 维普资讯 http://www.cqvip.com 广东医学２００８年７月第２９卷第７期 Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｊｕ１．２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．７ １Ｏ １１３３ 养上清作为抗原，免疫第４周的大鼠血清（１：５０稀释） 作为一抗，二抗为抗大鼠ＩｇＧ（１：１ ０００），方法同上。 １．５ 中和抗体测定 为了检测Ａｄ—Ｓ 在大鼠体内诱 导的抗体对ＳＡＲＳ病毒的感染是否具有保护作用，取 免疫第４周的血清，５６％保温３０ ｍｉｎ灭活补体，用Ｖｅｒｏ —Ｅ６细胞体外保护试验测定血清中ＳＡＲＳ中和抗体滴 廿 萋 ６ 度。热火活鼠血清按１：２比例逐步稀释，取稀释的血 清１００ ｐ．１与１００ ＴＣＩＤ５０的ＳＡＲＳ病毒（ＢＪ０１株）３７ｃ（＝ 孵育１ ｈ，加入种有Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞（１×１０ ／孔）的９６ 乏世 撰 ４ 《一 孔板中，３７ｃ（二培养３～４ ｄ， 察细胞病变（ＣＰＥ）的形成 情况。中和抗体滴度用能完全抑制５个复孔中３孔 Ｖｅｒ～Ｅ６细胞发生病变的最高稀释倍数表示。 １．６统计学方法采用双尾ｓｔｕｄｅｎ’ｓ ｔ检验。 ２ 结果 ２．１ Ａｄ—Ｓ、在大鼠体内表达检测 用ＲＴ—ＰＣＲ方 法检测结果显示，注射８ ｈ就可以检测到Ｓ ｍＲＮＡ，在 ２４ ｈ和４８ ｈ达到最高，然后逐渐减弱，到第７天仅能见 到微弱的扩增条带（图１Ａ）。Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ检测结果显 示，与ＲＴ—ＰＣＲ结果基本一致，但表达最高峰出现在 ４８ ｈ（图１Ｂ）。而在Ａｄ—ＬａｃＺ注射的组织中始终未检 测到Ｓ ｍＲＮＡ和蛋白（图略）。 １ ０００ ７５０ Ｓ ５００ ｐ—ａｃｔｉｎ ２５０ Ｂ Ａ：ＲＴ—ＰＣＲ分析（Ｓ ６２４ ｂｐ，内对照（一ａｃｔｉｎ ４１７ ｂｐ） Ｂ：Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析 图１ Ａｄ—Ｓ 在大鼠体内的表达 ２．２ Ａｄ—Ｓ 诱导大鼠产生ＳＡＲＳ—ＣｏＶ特异的ＩｇＧ抗 体ＥＬＩＳＡ方法检测结果显示：Ａｄ—Ｓ 在大鼠体内能 诱导产生高滴度的抗ＳＡＲＳ冠状病毒ＩｇＧｓ，特异性 ＩｇＧｓ在第一次免疫２周后开始出现，并逐渐升高，在最 后一次免疫１～２周后达到最高（最高滴度为１：２ ）； 而对照组（ＡｄＬａｃＺ组、ＰＢＳ组）在整个过程中均无 ＳＡＲＳ—ＣｏＶ特异性抗体产生（Ｐ＜０．００１）。 ２．３ Ａｄ—Ｓ 诱导的ＳＡＲＳ—ＣｏＶ中和抗体测定Ｖｅｒｏ —Ｅ６细胞体外保护试验测定结果显示，Ａｄ—Ｓ 诱导 的大鼠抗体在体外对ＳＡＲＳ病毒具有很强的中和作 用，中和抗体滴度达到１：２。 ，而对照组血清对ＳＡＲＳ— ＣｏＶ无中和作用，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）见图２。 ２ ０ 图２ 免疫大鼠血淆中ＳＡＲＳ—ＣｏＶ中和抗体测定 ３讨论 ＳＡＲＳ冠状病毒是一种非节段性正链的ＲＮＡ病 毒，其基因组近３０ ｋｈ，可以在人和动物中传播，主要感 染人和动物的呼吸系统，具有内核心及囊膜包被，共有 四种结构蛋白：刺突蛋白（ｓｐｉｋｅ，Ｓ）、膜蛋白（ｍｅｎ— ｂｒａｎｃｅ，Ｍ）、囊膜蛋白（ｅｎｖｅｌｏｐｅ，Ｅ）及核蛋白（ｎＬｌｅｌｅｏ— ｐｒｏｔｅｉｎ，Ｎ） 。刺突蛋白（Ｓ）是ＳＡＲＳ—ＣｏＶ识别宿主细 胞受体并介导病毒进入细胞的关键蛋白，而其ｓ１亚单 位是其与宿主细胞结合必需的结构 。 。近期的研究证 实，ｓ１与其受体ＡＣＥ一２的结合位点位于ｓ１的３１８～ ５１０位氨基酸残基之间 。本研究用腺病毒载体成功地 在大鼠体内表达了ｓ１亚单位的１～４９０氨基酸片段 （Ｓ ），该蛋白在大鼠皮下组织的表达能诱导高滴度的 ＳＡＲＳ—ＣｏＶ特异性抗体（图２），而且该抗体能中和 ＳＡＲＳ病毒，阻止其在体外对Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞的攻击，推 测其在体外对ＳＡＲＳ病毒中和、对Ｖｅｒｏ—Ｅ６细胞的保护 作用是由于抗体封闭了ＳＡＲＳ病毒的受体结合位点而引 起的。ＳＵＩ等 最近报道了一种人抗ｓ１亚单位的单克 隆抗体能通过干扰ＳＡＲＳ—ＣｏＶ与细胞受体的结合而阻 断其感染，这一结果也证实了本研究的推测。 近来研究报道，用裸ＤＮＡ、复制缺陷型腺病毒、减毒 的痘病毒和副流感病毒等载体表达全长ｓ蛋白或其胞 外部分甚至仅表达其ｓ１亚单位均能在动物体内诱导保 护性体液免疫 ” 。本研究用腺病毒表达更小的ｓ蛋 白片段（截短的ｓ１亚单位，Ｓ ）也能在动物体内诱导出 高滴度的ＳＡＲＳ病毒中和抗体。该基因片段比较短，与 其他报道发生重组产生新的冠状病毒的危险性小，从安 全性角度考虑，该重组腺病毒（Ａｄ—Ｓ ）应该是一种具有 开发前景的候选ＳＡＲＳ疫苗。当然，由于大鼠免疫学特 征与人类存在较大差异，所以，非常必要在其他动物（包 括灵长类动物）体内进行Ａｄ～Ｓ 的免疫实验，进一步验 证将其开发成ＳＡＲＳ基因疫苗的可能性。 （致谢：感谢中国医学科学院病毒所在中和抗体测定方 面给予的协助）。 维普资讯 http://www.cqvip.com ・１１３４・ 广东医学２００８年７月第２９卷第７期 ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭｅｄｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｊｕ１．２００８，Ｖｏ１．２９，Ｎｏ．７ ［８］ＷＯＮＧ Ｓ Ｋ，ＬＩ Ｗ，ＭＯＯＲＥ Ｍ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ａ １９３一ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｌｆａｇ－ ｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ＳＡＲＳ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ Ｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｆｉｃｉｆｅｎｔｌｙ ｂｉｎｄｓ ａｎｇｉｏｔｅｎ－ 参考文献 ［１］ＫＳＩＡＺＥＫ Ｔ Ｇ，ＥＲＤＭＡＮ Ｄ，ＧＯＬＤＳＭＩＴＨ Ｃ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ａ ｎｏｖｅｌ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］． Ｎ Ｅｎｓｌ Ｊ Ｍｅｄ，２００３，３４８（２０）：１ ９５３—１ ９６６． ｓｉｎ—ｃｏｎｖｅｒｔｉｎｇ ｅｎｚｙｍｅ ２［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００４，２７９（５）： ３ １９７—３ ２０１． ［２］ ＲＯＴＡ Ｐ Ａ，ＯＢＥＲＳＴＥ Ｍ Ｓ，ＭＯＮＲＯＥ Ｓ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ－ ｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ［９］ＳＵＩ Ｊ，ＬＩ Ｗ，ＭＵＲＡＫＡＭＩ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐｏｔｅｎｔ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅ— ｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ（ＳＡＲＳ）ｃｏｒｏｎａｖｉｕｓｒ ｂｙ ａ ｈｕｍａｎ ｓｙｎｄｒｏｍｅ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，３００（５ ６２４）：１ ３９４—１ ３９９． ［３］ＴＡＮＧ Ｌ，ＺＨＵ Ｑ，ＱＩＮ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ＳＡＲＳ—ＣｏＶ ｖａｃｃｉｎｅ ｐｒｅｐａｒ￣ｔ ｆｒｏｍ ｗｈｏｌｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｄｕｃｅｓ ａ ｈｉｉｇｈ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄ－ ｍＡｂ ｔｏ Ｓ１ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈａｔ ｂｌｏｃｋｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００４，１０１（８）：２ ５３６—２ ５４１． ［１Ｏ］ＹＡＮＧ Ｚ Ｙ，ＫＯＮＧ Ｗ Ｐ，ＨＵＡＮＧ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ａ ＤＮＡ ｖａｃｃｉｎｅ ｉｎ－ ｄｕｃｅｓ ＳＡＲＳ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｎｅｕｔｒａｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｉｎ ｉｅｓ ｉｎ ＢＡＬＢ／ｅ ｍｉｃｅ［Ｊ］．ＤＮＡ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ，２Ｏ０４，２３（６）：３９１—３９４． ［４］刘然义，黄必军，黄嘉凌，等．携带ＳＡＲＳ—ＣｏＶ刺突蛋白Ｎ 端片段重组腺病毒载体的构建［Ｊ］．中山大学学报：医学科学 版，２００５，２６（３ ｓ）：３２—３４． ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２００４，４２８（６ ９８２）：５６１—５６４． ［１１ ｊ ＢＵＫＲＥＹＥＶ Ａ，ＬＡＭＩＲＡＮＤＥ Ｅ Ｗ，ＢＵＣＨＨＯＬＺ Ｕ Ｊ，ｅｔ ａ１． Ｍｕｃｏｓａｌ ｉｍｍｕｎｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｆｉｒｃａｎ ｇｒｅｅｎ ｍｏｎｋｅｙｓ（Ｃｅｒｃｏｐｉｔｈｅｃｕｓ ［５］刘然义，黄嘉凌，吴立志，等．腺病毒介导ＳＡＲＳ病毒ｓ 基因 表达及其诱导的体液免疫［Ｊ］．中国人兽共患病杂志，２００５， ２１（８）：６７０—６７３． ａｅｔｈｉｏｐｓ）ｗｉｔｈ ａｎ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｐａｒａｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｕｓｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ＳＡＲＳ ｃｏｒｏｎａｖｉｒｕｓ ｓｐｉｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｏｆ ＳＡＲＳ［Ｊ］． Ｌａｎｃｅｔ，２００４，３６３（９ ４２７）：２ １２２—２ １２７． ［６］ ＩＮＧＡＬＬＩＮＥＬＬＡ Ｐ，ＢＩＡＮＣＨＩ Ｅ，ＦＩＮＯＴＦＯ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｆｕｓｉｏｎ——ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｌｅｘ ｏｆ ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅ— ［１２］ＢＩＳＨＴ Ｈ，ＲＯＢＥＲＴＳ Ａ，ＶＯＧＥＬ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａ－ ｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｕｓ ｓｐｉｒｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｂｙ ａｔｔｅｎｕａｔｅｄ ｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｅｍｅ（ＳＡＲＳ）ｃｏｒｅｎａｖｉｕｓ［Ｊ］．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌｒ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００４，１０１（２３）：８ ７０９—８ ７１４． ｖａｃｃｉｎｉａ ｖｉｕｓｒ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｌｙ ｉｍｍｕｎｉｚｅｓ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ｐｒｅｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ２００４，１０１（１７）：６ ６４１—６ ６４６． ［７］ＹＡＮＧ Ｚ Ｙ，ＨＵＡＮＧ Ｙ，ＧＡＮＥＳＨ Ｌ，ｅｔ ａ１．ｐＨ—ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｅｎ－ ｏｆ￣ｅｖｅｒｅ ａｃｕｔｅ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｃｏｒｏｎａｖｉｕｓ ｉｒｓ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｓｐｉｋｅ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｂｙ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｔｒａｎｓｆｅｒ ［１３］ＧＡＯ Ｗ，ＴＡＭＩＮ Ａ，ＳＯＬＯＦＦ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ａ ＳＡＲＳ—ａｓｓｏ— ｃｉａｔｅｄ ｃｏｒｏｎａｖｉｕｓｒ ｖａｃｃｉｎｅ ｉｎ ｍｏｎｋｅｙｓ［Ｊ］．Ｌａｎｃｅｔ，２００３，３６２ （９ ３９９）：１ ８９５—１ ８９６． ｔｈｒｏｕｇｈ ＤＣ—ＳＩＧＮ［Ｊ］．Ｊ Ｖｉｒｏｌ，２００４，７８（１１）：５ ６４２—５ ６５０． （收稿日期：２００８—０３—０５编辑：张素文） 气管内持续滴人立止血治疗吸人性损伤气管切开患者气管内出血 刘樾董政袁寿忠潘维诚 南京医科大学附属常州市第二人民医院烧伤整形中心（江苏常州２１３００３） 中重度吸人性损伤患者气管切开 后，可因反复多次吸痰损伤，气管黏膜 脱落，气管套管在气管内活动损伤，造 成气管内壁糜烂，出现血管破裂，造成 气管内出血，甚至出现窒息，我院从 １９９９—２００７年开始使用立止血加入湿 化液中经气管内持续给药治疗上述情 况所致气管内出血，取得了较好的治疗 ２结果 从巴西蝮蛇的毒液中分离、提纯所得的 一患者显效１８例，其中２ ｈ内显效６ 例；４ ｈ内显效６例；６ ｈ内显效４例； ８ ｈ内显效２例；１０ ｈ内显效１例；１２ ｈ 种酶性止血剂，其一方面产生的“类 凝血酶样作用”在出血部位可增加血小 板黏附力及血小板凝聚力，并且只在出 血位激发白色栓子形成，产生止血效 力；另一方面产生的“类凝血激酶样作 用”在出血部位被血小板释放的血小板 第３因子ＰＦ３激话，促进凝血酶的形 内显效１例；有效２例，其中１例为 １２—２４ ｈ停止出血，１例为出血明显减 少，无效０例。 ３讨论 效果，现报告如下。 １资料与方法 １．１一般资料本组患者２０例，均为 吸人性损伤患者气管切开后可因 反复多次吸痰损伤，气管黏膜脱落，气 管套管在气管内活动损伤，造成气管内 壁糜烂，出现血管破裂，造成气管内出 血，甚至出现窒息，其在临床中较为常 见。以往常规是使用去甲肾上腺素气 管内注入，或静脉使用止血敏等止血药 物，但是吸人性损伤患者一般都合并有 严重烧伤，存在心功能损害，甚至合并 有严重的心律失常，去甲。肾上腺素有可 成，起到凝血作用 ，其既可以静脉使 用也可以局部使用。 综上所述，立止血加入湿化液中经 中重度吸人性损伤气管切开患者，其中 男１０例，女１０例，年龄２０—６６岁，出 现气管内出血一般为伤后１５—２１ ｄ，其 中吸痰损伤３例，气管黏膜脱落后出血 １５例，气管套管损伤２例。 １．２方法 将立止血２ ｋｕ加入气道 湿化液（０．９％生理盐水）４８ ｍｌ，微量泵 以２ ｍｌ／ｈ持续滴入气道中。 １．３疗效观察及判定每２小时吸痰 次，同时观察止血效果，显效：１２ ｈ内 一气管内持续局部给药治疗吸人性损伤 患者气管切开后气管内出血，方法简单 易行，不需特殊设备，给药直接，止血效 果明确。 参考文献 ［１］ 李永强．立止血防治手术创面出血的 疗效观察［Ｊ］．现代中西医结合杂志， ２００４，１３（６）：８１３、 能对患者造成严重的不良后果，而静脉 使用止血药，局部血药浓度低，止血效 果差。 ［２］ 张春雨，胡伟山，赵淑玲．经纤维支 气管镜病变部位注人立止血治疗咯血 出血停止；有效：２４ ｈ内出血停止或病 情改善；无效：７２ ｈ后出血未改善（出血 停止后出现新的出血除外） 立止血是一种显效快的止血剂，有 ３７例临床分析［Ｊ］．吉林医学，２００４， １２（１２）：８６． 效率高，给药途径多，无毒副作用，是一 种比较理想的新型止血剂…，是通过 （收稿日期：２００７—０３—１８编辑：庄晓文）
