高产纤维素酶青霉菌的筛选和及产酶条件的研究

《现代食品科技》　Ｖｏｉ．２３Ｎｏ．３（总９３）　高产纤维素酶青霉菌的筛选和及产酶条件的研究　胡丹，刘霞，雷颉　（南昌理工学院生物与环境工程系，江西南昌３３００１　３）　摘要：本文从稻田土壤中分离到—株产纤维酶活力高的ｘ－５茵株，经形态特征及生理生化特征初步鉴定为半知茵亚门，丝孢纲，　丝孢目，丛梗孢科，青霉属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）。对青霉茵Ｘ－５茵株进行发酵培养条件的研究结果表明，以５．ｏ０／ｏ￣草粉为碳源，３．００／ｏ豆饼粉为　氮源，装液量为６０ｍｌ，接种量为５．ｏ０／ｏ，培养温度为２６～２８℃，初始ｐＨ４．５～６．０，培养１２０ｈ，产酶活力最高，ＣＭＣ酶活为７５．７２ＩＵ／ｍｌ，　Ｈ’酶活为６．６８　ＩＵｈｎ１．　关键词：纤维素酶：青霉属；液体发酵　中图分类号：Ｑ９３－３３１；文献标识码：Ａ；文章篇号：１６７３．９０７８（２００７）０３－００１４－０４　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ａ　Ｈｉｇｈ　Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｔｉｎｇ　Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　Ｓｔｒａｉｎ　ａｎｄ　Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ　Ｐｒｏｄｕｃｔｉ０ｎ　ＨＵＤａｎ，ＬＩＵＸｉａ，ＬＥＩ　Ｊｉ　（Ｂｉ０ｌ０ｇｙ　ａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｃｈａｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＮａｎＣｈａｎｇ　３３００１３，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｔｒａｉｎ　Ｘ－５　ｗｈｉｃｈ　ｗｉｔｈ　ｌｌｉｇｈ　ｃｅｌｌｕｌｏｓ－ｐｒｏｄｕｅｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｗａｓ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｉｆｄｅ　ｔｏ　ｂｅ　Ｆｕｎｇｉ　Ｉｍｐｅｒｆｅｃｔｉ，Ｍｏｎｉｌｉａｌｅｓ，　Ｍｏｎｉｌｉａｃｅａｃｅ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｅａｅ，Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ．．Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｕｌａｓｅｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｂｙ　ｓｕｂｍｅｒｇｅｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｗｉｔｈ　ＳＷｄｉｎＸ－５．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔｔｈｅｂｅｓｔｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅ，ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅ，ｍｅｄｉｕｍｖｏｌｕｍｅ，ｉｎｏｃｕｌｕｍ　ｓｉｚｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｈｅｉｎｉｉｔａｌｐＨｖａｌｕｅ　ａｎｄｃｕｌｔｕｒｉｎｇｔｉｍｅｗｅｒｅ　５．Ｏ０Ａ　ｒｉｃｅ　ｓｔｒａｗｐｏｗｄｅｒ，３．０ｏ／０ｂｅａｎｃａｋｅｍｅａｌ，６０ｍＬ，５．∞　２６＾２８℃，４．５－－６．０，ａｎｄ　１２０ｈ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅａｂｏｖｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ　ＣＭＣａｓｅａｎｄＦＰａｓｅｉｎｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔｅｄｂｒｏｔｈｗｅｒｅ７５．７２ＩＬｌ／ｒｉｆｔａｎｄ６．６８ＩＵ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｃｅｌｌｕｌａｓｅ；Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ；ｓｕｂｍｅｒｇｅｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　纤维素是生物圈最丰富的有机物质，占植物界碳　１．１样品：稻田土壤　素的５０％以上，同是也是自然界分布最广的有机化合　１．２培养基　物。　１．２．１增殖培养基　纤维素酶（Ｃｅｎｕｌａｓｅ）是降解纤维素生成葡萄糖的　２ｇ　ＫＨ２ＰＯ４，１．４ｇ（ＮＨ４）２ＳＯ４，０．３ｇ　ＭｇＳＯ４’７Ｈ２０，　一组酶的总称，它不是单种酶，而是起协同作用的多种　０．３ｇ　ＣａＣｈ，５ｍｇ　ＦｅＳＯ４’７Ｈ２Ｏ，１．６ｍｇ　ＭｎＳＯ４，１．７ｍｇ　酶系【ｌ　，要使纤维素得以充分降解和利用，一方面要提　ＺｎＣｈ，１．７ｍｇ　ＣＯＣ１２，２０ｇ　ＣＭＣ－Ｎａ，１０００ｍＬ蒸馏水，　高酶的活力，另一方面要改善纤维素酶系各组分相对　ｐＨ５．５。　．．　含量。纤维素酶的工业化生产有固体发酵法和液体深　１．２．２分离筛选培养基【４】：　层发酵法２种，由于液体深层发酵法的培养条件容易控　①刚果红纤维素琼脂：２．０ｇ　ＫＨ２ＰＯ４，０．２５ｇ　制，不易污染杂菌，生产效率高，已成为国外重要的研究　ＭｇＳＯ４，１４．０ｇ琼脂，２．０ｇ明胶，１．８８ｇ纤维素粉，０．２０ｇ　和生产工艺【３】。　刚果红，１０００ｍＬ水，ｐＨ７．０。培养基中的琼脂均需预　本课题对从稻田土壤中分离到的产纤维素酶菌株，　处理以除去可能存在的碳源。　采用液体发酵生产纤维素酿通过发酵条件的优化，筛　②滤纸条培养基：直径１．５ｃｍ、长１．５ｃｍ试管中　选得到一株高产纤维素酶青霉菌，尤其是滤纸酶活较　加入上述刚果红纤维素琼脂５ｍＬ，加１条瓦特曼滤纸　高，具有广泛的应用前景。　（６ｅｒａ￣ｌｃｍ）垂直于试管中，一部分露出斜面，加棉塞　１材料、培养基与方法　１２１℃，３０ｍｉｎ下灭菌。　１．２．＿３鉴定培养基　收稿日期：２００６－１０－３０　土豆２００ｇ洗净，去皮切成小块，煮沸１５ｍｉｎ后　作者简介：胡丹（１　９８０－），女。助教．研究方向为工业微生物　纱布过滤，定容至１０００ｍＬ加１％葡萄糖、０￣０５％胆酸　１４　维普资讯 http://www.cqvip.com

《现代食品科技》　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｆｏｏｄ　Ｓｄ一∞ａｎｄ　Ｔｏｅｈｎｏｌｏ￣　ＶｏＬ２３　Ｎｏ＿３（总蚰）　钠和１．５％琼脂，ｐＨ　８．０。　１．２．４发酵培养基　２ｇＩ￣－ｈＰＯ４，３０ｇ豆饼粉，０．３ｇＭｇＳＯ４，ＴＨ２０，０．３ｇ　ＣａＣ１２，５ｒａｇＦｅＳＯ４。７Ｈ２０，１．６ｍｇＭｎＳＯ４，１．７ｍｇＺｎＣ１２，　比值较大的６个菌落如表１，同时将这６个菌落分别　接入滤纸条培养基中，于３０＂（３静置培养，目测滤纸条　溃烂情况得表２。　表１刚果红平板分离筛选结果　筛选菌珠Ｘ－１　Ｘ－２　Ｘ－３　Ｘ－４　Ｘ－５　Ｘ－６　１．７ｒａｇＣｏＣｌ２，５０ｇ稻草粉，１００Ｏｒａｌ蒸馏水，ｐＨ５．５。　１＿３方法　１．３．１　纤维素酶生产菌的筛选【５Ｊ　１．３．１．１初筛方法　将少许样品放入含５０ｍＬ增殖培养基的３００ｍＬ的　三角瓶中，３０￣Ｃ、２００ｒ／ａｒｉｎ下培养３￣５ｄ，然后分别稀　释涂布于分离筛选培养基上，观察菌落特征和透明圈　大小，同时将单个纯菌落分别接入滤纸条培养基中，　于３０℃静置培养，定期目测滤纸条溃烂情况，选取透　明圈／菌落直径比值较大菌落及滤纸溃烂显著的菌株　进行产酶发酵试验。　１．３．１．２复筛方法　将初筛得到的几株菌制成孢子悬液（１０　＋／ｍＥ）。　在５００ｍＬ三角瓶中装入液体发酵培养基５０ｍＬ，于旋　转摇床上２５０ｒ／ａｉｒｎ，３０℃培养４正将发酵液于４０００　ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ，取上清液测其ＣＩＭＣ和ＦＰ酶活力，　２．１．２复筛结果　取上清液测其ＣＭＣａｓｅ和ＦＰＡ酶活力如表３，比　较各菌株在稻草上的产酶能力，得到酶活较高的Ｘ．５　菌株。　表３各菌株在粗酶液中的酶活单位：１０／ｅｌ＿　比较各菌株在稻草上的产酶能力，得到酶活较高的菌　株。　１．３．２纤维素酶活力测定【６Ｊ　①羧甲基纤维素酶（ＣＭＣａｓｅ）活力：取适当稀　释的上清液０．５ｍＬ，以ＣＭＣ－Ｎａ为底物，加入ｐＨ为　４．８的醋酸缓冲液０．５ｍＬ，以不加底物为对照，５Ｏ℃反　菌珠ＣＭＣａｓｅ酶活Ｘ－１　Ｘ－２　Ｘ．３　Ｘ－４　Ｘ－５　Ｘ－６　３．３３　１．２９　６．６４　２、８６　３２．８　１　６０．０８　４５２９　２２．６１　７５．６７　３６．８３　ＦＰＡ酶活　２．４４　５．２３　２．２菌种鉴定　Ｘ．５菌株的菌落特征：菌落颜色为绿色，同心圆　花纹，孢子呈现绿色。　应３０ｍｉｎ，取出，加２ｍＬ　ＤＮＳ溶液，沸水浴中保持　５ｍｉｎ，流水冷却，定容至２５ｍＬ，混匀，在５５０ｒｉｍ处　比色。　显微镜观察结果如图１，子实体为帚状，其帚状　枝有单束的小梗，分生孢子小梗不分枝，产生单轮帚　状枝。无足细胞，菌丝有横隔。孢子成串或链状，单　个孢子为球状或圆形，非常光滑，常常带有青绿色。　单个孢子通过缢裂产生，是典型的分生孢子。　②滤纸酶（ＦＰＡ）活力：取适当稀释的上清液　０。５ｍＬ，以５０ｒａｇ（１ｅｍ￣６ｅｍ）新华滤纸条为底物，加入　ｐＨ　４．８醋酸缓冲液０．５ｍＬ，以不加底物为对照，５０＂Ｃ　反应６０ｍｉｎ，取出，加入２ｍＬＤＮＳ溶液，沸水浴中保　持５ｍｉｎ，流水冷却，定容至２５ｍＬ，混匀，在５５０ｎｍ　处比色。　依据文献资料【　，初步鉴定为半知菌亚门，丝孢　纲，丝孢目，丛梗孢科，青霉属（（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ））　酶活定义：以ｌｍＬ酶液在ｌｍｉｎ内分解底物生成　１￣ｍｏｌ葡萄糖的酶量定义为１个酶活单位　Ｊ）。　１．３．３菌株鉴定方法［７，。】　菌落观察和显微电镜观察。　２结果　２．１菌种筛选　２．１．１初筛结果　图１　Ｎｃ．７菌株的菌丝照片　通过刚果红平板分离筛选，得到透明圈庙落直径　２．３发酵条件对产酶的影响　ｌ５　维普资讯 http://www.cqvip.com

《现代食品科技》　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｆｏｏｄ　ｓｃ　哺∞ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ＶｏＬ２３　Ｎ０．３【总９３）　２．３．１不同碳源对产酶的影响　分别用４种不同碳源进行产酶试验，酶活测定结果　见表４。由表４可知，以稻草粉为碳源时羧甲基纤维　素酶和滤纸酶活力分别高达７４．３７　ＩＵ／ｍＬ和６．６８　ＩＵ／ｍＬ，以玉米秆、麸皮和米糠为碳源时酶活稍低。因　此选用稻草粉为碳源进行产酶试验。　表４不同碳源对产酶的影响单位：ＩＵ／ｍＬ　２．３．２碳源添加量对产酶的影响　．在培养基中分别加入不等量碳源，其他发酵条件　不变，结果见表５。由表５可知，碳源不足不能满足　菌体生长，过多添加碳源并不能提高该菌产酶能力，考　虑经济效益，Ｘ－５菌株发酵所需最佳碳源量为５％。　表５不同碳源添加量对产酶的影响单位：Ｉ　Ｕ／ｍＬ　２．３．３不同氮源对产酶的影响　分别用６种不同氮源进行产酶试验，酶活测定结　果见表６。由表６可知，以豆饼粉为氮源时酶活最高，　因此选用豆饼粉为氮源进行产酶试验。　表６不同氮源对产酶活力的影响单位：ＩＵ／ＩＴＬ　氮源（Ｎ￣ｈＳＯ４　ＮＨＩＮｏ３　Ｎ￣４Ｃ１尿素豆饼粉酵母膏　ＣＭＣａｓｅ酶活　３９．８３　４５．３８　６２．１５　ｌ１．０７　７６．０３　２４．３７　ＦＰＡ酶’活　３．０６　３．６９　５．０９　０．７１　６．４４　１．３８　２．３．４氮源添加量对产酶的影响　在培养基中分别加入不等量氮源，其他发酵条件　不变，结果见表７。测得Ｘ－５菌株发酵所需最佳氮源　量为３％。　表７不同氮源添加量对产酶的影响单位：ｌＵ／ｍＬ　２．３．５接种量对产酶的影响　设定不同接种量，其他发酵条件不变，结果见表　８。测得５％为最佳接种量，接种量不足或过大都会影　响纤维素酶的发酵产量。　表８不同接种量对产酶的影响单位：ＩＵ／ｍＬ　２．３．６培养基起始ｐＨ对产酶的影响　ｌ６　将培养基ｐＨ调至不同的值，其他发酵条件不变，　结果见表９。产酶最适ｐＴ４为４．５￣６．０。　表９不同培养基起始ｐＨ值对产酶的影响单位：ＩＵ／ｍＬ　２．３．７培养温度对产酶的影响　于不同温度下进行产酶试验，结果见表１Ｏ。产酶　最适培养温度为２６－－２８＂Ｃ。　表１　０不同温度对产酶的影响单位：Ｉ　Ｕ／ａｔ．　温度／℃　２４　２６　２８　３０　３２　ＣＭＣａｓｅ酶活　５１．９５　７３．９４　７４．４２　６５．１９　５０．２２　ＦＰＡ酶活４．０３　６．５５　６．４９　５．３７　３．９８　２．３．８培养时间对产酶的影响　于不同培养时间取样，测定酶活，结果见表ｌｌ。培　养１２０ｈ产酶达到高峰。　表１１不同培养时间对产酶的影响单位：Ｉ　Ｕ／ａｔ－　时间／ｈ　２４　４８　７２　９６　１２０　１４４　１６８　ＣＭＣａｓｅ百审话１７．４４　３１Ａ７　４９．８５　６７．０１　７５．１８　７０．２３　６３．２９　ＦＰＡ酶活０．９７　２．１６　４．０４　５．５８　６．５２　６．１７　５．３２　２．３．９通气量对产酶的影响　于２５０ｍＬ三角瓶装不同量培养基。进行产酶试验，　结果见表１２。测得２５０ｍＬ三角瓶装６０ｍＬ培养基能　获得最佳产酶效果。　表１　２不同装液量对产酶的影响单位：Ｉ　Ｕ／ＩＴＬ　装￣Ｕ］ｔ／ｍｌ　２０　４０　６０　８０　１００　ＣｌｖｌＣａｓｅ酶活　４５．７５　６６．１３　７５．７２　６２．９６　４２．ｏ９　ＦＰＡ酶活　３．６４　５．１１　６．６８　５．２９　３－３ｌ　３结论　从稻田土壤中分离到一株产纤维酶活力高的Ｘ－５　菌株，经形态特征及生理生化特征初步鉴定为半知菌　亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，青霉属（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ）。　对青霉菌Ｘ－５菌株进行发酵培养条件的研究结果表　明，以５．Ｏ％稻草粉为碳源，３．０％豆饼粉为氮源，在　２５０ｍＬ三角瓶中装６０ｍＬ培养基，接种量为５．０％，培　养温度为２６－－２８℃，初始ｐＨ４．５￣６．０，培养１２０ｈ。产　酶活力最高，ＣＭＣａｓｅ酶活为７５．７２　ＩＵ／ＩＩｌＬ，ＦＰＡ酶活　为６．６８　ｎ『／ｍＩ，。　参考文献　【１】　Ｋｉｎｇ　ＫＷ，Ｖｅｓｓａｌ　ＭＬ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｅｌｌｕｌａｓｅｓ［Ｊ］．　Ａｄｖａｎｃｈｅｍ．ｓｅｒ＇１９６９，（９）：７・１５．　（下转第１３页）　维普资讯 http://www.cqvip.com

＜现代食品科技》　Ｍｏｄｅｒｎ　Ｆｏｏｄ　Ｓｅｌｅｎｅｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ＶｏＬ２３　ＮｏＪ（￣９３）　４０．１％。豆浆中的蛋白质含量随加热时间的延长而增　加，而腐竹中蛋白质含量呈下降趋势，其原因可能是　是一拉就断，没有韧性。膜的韧性与豆浆浓度、豆浆　中蛋白质浓度、豆浆的ｐＨ值以及腐竹中蛋白质含量　密切相关。揭皮初期，蛋白质分子呈一种卷曲的紧密　结构，表面被水化膜包围着，具有相对的稳定性。通　过加热，蛋白质分子就从卷曲状态舒展开来，原来包　在卷曲结构内部的疏水基团就暴露出来，而原来在蛋　白质分子卷曲结构外部的亲水性基团都相应减少。随　着加热的进行，蛋白质分子间通过疏水键、二硫键的　结合，形成中间留有空隙的立体网络结构。随着加热　的继续进行，蛋白质过度变性，二硫键氧化，形成凝　胶的机会减少，到最后不能形成立体网络结构，就不　能在形成成膜。　３结论　蛋白质分子在长时间的加热过程中过度变性，分子内　二硫键增加，分子间二硫键减少，蛋白质分子交联的　机会降低，导致结合到腐竹中的蛋白质减少，其他成　分如总脂肪、中性脂和磷脂含量增加。　６Ｏ％　５５％　咖５０％　抽　惶；４５％　皿　嘲４０％　３５％　３Ｏ％　Ｏ　２　４　６　８　在揭皮过程中蛋白质含量和可溶性固形物含量随　加热时间延长而升高，其中可溶性固形物含量增幅大　时间／ｈ　图３腐竹中蛋白质含量的变化趋势　２．５膜的韧性的变化规律　于蛋白质含量的增长，浆液的ｐＨ值随加热时间的延长　而降低０．４个ｐＨ值；腐竹中蛋白质含量随揭皮时间的　延长而降低，韧性也随之而降低。　参考文献　【ｌ】　任广鸣．国外腐竹生产工艺研究概况【Ｊ］．食品科学，１９８９，　（５）：４４—４５．　腐竹要求的口感有一定的韧性，通过质构仪拉伸　膜的力来反映膜的韧性，膜的韧性的变化如图４所示。　图中“０”点是开始揭第一张膜时拉力的大小，之后每　小时取一张膜。　３５０　３００　２５０　２００　【２］　Ａ　ｈｒｎｅｄａ　Ａ．，Ａ　ｌｚａｇｔａｔ，Ｉｎｔｅａｚ　Ａｌｌｉ．Ｐｒｏｔｅｉｎ－ｌｉｐｉｄ　ｉｎｔｅｒ－　ａｃｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ｓｙｓｔｅｍｓ：ｒｅｖｉｅｗ【Ｊ】．Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＮｕｔｒｉｉｔｏｎ，２００２，５３：２４９－２６０．　１５０　ｉ００　５Ｏ　Ｏ　［３】　邓瑞君．优质腐竹生产的研究【『】．食品与机械，１９９８，（３）：　ｌ９＿２０．　［４】　张军合．腐竹生产工艺的改进研究【Ｊ］．粮油加工与食品机　械，２００１，（１１）：４２—４４．　０　２　４　６　８　【５】　［６】　韩智，石谷孝佑，李再贵，不同豆浆浓度和浆液深度对腐　竹生产的影响，农业工程学报，２００５’２ｌ（１　１）：１７９．１８１　刘昭明．腐竹生产工艺原理研究【Ｊ］．广西工学院学报，　１９９４，５（１）：６７—７１．　时间／ｈ　图４膜的韧性变化趋势　腐竹产品的韧性与大豆蛋白质分子之间聚合时形　成的键的数目有关。从图４可见，随着揭皮时间的延　长，膜的韧性呈下降的趋势，最后１ｈ出来的膜，几乎　上接第１６页）　［２】　ＷｏｏｄＴＭ．Ｐｒｏｐｅｒｆｉｅ　ｓａ】耐ｍｏｄｅｏｆ￣ｏｎ　０ｆｃｅｕｕｌａｓｅｓ【Ｊ］．　Ｂｉｏｔｅｅｈｎｏｌ　Ｂｉｏｅｎｇ．Ｓｙｍｐ，１９７５，（５）：ｌ１１—１３７．　【７】　Ｏ．Ｒ菲尼马．食品化学ＩＭ］．北京：中国轻工业出版社，　１９９１．　【５】　姚强，黄琰，陈冠军．产耐碱纤维素酶丝状真菌的筛选和鉴　定【Ｊ］．山东大学学报，２００５，（１）：１１９，－，１２４　［６】　管斌，丁友，谢来苏等．还原糖测定方法的规范【Ｊ］．无锡轻　工大学学报，１９９９，１８０）：７４－７９　［３】　梁霆，王遂，莫志忠，等．纤维素酶液体深层发酵条件的研　究【Ｊ】．生物技术，１９９７，７（６）：２２－２６．　【７】　周与良，邢来君．真菌学ＩＭ］．北京：高等教育出版社，１９８６．　４１７－４５７．　［４】　刘德海，王红云，等．纤维素酶高产菌株的选育及其生物学　性状的研究【Ｊ】．饲料工业，２００５，１８（２６）：２４－－２６　【８】　戴芳澜．中国真菌总汇［Ｍ１．北京：科学出版社，１９７９．４９３　ｌ３