实验原理
牛奶中含丰富的蛋白质,其中主要是酪蛋白。蛋白质在其等电点PI溶液中溶解度最低。据此原理,将牛奶的PH调至4.7,即酪蛋白的等电点时,酪蛋白即沉淀出来。酪蛋白不溶于乙醇和乙醚,利用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的磷脂类物质脂肪,用乙醚除去脂肪类物质,得到纯的酪蛋白。 实验步骤
1. 将100 mL牛奶和100 mL pH为4.7的乙酸-乙酸钠缓冲溶液加热至40-45℃,在搅拌下将缓冲溶液慢慢加至牛奶中,直到pH值达到4.7,可用精密pH试纸检查,此过程应保持温度在40-45℃。将上述悬浊液冷却至室温,离心15min(3000r/min),弃去上层清液,得酪蛋白粗制品。 2. 向沉淀中加入10 mL蒸馏水,用玻璃棒将沉淀充分搅匀,离心10 min(3000r/min),弃去上层清液。重复此过程一次。
3. 在沉淀中加入20 mL乙醇,搅拌片刻,将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇-乙醚混合液(乙醇:乙醚=1:1 V/V)洗涤沉淀2次(每次加洗涤液10 mL,加洗涤液时将抽气系统断开)抽干,最后用乙醚洗涤沉淀2次,抽干。 4. 将沉淀摊开在表面皿上,风干,得酪蛋白纯品。准确称重,计算含量。
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