中西医结合心脑血管病杂志２０１０年８月第８卷第８期 ［７］Ｑｕｉｎｔａｎａ Ｍ，Ｈｊｅｍｄａｈｌ Ｐ，Ｓｏｌｌｅｖｉ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｅｖｅｎｔｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａｄｊｕｖａｎｔ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ ａｄｅｎｏ— ｓｉｎｅ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｒｏｍｂｏｌｙｓｉｓ，ｒｅ— ｓｕｈｓ ｏｆ ｔｈｅ ＡＴＴｅｎｕａｔｉｏｎ ｂｙ Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｏｆ Ｃａｒｄｉａｃ Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ・ ９６１ ・ ｒ１２］Ｃｈａｎｄｒａｓｅｋａｒ Ｂ，Ｓｔｒｅｉｔｍａｎ ＪＥ，Ｃｏｌｓｔｏｎ ＪＴ．ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｎｕ— ｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａＢ ａｔｔｅｎｕａｔｅｓ ｐｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ａｎｄ ｉｎ— ｄｕｅｉｈｌｅ ｎｉｔｒｉｃ——ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｐｏｓｔｉｓｃｈｅｍｉｃ ｍｙｏｃａｒ。＿ ｄｉｕｍ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ，ｌ９９８，１４０６（１）：９１—１０６． ［１３］Ｃｈｅｎ Ｆ，Ｃａｓｔｒａｎｏｖａ Ｖ，Ｓｈｉ ｘ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｗ ｉｎｓｉｇｈｔｓ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｎｕｃｌｅａｒ ｆａｃｔｏｒ ｋａｐｐａＢ．ａ ｕｂｉｑｕｉｔｏｕｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｉ （ＡＴＴＡＣＣ）Ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００３，５９（１）：１—９． ［８］Ｌｉｎｋ ＡＡ，Ｋｉｎｏ Ｔ，Ｗｏｒｔｈ ＪＡ，ｅｔ ａ１．Ｌｉｇａｎｄ—ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ａｄｅｎ— ｏｓｉｎｅ Ａ２ａ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＩＩ，一１ ２ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏ— ｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，１ ９９９．４５（】）：７ ｌ７． ｒ１４］ Ｗｉｔｋｏ—ｓａｒｓａｔ Ｖ，Ｒｉｅｕ Ｐ，Ｄｅｓｅａｍｐｓ—Ｌａｔｓｃｈａ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏ ｐｈｉｌｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉ。ｌ。ｇｉｃａＩ ａｓｐｅｃｔｓ．Ｎｅｕ ｃｙｔｅｓ［ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０００，１６４（１）：４３６—４４２． ［９］Ｐｒｅｎｔｉｃｅ ＤＪ，Ｈｏｕｒａｎｉ ＳＭ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｉｔｅｓ ｂｙ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｉｎｔｈｅ ｒａｔ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｏｒｔａ［Ｊ］．Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，ｌ９９６，１１８ （６）：ｌ５０９一ｌ５１ ７． ｔｒｏｐｈｉｌｓ：Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉ０Ｉｏｇｉｃａｌ ａｓｐｅｃｔｓ［Ｊ］． Ｉ ａｂＩｎｖｅｓｔ，２０００，８０（５）：６１ ７—５３． ［１ｏ］Ｌａｐｐａｓ ＣＭ，Ｒｉｅｇｅｒ ＪＭ，Ｌｉｎｄｅｎ Ｊ．Ａ２Ａ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎｄｕｃ ｔｉｏｎ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ＩＦＮ—ｇａｍｍａ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｍｕｒｉｎｅ ＣＤａ Ｔ ｃｅｌｌｓ［Ｊ］． Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００５，ｌ７４（２）：１０７３—１０８０． 作者简介：田金（１９８４），女，现为山西医科大学在读硕士研究生（邮编 ０３０００１）；王雄（通讯作者），工作于山西医科大学第一医院（邮编 ０３０００１）。 ［１１］Ａｂｒａｈａｍ Ｅ．ＮＦ—ｋａｐｐａＢ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，２０００，２８ （４Ｓｕｐｐ１）Ｎ１００一ＮｌＯ４． （收稿日期：２００９—１２—０４） （本文编辑王雅清） 侧脑室注射ＳＴＺ对大鼠学习记忆障碍及 海马 ｔａｕ 蛋白ＡＤ特异性位点磷酸化增加的影响 第五永长，辛馥伶，李敏，赵娜。苗迎春，时晶 摘要：目的 验证侧脑室注射链脲佐菌素（ｓＴｚ）阻断脑内胰岛素信号转导致脑能量代谢缺陷与阿尔茨海默病（ＡＤ）样学习记忆 障碍及ｔａｕ蛋白磷酸化的关系。方法 ３６只ＳＤ大鼠随机分为模型组和假手术组，模型组双侧侧脑室注射ＳＴＺ ３ ｍｇ／ｋｇ，第３天重 复１次，假手术组侧脑室注射等量的人工脑脊液代替ＳＴＺ。的２ｌ天、第３１天后分别对一批动物进行学习记忆能力测试，同时免疫 组化及Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ方法检测两组大鼠海马ｔａｕ—ｐｓ 表达。结果 与假手术组相比，模型组大鼠出现学习记忆障碍，海马ＣＡ １ 区ｔａｕ—ｐｓ４２２阳性细胞明显增多，以第３１天更为明显，Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ结果相同（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论 侧脑室注射ＳＴＺ可 以引起ＡＤ样学习记忆障碍及脑内ｔａｕ蛋白ＡＤ特异性位点Ｓｅｒ４２２磷酸化水平增加。 关键词：阿尔茨海默病；侧脑室注射；ｔａｕ蛋白 中图分类号：Ｒ７４９．１ Ｒ２５５．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７２一】３４９（２Ｏ１０）Ｏ８—０９６１ ０３ 阿尔茨海默病（Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ，ＡＤ）是一种以进行性 记忆认知损害和智能障碍为主的中枢神经系统退行性疾病。目 前公认的ＡＤ核心病理特征为大脑局部，尤其是海马和皮层神 经元退行性病变，细胞内神经原纤维缠结（ＮＦＴ）和细胞外老年 斑（ＳＰ）沉积。然而，ＡＤ的病因和确切发病机制目前仍不清楚。 葡萄糖代谢紊乱和能量生成减少与淀粉样蛋白沉积以及ｔａｕ蛋 白过度磷酸化密切相关，可能促进了ＡＤ的发生。链脲佐菌表 （ＳＴＺ）侧脑室注射已被证实可以引起大鼠脑持久的葡萄糖代谢 １．２ 药品与试剂 链脲佐菌素：Ｓｉｇｍａ公司：抗体：ｐＳ２１４ （ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测及免疫组化检测的一抗分别购自Ｂｉｏｓｏｕｒｅｅ 和Ａｂｃａｍ公司）。 １．３ ＩＣＶ—ＳＴＺ拟ＡＤ模型制备 参考Ｓｈａｒｍａ等２ｌ方法，所 有大鼠经１０ 水合氯醛（４ ｍＩ ／ｋｇ）麻醉后，固定于江湾Ｉ型Ｃ 大鼠立体定位仪上，常规消毒皮肤，正中矢状切口，分离骨膜，锥 颅器钻开颅骨，暴露硬脑膜。除假手术组外，其余动物均用微量 注射器每侧侧脑室各注射ＳＴＺ约１８“Ｉ （３ ｍｇ／ｋｇ，注射前将 ＳＴＺ溶于人工脑脊液，浓度为２５ ｍｇ／ｍＬ）。坐标参考《大鼠脑 紊乱、能量生成障碍伴海马乙酰胆碱转移酶活性降低和氧化应 激反应以及学习记忆障碍０ ，然而其与ＡＤ病理改变的联系未 得到进一步实验证实。本实验进一步观察了ＳＴＺ侧脑室注射 对大鼠学习记忆及海马组织ｔａｕ蛋白ＡＤ特异性磷酸化位点 Ｓｅｒ４２２的磷酸化程度的影响。 １材料与方法 立体定向图谱》 ］：前囟后１．５ ＩＴｌｍ。矢状缝左右旁开１．５ ｍｍ，脑 表面下３．５ ｍｍ。第３天重复注射，剂量同前。假手术组以等量 人工脑脊液替代ＳＴＺ。术后常规饲养２１ ｄ后行为学测试并处 理第一批，３１ ｄ后行为学测试并处理第二批动物。 １．４ 学习记忆能力测试 采用Ｍｏｒｒｉｓ水迷宫试验法。 １．５脑组织样品处理于行为学测试完毕后，分别于、两个时 １．１动物及分组 ＳＰＦ级健康雄性Ｓｐｒａｇｕｅ—Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大 鼠３６只，体重（２５０４－２０）ｇ。随机分成假手术组、ＳＴＺ侧脑室注 射模型组，每组１８只。实验过程巾动物自由摄食和饮水（术前 禁食除外），室温２２℃～２６℃，湿度为２８ ～３Ｏ 。 问点选取动物，灌注固定，按４ ｒｎＩ ／ｋｇ的剂量腹腔注射１Ｏ 水 合氯醛麻醉大鼠。迅速插导管于左心室至升主动脉并同定，同 时剪开右心耳。快速灌注生理盐水１Ｏ¨Ｏ ｍＬ至肝脏完全变白， ・ ９６２ ・ ＣＨＩＮＥＳＥ ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＩＮＴＥＧＲＡＴＩＶＥ ＭＥＤＩＣＩＮＥ ＯＮ ＣＡＲＤ１０一／ＣＥＲＥＢＲＯＶＡＳＣＵＩ ＡＲ ＤＩＳＥＡＳＥ Ａｕｇｕｓｔ Ｎｏ．８ 右心室流出澄清液体后，更换４ 多聚甲醛先快后慢继续灌注 ３０ ｍｉｎ，然后断头，完整取出鼠脑，置固定液中，２４ ｈ后石蜡包埋 切片。每只大鼠海马ＣＡ１区出现后连续冠状切片，放入０．０ｌ １．６统计学处理计量资料以均数土标准差（ｊ±ｓ）表示，免疫 组化和免疫印迹结果采用Ｋｏｄａｋ图像分析系统及Ｉｍａｇｅ—ｐｒｏ— ｐｌｕｓ软件处理。使用ＳＰＳＳ１７．０软件分析。两组间采用两 样本ｔ检验。 ２ 结 果 ｍｏｌ／Ｌ ＰＢＳＴ的溶液中进行免疫组化染色。 Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ蛋白印迹检测取用新鲜脑组织置液氮中速 冻后保存于一７Ｏ℃冰箱。 ２．１行为学测试结果（见表１、表２） 表１ 造模２１ ｄ后两组定位航行试验结果（ｉ±ｓ） ２．２免疫组化检测结果（见表３） 表３造模第２１天、第３１天后大鼠海马ＣＡｌ区ｔａｕ—ｐｓ 表达（ｊ±Ｓ） ２．３ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果（见表４） 表４造模第３１天后大鼠海马区ｔａｕ—ｐｓ 表达（ｉ±Ｓ） 组别 假手术组 模型组 ６．８１±１．９８ ２３．９６±３．２８ ＳＡＤ的病理特征。目前认为，ＳＴＺ破坏Ｉｎｓ／ＩＲ信号转导通路， 降低了大鼠脑内葡萄糖利用（Ｇｕ），引起脑能量代谢障碍，ＡＴＰ、 ＧＴＰ生成减少，造成认知功能相关皮层的神经细胞功能受损， 影响突触传递和突触可塑性，导致学习记忆功能障碍，这也是弓ｌ 起基底前脑合成乙酰胆碱减少、氧化应激、轴突和突触损伤的基 础。近年进一步研究认为，大脑葡萄糖代谢低下可通过改变ｔａｕ 的Ｏ—ＧｌｃＮＡｃ糖基化修饰调节ｔａｕ的磷酸化，在ＡＤ发病机制 中起着重要作用。与脑葡萄糖能量代谢障碍同时存在的葡萄糖 转运体ＧＬＵＴｌ与ＧＬＵＴ３减少和ｔａｕ蛋白的０一ＧｌｃＮＡＣ糖基 与假手术组比较，１）Ｐ＜０．０１ ３讨论 ＳＴＺ是一种甲基亚硝基脲产物，具有抗菌、抗肿瘤的性能 和致糖尿病的副反应。１９９６年Ｈｏｙｅｒ带领的研究小组首次用 侧脑室注射ｓＴ２的方法来干扰胰岛素／受体（Ｉｎｓ／ＩＲ）信号系 统，使脑内出现渐进性葡萄糖和糖原合成减少［４ 。而有实验证 明Ｉｎｓ／ＩＲ信号转导系统障碍是引起ＡＤ脑内葡萄糖／能量代谢 异常的主要原因 ｊ，在此基础上形成糖基化终末产物（ＡＧＥｓ）， 化水平呈正相关，同时也与ｔａｕ蛋白的磷酸化水平呈负相关。 葡萄糖代谢障碍引起Ｔａｕ的０一ＧｌｃＮＡＣ糖基化修饰水平下 降，促进了ｔａｕ的过度磷酸化和ＡＤ重要病理改变ＮＦＴ的形成ｌ８］。 本实验结果显示，大鼠侧脑室注射ＳＴＺ后第２１天即出现 明显的学习记忆障碍．模型组与假手术组比较有统计学意义 并最终导致ＡＩ？及ＮＦＴ的形成 。２００５年美国布朗医学院的 ｄｅｌａ Ｍｏｎｔｅ教授和她的研究小组验证了ＡＤ是“３型糖尿病”的 假说。通过对尸检脑组织进行检测，发现ＡＤ患者脑内胰岛素、 ＩＧＦ及其受体的蛋白含量和基因表达均较对照组明显降低； ２００６年该小组通过对小鼠侧脑室注射ＳＴＺ的方法阻断胰岛素 受体自身磷酸化和内在的酪氨酸激酶活性ｌ７］，损伤胰岛素和 ＩＧＦ信号转导通路，实验发现，微量的ＳＴＺ未引起外周血糖升 高，胰腺结构和胰岛素的免疫活性也没受到影响；却出现脑体积 （Ｐ＜Ｏ．０１）；随着时间的延长第３１天后大鼠的学习记忆障碍不但 没有恢复，而且有进一步加重趋势（Ｐ＜Ｏ．０１）。同时，造模第２１ 天模型组大鼠海马ＣＡ１区ｔａｕ—ｐｓ 。 即有阳性表达，而假手术 组则不明显，造模第３１天模型组大鼠海马ＣＡ１区ｔａｕ—ｐｓ 表 达更为明显，而假手术组几乎没有阳性表达。Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检 测结果显示：随着时间的延长，造模第３１天模型组大鼠在５Ｏ ｋＤ～ ７１ｋＤ之间条带（约６７ｋＤ，为ｔａｕ—ｐｓ 的表达）明显比假手术 组大鼠在这一区域的条带粗，说明造模第３１天模型组大鼠海马 缩小，细胞丢失、神经胶质增生、Ａ８沉积增多、ｔａｕ蛋白过度磷酸 化、泛素化等惊人变化，学术界一致认为该模型成功地模拟了 ｔａｕ蛋白在Ｓｅｒ４２２位点的磷酸化水平明显高于假手术组。近几 年对于ｔａｕ蛋白磷酸化位点的研究表明，Ｓｅｒ４２２位点是ＡＤ特 中西医结合心脑血管病杂志２０１０年８月第８卷第８期 ・ ９６３ ・ ｒ６］ Ｍｎｎｃｈ Ｇ，Ｓｃｈｉｎｚｅｌ Ｒ，Ｌｏｓｋｅ Ｃ，ｅｌ ａ１．Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ—ｓｙｎｅｒ ｇｉｓｔｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｄｅｆｉｃｉｔ，ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃａ— 异性位点，其磷酸化使ｔａｕ变成毒性分子从而拮抗正常微管相 关蛋白的作用｜９Ｊ，Ｔｈｒ２３１，Ｓｅｒ３９６和Ｓｅｒ４２２的进一 步磷酸化则可促使ｔａｕ自身聚积成纤维状结构。Ｔａｕ羧基端 （Ｓｅｒ３９６，Ｓｅｒ４０４，Ｓｅｒ４２２）的磷酸化对其形成双股螺旋丝（ＰＨＦ） 起关键作用Ｄｏ－１ ２］。 ＳＴＺ侧脑室注射可引起大鼠学习记忆障碍及海马组织ｔａｕ 蛋白ＡＤ特异性磷酸化位点Ｓｅｒ４２２的磷酸化水平增加，这对于 ［７］ｔｉｏｎ ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ，１９９８，１０５（４—５）：４３９— ４６１． Ｌａｎｎｅｒｔ Ｈ，Ｈｏｙｅｒ Ｓ．Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕ１ａｒ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ ｃａｕｓｅｓ ｌｏｎｇ—ｔｅｒｍ ｄｉｍｉｎｕｔｉｏｎｓ ｉｎ ｌｅａｒｎｉｎｇ ａｎｄ ｍｅｍｏｒｙ ａｂｉｌｉｔｉｅｓ ａｎｄ ｉｎ ｃｅｒｅｂｒａｌ ｅｎｅｒｇｙ ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ ｉｎ ａｄｕｌｔ ｒａｔｓ ［Ｊ］．Ｂｅｈａｖ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１９９８，儿２：１１９—２０８． ［８］Ｌｉｕ Ｙ，Ｌｉｕ Ｆ，Ｉｑｂａｌ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ ｅｏｒｒｅ— ｌａｔｅ ｔｏ ａｂｎｏｒｍａｌ ｈｙｐｅｒｐｈｏｓ—ｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｕ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓ— 进一步形成ＰＨＦ／ＮＦＴ非常重要，因而是较为理想的散发性 ＡＤ（ＳＡＤ）模型，可用于ＡＤ的脑能量代谢及ｔａｕ蛋白磷酸化方 面的研究。 ｅａｓｅｉ Ｊ １．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ，２００８，５８２（２）：３５９—３６４． ［９］ Ａｌｏｎｓｏ Ａ，Ｄｅｌ Ｃ，Ｍｅｄｅｒｌ Ｙｏｖａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｍｏｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｅｒｐｈｏｓ— ｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｂｙ ｆｒｏｎｔｏｔｅｍｐｏ—ｒａｌ ｄｅｍｅｎｔｉａ ｔａｕｍｕｔａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００４，２７９：３４８７８—３４８８１． 参考文献： ［１］Ｂｌｏｋｌａｎｄ Ａ，Ｊｏｌｌｅｓ Ｊ．Ｓｐａｔｉａｌ ｌｅａｒｎｉｎｇ ｄｅｆｉｃｉｔ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｄ ｈｉｐｐｏｃａｍ ｐａｌ ＣｈＡＴ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ ｒａｔｓ ａｆｔｅｒ ａｎ ＩＣＶ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃＩｎ ｒｌＯ］ Ａｂｒａｈａ Ａ，Ｇｈｏｓｈａｌ Ｎ，Ｇａｍｂｌ Ｉｎ Ｔ Ｃ，ｅｔａ１．Ｃ—ｔｅｒｍｉｎａｌ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔａｕ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｓｅｉ， ２０００，１１３：３７３７—３７４５． ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｅｈａｖ，１９９３，４４：４９１—４９４． ［２］ Ｓｈａｒｍａ Ｍ，Ｇｕｐｔａ ＹＫ．Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒ０ｖｅｎｔｒｉｃｕ１ａｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｔｒｅｐｔｏ ｚｏｔｏｃｉｎ ｉｎ ｒａｔｓ ｐｒｏｄｕｃｅｓ ｂｏｔｈ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｉｎ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ａｎｄ ｃｏｇ— ［１１］Ｈａａｓｅ Ｃ，Ｓｔｉｅｌｅｒ Ｊ，Ａｒｅｎｄ ＴＴ，ｅｔ ａ１．Ｐｓｅｕｄ０ｐｈ０ｓｐｈｏｒｙ１ａｔｉ。ｎ ｏｆ ｔａｕ Ｐ ｒｏｔｅｉｎ ａｌｔｅｒｓ ｉｔｓ ａｂｉｌｉｔｙ ｆｏｒ ｓｅｌｆ—ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ， ２００４，８８：１５０９—１５２０． ｎｉｔｉｖｅ ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０００，６８（９）：１０２１—１０２９． ｒ１２］ Ｆｅｒｒａｒ ＩＡ，Ｈｏｅｒｎｄｌ ＩＦ，Ｂａｅｃｈ ＩＴ，ｅｔ ａ１．Ｂｅｔａ—ａｍｙｌｏｉｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ［３］包新民，舒斯云．大鼠脑立体定向图谱［Ｍ］．北京：人民卫生出版 社，１９９１：１２一ｌ８． ｐａｉｒｅｄ ｈｅｌｉｃａｌ ｆｉｌａｍｅｎｔ—ｌｉｋｅ ｔａｕ ｆｉｌａｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２００３，２７８：４Ｏ１６２—４０１６８． ［４］Ｈｏｙｅｒ Ｓ，Ｈｅｎｎｅｎｂｅｒｇ Ｎ，Ｋｎａｐｐｅｔ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｂｒａｉｎ ｇｌｕｃｏｓｅ ｍｅｔａｂｏ— ｌｉｓｍ ｉｓ ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｂｙ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚａｔｉ０ｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｕｒｏ— 作者简介：第五永长（１９７１一），男，副主任医师，副教授，博士研究生，北 京中医药大学第一临床医学院博士研究生，现工作于陕西中医学院中医 临床医学院（邮编：７１２０４６）；辛馥伶、李敏、赵娜，工作于陕西中医学院； 苗迎春、时晶，工作于北京中医药大学东直门医院。 （收稿日期：２０１０一Ｏ１—２８） （本文编辑王雅洁） ｎａ１ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ［Ｊ］．Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ，１９９６，７７７：３７４—３７９． ［５］Ｆｒｏｌｉｃｈ Ｌ，Ｂｌｕｍ—Ｄｅｇｅｎ Ｄ，Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ ＨＧ，ｅｔ ａ１．Ｂｒａｉｎ ｉｎｓｕｌｉｎ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ａｇｉｎｇ ａｎｄ ｓｐｏｒａｄｉｃ Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊ Ｎｅｕｒａｌ Ｔｒａｎｓｍ，１９９８，１０５（４—５）：４２３—４３８． 缺血性卒中模型大鼠脑组织ＯＭｇｐ的 表达及中药干预作用 王中琳 摘要：目的 观察首鸟仙海片干预少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（ｏＭｇｐ）在缺血性卒中模型大鼠脑组织中的表达，探讨其促进神经 再生的作用机制。方法 ２４０只ＳＤ大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组和药物组，并根据病程每组又分为３ ｄ、１周、２周、４ 周、６周５个亚组，每个亚组动物数为１２只。用改良的Ｌｏｎｇａ法制备大脑中动脉阻塞大鼠模型，药物组灌胃给予首乌仙海片水溶 液，余各组分别灌胃给予同剂量的蒸馏水。用免疫组织化学法观察各组大鼠梗死周边区脑组织０Ｍｇｐ的表达。结果 模型组大鼠 脑内ＯＭｇｐ在梗死后即开始表达，２周时达到高峰，第６周时仍处于高表达状态，明显高于正常对照组（Ｐ＜０．０１）。药物组ＯＭｇｐ表 达与模型组比较均有统计学意义（Ｐ＜Ｏ．０５或Ｐ＜０．０１）。结论 首乌仙海片可抑制ＯＭｇｐ的表达，对神经再生有促进作用。 关键词：首乌仙海片；缺血性卒中；神经再生抑制因子；少突胶质细胞髓鞘糖蛋白；大鼠 中图分类号：Ｒ７４３．３ Ｒ２５５．２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７２—１３４９（２０１０）０８—０９６３—０３ 影响缺血性卒中神经再生和重塑的因素主要包括促进因素 和抑制因素，而抑制因素在神经再生过程中扮演着更为重要的 角色，能否有效解除抑制效应是中枢神经再生的关键ｌ１ 。迄今 １．１ 材料 １．１．１动物和分组雄性ＳＤ大鼠 ２４０只，体质量２５０ ｇ～３００ ｇ，山东中医药大学实验动物中心提供，合格证号：鲁动质字 ０００２３４２。２４０只大鼠随机分为正常对照组、假手术组、模型组、 少突胶质细胞髓鞘糖蛋白（ＯＭｇｐ）是已发现的主要的抑制轴突 生长的蛋白之一。前期研究表明［２］，滋补肝肾中药首乌仙海片 药物组，并根据脑缺血病程每组又分为３ ｄ、１周、２周、４周、６周 共５个亚组，每个亚组各为１２只。 可诱导缺血性卒中神经功能重塑，促进神经轴突的再生。本研 究通过观察首乌仙海片干预局灶性脑缺血模型大鼠脑组织中 ＯＭｇｐ含量的变化，进一步探讨中药在脑梗死后脑功能重塑中 的作用机制。 １材料与方法 １．１．２药物与试剂 首乌仙海片主要药物有制首乌、仙灵脾、 海马、桑寄生、草决明等，由山东鲁信药业有限公司提供，批号 ２００７０３０７０１，并按照成人剂量的２ｏ倍［９ ｇ／（ｋｇ・ｄ）］将其制成
