(12)发明专利申请
(10)申请公布号 CN 110251487 A(43)申请公布日 2019.09.20
(21)申请号 201910709057.1(22)申请日 2019.08.01
(71)申请人 郑州大学
地址 450001 河南省郑州市高新技术开发
区科学大道100号(72)发明人 郭新红 李宵 蔡青青 范淑婷
廉欣洁 虎文涛 张振中 (74)专利代理机构 郑州天阳专利事务所(普通
合伙) 41113
代理人 蔡文雅(51)Int.Cl.
A61K 9/51(2006.01)A61K 47/42(2017.01)A61K 31/337(2006.01)A61P 35/00(2006.01)
权利要求书2页 说明书4页
(54)发明名称
一种提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法及其应用(57)摘要
本发明涉及提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法及其应用，可有效解决现有多西他赛纳米粒载药量低和口服抗肿瘤无效的问题，其解决的技术方案是，包括以下步骤：1）称取PC-80、Zein混合物加入到无水乙醇中，将DTX溶于乙醇并加入上述溶液，作为乙醇相；2）在磁力搅拌下将乙醇相以滴加到装有超纯水的烧杯中，磁力搅拌，然后放入的水浴锅中，除去乙醇，得DTX-Zein纳米粒混悬液；3）将乳糖或聚乙烯醇溶液作为微球材料溶液；4）将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1-2:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球，本发明提出的醇溶蛋白纳米粒可显著增加多西他赛的载药量和口服生物利用度。
CN 110251487 ACN 110251487 A
权 利 要 求 书
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1.一种提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）称取重量比为1-3:1-6的PC-80、Zein混合物20-100mg，加入到10mL体积浓度为50%-90%的无水乙醇中，超声5-30min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：2-100，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
2）在磁力搅拌下将10mL乙醇相以1-5mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1:1-20，磁力搅拌10min-180min，然后放入40℃-70℃的水浴锅中，以300-1200rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；
3）将质量体积浓度为0.02%-0.6%的乳糖或聚乙烯醇溶液作为微球材料溶液；4）将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1-2:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。
2.根据权利要求1所述的提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）称取重量比为1:6的PC-80、Zein混合物60mg，加入到10mL体积浓度为60%的无水乙醇中，超声6min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：10，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
2）在磁力搅拌下将10mL乙醇相以2mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1: 20，磁力搅拌30min，然后放入50℃的水浴锅中，以300rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；
3）将质量体积浓度为0.2%的乳糖溶液作为微球材料溶液；4）将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。
3.根据权利要求1所述的提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）称取重量比为1:1的PC-80、Zein混合物80mg，加入到10mL体积浓度为70%的无水乙醇中，超声10min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：8，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
2）在磁力搅拌下将10mL乙醇相以1mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1:3，磁力搅拌80min，然后放入60℃的水浴锅中，以600rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；
3）将质量体积浓度为0.4%的乳糖溶液作为微球材料溶液；4）将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比2:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。
4.根据权利要求1所述的提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）称取重量比为1:1.5的PC-80、Zein混合物100mg，加入到10mL体积浓度为80%的无水乙醇中，超声15min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：9，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
2）在磁力搅拌下将10mL乙醇相以3.5mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，
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权 利 要 求 书
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乙醇相与超纯水的体积比为1:2，磁力搅拌120min，然后放入60℃的水浴锅中，以900rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；
3）将质量体积浓度为0.05%的PVA溶液作为微球材料溶液；4）将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1.8:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。
5.根据权利要求1所述的提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）称取重量比为2:1的PC-80、Zein混合物100mg，加入到10mL体积浓度为90%的无水乙醇中，超声30min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：6，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
2）在磁力搅拌下将10mL乙醇相以5mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1:1，磁力搅拌180min，然后放入70℃的水浴锅中，以1200rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；
3）将质量体积浓度为0.08%的PVA溶液作为微球材料溶液；4）将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。
6.权利要求1-5任一项所述方法制备的醇溶蛋白纳米粒微球在制备多西他赛口服制剂中的应用。
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一种提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米
粒的制备方法及其应用
技术领域
[0001]本发明涉及医药领域，特别是一种提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法及其应用。
背景技术
[0002]临床上抗癌药多西他赛因为口服生物利用度低而只能采用静脉注射给药方式进行疾病的治疗，静脉给药需要频繁的注射，患者的依从性较差，血药浓度波动较大导致明显的毒副作用，抗肿瘤药物也需要较长时间服药，口服给药患者可自行用药，患者依从性高，多西他赛口服后生物利用度低是因为存在溶解度很低、明显的肝首过效应和肠吸收外排等障碍，目前该药的普通制剂(药物以分子状态进行肠吸收)，口服后难以克服这些障碍导致生物利用度很低。随着社会的发展和生活水平的提高，口服药物的开发必然成发展趋势。[0003]纳米粒是一个提高多西他赛口服生物利用度的有效策略，不过目前多西他赛纳米粒一般载药量较低，难以满足临床给药剂量的要求，载药纳米粒直接口服给药，由于在胃肠道滞留时间短，不能充分在肠道吸收，影响其吸收效果，且采用药用辅料制备的纳米粒口服生物口服生物利用度较低，难以满足临床应用的要求，不少纳米载体不能全部采用药用辅料，限制其临床开发和应用，因此如何采用药用辅料制备纳米粒并提高载药纳米粒的载药量和口服生物利用度是目前国内外研究的焦点之一，也是临床开发应用的重要障碍，而如何克服以上障碍，有效提高口服生物利用度，积极推动其进入临床应用，目前尚未见有相关报道。
发明内容
[0004]针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种提高多西他赛载药量和口服生物利用度的醇溶蛋白纳米粒的制备方法及其应用，可有效解决现有多西他赛纳米粒载药量低和口服抗肿瘤无效的问题，并积极推动多西他赛口服制剂的开发。[0005]本发明解决的技术方案是，包括以下步骤：
[0006]1)称取重量比为1-3:1-6的PC-80(大豆卵磷脂)、Zein(玉米醇溶蛋白)混合物20-100mg，加入到10mL体积浓度为50％-90％的无水乙醇中，超声5-30min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX(多西他赛)溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：2-100，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
[0007]2)在磁力搅拌下将10mL乙醇相以1-5mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1:1-20，磁力搅拌10min-180min，然后放入40℃-70℃的水浴锅中，以300-1200rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；
[0008]3)将质量体积浓度为0.02％-0.6％的乳糖或聚乙烯醇(PVA)溶液作为微球材料溶液；
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4)将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1-2:1搅拌混匀，喷雾干燥，
即得醇溶蛋白纳米粒微球。
[0010]所述方法制备的提高难溶性多西他赛口服生物利用度的纳米粒微球在制备多西他赛口服制剂中的应用。
[0011]本发明提出的醇溶蛋白纳米粒可显著增加多西他赛的载药量和口服生物利用度，本发明方法主要采用醇溶蛋白药物辅料进行制备，安全无毒无刺激，将极大的推动多西他赛纳米粒口服制剂的开发，具有极大的推广价值和应用前景。具体实施方式
[0012]以下结合实施例对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。[0013]实施例1
[0014]本发明在具体实施中，纳米粒微球的制备方法也可由以下步骤实现：[0015]1)称取重量比为1:6的PC-80、Zein混合物60mg，加入到10mL体积浓度为60％的无水乙醇中，超声6min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：10，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
[0016]2)在磁力搅拌下将10mL乙醇相以2mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1:20，磁力搅拌30min，然后放入50℃的水浴锅中，以300rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；[0017]3)将质量体积浓度为0.2％的乳糖溶液作为微球材料溶液；
[0018]4)将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。[0019]实施例2
[0020]本发明在具体实施中，纳米粒微球的制备方法也可由以下步骤实现：[0021]1)称取重量比为1:1的PC-80、Zein混合物80mg，加入到10mL体积浓度为70％的无水乙醇中，超声10min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：8，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
[0022]2)在磁力搅拌下将10mL乙醇相以1mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1:3，磁力搅拌80min，然后放入60℃的水浴锅中，以600rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；[0023]3)将质量体积浓度为0.4％的乳糖溶液作为微球材料溶液；
[0024]4)将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比2:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。[0025]实施例3
[0026]本发明在具体实施中，纳米粒微球的制备方法也可由以下步骤实现：[0027]1)称取重量比为1:1.5的PC-80、Zein混合物100mg，加入到10mL体积浓度为80％的无水乙醇中，超声15min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：9，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
[0028]2)在磁力搅拌下将10mL乙醇相以3.5mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1:2，磁力搅拌120min，然后放入60℃的水浴锅中，以900rpm
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磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；[0029]3)将质量体积浓度为0.05％的PVA溶液作为微球材料溶液；
[0030]4)将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1.8:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。[0031]实施例4
[0032]本发明在具体实施中，纳米粒微球的制备方法也可由以下步骤实现：[0033]1)称取重量比为2:1的PC-80、Zein混合物100mg，加入到10mL体积浓度为90％的无水乙醇中，超声30min使其溶解，磁力搅拌1h，将DTX溶于1mL乙醇并加入上述溶液，DTX与Zein的重量比为1：6，再磁力搅拌1h，作为乙醇相；
[0034]2)在磁力搅拌下将10mL乙醇相以5mL/min的速度缓慢滴加到装有超纯水的烧杯中，乙醇相与超纯水的体积比为1:1，磁力搅拌180min，然后放入70℃的水浴锅中，以1200rpm磁力搅拌2h除去乙醇，过0.45μm微孔滤膜，得DTX-Zein纳米粒混悬液；[0035]3)将质量体积浓度为0.08％的PVA溶液作为微球材料溶液；
[0036]4)将微球材料溶液与DTX-Zein纳米粒混悬液按体积比1:1搅拌混匀，喷雾干燥，即得醇溶蛋白纳米粒微球。
[0037]本发明方法制备的DTX-zein纳米粒粒径较小，分布均匀，可显著提高载药量，纳米粒混悬液喷球后固体化，载药量可达到4％-8％，结果如表1所示，为满足临床应用时剂量要求提供了重要的保障，目前大多DTX纳米粒制剂的载药量较低，一般在1％-3％左右，很难满足临床用药剂量的要求，这是限制纳米粒临床推广的主要原因之一，本发明则显著提高了DTX-zein纳米粒的载药量。[0038]表1 DTX-zein纳米粒及其微球的制剂学参数(平均值±SD,n＝6)
[0039]
[0040]
本发明方法制备的DTX-zein纳米粒微球可显著提高多西他赛口服生物利用度，可有效提高抗癌药物口服的药效，实现醇溶蛋白在制备抗癌药物口服纳米粒制剂中的应用。[0041]本发明所述方法经过反复多次试验，均得出相同或相近的结果，相关实验资料如下：
[0042]本发明提出的DTX-zein纳米粒微球提高多西他赛口服生物利用度的试验数据具体如下：
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1.动物：SPF级Sprague Dawley大鼠，雌性，体重200±20g，由郑州大学实验动物中
心提供。合格证编号：SCXK(豫)2015-0004。每组动物数为5只。[0044]2.药动学实验分别将大鼠分成7组，实验前禁食12h，自由饮水。不同制剂大鼠灌胃或静注后，分别在规定时间点眼眶取血，并置于已经肝素化处理的离心管内，5000rpm离心10min后取血浆。采用高效液相色谱法测定血药浓度，各制剂对应的药动学参数见表2所示。[0045]表2 DTX-zein纳米粒及其微球大鼠灌胃后药动学参数(平均值±SD,n＝5)
[0046]
由表1可知，DTX-zein纳米粒与0.05％PVA按照体积比1:1喷的微球大鼠灌胃后，与duopafei口服组相比，显著提高峰浓度(Cmax)约8倍，显著延长体内滞留时间(MRT)24.56倍，显著提高其口服生物利用度98倍；DTX-zein纳米粒与0.2％乳糖按照体积比1:1喷的微球大鼠灌胃后，与duopafei口服组相比，显著提高峰浓度(Cmax)约7倍，显著延长体内滞留时间(MRT)41.86倍，显著提高其口服生物利用度86倍。关键是DTX-zein纳米粒，DTX-zein纳米粒与0.2％乳糖按照体积比1:1喷的微球以及DTX-zein纳米粒与0.05％PVA按照体积比1:1喷的微球的口服生物利用度均远远超过20％，预示着口服抗肿瘤是有效的，而且醇溶蛋白是常用的药用辅料，常作为包衣材料，是天然的植物蛋白，价廉易得，安全无毒无刺激，而微球材料主要采用乳糖或聚乙烯醇，这些也都是采用的药用辅料，这些制剂均具有很好的开发和应用前景。因此DTX-zein纳米粒微球具有很好的应用前景。[0048]本发明醇溶蛋白纳米粒微球，对于原来采用常规制剂口服无效的多西他赛原料药特别适合，将多西他赛制备成醇溶蛋白纳米粒微球，可以明显提高纳米粒的载药量以及口服利用度，使其口服有效，醇溶蛋白是常用的药用辅料，常常作为包衣材料，是天然的植物蛋白，价廉易得，安全无毒无刺激，微球材料也是常用的药用辅料，具有很好的应用前景。醇溶蛋白纳米粒微球主要适合于水难溶性药物多西他赛，醇溶蛋白纳米粒及其微球可以显著提高多西他赛的水溶解度和载药量，喷成微球后固态化，不仅可以提高其储存稳定性，还可以直接口服给药，病人可以自行用药，服药方便，病人依从性大大提高，微球可使纳米粒在小肠上端释放，使其在小肠的上端充分的吸收，提高了纳米粒肠吸收的效率，克服常规制剂中多西他赛的肠吸收过程中存在的障碍，如肝首过效应，肠外排现象等，提高其口服生物利用度，改变原来用原料药制备的常规制剂口服无效的现状，提高口服有效率，有显著的经济和社会效益。
[0047]
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