生化与分析技术

第一章生化实验室基本常识与常用技术第二章电泳技术第三章层析技术第四章光谱分析技术第五章生化制备技术

{生化与分析技术：是一门有关于生化实验常规技能以及仪器使用原理与正确的操作实验使用科学

生化分析技术应用：渗透于生物学研究的所有的领域 第一章 生化实验基本常识与常用技术 一实验室：安全防护知识

实验室安全常识：1进入实验室要严格遵守实验室的规章制度，开工作时前应该了解木阀门即电阀所在处，离开实验室时将室内检查一遍，将木电开关关好，门窗锁好。

2使用电器设备（如烘箱，恒温水浴，离心机，电炉等）严防触电；决不可用湿手或在眼睛旁视时开关电阀和电器开关。检测电器设备是否漏电时应将手背轻轻触及仪器的表面，凡是；漏电的仪器，一律不能用。

3使用浓酸，浓碱，必须小心操作，以防溅失。用吸管取这些试剂时，必须用吸球，决不可用嘴吸。若不慎溅到试验台上，必须及时用湿抹布擦洗干净。如触及皮肤，应立即治疗。 4使用可燃物，特别是易燃物（如乙醚酒精丙酮苯金属钠等）时，应该特别小心。不要大放在桌面上，更不应该放在靠经火焰上，只有在远离火源，或将火焰熄灭后，才可大量倾倒这类液体。低沸点的有机溶剂不准在火焰上直接加热，只能在浴上利用回流冷凝管加热或蒸馏。 5如果不慎倾出大量的易燃液体，应按照以下方法处理：（1）立即切断电源（2）打开窗户（3)用湿布将其移到较大的容器里，用橡皮塞改好容器瓶。

6易燃和易爆物质的残渣（如金属钠，白磷，火柴头）不得倒入污物桶 或水槽，应放入指定容器里。

7废液特别是强酸和强碱不能直接倒水槽，，应先稀释后在导入水槽，再用大量的水冲洗水槽。

实验室灭火方法：一旦失火后，切不可惊慌失措，应保持冷静，首先立即切断室内的电源，然后根据具体的情况积极正确的进行抢救和灭火，灭火的方法有：

1在可燃液体燃着时，应立即那开着火区一切可燃物，关闭通风器，防止扩大燃烧。若着火面积较小，可用石棉布，湿布，铁片，沙土覆盖，隔绝空气使之熄灭。覆盖时要轻，避免碰坏或打翻盛有易燃溶液。

2酒精即其他的可溶与水的液体着火时，可以用水灭火。

3汽油，甲醛，甲苯等有机溶剂着火时，应用石棉布，或沙土扑灭。决不能用水，否者反而会扩大燃烧面积。

4金属钠着火时可用沙子盖在它的上面。

5导线着火时，不能用水或（二氧化碳灭火器），应用断开电源或用四氯化碳灭火器灭火。 实验室急救

1受玻璃割破：首先必须检查伤口内无玻璃即金属物质碎片，然后用硼酸水洗，再涂碘酸红汞水，必要时用纱布包扎，若伤口较大或过深而大量出血，应在伤口的上部或上部扎紧止血，立即送往医院治疗。

2烫伤：一般用浓度为（90%—95%）的酒精消毒后，涂上苦味软膏 3强碱（如氢氧化钠，氢氧化钾），钾，钠等触及皮肤而引起的灼伤，首先应用5%碳酸氢钠溶液或氢氧化铵溶液洗涤（在用大量清水冲洗前，最好先用吸附性较强的纸将强酸溶液吸收） 4水银容易有呼吸道进入人体，也可由皮肤进直接吸收而进行积累性中毒，严重中毒症状是口中有金属味，呼出的气体也有气味;流唾液，打哈欠时疼痛，牙床即嘴唇上有硫化汞的黑色，淋巴腺及唾液腺肿大。若不慎中毒，应送往医院急救，急性中毒时，通常使用碳粉，或

呕吐剂彻底洗胃，或者食入蛋白（如一升牛奶加三个鸡蛋清)或蓖麻油解毒，并使之呕吐。 5强酸，溴等触及皮肤而致伤时应用大量清水清洗，自用5%的硼酸或2%的乙酸溶液洗涤 6酚触及到皮肤引起灼伤，可用酒精洗涤

7触电：触电时可按照下列方法之一切断电路，（1）关闭电源

(2)用干木棍使导线与被害者分开

(3)使被被害者与土地分开，受伤严重者应及时送往医院治疗，急救时急救者必须防止触电的安全措施，手脚必须绝缘 二实验室基本操作和实验常识 1玻璃仪器的的清洗

新购买的玻璃仪器的清洗

新购买的玻璃仪器表面常附有游离的碱性物质，可先用肥皂水（或去污粉）洗涮在用自来水清洗，然后浸泡在1%-2%的盐酸溶液中（不少4小时），在用自来水冲洗，最后用蒸馏水洗涤，2-3次后晾干，烘干

2使用过的玻璃仪器的使用1一般的玻璃仪器（试管，烧杯，锥形瓶量筒，先用水洗刷至无污物，再选用大小合适的毛刷蘸取去污粉或浸于肥皂水中将器皿内外细心的刷，用自来水洗净后，用蒸馏水冲洗后2-3次，倒置或至烘箱低温烘干，内壁不在有水珠为干净。 凡洗净的玻璃器皿，不应在容器壁上带有水珠，否者表示未洗干净 量器(洗量管，滴定管，量筒）等使用后立即浸泡在(不能烘干）， 工作完毕用流水清洗出去附着的试剂，蛋白质等物质，（切记不可加热烘干）晾干后浸泡在铬酸4-6小时(或过夜），在用自来水充分洗涤，最后用自来水充分洗涤，最后用蒸馏水多洗2-4次，晾干备用，

3洗涤液的种类和配制方法

（1）铬酸洗液（重铬酸钾-硫酸洗液或简称洗液）广泛用于玻璃仪器洗涤。常用的配置方法有一下四种:

（1）取100ml浓硫酸置于烧杯中，小心加热，然后慢慢加入5g重铬酸钾粉末，边加搅拌，待全部溶解后冷却，置于玻璃塞的细口瓶中

（2）取5g重铬酸钾置于150ml的烧杯中，加入5ml水，尽量使其溶解，慢慢加入浓硫酸100ml，随加随搅拌，冷却后贮存备用

（3）取80g重铬酸钾粉末置于100ml自来水中，慢慢加入工业硫酸100ml（边加边用玻璃棒搅拌

（4）取200g重铬酸钾粉末置于500ml自来水中，慢慢加入工业硫酸（边加边用玻璃棒搅拌）

（2）浓盐酸（工业用）：可用于洗去水垢或某些无机盐沉淀

（3）5%的草酸溶液，可用数滴硫酸酸化，可洗去高锰酸钾沉淀 (4) 5_10%磷酸三钠溶液可洗涤油污物

（5）30 %的溶液：洗涤二氧化碳测定仪器 （6）酒精与浓混合液最适合于洗净滴定管

（7）有机溶液如丙酮，乙醇，乙醚等可用于洗脱油脂，脂溶性染料，二甲苯可用于洗脱油漆污垢，肥皂水，有机溶剂及少量油污皆会使重铬酸钾溶液变绿，洗涤效果降低 （8）5%-10%的乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）加热煮沸洗涤蛋白质 （9）尿素洗涤剂：洗涤蛋白质

（10）NaOH的酒精溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液是两种强碱性的洗涤剂，对玻璃仪器的腐蚀性很强，清除内壁的污渍时间，洗涤时间不宜过长，要及时清洗

用上述洗液前，应将玻璃仪器用水多次清洗，除废液，用软纸擦去凡士林或羊毛脂，以防

4搅拌和震荡

（1）配制溶液时必须随时搅拌或震荡混合，配制完毕后必须充分搅拌或震荡混合 （2）搅拌时的用的玻璃棒必须两头烧圆滑

（3)搅棒的粗细长短必须与容器的大小和所配溶液的多少成适当的比例关系，不能用长而粗的玻璃棒去搅拌小离心管中的少量溶液

(4)搅拌时尽量沿着器壁搅拌，不搅入空气，不使液体飞溅

(5)震荡混合小离心管中液体时，可将离心管握于手中，以手腕，肩或肘作轴 (6)容量瓶混合溶液时，应倒持容量瓶摇动，用食指或掌心顶住瓶塞并不时翻动容量瓶（用于精确配制溶液）

(7)在分液漏斗中震荡液体时，应一手在适当倾斜下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，要不时的打开塞子放气。分液漏斗震荡液体时要一边震荡一边转塞子 (8)研磨配制胶体溶液要单向研磨 5沉淀的过滤和洗涤

（1）过滤黏度小的沉淀一般要用滤纸

（2）颗粒应根据沉淀的不同性质选择不同的滤纸。胶状沉淀应该用质松孔大的滤纸。一般大小形成结晶沉淀，应用致密孔较小的滤纸。而极细的沉淀应该用致密孔最小的滤纸。滤纸越致密，过滤就越慢。

（3）滤纸的大小应有沉淀的量来决定不应由溶液的体积来决定，沉淀量应装到滤纸高度的1/3左右，最多不超过1/2.通常使用直径为1-9cm的圆形滤纸

（4）在容器里洗涤沉淀一般采用倾注法。洗涤时采用少量多次的方法最有效。通常容易洗涤的粗粒晶体沉淀洗2-3次，难洗的粘稠无定型沉淀则需洗5-6次。每次应尽量倾干水分以防止沉淀流失。

（5）在漏斗中洗涤沉淀时，先将沉淀轻轻摊开在漏斗下部，再用吸管吸液加入漏斗上缘稍向下的地方，同时转动漏斗。 *注：沉淀过滤和洗涤工作要一次完成，不可间断。通常洗去沉淀所吸收的不挥发物质约8-10次

6实验室常识

（1）挪动干净玻璃仪器时，勿触摸仪器内部

（2）量瓶是量器，不要用量瓶做盛器。量瓶等带有磨口的玻璃塞的仪器的塞子不要盖错。盖玻璃塞的玻璃仪器或玻璃瓶等暂时不能使用，要用纸条把瓶口和瓶塞隔开，洗净的仪器要放在架上或纱布上晾晒，不能用抹布擦。

（3）不要用滤纸称量药品(要用硫酸纸)，更不能用滤纸做记录

（4）不要用纸片覆盖烧瓶或锥形瓶等，不要用石蜡封闭精细药瓶的瓶口，以免掺混，不要用棉花代替木塞或橡胶塞堵瓶口或试管口。

（5）标签纸的大小应该与容量瓶相称，或用大小相等的白纸，绝对不能用滤纸，标签上应写明物质的名称，规格，浓度，配制的日期及配制人。标签应贴咋试剂瓶或2/3处，试管等细长容器应贴在上部。

（6）使用铅笔写标记时，要在玻璃仪器的磨砂玻璃处。如果用玻璃铅笔，则写在玻璃仪器的光滑面，还有记录笔等其他的标记方式（坩埚：在棕黄色FeCl3在烧到40-50度的时候写上去。

（7）凡是发生烟雾，有毒气体和有臭味气体的实验均应该在通风橱里进行，橱门应紧闭，非必要时不能打开

（8）取用试剂和标准溶液后应立即将瓶塞塞严，放回原处，未用勿倒回瓶内 （9）天平，分光光度计，离心机应十分重视

7试剂的配制

壹 一般注意事项

（1）称量要精确，特别是在配制标准溶液和缓冲液时应该注意严格称量。有特殊要求的，要按照规定进行干燥提纯等。

（2）一般溶液都应用蒸馏水或无离子水（即离子交换水）配制，有特殊要求的除外。 （3）化学试剂根据质量分为各种规格（如化学纯，分析纯），另外还有一些规格：如纯度很高的高谱纯，层析纯；纯度较低的工业用：药典纯等等、配制溶液时，应根据实验要求选择不同的规格的试剂。

（4）试剂应根据需要量配制，一般不宜过多，以免挤压浪费，过期失效。

（5）试剂（特别是液体）一经取出不能放回。试剂要用愿瓶塞塞紧，瓶塞不得沾染污物或沾污桌面。

贰 一些常用术语

（1)溶质：可均匀分布在另一种介质的物质，称为溶质 （2)溶剂：使溶质质点均匀分布的介质，称为溶剂。

（3)溶液;（1）真溶液：溶质颗粒的直径小于1*10-6mm 溶液里的溶质是以分子状态或离子状态均匀的分布在溶剂的分子之间（2）乳浊液：由两种均匀的散布着但又互不相溶的液体微小珠滴组成的溶液直径大于10-4mm

③悬浊液:在这种液体溶剂中间散布着固体的小颗粒，这些溶质颗粒直径大于1*10-4mm

④j胶体溶液：直径大于溶液小于浊液直径在1*10-6至1*10-4mm之间

（4)溶解：溶质均匀的分布在溶剂中

①溶解速度：在单位时间内，溶质的分子分布到溶剂里的量。受温度，压力，振动搅拌等影响。

②溶解热：1mol溶质溶解时所放出的热量

③饱和溶液：在一定的温度；压力下，溶剂中所溶解的溶质已达到最大量的溶液叫饱和溶液。若溶质在溶剂中所溶解的量超于饱和溶液的量称不饱和溶液。半饱和溶液是溶质在溶剂中所溶解的量相当于饱和溶液中该溶剂量的一半，在溶剂中溶质的量超于相应的饱和状态时，称为过饱和溶液。（绝对不溶的物质是没有的，易溶，难溶，不溶是相对的） ⑮溶解度：在一定的条件下所能溶解的最大量。溶质克数一般规定在常温120℃下某物种能溶解在100g水中的量，在10g以上称为易溶解物质；如果溶解的量小于1g则称难溶物质；若溶剂的量少于万分之一克，则称不溶解物质

⑯溶解浓度：在一定重量或一定体积的溶液中所含溶质的量，称为溶液的浓度。如百分浓度，摩尔浓度，和当量浓度 叁 常用试剂表示方法

⑪重量/体积百分比浓度（w/v）指100ml溶液中所含溶质的克数，一般用于溶质为固体的溶液的配置 例1%NaOH=1gNaOH加水至100ml

⑫重量/重量百分比浓度*（w/w）指100g溶液中所含溶质的克数，生产厂家生产液体酸.碱常用此法 例10%H2SO4 200g=20gH2SO4+180gH2O

⑬体积/体积百分比浓度（v/v）指100ml溶液中所含溶质的数用于液体溶质 70%乙醇=70ml乙醇+30ml水

⑭摩尔浓度（mol/l）（克分子浓度）指100ml溶液中所含溶质的mol数（克分子数） 1mol/L是指物质的分子量以克单位来表示

MW(HaON)=40 1mol/L NaOH 500ml（取20gNaOH）

⑮当量浓度（N）是指100ml溶液中所含溶质的克当量数

酸的当量=MW/酸分子中可被金属置换的H原子数 碱的当量=MW/碱分子中的OH- 数

氧化还原物质的当量=MW/每一分子失去或得到的电子数 *

*物质与物质的反应是等当量关系

MW 标准N浓度 重量浓度 比重 配* * * 需ml数 HCL 36.5 12 37-38 1.1g 84 H2SO4 98 35-36 96-98 1.84 28 乙酸 60 17 99.5 1.05 59 氨水 35 15 25-28 0.9 67 肆 常见溶液的配置

⑪重量(g)/克当量=可当量数=nv 当量定律N1V1=N2V2(其中N为当量浓度，V为溶液体积NV为毫克当量数) 例10gNaOH是多少克当量？NaOH克当量（即分子量）为40g 10/40=0.25（即10gNaOH为0.25个克当量） 1000*0.25=250=nv（毫克当量）若N=1 则V=200ml N=2 V=125ml

（2）重量百分浓度（W/W)与比重（d）,重量（w）之间的吧关系 W=d*v*X% 其中v为体积（ml） x%为百分浓度

例 500ml d为1.42含HNO3 70%的溶液中所含HNO3的重量是你多少？ W=1.42*500*70%

（3）摩尔浓度与重量之间的关系

（4）常用仪器的使用

①容量仪器的使用和校正

1 量筒：为粗量器，不能用来配制标准溶液，仅能用作粗略的度量液体体积，用量筒是要根据所量溶液的多少来选择 2量瓶（容量瓶）：量瓶不准加热，不必烘干，不准用量瓶储存溶液⒈溶质首先在小烧杯中加大量水溶解，再把溶液沿玻璃引入量瓶⒉检查是否漏水⒊不可加热，不能储存，必须立即洗净。⒋用必后必须垫一纸条，将塞盖好⒌用必要立即洗净，不必烘干，量瓶塞不能任意更换

3滴定管：有带玻璃塞的酸溶液滴定管和带橡皮塞的碱溶液滴定管两种。不能用选溶液滴定管盛碱溶液，以免把玻璃塞腐蚀，如必须使用，用完必须立即洗净。凡士林不能涂得太多，而把活塞小孔堵塞；也不能涂得太少，以防活塞不能润滑的转动，甚至遗漏溶液，涂好油的活塞应当是润滑而透明的，然后用橡皮圈扎好

4吸管：为精密量取容器 （洗涤：用自来水冲洗数次，晾干以重铬酸钾-硫酸洗液浸泡，浸泡一小时以上应放入大量筒中浸泡：在筒下垫有玻璃纤维，且尖嘴向上)

①移液管：读数有从上到下的也有从下到上的，使用时必须看清，以免发生差错;执管时尽量拿上部，以食指堵住管口控制流量，刻度数字 ②吸量管：，向着自己，无论哪种吸量管，都应以食指堵住吸量管上孔，从中取出液体后，特别是粘性大的液体，必须用滤纸将管外擦干，泄放时使吸管尖端轻轻触及器皿的内壁

（5）台秤及电子天平：普通的分析天平，空气阻尼分析天平，半自动电光天平，电子天平等（根据构造分）

①烘箱和恒温箱：烘烤洗涮完的仪器，应尽量将水珠甩干净后再放入烘箱内，干燥后，待温度降到60度以下方可取出物品，注意若温度超过180度，箱内的棉花纸则烤糊，玻璃器皿则容易破损，仪器附近不能放置易燃物品；仪器必须有良好的地线挥发性物质如盛有有机溶剂的器具是不能放进去的，以防爆炸。

②电热恒温水浴，精密恒温热板：关闭水浴底部的放水阀门，向水域内注入蒸馏水至适当的深度，加蒸馏水是为了防止水浴槽被腐蚀。

③离心机：台式离心机，台式冷冻离心机：在实验过程中要使母液与沉淀分开，有过滤和离心两种方法。

使用离心方法较合适的有（1）沉淀有粘性（2）沉淀颗粒小，容易透过滤纸（3）沉淀多而疏松（4)沉淀量少，需要定量测量（5）母液很少，分离时应减少损失（6)沉淀与母液必须立即分开（7)母液粘稠（8）一般的胶体溶液

离心机使用离心力将混合溶液进行分离和沉淀的一种专用仪器

1离心时将待离的的物质转移到大小合适的离心管中，盛装占管的2/3体积以免流出

2一对外套管（连同离心管）放在台秤上平衡，如不平衡可用吸管调整离心管内容物的量或向离心管与外套管之间加入平衡水。每次离心操作，都必须严格遵守平衡要求，否者将会损坏离心部件，甚至造成严重事故，应十分警惕。

3将以上两个平衡好的套管，按对称位置放到离心机中盖严离心机盖，并把不用的离心套管取出

按转速分：普通离心机（rpm 4000n/mm)，高速离心机（rpm 10000以上 不超过15000n/mm）,超速离心机（rpm 两万转以上每分钟）

④离心过程中若听到特殊的声响，表明离心管可能破裂，应立即停止离心如果管已破裂，将玻璃渣冲洗干净，然后换管，按照上述操作步骤重新操作。若管未破，也应该重新配平后在离心;

⑤酸度计（PH计）：便携式酸度计，数显式酸度计，42OH-酸度计

新的长期不使用的玻璃电极球泡在使用前应放在蒸馏水中浸泡48H。电极插头应保持干燥，切勿与污物接触。甘汞电极在使用时应把面小的橡皮塞即下端皮套拔去，以保持液位压差，用毕复原。

玻璃电极不要与强吸水的溶剂接触太久，在强碱溶液中使用应尽快操，用毕立即吸手。

⑥微量加样器： ⑦冻干机

⑧电动搅拌器：任何情况都行

⑨磁力搅拌器：只能搅拌是液体的溶液或液体中带少量固体——不影响搅拌子转动 ⑩漩涡混合器

11微型高速物品粉碎机

第二章 电泳技术 一 电泳的基本原理

电泳——带电粒子在电场中向其与自身带相反电荷的电极移动称为电泳。电泳技术是由各种带电粒子在电场中迁移率不同而进行分离的一种技术。带电的蛋白质分子在电场中朝着与自身所带电荷相反方向移动，根据各种蛋白质分子的移动速度不同，对各种蛋白质进行分离。

Ph小于pI 带正电向负极跑 。Ph大于pI 带负电向正极跑 泳动度：不同的带电粒子在同一电场中泳动速度不同常用泳动度或迁移率来表示，泳动度的定义是带点颗粒在单位电场强度下的泳动速度 u=V/E=（d/t）/（v/l）=dl/VE

影响电涌因素 ⑪内在因素：泳动度首先取决于带电颗粒的性质，即颗粒所带电荷的量，颗粒的大小和颗粒的形状，一般来说，颗粒带电荷量越多，颗粒直径越小，越接近球形，则在电场的泳动速度越快，，反之越慢。（分子量小的跑得快） ⑫外在因素：

①电场强度：电场强度越高，带点颗粒移动速度越快。根据电场强度的大小，可将电泳分为常压（100-500v）电泳、和高压（500-1000）电泳。前者电场强度一般为2-10福特/厘米，后者一般为20-200伏特/厘米 常压电泳分离时间长，需数小时到数天，高压电泳分离时间短，有时仅需几分钟 ②溶液的PH值：溶液的PH值决定了带电颗粒的强度，也决定了物质所带静电荷的多少，对蛋白质、氨基酸等两性电解质而言PH值离等*点越远，颗粒所带静电荷越多，泳动速度也越快，反之越慢。

③溶液的离子强度：溶液的离子强度越高颗粒泳动速度越慢，反之越快，一般最适的离子强度在0.02-0.2之间，其原因是带电颗粒能把溶液中与其电荷相反的离子吸引在自己周围力差，往往会因溶液PH变化而影响泳动度的速率

④电渗现象：在电场中，液体对固体 支持物的相对移动称为电渗。

例如在在纸电泳中，由于滤纸（纤维素)带有负电荷，因感应相吸而使与纸相接触的水溶液带正电，液体想负极移动，并带动物质向负极移动，如果物质原来向负极移动，则移动的更快所以电泳时时的颗粒所表现的速度决定于颗粒本身的泳动速度和由于溶液移动而产生的电渗作用

⑤对支持物的选择：一般要求支持物均匀，吸附小，否则电场强度不均匀，影响区带的分离，实验结果及扫描结果图谱均无法重复。

⑥温度对电影的影响：电泳过程中，由于通电产生焦耳热，热对电泳的影响很大，温度升高

时介质你哦按度下降，分子运动加剧，引起自由散变快，，迁移率增加，温度每升高一度，迁移率增加2.4%。 电泳的分类：

1按照分离原理来分： ①区带电泳(ZEP): 电泳过程中不同的离子成分在均一的缓冲液体系中分离成的区带，这是当前最广泛的电泳技术。

②移界电泳：它是在U型管中进行的，由于分离效果差，已被其他电泳方式取代。

③稳态电泳(MEBF)：带电颗粒在电场作用的电迁移一定时间后达到一个稳定的状态，此后电泳条带的宽度不随时间的变化而变化，包括一下两种：

⑪等速电泳(ITP)：需专用电泳仪，当电泳达到平衡后，各区带相随分成清晰地界面，并以等速移动。

⑫等电焦距的电泳（IEF）：由于具有不同等电点的两性电解质，载体在电场中形成PH梯度，使被分离的物质移动至各自等电点的PH处聚焦成很窄的区带，且分辨率较高。 2按无支持物介质分：

⑪自由电泳（在溶液中进行）： 1Tiselle-es式微型电泳2显微电泳 3等速电泳 4密度梯度电泳

⑫支持物电泳（在固体支持物中进行） 1纸上电泳 2醋酸纤维薄膜电泳3薄层电泳等电点焦距电泳

三电泳仪器介绍

1电泳仪：提供稳定直流电流的装置 按电压分三类

①常压电泳仪（600V）：用于静电荷和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 ②高压电泳仪（3000V）：用于等电焦距和DNA测序

③超压电泳仪（3万-5万V）用于毛细管电泳，价格昂贵。 2电泳槽

按型式分成三类，常见的有立式电泳槽，卧式电泳槽，圆盘槽

3电泳配套设备:外循环恒温系统，脱色仪，凝胶干燥仪，凝胶扫描仪及处理系统，凝胶成像仪及处理系统 4电泳的操作模式

⑪按电泳方式分类：垂直式（立式，管式）蛋白质电泳（蛋白质的分离鉴定） 卧式，多用于核酸电泳

搭桥式（滤纸搭桥醋酸纤维膜）多用于免疫电泳，等电焦距

⑫按分离原理分类;PAGE，SDB-PAGE,PAG梯度电泳，PAG双向电泳，PAG等电聚焦，琼脂糖免疫电泳

PAGE→聚丙烯凝胶电泳 polyaoryamiole gel eleomphonesis :因塞孔可，故宜用于鉴定分子量的大小不等的的蛋白质，肽类及其复合物。 ⒈概述及原理

PAGE的简介 聚丙烯酰胺凝胶电泳→分辨率非常高

聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联 又称为共聚体的NN-甲叉丙烯酰胺 在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结松的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳成为聚丙烯凝胶电泳

原理 PAGE是根据物质所带的电荷及其分子大小，形状的差异，在电场作用下产生不同的移动速度而分离的方法 它具有电泳和分子筛的双重特性。 胶体结构：Ａｃｒ＋Ｂｒｓ→立体网状结构。

①凝胶孔径取决于凝胶总浓度和交联度，总浓度越大孔径越大。当Ｂｉｓ总凝胶总浓度％时，孔径最小，高于或低于５％孔径都变大。

注：分子筛效应的大小取决于凝胶孔径的大小与生物分子大小相接近的程度

PAGE与淀粉凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳相比：淀粉凝胶重复性差，琼脂糖凝胶孔孔径大，仅对少数蛋白具有筛分作用。而PAGE的优点较多:孔径大小可调，对所有的蛋白质和多肽都具有筛分作用。机械强度较好，弹性较大，电渗力低，分辨率较高，易于重复。单向PAGE多用于分离具有活性的生物物质，而双向或梯度PAGE宜于较难分离的鉴别的生物大分子物质。如果ＳＤＳ－ＰＡＧＥ则可测定蛋白质的分子质量，ＰＡＧＥ与等电聚焦的相结合时可用于分析蛋白质的等电点。此外，ＰＡＧＥ还可以用于制备少量的纯度高，有活性的生物大分子物质。

两个概念：

凝胶浓度T（%）：凝胶溶液中Acr和Bis总质量浓度。通常凝胶的筛孔，透明度，弹性是随着凝胶浓度的增加而降低的，而机械强度是随着凝胶浓度的增加而增加。

交联度C（%）：凝胶溶液中Bis占（Acr+Bis）总量的质量分数 玻璃器皿的硅化：

玻璃器皿的硅化是为了防止溶液吸附于玻璃表面或增强其疏水性，这在操作低浓度的特殊黏溶液，如单链核酸和蛋白质是尤其重要。非常适用处理变性聚丙烯酰胺测序胶的玻璃平板。 硅化剂：一氯三甲基硅烷或二氯二甲基硅烷（易燃有毒） 硅化方法：硅化蒸汽蒽。

⒉PAGE的分类

⑪按有无浓缩效应：

连续系统：缓冲液ph值机凝胶浓浓度相同，带电颗粒在电场的作用下，主要靠电荷及分子筛（没有浓缩j胶），主要取决于被分离蛋白质的电荷密度。

不连续系统：缓冲液的离子成分，ph，凝胶溶液及电位梯度具有不连续性，带电离子在电场中泳动，不仅有电荷效应，分子筛效应，有浓缩效应有浓缩胶。

①不连续系统的特点：1增加了浓缩胶对样品的浓缩，在进入分离胶前先浓缩成先浓缩成一条窄带（浓缩300倍）

②不连续系统的四个不连续性：1浓度的不连续性

2缓冲液离子：成分的不连续性

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