中国妇产科临床杂志２０１０年９月第１１卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１０，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．５ ・述评・ 卵巢功能保护与辅助生殖技术 乔杰 卵巢是女性最重要的生殖器官，妇女一生的生 殖生理变化与卵巢的生殖内分泌功能变化息息相 关。其功能主要有两方面：排卵和内分泌。女婴出 生时，每一个卵巢内约含７５万个原始卵泡，随着 年龄的增长，绝大部分原始卵泡逐渐解体而消失。 从青春期开始，每个月有一定数量的卵泡生长发 育，但通常只有一个卵泡成熟，并且排卵，排卵最 大的功能则是为了妊娠以获得后代；而卵巢又是维 持女性内分泌活动的重要器官，其周期性分泌各种 激素以维持女性的各种特征和功能。 在生理状态下，女性随着年龄的增长卵泡不断 消失。３５岁后卵泡耗竭加速并且卵子质量也在下 降，这使得因年龄产生的不孕增多且高龄孕妇的早 期自然流产率很高。而在现代社会中，由于年轻时 拼搏而错过最佳生育期的女性越来越多，这已成为 难以回避的社会问题。 除了在自然情况下因年龄增长所引起的生育力 生理性下降以外，对于患卵巢肿瘤的女性，手术创 伤也是引起卵巢功能下降的重要原因。同时，由于 肿瘤治疗方法的改进，恶性肿瘤的治愈率明显提 高，年轻患者的生存率亦得到很大提高，但恶性肿 瘤的放疗、化疗常易导致卵巢功能衰竭，使得这些 女性在肿瘤完全缓解或治愈后越来越多的治疗要求 是恢复内分泌及生育力。还有即将接受环磷酰胺等 烷化剂治疗的自身免疫性疾病，以及由于遗传、感 染和自身免疫等因素导致的卵巢早衰患者，也均有 在卵巢功能衰竭之前保护卵巢功能的迫切要求，以 期日后能够恢复生育力和内分泌功能。 在辅助生殖技术中，保护卵巢功能的方法主要 有：胚胎冷冻、卵子冷冻、卵巢冷冻及与之相关的 卵母细胞体外培养和卵泡体外培养技术。 一、胚胎冷冻 目前，胚胎冷冻是临床治疗中常规的保存生育 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—１８６１．２０１０．０５．００１ 基金项目：首都医学发展科研基金（２００７—１００２）、高校基 本科研业务专项基金（ＢＭＵ ２００９０５１４—６０３）和国家杰出青年科学 基金作者单位：１００１９１北京大学第三医院妇产科 （３０８２５０３８） 李敏 力的方法，能有效地减少ＩＶＦ患者反复接受激素 刺激超排卵治疗，是目前唯一被北美生殖医学委员 会认可的临床可开展的生育力保存方法【＿】ｊ。对于未 来可能卵巢衰竭的患者，可以提前将胚胎进行冻 存，以备日后妊娠之需。然而这个技术的使用需要 患者有固定的生活伴侣，不适合于儿童患者及没有 伴侣的育龄妇女。另外，需要进行２～４周的卵巢 刺激来获取卵母细胞，这将会延迟癌症的治疗，因 此，不适用于已经开始化疗或恶性度高的肿瘤患者 及对激素敏感的癌症患者。 冻存人胚胎主要采用慢速冷冻技术。采用丙二 醇（ＰＲＯＨ）、甘油等冷冻保护剂可成功冻存原核 期、早期或囊胚期胚胎＿２ ］，方法较成熟。 二、卵母细胞冷冻 卵母细胞冷冻可以避免胚胎冷冻所带来的伦 理、宗教或法律问题；还可以建立卵母细胞冷冻保 存库——“卵子库”，为赠卵一体外授精胚胎移植 提供一些卵源。 对于青春期女孩、无性伴侣女性，或者由于个 人、宗教、伦理道德等因素而无法选择胚胎冷冻方 法的女性，卵母细胞冷冻无疑是一个可行的方法； 同时因个人、职业或经济因素而推迟生育的女性， 可提前冷冻保存卵母细胞，为其日后能够获得自己 的后代提供了保障。１９８６年，Ｃｈｅｎｌ４ 首次用冻融 卵母细胞获得成功妊娠。随着辅助生殖技术的不断 发展及人们对卵母细胞冻存的关注，临床成功报道 逐渐增多。Ｐｏｒｃｕ等［副冻存了１］２个ＩＶＦ周期的 １ ７６９枚成熟卵母细胞，解冻后存活率５４．１ ９／５，ＩＣ— ＳＩ后受精率５７．７ ，卵裂率９１．２ ，获得１６例妊 娠，并分娩活婴１１例。Ｂｏｒｉｎｉ等［６ 回顾了５９个胚 胎移植周期的妊娠结局，共解冻７３７枚卵母细胞， 存活率３７ ，获得１５例妊娠，其中１３例活婴分 娩。 卵子冷冻方法主要有慢速冷冻和玻璃化冷冻两 种。根据文献报道，慢速冷冻方法的卵母细胞存活 率波动于２３ ～８９ ，每枚解冻卵母细胞活婴分 娩率１ ～１０ ＿７ ］。而玻璃化冷冻方法是冻存卵 ２０１０年９月第１１卷第５期Ｃｈｉｎ Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｂｓｔｅｔ Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２０１０，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．５ 母细胞非常有效的方法，优于慢速冷冻方法ｒ７］。玻 璃化冷冻人卵母细胞和胚胎，获得了较高的存活 率，妊娠和分娩病例越来越多［９ 。 三、卵巢组织冷冻 ２０世纪５０年代以来，人卵巢组织的冻存和移 植、体外培养等临床应用的研究取得了一定进展， 为体外保存生育力探索了一条有价值的道路。 卵巢组织冷冻及其复苏后移植，理论上可为患 者提供均衡的生殖内分泌激素和其他生物活性因 子，同时，由于该技术不经过促．ｌｆ｝卵而冻存大量未 成熟卵，具有节省费用和减少超－：ｋｉ｝卵可能引起的卵 巢过度刺激综合征。对癌症患者也不用担心延误治 疗。因此，对于青年癌症患者和希望保存年轻时卵 巢的女性，将卵巢组织冷冻保存，待拟生育或病情 缓解后再进行卵巢自体移植，在一定程度上可恢复 卵巢内分泌功能和生育能力。 ２００４年，Ｄｏｎｎｅｚ等１］１＿为ｌ例霍奇金淋巴瘤患 者进行了冻存卵巢组织原位移植手术，患者恢复排 卵并自发妊娠，成功分娩一女婴，为世界首例。之 后也有一些成功的报道＿】 ］。 卵巢冷冻的方法虽已有慢速冷冻和玻璃化冷冻 两种。然而无论是慢速冷冻还是玻璃化冷冻卵巢组 织，均有两个难题需要攻克：一是冷冻保护剂在卵 巢组织块内渗透性差和细胞毒性，二是移植后组织 缺血损伤和血供重建。此外，冻存卵巢组织中是否 携带肿瘤细胞，关系到移植安全性问题。目前这些 问题尚未有效解决。但是，近年来人卵巢组织冻存 联合自体原位或异位移植方法，成功的病例报道逐 渐增多，经过进一步探讨和改进后，将是保存女性 生育力和恢复内分泌功能的理想途径。 四、其他 有研究者建议将卵母细胞和卵巢组织的冻存与 体外培养和成熟技术相结合，作为保存患者生殖功 能的新方法。还有研究者将冻融的卵巢组织自体移 植或异种移植，当卵泡发育到一定阶段取出卵母细 胞，再将其进行体外成熟培养。这一方案不仅充分 利用了卵母细胞，而且扩大了冻存的范围，进一步 满足了卵巢早衰患者保存卵巢功能的迫切要求。另 外，有越来越多的研究者关注卵泡的培养，将冻融 后卵巢的卵泡进行培养，可以避免卵巢移植带来的 癌细胞再“种植”问题。 总之，目前保护卵巢功能的辅助生殖技术中， 胚胎冷冻为首选，其次为卵母细胞冷冻，再者为卵 巢组织冷冻及多种技术的联合应用。冷冻的方法有 慢速冷冻和玻璃化冷冻两种，而玻璃化冷冻技术将 成为日后冻存趋势。卵巢组织冷冻并移植可同时恢 复患者的内分泌和排卵功能，将成为理想有效的保 存卵巢功能的方法。而卵母细胞冷冻、卵巢组织冷 冻和体外成熟培养的联合应用，提供了更灵活、可 行的方案，是将来的发展趋势。这些技术的不断进 步，将对生殖医学的发展产生重要的意义。 参考文献 Ｅｌｉ Ｔｈｅ Ｅｔｈｉｃｓ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃ— ｔｉｖｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ ｃａｎｃ— ｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００５，８３：１６２２—１６２８． ［２３ Ｃｏｈｅｎ Ｊ，Ｓｉｍｍｏｎｓ ＲＦ，Ｅｄｗａｒｄｓ ＲＧ．Ｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｏｒａｇｅ ｏｆ ｅｘｐａｎｄｅｄ ｈｕｍａｎ ｈｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ．Ｊ Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｆｅｒｔ Ｅｍｂｒｙｏ Ｔｒａｎｓｆ，１９８５，２：５９—６４． ［３］ Ｆｕｇｇｅｒ ＥＦ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔａｔｕｓ ｏｆ ｈｕｍａｎｅｍｂｒｙｏ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ａｍｅｒｉｃａ．Ｆｅｒｔｉ１ Ｓｔｅｒｉｌ，１９８９，５２：９８６—９９０． ［４］ Ｃｈｅｎ ｅ Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ａｆｔｅｒ ｈｕｍａｎ ｏｏｃｙｔｅ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ． Ｌａｎｃｅｔ，１９８６，１：８８４～８８６． ［５］Ｐｏｒｃｕ Ｅ，Ｆａｂｂｒｉ Ｒ，Ｃｉｏｔｔｉ Ｐ．Ｃｙｃｌｅｓ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｏｏｃｙｔｅ ｃｒｙｐｒ— ｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｓｐｅｒｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ：ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ １１２ ｃｙｃｌｅｓ．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，１９９９，７２（Ｓｕｐｐｌ １）：Ｓ２． ［６］ Ｂｏｒｉｎｉ Ａ，Ｂｏｎｕ ＭＡ，Ｃｏｔｉｅｅｈｉｏ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓ ａｎｄ ｂｉｒｔｈｓ ａｆｔｅｒ ｏｏｃｙｔｅ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉ０ｎ． Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００４，８２： ６０１—６０５． ［７］ Ｋｕｌｅｓｈｏｖａ ＬＬ，Ｌｏｐａｔａ Ａ．Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｃａｎ ｂｅ ｍｏｒｅ ｆａｖｏｒａ— ｂｌｅ ｔｈａｎ ｓｌｏｗ ｃｏｏｌｉｎｇ．Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００２，７８：４４９—４５４． ［８］ Ｗｉｎｉｎｇｅｒ ＪＤ，Ｋｏｒｔ ＨＩ．Ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍａｔｕｒｅ ａｎｄ ｍａ— ｔｕｒｅ ｈｕｍａｎ ｏｏｅｙｔｅｓ．￣ｆａｉｎＲｅｐｒｏｄＭｅｄ，２００２，２０：４５—４９． Ｅ９］ Ｖａｎｄｅｒｚｗａｌｍｅｎ Ｐ，Ｂｅｒｔｉｎ Ｇ，Ｄｅｂａｕｃｈｅ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｂｌａｓｔｏｃｙｓｔｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｈｅｍｉ—Ｓｔｒａｗ ｃａｒｒｉｅｒ：ａｐｐｌｉｃａ— ｔｉｏｎ ｏｆ ａｓｓｉｓｔｅｄ ｈａｔｃｈｉｎｇ ａｆｔｅｒ ｔｈａｗｉｎｇ．Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ，２００３， １８：１５０４—１５１１． ［１Ｏ］Ｃｈｉａｎ ＲＣ，Ｈｕａｎｇ ＪＹ，Ｇｉｌｂｅｒｔ Ｉ ，ｅｔ ａ１．Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃ ｏｕｔｃｏｍｅｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ｖｉｔｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｍａｔｕｒｅｄ ｏｏｃｙｔｅｓ． Ｆｅｒｔｉｌ Ｓｔｅｒｉｌ，２００９，９１：２３９１—２３９８． ［１１］Ｄｏｎｎｅｚ Ｊ，Ｄｏｌｍａｎｓ ＭＭ，Ｄｅｍｙｌｌｅ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｌｉｖｅｂｉｒｔｈ ａｆｔｅｒ ｏｒｔｈｏｔｏｐｉｃ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｏｖａｒｉａｎ ｔｉｓｓｕｅ Ｌａｎｃｅｔ，２００４，３６４：１４０５—１４１０． ［１２］Ｍｅｉｒｏｗ Ｄ，Ｌｅｖｒｏｎ Ｊ，Ｅｌｄａｒ—Ｇｅｖａ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｏｖａｒｉａｎ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ａ ｐａｔｉｅｎｔ ｗｉｔｈ ｏｖａｒｉａｎ ｆａｉｌｕｒｅ ａｆｔｅｒ ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ， ２００５，３５３：３１８—３２１． Ｅｌ３］Ａｎｄｅｒｓｅｎ ＣＹ，Ｒｏｓｅｎｄａｈｌ Ｍ，Ｂｙｓｋｏｖ ＡＧ，ｅｔ ａ１．Ｔｗｏ ｓｕｅ— ｃｅｓｓｆｕｌ ｐｒｅｇｎａｎｃｉｅｓ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａｕｔｏｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｒｏｚｅｎ／ ｔｈａｗｅｄ ｏｖａｒｉａｎ ｔｉｓｓｕｅ．Ｈｕｍ Ｒｅｐｒｏｄ，２００８，２３：２２６６— ２２７２． （收稿日期：２０１０—０６—２８）
