西北药学杂志２０１１年１０月 第２６卷第５期 ３１９ 胶束毛细管电泳法测定天山花楸果实中苦杏仁苷的含量 张 倩 ，马晓丽 ，常军民¨，王 岩 ，孟 磊 （１．新疆医科大学药学院，新疆乌鲁木齐８３００１１；２．新疆医科大学分析 测试中心，新疆乌鲁木齐８３００１１） 摘要：目的 建立了一种简单、快速分析天山花楸果实中苦杏仁苷含量测定的胶束毛细管电泳法（ＭＥＫＣ）。方法 采用熔融石 英毛细管（５８．５ ｃｍＸ ７５肛ｍ，有效长度为４８．５ ｃｍ），缓冲体系为７０ ｍｍｏｌ・Ｌ 的硼砂一２００ ｍｍｏｌ・Ｌ 的十二烷基硫酸钠（ｐＨ ９．５０）； 分离电压１０ ｋＶ（＋）一（一）；电泳时间４０ ｍｉｎ；电泳温度２５℃；压力进样０．５ ｐｓｉ×１０ ｓ；柱上检测Ｕｖ ２１５ ｎｍ（二极管阵列检测器）。 结果 苦杏仁苷在２０ ｍｉｎ内得到较好分离，在２５～２２５ ｐ－ｇ・ｍＬ 范围内与峰面积线性关系良好，线性方程为：Ｙ一７７６．６６ Ｘ一 ６ ６３７．９（ｒ一０．９９９ ７），样品平均回收率为１００．８ ，ＲＳＤ值为２．８ 。结论 该方法简单、快速，结果准确可靠，可用于天山花 楸中氰苷类成分测定及质量控制。 关键词：天山花楸；苦杏仁苷；胶束毛细管电泳法 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—２４０７．２０１１．０５．００３ 中图分类号：Ｒ９２７．２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４－２４０７《２０１１）０５—０３１９－０３ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ａｍｙｇｄａｌｉｎ ｉｎ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．ｆｒｕｉｔ ｂｙ ｍｉｃｅｌｌａｒ ｅｌｅｃｔｒｏｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ＺＨＡＮＧ Ｑｉａｎ ，ＭＡ Ｘｉａｏｌｉ ，ＣＨＡＮＧ Ｊｕｎｍｉｎ ，ＷＡＮＧ Ｙａｎ ，ＭＥＮＧ Ｌｅｉ （１．Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉ￣ｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ。 Ｘｉ￣ｉａｎｇ Ｕｒｕｍｕｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ；２．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ８Ｌ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｘｉ￣ｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ￣ｉａｎｇ Ｕｒｕｍｕｑｉ ８３００１１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ａ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｒａｐｉｄ ｍｉｃｅｌｌａｒ ｅｌｅｃｔｒｏｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｍｅｔｈｏｄ（ＭＥＫＣ）ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ａｍｙｇｄａｌｉｎ ｉｎ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．ｆｒｕｉｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂａｒｅ ｆｕｓｅｄ－ｓｉｌｉｃａ ｃａｐｉｌｌａｒｙ（５８．５ ｃｍ×７５ ｍ，ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｌｅｎｇｔｈ ｏｆ ４８．５ ｃｍ）ｗａｓ ｕｓｅｄ；ｔｈｅ ｂｕｆｆｅｒ ｗａｓ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ７０ ｍｍｏ１．Ｌ ｓｏｄｉｕｍ ｂｏｒａｔｅ－２００ ｍｍｏｌ・Ｌ ＳＤＳ（ｐＨ９．５０）；ｒｕｎｎｉｎｇ ｖｏｌｔａｇｅ ａｔ １０ ｋＶ；ｐｏｌａｒｉｔｙ ｆｒｏｍ ａｎｏｄｅ（ｉｎｌｅｔ）ｔｏ ｃａｔｈｏｄｅ（ｏｕｔｌｅｔ）；ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ４０ ｍｉｎ；ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ２５℃；ｓａｍｐｌｉｎｇ ０．５ ｐｓｉ×１０ ｓ；ｏｎ ｌｉｎｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ａｔ ２１５ ｎｍ（ＰＤＡ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｏｆ ａｍｙｇｄａｌｉｎ ｗａｓ ｆｒｏｍ ２５—２２５ ｂｉｇ・ｍＬ～，ｗｉｔｈ ｌｉｎｅａｒ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅ— ｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ Ｙ一７７６．６６ Ｘ一６ ６３７．９（ｒ一０．９９９ ７）。ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ １００．８ 。ｗｉｔｈ ＲＳＤ ２．８ ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｓｉｍｐｌｅ，ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ，ａｎｄ ｃａｎ ｂｅ ａｐｐｌｉｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｃｙａｎｏｇｅｎｉｃ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．；ａｍｙｇｄａｌｉｎ；ｍｉｃｅｌｌａｒ ｅｌｅｃｔｒｏｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ 天山花楸为蔷薇科Ｒｏｓａｃｅａ花楸属Ｓｏｒｂｕｓ植物 管电泳仪（Ｂｅｃｋｍａｎ公司，美国），二极管阵列检测 天山花楸Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．的干燥果实，主 器，石英毛细管柱（５８．５ ｃｍ×７５ ｍ，有效长度４８．５ 产于新疆的天山山脉，是维吾尔族和哈萨克族民间常 ｃｍ，河北永年光纤厂）；ＦＥ２０一ｐＨ计（ＭＥＴＴＬＥＲ 用药材。据《中华本草》记载［１ ］，天山花楸的枝叶与 ＴＯＬＥＤＯ公司）；Ｘ￥２０５电子天平（ＭＥＴＴＬＥＲ ＴＯ— 果实常用于治疗肺结核、哮喘、咳嗽、胃痛等。苦杏仁 ＬＥＤｏ公司）；Ｍｉｌｌｉ－Ｑ纯水仪（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）；ＵＶ一 苷是天山花楸主要的有效成分之一，具有止咳平喘的 ２５５０紫外分光光度计（Ｓｈｉｍａｄｚｕ公司，日本）；ＤＺＦ一 功效。目前，文献报道的苦杏仁苷的分析方法主要有 ６０９０真空干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）。 ＨＰＬＣ法ｒ３ ］。随着毛细管电泳应用领域的不断拓 １．２试药 苦杏仁苷对照品（中国药品生物制品检 宽，作为一种高效、灵敏和低耗的分析方法，其已被广 定所，批号１１０８２０—２００４０３）；十二烷基硫酸钠（ＳＤＳ， 泛应用于传统中草药及中药制剂的有效成分检 Ｓｉｇｍａ公司）；硼砂；其他试剂均为分析纯；实验中配 测ｌ＿８ 。为了进一步开发和利用天山花楸，笔者首次 制缓冲液和样品液所用水为高纯水（Ｍｉｌｌｉ—Ｑ）；天山 采用胶束毛细管电泳法对天山花楸果实中的苦杏仁 花楸２０１０年８月采自新疆呼图壁县林场，并经新疆 苷含量进行测定，旨在建立一种简单、快速分离测定 医科大学药学院生药教研室帕丽达・阿不力孜教授 天山花楸果实中苦杏仁苷含量的方法，以期为天山花 鉴定。 楸资源的开发和利用提供基础依据，并为控制药材的 ２ 实验方法 内在质量提供一种新的分析方法。 ２．１ 对照品储备液的制备精确称取苦杏仁苷对照 １仪器与试药 品１０．０ ｍｇ，置于１０ ｍＬ棕色量瓶内，以去离子水溶解 １．１ 仪器 Ｂｅｃｋｍａｎ Ｐ／ＡＣＥＴＭ ＭＤＱ型高效毛细 并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为１ ｍｇ・ｍＬ 的 对照品储备液；放置一４℃冰箱中保存，在使用前按 基金项目：新疆维吾尔自治区高校科研计划项目（编号： 要求稀释。． ＸＪＥＤＵ２００５１１９） 作者简介：张倩，女，硕士研究生 ２．２样品的前处理精确称取天山花楸果实５．０００ ４ 通信作者：常军民，男，博士，教授，硕士生导师 ｇ，研磨均匀，置于２５０ ｍＬ圆底烧瓶中，加入１００ ｍＬ ３２０ 西北药学杂志２０１１年１Ｏ月 第２６卷第５期 乙醚，在４０℃加热回流脱脂（６０ ｍｉｎ×３），过滤并弃 去乙醚层，滤渣挥干；加甲醇１００ ｍＬ在４０℃加热回 流提取（６０ ｍｉｎ×３），合并提取液，在４Ｏ℃的真空干 燥箱中将甲醇挥尽；用去离子水溶解并定容至１００ ｍＬ量瓶中，摇匀，制成供试品溶液，放置一４℃冰箱 中保存。 ２．３ 紫外扫描 为确定毛细管电泳中的最佳检测波 长，对苦杏仁苷的标样（２Ｏ ｇ・ｍＬ ）进行紫外扫 描，在２００ ４００ ｎｍ的波长范围内，苦杏仁苷的最大 吸收在２１５ ｎｍ处，故选择检测波长为２１５ ａｍ。 ２．４ 电泳条件 石英毛细管柱（５８．５ ｃｍ×７５ ｍ， 有效长度４８．５ ｃｍ）；运行缓冲液：７０ ｍｍｏｌ・Ｌ 的硼 砂一２００ ｍｍｏｌ・Ｌ 的十二烷基硫酸钠（ｐＨ９．５０）；分 离电压１０ ｋＶ（＋）一（一）；电泳时间４０ ｍｉｎ；电泳温 度２５℃；压力进样０．５ ｐｓｉｘ １０ Ｓ；柱上检测ＵＶ ２１５ 对分离选择性的影响。结果表明，ｐＨ＞１０．５时，苦杏 仁苷的峰会裂开成２个，可能是苷元实体与非糖衍生 的手性中心的杏仁腈差向异构化的原因，ｐＨ为９．０， ９．５和１０．０时，保留时间比较理想，其中ｐＨ９．５时，分 离效果最佳，峰形最好，故选定缓冲液的ｐＨ为９．５。 ３．４ 线性关系考察 分别精密吸取０．２５０，０．５００， １．０００，１．５００，２．０００和２．２５０ ｍＬ苦杏仁苷对照品储 备液置于６个ｉ０ ｍＬ棕色量瓶中，用去离子水稀释 至刻度，摇匀作为对照品溶液，经０．４５ ｍ微孔滤膜 滤过，进样，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，以相应 进样质量浓度为横坐标进行线性回归。结果表明苦 杏仁苷质量浓度在２５～２２５ ｇ－ｇ・ｍＬ 线性范围内与 峰面积积分值呈良好的线性关系，苦杏仁苷对照品电 泳图见图１。 ｎｍ（二极管阵列检测器）。清洗程序：第１次进样前 分别以甲醇、双蒸水、０．１ ｍｏｌ・Ｌ 盐酸、双蒸水、０．１ ｍｏｌ・Ｌ 氢氧化钠、双蒸水、缓冲溶液冲洗毛细管２Ｏ ｐｓｉ×３ ｍｉｎ；每次进样间用１ ｍｏｌ・Ｌ 氢氧化钠冲洗 ２０ ｐｓｉ×３ ｍｉｎ，双蒸水冲洗２０ ｐｓｉ×５ ｍｉｎ，最后用缓 冲溶液冲洗２０ ｐｓｉ×３ ｍｉｎ。样品及缓冲液均在４℃ 储存，在使用前用０．４５ ｍ微孔滤膜滤过，且临用前 超声脱气处理。 ３结果与分析 图１苦杏仁苷对照品电冰图 １．苦杏仁苷 Ｆｉｇ．１ Ａ ＣＺＥ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｙｇｄａｌｉｎ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅ ３．１缓冲液的浓度及分离电压的影响 考察了１Ｏ， ２Ｏ，３Ｏ，５Ｏ，７０和１００ ｍｍｏｌ・Ｌ 不同浓度的硼砂缓冲 １．ａｍｙｇｄａｌｉｎ 溶液对分离的影响。结果表明，１０ ｍｍｏｌ・Ｌ 时没有 电流，图谱出现断层，２Ｏ ｍｍｏｌ Ｌ 时分离不完全，随 着浓度的增大，分离时间延长，峰形趋于正态，但当缓 冲液浓度大于１００ ｍｍｏｌ・Ｌ 时峰形变差，有拖尾现 象，且分离效果也不佳。选用７０ ｍｍｏｌ・Ｌ－ 的硼砂缓 冲溶液，在选定的缓冲液浓度下，又进一步考察了８， １Ｏ和２０ ｋＶ电泳电压对分离的影响，我们综合考虑 组分的分离度、灵敏度、噪音、焦耳热及分析时间等因 素，选择１０ ｋＶ为分离电压。 ３．２表面活性剂的浓度对分离的影响 考察了５Ｏ， １００，２００和３００ ｍｍｏｌ・Ｌ 不同浓度的ＳＤＳ对分离 ３．５精密度实验考察所建立方法在相同操作条件 下短时间内的精密度：取苦杏仁苷对照品溶液，按２．４ 项下的电泳条件，连续６次重复进样分析，每次进样 １０ Ｓ，测得苦杏仁苷对照品峰面积的ＲＳＤ为１．４ 。 结果表明，此分析方法精密度好。 ３．６稳定性实验取供试品溶液每隔２ ｈ连续１２ ｈ 考察样品的日内稳定性，每次进样１０ Ｓ。记录并计算 峰面积的ＲＳＤ为１．８ 。结果表明，供试品溶液在 １２ ｈ内稳定性好。 ３．７ 重复性实验取同一批天山花楸样品６份，按２．２ 项下操作制备样品溶液，经测定样品中苦杏仁苷峰面积 的ＲＳＤ为２．２ 。结果表明，该方法重复性较好。 ３．８加样回收率实验 取已知含量的样品，定量加 入混合对照品，按２．２项下进行处理，重复测定６次， 测得吸收峰面积，计算回收率，结果见表１。 ３．９样品测定取天山花楸果实样品，按照供试品 效果的影响，随着浓度的增加，分离效果越好，峰带越 窄，分离越完全，但是在３００ ｍｍｏｌ・Ｌ 时，基线分离 度增大，分析时间明显延长，且配制不容易，易结晶阻 塞毛细管通路，影响实验的重复性。故选用了２００ ｍｍｏｌ・Ｌ 的ＳＤＳ作为阴离子表面活性剂。 ３．３ ｐＨ的确定 运行缓冲液的ｐＨ既可改变溶质 的结构，使溶质电离或呈中性状态，又可改变电渗流的 大小，因此，ｐＨ对ＣＥ分离有较大的影响。在２个缓 制备方法制得天山花楸供试品液３份，使用前经超声 脱气处理，摇匀，过０．４５ ｍ微孔滤膜滤过，进样分 析。采用外标法测定样品，计算含量，结果见表２，电 泳图见图２。 冲液的浓度均确定的基础上，改变ｐＨ进一步考察ｐＨ 西北药学杂志２０１１年１Ｏ月 第２６卷第５期 ３２１ 低质量浓度 ２３．４９８ ３８．３４ ２３．４９８ ３８．４２ ２３．４９８ ３７．９４ 中质量浓度 ２３．４９８ ５３．６１ ２３．４９８ ５４．０８ ２．８ ２３．４９８ ５４．２７ 高质量浓度 ２３．４９８ ７０．９９ ２３．４９８ ６９．５Ｏ ２３．４９８ ６８．４５ 表２样品中苦杏仁苷的含量测定结果 ∞如如 本实验通过胶束毛细管电泳技术对天山花楸果 Ｔａｂ．２ Ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ａｍｙｇｄａｔｉｎ ｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ 实中苦杏仁苷含量进行测定，对缓冲液的ｐＨ、硼砂 浓度、电压、ＳＤＳ浓度等条件做了优化，结果表明：７Ｏ ｍｍｏｌ・Ｌ 硼砂缓冲液一２００ ｍｍｏｌ・Ｌ 的ＳＤＳ， ｐＨ９．５０，电压１Ｏ ｋＶ，柱温２５℃的ＣＺＥ分离体系，能 使样品中苦杏仁苷得到较为理想的分离。 参考文献： ［１３ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志：第３６ ０ ０４ ２８５． ０．０３ 恻 卷［Ｍ３．北京：科学出版社，１９７４：２８４—鼎 鼎 Ｅ２］新疆植物志编辑委员会．新疆植物志：第２卷ＩＭ］．乌鲁 ０ ０２ 督 皿 木齐：新疆人民出版社，１９７３：６－７． 逛０迎墼 ．０１ ０ ００ ｆＵ∞Ｌ—． —一％ ∞ 鲫 ［３］杨玲玲，常军民，姚军．ＨＰＬＣ法测定天山花楸中的苦杏 ０ ５ １０ ｌ ５ 卯 弘 孙曲 仁苷ＥＪ］．华西药学杂志，２００７，２２（５）：５８９—５９０． ２０ ２５ ３０ ３５ ｔ／ｒａｉｎ ｔ／ｍｉｎ ［４］沙明，曹爱民，姜丽，等．高效液相色谱法测定苦杏仁中 Ａ Ｂ 苦杏仁苷的含量［Ｊ１．药物分析杂志，１９９６，１６（６）：３９７— 图２天山花楸果实样品电泳图 ３９８． Ａ．供试品；Ｂ．供试品加苦杏仁苷对照品；１．苦杏仁苷 ［５］庄永峰．高效液相色谱法测定枇杷叶中苦杏仁苷的含量 Ｆｉｇ．２ Ａ ＣＺＥ ｏｆ ｓａｍｐｌｅ ｏｆ Ｓｏｒｂｕｓ ｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａ Ｒｕｐｒ．ｆｒｕｉｔ ［Ｊ］．海峡药学，２００２，１４（５）：６４—６５． Ａ．ｓａｍｐｌｅ；Ｂ．ｓａｍｐｌｅ ａｄｄ ａｍｙｇｄａｌｉｎ ｏｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ； ［６］李海龙，王静，张英春，等．ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定苦杏仁 １．ａｍｙｇｄａｌｉｎ 中苦杏仁苷的含量［Ｊ］．食品与发酵工业，２００７，３３（１）： ４讨论 １０９—１ １２． ①样品前处理的选择选用了加热回流的提取 ［７］ 吴昭晖，游文玮．ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ法测定苦杏仁中苦杏仁 苷含量的研究［Ｊ１．第一军医大学学报，２００５，２５（１２）： 方法和超声的提取方法对样品进行处理，发现加热回 １５４９—１５５１． 流提取的样品没有太多的杂峰干扰，而超声提取的样 ［８］钱燕娟，梁静，蒋小丰，等．高效毛细管电泳法测定麻黄 品杂峰相对多，而且分离效果不如加热回流提取的 汤中３种有效成分的含量Ｉ－Ｊ１．中国临床药学杂志， 好，故本实验选用了加热回流的前处理方法。 ２００８，１７（６）：３７１—３７３． ②胶柬毛细管电泳考察了硼砂与ＳＤＳ按１０： ［９］Ｃ Ｃａｍｐａ，Ｐ Ｓｃｈｍｉｔｔ－Ｋｏｐｐｌｉｎ，ＴＲＩ．Ｃａｔａｌｄｉ，ｅｔ ａ１．Ａｎａｌｙ— １，５：１，４：１，２：１，４：３和１：１不同比例的缓冲 ｓｉｓ ｏｆ ｃｙａｎｏｇｅｎｉｃ ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ ｂｙ ｍｉｃｅｌｌａｒ ｃａｐｉｌｌａｒｙ ｅｌｅｃｔｒｏ— 盐，ＳＤＳ的浓度太低，胶束稳定性差，负载小，分辨能 ｐｈｏｒｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ，２０００，７３９：９５—１００． 力下降，重复性不好。随着ＳＤＳ量增大，出峰时间相 ［１ｏ］Ｓｅｏｎｇ Ｈｏ Ｋａｎｇ，Ｈｙｕｎｓｏｏｋ Ｊｕｎｇ，Ｎａｍｓｈｉｎ Ｋｉｍ，ｅｔ ａ１． Ｍｉｃｅｌｌａｒ ｅｌｅｃｔｒｏｋｉｎｅｔｉｃ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ 对延后，峰形相对对称，但是缓冲液与ＳＤＳ等比加入 ｏｆ Ｄ－ａｍｙｇｄａｌｉｎ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｐｉｍｅｒ ｉｎ ａｐｒｉｃｏｔ ｋｅｒｎｅｌ［Ｊ］．Ｊ 时，浓度太高，电流变大，焦耳热增加，柱效降低，基线 Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ａ，２０００，８６６：２５３—２５９． 噪音增大，所以，综合考虑，最佳的配比是４：１。 （收稿日期：２０１１－０５－０４） ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｚ．ｃｈｉｎａｊｏｕｒｎａ１．ｎｅｔ．ｃａ
