云南农业大学学报ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２０１３，２８ｈｔｔｐ：／／ｘｂ．ｙｎａｕ．ｅｄｕ．ｃｎＥ－ｍａｉｌ：ｘｂ＠ｙｎａｕ．ｅｄｕ．ｏｎＩＳＳＮ１００４—３９０Ｘ；ＣＯＤＥＮＹＮＤＸＡＸＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—３９０Ｘ（ｎ）．２０１３．０６．００６添加烟酰胺对小鼠脂肪细胞能量代谢的影响成海建１，臧坤２，刘晓牧１，万发春１，谭秀文１，刘桂芬１，宋恩亮ｈ４（１．山东省农业科学院畜牧兽医研究所，山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南２５０１００；２．青岛农业大学动物科技学院，动物生殖发育与基因工程研究所，山东青岛２６６１０９）摘要：为研究烟酰胺（ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ，ＮＡ）对小鼠脂肪细胞能量代谢的影响，本试验添加０，１００，２００，３００，４００，５００Ｉｘｍｏｌ／ＬＮＡ干预２４ｈ后，检测小鼠脂肪细胞一氧化氮（ＮＯ）生成量和三磷酸腺苷酶（ＡＴＰａｓｅ）活性，利用实时荧光定量ＰＣＲ检测细胞过氧化物酶体增殖物激活受体基因（Ｐ蹦脚）的表达。结果表明：随着ＮＡ浓度的增加，ＮＯ生成量减少，脂肪细胞能量代谢提高，Ｐ蹦研基因ｍＲＮＡ表达受到明显抑制，其中以２００Ｉｘｍｏｌ／ＬＮＡ的效果最为显著（Ｐ＜０．０１），但５００¨ｍｏＶＬＮＡ反而抑制了细胞的能量代谢。表明在一定浓度范围内，烟酰胺具有促进脂肪细胞能量代谢的作用，这可能对于肥胖、脂肪肝等多种脂肪能量代谢相关疾病有一定的治疗作用。关键词：烟酰胺；能量代谢；脂肪细胞中图分类号：Ｑ２５１文献标志码：Ａ文章编号：１００４—３９０Ｘ（２０１３）０６—０７９１—０５ＴｈｅＥｆｆｅｃｔｏｆＮｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅｏｎＥｎｅｒｇｙＭｅｔａｂｏｌｉｓｍＣＨＥＮＧｏｆＭｉｃｅＡｄｉｐｏｃｙｔｅｓｉｎｖｉｔｒｏＨａｉｊｉａｎｌ，ＺＡＮＧＫｕｎ２，ＬＩＵＸｉａｏｍｕｌ，ＷＡＮＦａｃｈｕｎｌ，ＴＡＮＸｉｕｗｅｎｌ，ＬＩＵＧｕｉｆｅｎｌ，ＳＯＮＧＥｎｌｉａｎ９１（１．ＳｈａｎｄｏｎｇＫｅｙＬａｂｏｆＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＢｒｅｅｄｉｎｇ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＳｈａｎｄｏｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｊｉｎａｎ２５０１００，Ｃｈｉｎａ；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄＧｅｎｅｔｉｃＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＱｉｎｇｄａｏＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｑｉｎｇｄａｏ２６６１０９，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ（ＮＡ）ｏｎｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｍｉｃｅａｄｉｐｏｃｙｔｅｓｉｎｖｉｔｒｏ，ａｄｉｐｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｗｉｔｈ０，１００，２００，３００，４００，５００Ｉ山ｍｏｌ／ＬＮＡｆｏｒ２４ｈ，ｔｈｅｎｎｉｔｒｏｇｅｎｏｘｉｄｅ（ＮＯ）ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｔｉｖｉｔｙｗｅｒｅｉｎｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍａｎｄｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒａｄｅｎｏｓｉｎｅｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（ＡＴＰａｓｅ）ａｏ—ａｓｓｅｓｓｅｄ，ａｎｄｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｔｈｅｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ－ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｇａｍｍａａｎａｌｙｚｅｄｕｓｉｎｇｒｅａｌ・ｔｉｍｅＰＣＲ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｗｉｔｈｔｈｅｉｎｃｒｅａｓｅｏｆｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｒｅｄｕｃｅｄ，ｗｈｉｌｅｃｏｎ—ｇｅｎｅ（Ｐ以研）ｗａｓｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＮＡ（０～２００斗ｍｏＶＬ），ＮＯｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｍｉｃｅａｄｉ—ｃｏｎ—ｐｏｃｙｔｅｓｗａｓｉｍｐｒｏｖｅｄａｎｄＰＰＡＲｌｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｗａｓｍａｒｋｅｄｌｙｉｎｈｉｂｉｔｅｄ，ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｗａｓｉｎｈｉｂｉｔｅｄｗｉｔｈｈｉｇｈｅｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＮＡ（５００斗ｍｏＬ／Ｌ）．ＴｈｅｃｙｔｅｓｉｎｖｉｔｒｏｗｉｔｈｉｎａｒｅｓｕｌｔｓａｂｏｖｅｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＮＡｃｏｕｌｄｐｒｏｍｏｔｅｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｏｆｍｉｃｅａｄｉｐｏ—ｃｅｒｔａｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｍａｙｈａｖｅａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｅｆｆｅｃｔｆｏｒｏｂｅｓｉｔｙ，ｆａｔｔｙｌｉｖｅｒ０４：５５收稿日期：２０１２—０６—２５修回日期：２０１３—０８一０１网络出版时间：２０１３—１ｌ一１３。基金项目：山东省优秀中青年科学家科研奖励基金（ＢＳ２０１１ＳＷ０４３）；山东省农业良种工程（２０１０ＬＺ０１２）；山东省生物基因资源发掘与种质创新利用研究项目。作者简介：成海建（１９７８一），男，山东荷泽人，学士，助理研究员，主要从事动物遗传育种与繁殖研究。Ｅ—ｍａｉｌ：９８０６１１０７＠１６３．ｃｏｎ＋。通信作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：宋恩亮（１９７１一），男，山东兖州人，硕士，副研究员，主要从事养牛科学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｅｎｌｉａｎｇｓ＠１２６．ｃｏｒｎ网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／５３．１０４４．Ｓ．２０１３１１１３．１６５５．２０１３０６．７９１—００７．ｈｔｍｌ万方数据７９２云南农业大学学报ａｎｄｏｔｈｅｒｆａｔｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｒｅｌａｔｅｄｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ；ｅｎｅｒｇｙｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ；ａｄｉｐｏｃｙｔｅ第２８卷脂肪组织的最基本的功能是储存能量，当机体缺少能量时氧化储脂供能，在维持机体能量代谢稳态中具有重要作用。烟酰胺（ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ，ＮＡ）是尼克酸的前体物，系Ｂ族维生素，在体内与核糖、磷酸、腺嘌呤形成烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（辅酶Ｉ）和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（辅酶ＩＩ），参与大量的生物反应，为脂质代谢、组织呼吸的氧化作用和糖原分解所必需¨Ｊ。有研究报道，烟酰胺可能是高等动物细胞过程的一个关键调控因子旧。３１，在维持细胞的正常生命活动中起到重要作用。ＣＥＴＫＯＶＩＣ—ＣＶＲＬＪＥ等Ｈｏ的研究表明表明一定剂量烟酰胺可抑制ＮＯ的产生，而ＮＯ通过影响线粒体生物合成、脂肪细胞分化以及脂肪分解等，参与能量代谢的调节。过氧化物酶体增殖物激活受体（ＰＰＡＲ，，／）属于核激素受体超家族中的成员，当与特异性配体结合活化后，能够在转录水平上控制多种基因的表达。ＰＰＡＲ＇，／具有脂肪组织特异性，主要在脂肪组织中参与脂肪细胞的分化，在许多脂肪细胞基因转录激活前被诱导，是诱导脂肪细胞分化的特异性转录因子。ＰＰＡＲ一、／的天然配体１５ｄ．ＰＧＪ２能显著抑制诱导型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）的表达，从而减少ＮＯ的产生∞Ｊ。ＮＩＳＯＬＩ等Ｍ１发现，使用ＮＯ供体ＳＮＡＰ孵育大鼠棕色前脂肪细胞，可明显增加细胞内线粒体的数量，并上调了ＪＰＰＡ脚的表达。因此，本试验用ＮＡ处理体外培养的小鼠脂肪细胞，旨在研究ＮＡ对小鼠脂肪细胞能量代谢的影响，以期为调控机体能量代谢和预防疾病提供参考。１材料与方法１．１材料１．１．１试验动物６周龄昆明雌性小鼠，山东大学实验动物中心提供。１．１．２主要试剂烟酰胺（Ｓｉｇｍａ）、牛血清白蛋白（ＢＳＡ）（Ｓｉｇｍａ），ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、Ｉ型胶原酶、万方数据胎牛血清（ＦＢＳ）（Ｇｉｂｃｏ），Ｔｒｉｚｏｌ试剂（Ｉｎｖｉｔｒｏ－ｇｅｎ），ＮＯ及ＡＴＰａｓｅ检测试剂盒为南京建成产品，反转录试剂盒为北京全式金生物技术有限公司产品，引物由博尚生物技术有限公司合成。１．２方法１．２．１小鼠前体脂肪细胞的原代培养无菌状态下取小鼠腹股沟皮下脂肪组织，剪成１ｍｍ３大小的组织块，加入Ｉ型胶原酶消化液（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋２０ｇ／ＬＢＳＡ，临用时加入１ｇ／ＬＩ型胶原酶），恒温振荡水浴锅３７。Ｃ消化３０ｍｉｎ。加血清培养液终止消化，２００目细胞筛过滤，滤液２０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，弃上清液，加入ＤＭＥＭ／Ｆ１２无血清培养液洗（１０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ）２次后，加入含１０％ＦＢＳ的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液混匀，制成细胞悬液，计数、接种，即获得小鼠前体脂肪细胞。１．２．２烟酰胺干预以５×１０４个／ｃｍ２密度将细胞接种于２４孔培养板，在细胞分化的第０天，更换为ＮＡ（０，１００，２００，３００，４００，５００ｉｘｍｏｌ／Ｌ）处理培养液，干预２４ｈ，设３个重复。１．２．３生物化学检测（１）ＮＯ浓度测定：取脂肪细胞培养介质，用自动生化分析仪检测。测定过程均按相应试剂盒说明书进行。（２）细胞内ＡＴＰａｓｅ活力测定：ＡＴＰａｓｅ活力通过定磷法测定。Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ“一Ｍ９２＋．ＡＴＰａｓｅ检测过程按相应试剂盒说明书进行，测出测定管和标准管的吸光度，计算出ＡＴ—Ｐａｓｅ活力。１．２．４线粒体染色将１ｍｇ／ｍＬ的罗丹明一１２３加入ＮＡ干预２４ｈ的活细胞，３７℃孵育１５ｍｉｎ，Ｄ—Ｈａｎｋｓ漂洗３遍，荧光显微镜下观察，在每个处理中任意选取３个视野，每个视野中对１００个线粒体数目不同的细胞进行计数。１．２．５Ｐ雕Ｒｙ表达的检测在分化培养的２４ｈ取出培养板，提取细胞总ＲＮＡ，利用１％琼脂糖凝胶电泳和紫外分光度计第６期成海建，等：添加烟酰胺对小鼠脂肪细胞能量代谢的影响７９３检测总ＲＮＡ质量和纯度。取１ｐ，Ｌ总ＲＮＡ，按照反转录使用ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＴＭｔｈｅｓｉｓＦｉｒｓｔＳｔｒａｎｄｃＤＮＡＳｙｎ．Ｋｉｔ说明书进行操作，以ＯｌｉｇｏｄＴ为引物合０．２００成ｃＤＮＡ第１链。根据ＫＩＭ等¨ｏ提供的尸！尸Ａ脚基因序列合成引物，上游Ｆ：ＣＧＴＧ从ＧｃｃｃＡＴｃＧＡＧＧＡＣＡＴＣ；下游Ｒ：ＴＧＧＡＧＣＡＣＣｒＩＴＩ＇ＧＧＣＧ从ＣＡＧ，产物长度为１０４ｂｐ；根据ＳＵＢＡＵＳＴＥ等旧１提供的Ｏ．１００１８Ｓ基因序列合成引物，上游Ｆ：ＡｃＴＣＡＡＣＡｃＧＧＧＡＡＡＣＣＴＣＡＣＣ，下游Ｒ：ＣＣＡＧＡＣＡＡＡＴＣＧＣＴＣ—ＣＡＣＣＡＡＣ，产物长度为１２０ｂｐ。２５ｕＩＰＣＲ反应体ｔｘＬ，ｆＰ＜Ｏ．０５）．图１Ｆｉｇ．１ＮＡ／（斗ｍｎｌ・Ｌ－Ｉ）系：１０ｐｊｎｏｌ／Ｌ目标基因引物（Ｆ上游）１注：同行肩注不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５）．Ｎｏｔｅ：１）ｉｆｆｅｒｅｎ！ｌｅｔｔｅｒｓｉｎ．ｑａ／ｌｌｅｃｏｌｕｍｎｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎ！ｄｉｆｆｅｒｅｎ，１０斗ｍｏｌ／Ｌ目标基因引物（Ｒ下游）１¨Ｌ，２×ＥａｓｙＰＦｕＰＣＲＳｕｐｅｒＭｉｘ１２．５斗Ｌ，ｃＤＮＡ产物１斗Ｌ，ｍｉｎ，９４℃ＮＡ对脂肪细胞ＮＯ产生的影响ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＮＡｏｎＮＯｉｎａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ灭菌超纯水９．５止。反应条件：９５℃５３０Ｓ。６０ｏＣ４５Ｓ，７２℃４０１０ｍｉｎ，４。Ｃ１０Ｓ，３５个循环，７２℃●Ｎａ＋一Ｋ＋一ＡＴＰａｓｅ口Ｃａ“一Ｍ９２＋－Ａ～１ＰａｓｐＢ６００ｍｉｎ。２％的琼脂糖凝胶电泳检测扩ｒａｑｌＭ（ＰｅｒｆｅｃｔＲｅａｌ增产物，将ＰＣＲ产物切胶回收进行纯化。采用ＳＹＢＲ＠ＰｒｅｍｉｘＥｘＴｉｍｅ）试剂５７５盒（ＴａＫａＲａ）进行两步法ＲＴ—ＰＣＲ反应体系。反转录后，取２在ＡｐｐｌｉｅｄｔｘＬｃＤＮＡ作模板，加样于９６孔板，７５００进行实时ＰＣＲ。５５０Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ１．２．６统计学分析试验数据以平均值±标准误（ｍｅａｎ±阳）表示，采用ＳＰＳＳｌ３．０统计分析软件中的Ｏｎｅ—ｗａｙＡＮＯＶＡ进行方差分析和显著性检验，用ＬＳＤ检验不同处理之间的差异。２结果与分析图２２．１０ＮＭ（ｐ．ｍｏｌ’Ｌ１）注：同行肩注不同大写字母表示Ｎａ＋一Ｋ＋一Ａ１甲ａｓｅ差异显著（Ｐ＜Ｏ．０５）同行肩注不同小写字母表示Ｃａ２＋一Ｍ矿一ＡＴＰａｓｅ差异显著（Ｐ＜ｏ．０５）。Ｎｏｒｅ：ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃａｐｉｔａｌｌｅｔｔｅｒｉｎＳａｌｌｌｅｃｏｌｕｍｎｍｅａｎｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅＮａ＋一ｌｏ—ＡＴＰａｓｅ（Ｐ＜ｏ．０５）：ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｉｎｓａｌｎｅｃｏｌｕｍｎｍｅａｎｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎＣａ２＋－ＭｇＥ＋－ＡＴＦａｓｅｆＰ＜Ｏ．０５）．ｉｎＮＡ对脂肪细胞ＡＴＰａｓｅ活性的影响ｏｎＮＡ对脂肪细胞ＮＯ的影响Ｆｉｇ．２ＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＮＡＡＴＰａｓｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｉｎａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ由图１可见，在体外培养的脂肪细胞中添加ＮＡ后，与对照相比，１００—４００ｐａｎｏｌ／Ｌ２．３ＮＡ对脂肪细胞线粒体的影响为了检测ＮＡ对细胞内线粒体的影响，通过ＮＡ使细胞ＮＯｉｘｒｎｏＬ／Ｌｌａ，ｍｏｌ／ＬＮＡ的生成量下降了０．８％～１０．７％，其中以２００ＮＡ的作用最为显著（Ｐ＜０．０５），而５００罗丹明一１２３染色，观察细胞内线粒体数量的变化。如图３所示，经２００用（Ｐ＜０．０１），而５００Ｉ山ｍｏｌ／ＬＮＡ处理的细胞则无抑制作用，而是促进了ＮＯ的产生，但与对照组相比差异并不明显（Ｐ＞０．０５）。２．２内，线粒体数目明显多于正常细胞，呈极显著作ｉｘｍｏｌ／ＬＮＡ则显示出一定ＮＡ对脂肪细胞内ＡＴＰａｓｅ的影响鉴于２００Ｉｘｍｏｌ／Ｌ和５００Ｉｘｍｏｌ／Ｌ的抑制作用，但效果不显著（Ｐ＞０．０５）。２．４ＮＡ能抑制／ＮＡ对脂肪细胞Ｐ刚确，表达的影响促进ＮＯ的产生，而ＮＯ又参与细胞能量代谢的调节，所以笔者检测了细胞内ＡＴＰａｓｅ的活性，如图２。结果表明，与对照组相比，２００抑制了ＡＴＰａｓｅ的活力。Ｉ山ｍｏｌ／ＬＮＡ与对照组相比，经２００ｐａｎｏｌ／ＬＮＡ处理的细胞ＰＰＡＲｙ表达显著下降，而５００ｔｘｍｏｌ／ＬＮＡ则使促进了该基因的表达（表１）。说明一定浓度范围内ＮＡ是Ｐ黝Ｒｙ的一个有效抑制剂，它能通过影响使ＡＴＰａｓｅ的活力显著增强，而５００斗ｍｏｌ／ＬＮＡ则尸！ＰＡ研的表达来促进／抑制脂肪细胞的能量代谢。万方数据７９４云南农业大学学报Ｂ１００第２８卷蓬；—工一ｓｏ妻ｌ翟｛ｉ器＿！｛詈§｛６０翕￡蓦鲁告ｇ囊３。｛４０Ｕ＝；浏０；籁：‘故警ｌ叫＝２０卷ｉｍｖ｝Ｏ０●■２（）Ｉ）５（）Ｉ】、～（ｐ．ｎｍｌ’Ｌ“ｊ注：Ａ．罗丹明．１２３染色后的脂肪细胞，ａ为线粒体数目正常的细胞，ｂ为线粒体数目增多的细胞。Ｂ．经ＮＡ处理后不同线粒体数目的细胞计数，一表示与对照组相比，线粒体数目正常和增多的细胞数量差异极显著（Ｐ＜０．０１）。Ｎｏｔｅ：Ａ．ａｄｉｐｏｓｅｃｅｌｌｓｗｉｔｈＲｈｏｄａｍｉｎｅ．１２３ｓｔａｉｎｅｄ．ａｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓｎＯｌＴｌｌａｌｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａａｎｄｂｒｅｌ：Ｉｒｅｓｅｎｔｓｃｅｌｌｓｗｈｉｃｈｉｎｃｒｅａｓｅｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ．Ｂ．ｃｅｌｌｃｏｕｎｔｓｆｏｒｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ，”ｍｅａｎｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｉｅｒｅｎｃｅｉｎｎｏｒｍａｌａｎｄｉｎｃｒｅａｓｅｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ（Ｐ＜０．０１１．图３Ｆｉｇ．３ＮＡ对脂肪细胞线粒体的影响ｏｎＴｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＮＡａｄｉｐｏｓｅｃｅｌｌｓｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ表１ＮＡ对脂肪细胞ＰＰＡＲｙ表达的影响（均值±标准误）Ｔａｂ．１ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＮＡｏｎ１），这与ＣＥＴＫＯＶＩＣ．ＣＶＲＬＪＥ等一。的报道一致。ＡＴＰａｓｅ是质膜上重要的离子泵，对维持细胞膜结Ｐ只４尺ｖｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｏｖｉｎｅａｄｉｐｏｅｙｔｅｓ（ｍｅａｎ±ＳＥ）ＮＡ／（ｕｍ０１．Ｌ“）０ＪＷＭＲｙ１．００２±０．０４５ａ构的完整性和保持细胞正常的生理生化活动具有重５０００．９５１±０．１１１ａ２００２．８４６±０．８５６ｂ要作用，是能量代谢的重要检测指标，Ｎａ＋．Ｋ＋．ＡＴＰａｓｅ是镶嵌在细胞膜上的一种特殊蛋白质，其主要功能是逆电化学梯度将Ｎａ＋泵出细胞，运入Ｋ＋，而Ｃａ７＋一Ｍ９２＋一ＡＴＰａｓｅ主要作用是维持细胞内低ｃａ“水平。有研究表明，ＮＯ可对Ｎａ＋．Ｋ＋．ＡＴ．Ｐａｓｅ活性进行调节¨４。。本试验中，经２００注：同行不同的肩标字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５，，ｒｔ＝３）。Ｎｏｔｅ：Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｔｔｅｒｓｉｎｔｈｅｓａｍｅｒｏｗｉｎｄｉｃａｔｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５，ｎ＝３）．３讨论Ｉｘｍｏｌ／ＬＮＡ处理的脂肪细胞内，ＡＴＰａｓｅ活性显著提高（图脂肪组织是贮能库和重要的内分泌器官，可通过局部和全身信号网络调节能量代谢，使机体适应不同的代谢状态。其合成、释放的ＮＯ是一种具有广泛生理效应的气体信号分子，通过影响线粒体生物合成、脂肪细胞分化以及脂肪分解，直接参与能量代谢的调节旧Ｊ。先前有研究表明，交感神经激活一Ｊ、瘦素¨０Ｉ、胰岛素¨叫均可作用于脂肪细胞，使ＮＯ生成增加，从而对能量代谢进行调节。２），从而加快ＡＴＰ的产生，并且通过细胞内线粒体染色，可以清楚地观察到该浓度下线粒体数目较对照组明显增多（图３）。由此可见，ＮＡ通过抑制ＮＯ的产生，激活ＡＴＰａｓｅ，增加线粒体内ＡＴＰ的产生，加快了细胞能量代谢。ＫＵＲＯＳＡＫＩ等¨纠的研究表明，Ｐ尸４．唧在介导脂肪酸氧化及脂质代谢中起重要作用。Ｐ黝脚对能量代谢的影响是通过调节控制细胞内能量平衡烟酰胺系Ｂ族维生素类物质，通常用于治疗一些疾病，如焦虑症、骨关节炎和精神失常等，哺乳动物组织中烟酰胺的浓度大约为ｌｌ～４００ｐａｎｏＬ／Ｌ¨２｜，的基因来完成的¨引，但其机制尚不明确。我们通过实时ＲＴ．ＰＣＲ检测了ＮＡ对Ｐ朋晰表达的影响，结果显示２００的表达，５００ｉ咀ｍｏＬ／ＬＮＡ能明显抑制该基因近年来主要用于临床治疗癌症和Ｉ型糖尿病¨３Ｉ，但ＮＡ对脂肪细胞能量代谢影响的相关报道并不多见。本研究发现，在体外培养的脂肪细胞中添加一定浓度的ＮＡ后，细胞ＮＯ的产生显著减少（图ｐ。ｍｏｌ／ＬＮＡ则能上调Ｐ以尺ｙ，而ＮＡ的这一双向作用与其对ＮＯ，ＡＴＰａｓｅ和线粒体的影响相一致，由此，我们推测，ＮＡ通过调控Ｐ烈尺ｙ的表达，调节ＮＯ的产生，而ＮＯ生成量万方数据第６期成海建，等：添加烟酰胺对小鼠脂肪细胞能量代谢的影响７９５的变化又影响ＡＴＰａｓｅ活性，使线粒体内ＡＴＰ代谢发生变化，最终调节了脂肪细胞的能量代谢。ＷＩＬＬＩＡＭＳ等’１刊的研究结果表明ＮＡ具有一定的弱毒性，能使细胞失去活力或死亡。本研究中５００斗ｍｏｌ／ＬＮＡ作用恰证实了这一结论，笔者推测可能是因为大剂量ＮＡ通过上调艘Ａ研，使细胞产生大量具有细胞毒性的ＮＯ，导致细胞能量代谢降低。但ＮＡ的这一双向作用是否是通过同一途径实现的，还有待于进一步的研究和证实。总之，本研究初步表明一定剂量的烟酰胺能促进脂肪细胞能量代谢，这可能对于肥胖、脂肪肝等多种脂肪能量代谢相关疾病有一定的治疗作用。［参考文献］［１］ＤＩＥＴＲＩＣＨＬＳ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ［Ｊ］．Ａｍｅｒｉｃａｎｊｏｕｒｎａｌｏｆｃｌｉｎｉｃａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１９７１，２４（７）：８００—８０４．［２］ＡＮＤＥＲＳＯＮＲＭ，ＢＩＴＦＥＲＭＡＮＫＪ，ＷＯＯＤＪＧ，ｅｔａ１．ＮｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｎｄＰＮＣｌｇｏｖｅｒｎｌｉｆｅｓｐａｎｅｘｔｅｎｓｉｏｎｂｙｃａｌｏｒｉｅｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｉｎＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ『Ｊ］．Ｎａ．ｔｕｒｅ，２００３，４２３（６９３６）：１８１—１８５．［３］刘丽华，熊燕．一氧化氮与脂肪细胞能量代谢［Ｊ］．国际病理科学与临床杂志，２００６，２６（１）：５９—６２．［４］ＣＥＴＫＯＶＩＣ—ＣＶＲＬＪＥＭ，ＳＡＮＤＬＥＲＳ，ＥＩＺＩＲＩＫＤＬ．Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅａｎｄｄｅｘａｍｅｔｈａｓｏｎｅｉｎｈｉｂｉｔｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ．１．ｉｎ．ｄｕｃｅｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙＲＩＮｍＳＦｃｅｌｌｓｗｉｔｈｏｕｔｄｅｃｒｅａｓｉｎｇｍｅｓｓｅｎｇｅｒｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｆｏｒｎｉ－ｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９３，１３３（４）：１７３９—１７４３．［５］ＷＥＩＮＢＥＲＧＪＢ，ＧＲＡＮＧＥＲＤＬ，ＰＩＳＥＴＳＫＹＤＳ，ｅｔａ１．Ｔｈｅｒｏｌｅｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｉｎｔｈｅｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｓｐｏｎｔａ—ｎｅｏｕｓｍｕｒｉｎｅａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｄｉｓｅａｓｅ：ｉｎｃｒｅａｓｅｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＭＲＬ－ｌｐｒ／ｌｐｒｍｉｃｅ，ａｎｄｒｅｄｕｃｔｉｏｎｏｆｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅ・ｐｈｒｉｔｉｓａｎｄａｒｔｈｒｉｔｉｓｂｙｏｒａｌｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄＮＧ．．ｍｏｎｏｍｅｔｈ．．ｙｌ－Ｌ・ａｒｇｉｎｉｎｅ［Ｊ］．ｎｅＪｏｕｒｎａｌｏｆｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｍｅｄｉ—ｃｉｎｅ，１９９４，１７９（２）：６５１—６６０．［６］ＮＩＳＯＬＩＥ，ＣＬＥＭＥＮＴＩＥ，ＴＯＮＥＬＬＯＣ，ｅｔａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆｒａｔｂｒｏｗｎａｄｉｐｏｃｙｔｅｓｉｎｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅｓ［Ｊ］．ＢｒｉｔｉｓｈＪｏｕｒ－ｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１９９８，１２５（４）：８８８—８９４．［７］ＫＩＭＪ，ＳＡＴＯＭ，ＬＩＱｘ，ｅｔａ１．Ｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ—ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｇａｍｍａｉｓａｔａｒｇｅｔｏｆｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅｒｅｇｕ—ｌａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐｒｅｏｖｕｌａｔｏｒｙｆｏｌｌｉｃｌｅｓａｎｄｃｏｎｔｒｏｌｓｏｖｕｌａｔｉｏｎ万方数据ｉｎｍｉｃｅ［Ｊ］．ＭｏｌｅｃｕｌａｒａｎｄＣｅｌｌｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，２００８，２８（５）：１７７０一１７８２．［８］ＳＵＢＡＵＳＴＥＡＲ，ＢＵＲＡＮＴＣＦ．ＲｏｌｅｏｆＦｏｘ０１ｉｎＦＦＡ—ｉｎｄｕｃｅｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｓｔｒｅｓｓｉｎａｄｉｐｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ—ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙａｎｄＭｅｔａｂｏｌｉｓｍ，２００７，２９３（１）：Ｅ１５９一Ｅ１６４．［９］ＧＩＯＲＤＡＮＯＡ，ＴＯＮＥＬＬＯＣ，ＢＵＬＢＡＲＥＬＬＩＡ，ｅｔａ１．Ｅｖｉｄｅｎｃｅｆｏｒａｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅｓｙｓｔｅｍｉｎｂｒｏｗｎａｄｉｐｏｃｙｔｅｎｕｃｌｅｕｓ［Ｊ］．ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ，２００２，５１４（２／３）：１３５—１４０．［１０］ＭＥＨＥＢＩＫＮ，ＪＡＵＢＥＲＴＡＭ，ＳＡＢＯＵＲＡＵＬＴＤ，ｅｔａ１．Ｌｅｐｔｉｎ・ｉｎｄｕｃｅｄｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｗｈｉｔｅａｄｉ—ｐｏｃｙｔｅｓｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｔｈｒｏｕｇｈＰＫＡａｎｄＭＡＰｋｉｎａｓｅａｃｔｉ・ｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＡｍｅｒｉｃａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈｙｓｉｏｌｏｇｙ－ｃｅｌｌＰｈｙｓｉ・ｏｌｏｇｙ，２００５，２８９（２）：Ｃ３７９一Ｃ３８７．［１１］ＲＩＢＩＥＲＥＣ，ＪＡＵＢＥＲＴＡＭ，ＳＡＢＯＵＲＡＵＬＴＤ，ｅｔａ１．Ｉｎｓｕｌｉｎｓｔｉｍｕｌａｔｅｓｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｉｎｒａｔａｄｉｐｏ—ｃｙｔｅｓ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍ—ｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００２，２９１（２）：３９４—３９９．［１２］ＨＯＳＨＩＮＯＪ，ＳＣＨＬＩＬＩＴＥＲＵ，ＫＲＯＧＥＲＨ．Ｎｉｃｏｔｉｎａｍ．ｉｄｅｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎａｎｄｉｔｓｒｅｌａｔｉｏｎｔｏＮＡＤｓｙｎｔｈｅｓｉｓｉｎｒａｔｌｉｖｅｒｔｉｓｓｕｅｃｕｌｔｕｒｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｂａｓｉｓｆｏｒｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇ—ｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆ１．ｍｅｔｈｙｌｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａＡｃｔａ，１９８４，８０１（２）：２５０—２５８．［１３］ＫＡＡＮＤＥＲＳＪＨ，ＰＯＰＬＡ，ＭＡＲＲＥＳＨＡ，ｅｔａ１．ＡＲＣＯＮ：ｅｘｐｅｒｉｅｎｃｅｉｎ２１５ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｄｖａｎｃｅｄｈｅａｄ—ａｎｄ—ｎｅｃｋＣａｎｃｅｒ［Ｊ］．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＪｏｕｒｎａｌｏｆＲａｄｉａｔｉｏｎＯｎｃｏｌｏｇｙＢｉｏｌｏｇｙＰｈｙｓｉｃｓ，２００２，５２（３）：７６９—７７８．［１４］ＤＥＯＬＩＶＥＩＲＡＥＬＩＡＳＭ，ＴＡＶＡＲＥＳＤＥＬＩＭＡＷ，ＶＡＮＮＵＣＨＩＹＢ，ｅｔａ１．ＮｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｍｏｄｕｌａｔｅｓＮａ＋，Ｋ＋一ＡＴＰａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｔｈｒｏｕｇｈｃｙｃｌｉｃＧＭＰｐａｔｈｗａｙｉｎｐｒｏｘｉｍａｌｒａｔｔｒａｃｈｅａ［Ｊ］．ＥｕｒｏｐｅａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａ—ｃｏｌｏｇｙ，１９９９，３６７（２—３）：３０７—３１４．［１５］ＫＵＲＯＳＡＫＩＥ，ＮＡＫＡＮＯＲ，ＳＨＩＭＡＹＡＡ，ｅｔａ１．Ｄｉｆ－ｆｅｒｅｎｔｉａｌｅｆｆｅｃｔｓｏｆＹＭ４４０ａｈｙｐｏｇｌｙｃｅｍｉｃａｇｅｎｔｏｎｂｉｎｄｉｎｇｔｏａｐｅｒｏｘｉｓｏｍｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｏｒ—ａｃｔｉｖａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒｇａｍｍａａｎｄｉｔｓｔｒａｎｓａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＰｈａｒ—ｍａｃｏｌｏｇｙ，２００３，６５（５）：７９５—８０５．［１６］ＢＥＲＧＥＲＪ，ＭＯＬＬＥＲＤＥ．ＴｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｃｔｉｏｎｏｆＰＰＡＲｓ［Ｊ］．ＡｎｎｕａｌＲｅｖｉｅｗｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，２００２，５３：４０９—４３５．［１７］ＷＩＬＬＩＡＭＳＡ，ＲＡＭＳＤＥＮＤ．Ｎｉｃｏｔｉｎａｍｉｄｅ：ａｄｏｕｂｌｅｅｄｇｅｄｓｗｏｒｄ［Ｊ］．Ｐａｒｋｉｎｓｏｎｉｓｍ＆ＲｅｌａｔｅｄＤｉｓｏｒｄｅｒｓ，２００５，１１（７）：４１３—４２０．添加烟酰胺对小鼠脂肪细胞能量代谢的影响
作者：作者单位：
成海建， 臧坤， 刘晓牧， 万发春， 谭秀文， 刘桂芬， 宋恩亮， CHENG Haijian， ZANG Kun， LIUXiaomu， WAN Fachun， TAN Xiuwen， LIU Guifen， SONG Enliang
成海建,刘晓牧,万发春,谭秀文,刘桂芬,宋恩亮,CHENG Haijian,LIU Xiaomu,WAN Fachun,TAN Xiuwen,LIUGuifen,SONG Enliang(山东省农业科学院畜牧兽医研究所,山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室,山东济南250100)， 臧坤,ZANG Kun(青岛农业大学动物科技学院,动物生殖发育与基因工程研究所,山东青岛266109)
云南农业大学学报
Journal of Yunnan Agricultural University2013,28(6)
刊名：英文刊名：年，卷(期)：
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_ynnydxxb201306006.aspx
