中华保健医学杂志2018年10月第20卷第5期ChinJHealthCareMed袁October2018袁Vol20袁No.5
窑论著窑
大肠癌KRAS基因遗传变异的相关性研究罗劲松袁何
淼
选择
目的
研究大肠癌K-鼠肉瘤病毒癌基因渊KRAS冤基因遗传变异的相关性袁为临床诊治提供参考遥方法
2012年5月耀2013年5月在德阳市人民医院和德阳市第二人民医院接受择期外科手术治疗的大肠癌患者80例袁术中取癌KRAS基因突变的相关性尧KRAS基因突变与预后的相关性遥结果
咱摘要暂
组织袁经免疫组织化学法尧PCR-SSCP法检测大肠癌标本上KRAS基因遗传突变情况袁并分析大肠癌患者的病理学因素与号密码子突变者20例袁13号密码子突变者7例曰KRAS基因遗传变异与肿瘤部位尧肝转移尧肿瘤分化程度存在相关性袁差异有统计学意义渊P约0.05冤曰KRAS基因遗传变异与患者的性别尧年龄尧大体类型尧TNM分期尧淋巴结转移无显著相关性袁差异无统计学意义渊P跃0.05冤曰单变量分析结果发现袁KRAS基因遗传变异和大肠癌患者的预后不佳存在相关性袁且经多变量分析结果发现袁KRAS基因突变尧肝转移及肿瘤低分化是预后不佳的独立危险因素遥结论KRAS基因遗传变异与患者的肝脏转移及大肠癌低分化存在相关性袁且KRAS基因突变尧肝转移及肿瘤低分化对预后存在影响袁需及早进行靶向治疗袁提高预后遥
咱关键词暂大肠癌曰KRAS基因遗传变异曰相关性咱中图分类号暂R735.34
咱文献标识码暂A
DOI院10.3969/援issn.1674-3245.2018.05.011
80例大肠癌患者中袁KRAS基因突变者检出27例袁其中12
CorrelativestudyongeneticvariationofKRASgeneincolorectalcancer
LuoJinsong袁HeMiao
渊DepartmentofGastroenterology袁DeyangSecondPeople'sHospital袁Deyang618000袁China冤
咱Abstract暂ObjectiveTostudythecorrelationstudyofgeneticvariationofcolorectalcancerKRASgeneandprovidereferenceforclinicaldiagnosisandtreatment.Methods80casesofpatientswithcolorectalcancerwhounderwentselectiveoperationinourhospitalfromMay2012toMay2013wereselectedasobservationobjects.Thecanceroustissuesweretakenduringtheoperation.ThecolorectalcancerspecimensweredetectedbyimmunohistochemicalmethodandPCR-SSCPmethod.WeanalyzedthecorrelationsofKRASgene-relatedgeneticmutationsandapathologicalfactors,andthecorrelationofKRASmutationsandclinicalprognosis.ResultsOfthe80patientswithcolorectalcancer袁27caseswerefoundtohaveKRASmutations袁ofwhich20
caseswerecodon12mutationsand7caseswerecodon13mutations.ThegeneticvariationofKRASgenewascorrelatedwithtumorsite袁livermetastasisandtumordifferentiation袁andthedifferencewasstatisticallysignificant渊P约0.05冤.TherewasnosignificantcorrelationbetweentheKRASgenegeneticvariationandthepatient'sgender袁age袁generaltype袁TNMstage袁lymphnodemetastasis袁andthedifferencewasnotstatisticallysignificant渊P跃0.05冤.Theaveragesurvivaltimeofwildtypepatientswaslongerthanthatofmutanttype袁andthedifferencewasstatisticallysignificant渊P约0.05冤.Therewasnosignificantdifferenceinthemeansurvivaltimebetweenpatientswithmutationsincodon12and13oftheKRASgene渊P跃0.05冤.UnivariateanalysisshowedthattherewasacorrelationbetweenKRASgeneticmutationandpoorprognosisinpatientswithcolorectalcancer.MultivariateanalysisshowedthatKRASgenemutations袁hepaticmetastases袁andpoorlydifferentiatedtumorswereindependentriskfactorsforpoorprognosis.ConclusionThereisacorrelationbetweengeneticvariationofKRASgeneandlivermetastasisofpatientsandpoordifferentiationofcolorectalcancer.KRASgenemutation袁livermetastasis袁andpoordifferentiationoftumorshaveanimpactonprognosis.Targetedtherapyisneededtoimproveprognosis.
咱Keywords暂Colorectalcancer曰GeneticvariationofKRASgene曰Correlation
大肠癌作为常见的恶性肿瘤袁早期缺乏显著的典型性临床症状袁部分患者在入院确诊时多已进展断尧治疗具有重要意义咱1暂遥近年来袁随着临床医学发展袁分子靶向治疗技术被提出袁为临床治疗大肠癌提供了新选择袁但针对靶向治疗的预后情况有待进一步研究咱2暂遥而K-鼠肉瘤病毒癌基因渊KRAS冤作为丝裂原活化蛋白激酶渊MAPK冤尧RAS-RAF-丝裂原
作者单位院618000德阳市第二人民医院消化内科渊罗劲松冤曰德阳市
人民医院肿瘤科渊何
淼冤
活化蛋白激酶尧细胞外信号调节激酶的通路袁是重要的EGFR信号通路作用因子袁能引起细胞增殖及此袁本研究对大肠癌KRAS基因遗传变异的相关性进行分析袁探讨预后价值遥11.1
对象与方法对象
选择2012年5月耀2013年5月在德
基因突变袁与多种肿瘤发生存在相关性咱3-4暂遥基于
至中晚期袁危害患者生命健康袁故及早给予患者诊
阳市人民医院和德阳市第二人民医院接受外科手术治疗的大肠癌患者80例袁其中男46例袁女34例袁年龄26耀68岁袁平均渊55.3依7.4冤岁曰临床分期
中华保健医学杂志2018年10月第20卷第5期ChinJHealthCareMed袁October2018袁Vol20袁No.5
窑397窑
玉在肿瘤耀域的期原发39例灶袁芋上取耀郁3期mm41伊3例mm遥术中伊5mm取癌癌组织组织袁袁且取材位置需避开肿瘤的中心坏死灶袁在取材获得标本后实施固定尧石蜡包埋袁并送至病理诊断遥入选标准院所有入选对象均经临床检查确诊为大肠癌曰无其他恶性肿瘤尧凝血功能障碍曰术前未接受任何治疗曰所有患者对本研究均知情袁并签署有关同意书曰术后2耀3周开展5-Fu联合奥沙利铂尧亚叶酸钙1.2标准方方法案基渊1础冤采集化疗遥尧处术后理标给本予袁患者取材至尧固少定3院年术中随访将遥切除的新鲜大肠癌组织标本置入固定液内曰脱水透明院将标本浸入乙醇渊低浓度逐渐过渡到高浓度冤进行脱水袁在脱水完全后适当的浸入二甲苯溶液内进行透明处理曰浸蜡包埋院将标本浸入溶化的石蜡内袁并放在温箱内进行保温处理袁在石蜡彻底浸入标本后实施包埋曰切片尧贴片院用切片机将蜡块适当切片袁厚度约为5mm曰经热水烫平后准确的贴在载玻片上袁置入恒温箱内进行烘烤曰完成标本制作袁并开展HE染色袁用中性树胶进行封固遥渊2冤DNA提取袁将玻片放在58益烤箱内保存袁过夜后于室温下静置30min袁再放入石蜡库内保存曰并依据说明书准确提取石蜡组织DNA遥渊3冤DNA的PCR技术扩增袁设计尧合成引物院genjuNCBI基因数据库袁参照需要检测的相关位点进行引物序列设计渊扩增片段为CTGAAAATGACTGA-3162bp冤院设计KRAS5鸳曰的设上计游KRAS引物为的5下鸳-GGCCTG游引反鸳-GTCCTGCACCAGTAATATGCA-3应体系置入0.2mlPCR管内遥PCR渊反F冤应5鸳遥条件将物院于设PCR为定好的PCR仪上进行反应院即预变性90益渊5min冤尧变性90益渊40s冤尧退火50益渊40s冤尧延伸70益渊40s冤袁共反应30个循环后曰再延伸70益渊2min冤袁于4益环境下保存曰再检测PCR产物遥渊4冤基因测序袁将获得的PCR扩增产物送至实验室进行纯化尧测序袁测序方法为焦磷酸测序技术遥渊5冤观察并分析大肠癌患者的临床病理学相关因素与KRAS基因遗传变异的相关性袁病理学因素包括患者年龄尧性别尧大体类型尧肿瘤部位尧TNM分期尧远处转移尧肿瘤的分化程度1.3尧淋巴统计学处理结转移等情况采用遥
SPSS20.0统计软件进行数据分析袁计数资料以百分数和例数表示袁组间比较采用字2检验曰计量资料采用渊x依s冤表示袁组间比较采用t检验曰KRAS基因突变和患者生存期相关性用Kaplan-Meier生存曲线进行分析曰应用Log-rank检验法对显著性检验进行分析袁并用Cox回归模型分析多变量生存袁分析各种因素对大肠癌患者的预后影响曰以P约0.05为差异有统计学意义遥22.1结果
KRAS基因检测结果80例大肠癌患者中检出KRAS基因突变者27例袁基因突变率为33.8%曰其中12号密码子突变者20例渊74.1%冤袁13号密码子突变者7例渊25.9%冤遥研究显示袁KRAS基因突变全部表现为单个碱基点突变袁无逸2个碱基突变或是其他相关形式突变遥检测发现袁G-A突变检出率最高袁共有21例渊77.8%冤曰其次为G-T突变者5例渊18.5%冤尧G-C突变者2例渊7.3%冤遥而KRAS基因的12号密码子突变者20例中检出3种不同突变方式袁即院14例渊51.9%冤GGT-GAT突变袁造成天冬氨酸Asp替换甘氨酸Gly曰5例渊18.5%冤GGT-GTT突变GCT袁使基因突缬的变氨酸Val替换甘氨酸Gly曰1例渊3.7%冤GGT-13袁使号丙密氨码酸子Ala突变者替换7甘例氨渊酸25.9%Gly遥冤全而部KRAS显示为2.2GGC-GAC大肠癌的突病变理学袁使天因素冬氨与酸KRASAsp替基因换甘氨遗传酸Gly变异遥的相关性KRAS基因遗传变异与肿瘤部位尧肝转移渊龄P尧尧约肿瘤大体0.05分类冤曰化程型KRAS度存尧TNM基在相分因期遗关尧传性淋巴变袁异差结与异转患者有统移无的性计学显著别意义相尧年关性2.3袁差KRAS异无统基因和计学意患者义渊P的跃预0.05后生袁表存期相1冤遥
关性80例患者随访结果显示袁KRAS基因野生型患者的生存时间为渊35.1依3.1冤个月袁而基因突变型患者的生存时间为渊25.8依4.6冤个月曰野生型患者的生存时间高KRAS于突变型袁差异有统计学意义渊t=10.721袁P=0.000冤遥渊间25.7为渊24.8依基1.4因依冤12个号1.7月冤个曰密13码月曰号子突变患者的生存时间为两密组码患者子突的变患者平均生存的生存时间时对比2.4袁差KRAS危险异无统因素分析计学意义渊通过t=1.387袁P=0.178冤遥
相关性基曰因且遗经多传变变异量和大分析结肠单癌变果患者量发现的分袁预析结KRAS后不果基佳发现袁因存在突变尧肝转移及肿瘤低分化是预后不佳的独立危险因素3袁见讨论
表2遥径袁且KRASKRAS基基因因为突主要的变能导EGFR致部分信器号通官成路熟转细导胞途出现形态学变化袁并刺激癌细胞形成咱8暂基因作为细胞内信号转导中心调节子袁遥能同被时EGFR袁KRAS或是渊并PI3K其他GTP经冤相MAPK相互关酪作氨酸激酶活化袁与磷脂酰肌醇-3激酶通用路袁能途对径细对胞细生存胞增期进行间接调节袁能与对12比号12密号码密子码突子变的产天生冬的氨Ras酸殖替产蛋换生影响咱9暂遥白甘结氨合酸袁并后使
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中华保健医学杂志2018年10月第20卷第5期ChinJHealthCareMed袁October2018袁Vol20袁No.5
表1大肠癌患者的临床病理学因素与KRAS基因遗传
变异的相关性分析咱例渊%冤暂
病理学因素野生型组
突变组
字2值P值性别1.401
0.237
男28渊60.9冤18渊39.1冤女25渊73.5冤
9渊26.5冤
年龄渊岁冤1.046
0.306
臆跃55
5528肿瘤大体类型25渊渊71.861.0冤冤
1116渊渊28.239.0冤冤0.371
0.543
息肉13渊72.2冤5渊27.8冤溃疡40渊64.5冤
22渊35.5冤
肿瘤原发部位7.033
0.030
右半结肠13渊72.2冤5渊27.8冤左半结肠9渊42.9冤12渊57.1冤直肠31渊75.6冤10渊24.4冤TNM玉耀域分期肝芋耀郁
27渊69.2冤
12渊30.8冤
0.302
0.582
转移26渊63.4冤15渊26.6冤4.8500.028
有16渊51.6冤15渊48.4冤无
37渊75.5冤12渊24.5冤
肿瘤分化程度5.386
0.020
低分化9渊45.0冤11渊55.0冤中或高分化44渊73.3冤16渊26.7冤
淋巴结转移1.1840.277
有36渊70.6冤15渊29.4冤无
17渊58.6冤
12渊41.4冤注院野生型组53例曰突变组27例
表280例大肠癌患者的多因素Cox模型分析尧预后
相关危险因素分析
危险因素RR95%CIP值性别2.5680.706耀9.3090.153年龄
2.9100.516耀16.3760.226肿瘤大体类型0.9470.277耀3.1980.929肿瘤原发部位1.0610.574耀1.9480.854TNM分期0.9270.211耀3.3980.953肝转移21.9243.726耀128.8710.000肿瘤分化程度5.3351.223耀23.2040.025淋巴结转移
2.077
0.397耀10.821
0.384
其下KRAS游基的信因突号通变可路视相作关引效起应大器肠出现癌的持续启动性活因素化袁故咱10暂本研究结果显示袁KRAS基因突变KRAS基遥
因遗传变异与肿瘤部位尧肝转移尧肿瘤分化程度存在相关性袁且KRAS基因野生型大肠癌患者的平均生存期高于突变型患者袁但突变型患者内12尧13号密码子突变患者的生存期对比无显著差异咱11暂量分析发现袁KRAS基因突变尧肝转移及肿瘤遥经多低分变化是预后不佳的独立危险因素袁说明KRAS基因遗传变异与大肠癌的肝转移及分化程度存在相关性袁故可认为KRAS基因突变尧肝转移及肿瘤低分化是导致预后欠佳的危险因素遥目前袁临床医学针对大肠
癌多以手术疗法为主袁但术后存在较高的并发症发生风险袁对机体的损伤较大曰且多数患者因在确诊时已进展至中晚期袁丧失手术治疗机会袁故积极寻找安全尧有效的治疗方法具有重要意义遥随着医学技术的提高袁靶向治疗被提出袁能经设计相关治疗药物袁并在药物进入体内后特异性地选择致癌位点进行结合产生作用袁促使肿瘤细胞产生特异性死亡袁且对肿瘤周围相关正常组织细胞无影响袁存在较高的安全性咱12暂变情况袁使大遥肠同癌时治袁靶疗效向治果疗提高能调节袁故认KRAS为KRAS基因突基因突变可视作抗EGFR治疗评估的参考依据袁但针对其是否能视作临床评估大肠癌治疗预后尚存在争议遥
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渊收稿日期院2018-05-08曰修回日期院2018-06-04冤
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