高效液相色谱法同时测定银黄胶囊中绿原酸和黄芩苷的含量

任荣军

【摘 要】目的：建立同时测定银黄胶囊中绿原酸和黄芩苷的含量高效液相色谱法（ HPLC）。方法：色谱柱为Symme-tryR-C18（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1豫磷酸溶液梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，检测波长为318 nm，柱温为30益。结果：绿原酸在进样量0.2174~2.1740μg范围内与峰面积线性关系良好（r越0.9998）（n越5），平均回收率为99.26豫（n越6），RSD为0.56豫；黄芩苷在进样量0.8076~8.0760μg范围内与峰面积线性关系良好（r越0.9999）（n越5），平均回收率为98.43豫（n越6），RSD为1.07豫。结论：该含量测定方法简单可行，重复性好，为有效控制银黄胶囊的质量提供依据。

【期刊名称】《临床医药实践》 【年(卷),期】2016(025)005 【总页数】4页(P359-361,362)

【关键词】银黄胶囊;高效液相色谱法;绿原酸;黄芩苷 【作 者】任荣军

【作者单位】岳阳市食品药品检验所，湖南岳阳 414000 【正文语种】中 文 【中图分类】R927

银黄胶囊是由金银花提取物与黄芩提取物组成的复方制剂，有清热、解毒之功效，主要用于急、慢性扁桃体炎，急、慢性咽喉炎，上呼吸道感染等症的治疗。现行版的中国药典收载的剂型有银黄口服液、银黄颗粒，均采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)对有效成分绿原酸和黄芩苷分别进行测定[1]。银黄胶囊收载于《中药部颁药品标准》中，但标准中无主要成分的含量测定。为了能有效控制银黄胶囊的质量，笔者采用高效液相色谱法(HPLC)对同时测定银黄胶囊中主要成分绿原酸和黄芩苷进行了方法研究。报告如下。 1.1 仪器

Waters 2695e/2489高效液相色谱仪；电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。 1.2 试药

绿原酸对照品(110753-201314，纯度为96.6%)、黄芩苷(110715-201016，纯度94.0%)均购自中国食品药品检定研究院；银黄胶囊(A厂家，批号为20151012；B厂家，批号为150806；C厂家，批号为20150911)；甲醇(色谱纯)；水为超纯水；其余化学试剂均为分析纯。 2.1 色谱条件

色谱柱：SymmetryR-C18(250mm×4.6mm，5 μm)；流动相：甲醇(A)-0.1%磷酸溶液(B)，梯度洗脱(0～12 min，A 10%→45%；12～30 min，A 45%；30～35 min，A 10%)；流速为1.0 mL/min，检测波长为318 nm，柱温为30 ℃；进样量10 μL。 2.2 溶液的制备

混合对照品溶液的制备：取绿原酸、黄芩苷对照品适量，置棕色容量瓶中，加稀乙醇制成每1 mL含绿原酸0.108 7 mg，黄芩苷0.403 8 mg的混合溶液，即得。供试品溶液的制备：取本品装量差异项下的内容物，混匀，取约0.2 g，精密称定，

置50 mL棕色量瓶中，加稀乙醇30 mL，超声处理(250 W，40 kHz)15 min，放冷，用稀乙醇定容至刻度，摇匀，即得。阴性样品溶液的制备：按处方比例及生产制备工艺，自制不含金银花、黄芩提取物的空白样品，按“样品溶液的制备”项下制备阴性对照溶液。 2.3 专属性试验

取对照品混合溶液、供试品溶液与阴性样品溶液各10 μL按“2.1”项色谱条件测定记录色谱图，阴性样品无干扰，色谱图(见图1～图3)。 2.4 线性关系考察

分别精密吸取混合对照品溶液(绿原酸0.108 7 mg/mL、黄芩苷

0.403 8 mg/mL)2 μL，5 μL，10 μL，15 μL，20 μL，注入液相色谱仪，测定其峰面积积分值，以峰面积为纵坐标，以进样量为横坐标，绘制标准曲线，绿原酸回归方程为A=830.92C+193 753，R=0.999 8；黄芩苷回归方程为

A=10 087.11C-613 446.41，R=0.999 9。结果表明：绿原酸在进样量0.217 4～2.174 0 μg范围内与峰面积线性关系良好，黄芩苷在进样量0.807 6～8.076 0 μg范围内与峰面积线性关系良好。 2.5 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液，按“2.1”项色谱条件重复进样6次，每次10 μL，绿原酸、黄芩苷峰面积平均值RSD分别为0.2%和0.4%，表明仪器精密度良好。 2.6 稳定性试验

精密称取同一供试品(A厂家，20151012)按照“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h精密吸取10 μL，注入液相色谱仪测定，结果绿原酸、黄芩苷峰面积RSD分别为1.8%和0.9%，结果表明供试品溶液稳定性良好。 2.7 重复性试验

精密称取同一批号(A厂家，批号：20151012)样品6份，按“2.2”项下方法制备

供试品溶液依法测定，绿原酸平均含量为19.2 mg/g，RSD为0.3%；黄芩苷平均含量为114.0 mg/g，RSD为0.1%。 2.8 回收率试验

称取已知含量的同一批号(A厂家，批号：20151012)银黄胶囊样品(绿原酸19.2 mg/g、黄芩苷114.0 mg/g)约0.1 g，精密称定，分别精密加入混合对照品溶液(绿原酸1.001 mg/mL、黄芩苷5.462 mg/mL)2 mL，水浴蒸干，再按“2.2”项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率，结果见表1。 2.9 样品测定

分别取3个不同厂家的本品按“2.2”项下方法制备供试品溶液，精密量取供试品溶液及混合对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，按外标法以峰面积计算绿原酸、黄芩苷的含量，结果见表2。 3.1 检测波长的选择

现行药典中测定金银花中绿原酸的含量检测波长为327 nm，测定黄芩中黄芩苷的含量检测波长为280 nm[1]。笔者采用DAD检测器对银黄胶囊的样品进行紫外波长扫描(见图4，图5)，在200～400 nm范围内，绿原酸在约326 nm、黄芩苷在约276 nm和318 nm波长处有最大吸收，综合考虑到样品中绿原酸的含量远低于黄芩苷含量，为提高绿原酸与黄芩苷的检测灵敏度，同时减少对黄芩苷的检测干扰，在参考文献的基础上[2]，选择318 nm处作为同时检测绿原酸和黄芩苷的检测波长。 3.2 流动相的选择

流动相的选择在参考文献[2-6]的基础上，考察了甲醇-水、甲醇-磷酸盐缓冲液、甲醇-0.1%磷酸溶液及乙腈-0.1%磷酸溶液等几种，通过观察比较供试品溶液中主峰峰形、分离度、理论塔板数等评价参数确定流动相的组成，选择甲醇-0.1%磷酸溶液作为流动相，但在实验中发现采用等度模式分离绿原酸主峰及其相邻的杂质峰

分离度不理想，故采用梯度洗脱，结果绿原酸及其杂质峰分离度良好，黄芩苷主峰峰形也好，检测时间短，故确定其作为该色谱的分析条件。 3.3 供试品溶液的制备

查阅文献可知[6]，绿原酸易溶于甲醇、乙醇等有机溶剂，黄芩苷极性强，较难溶解在纯乙醇中，考虑试剂的环保性和溶解性，故选择醇和水的混合溶液作溶剂。试验考察比较了50%乙醇、稀乙醇及70%乙醇作为提取溶剂，结果以稀乙醇为提取溶剂时，超声处理15 min，绿原酸和黄芩苷提取基本完全，且总提取效率稍优于其他两种溶剂，故选择稀乙醇作为提取溶剂制备供试品溶液。笔者在实验过程中，发现绿原酸溶液对光极不稳定，易分解，故本实验操作宜在避光条件下进行，同时宜采用棕色容量瓶制备绿原酸对照品溶液及供试品溶液。

本文采用HPLC法同时检测银黄胶囊中绿原酸和黄芩苷的含量，该方法简便快速、准确可靠，可有效地控制银黄胶囊的质量。

【相关文献】

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:化学工业出版社,2010:205;283;1082-1084.1〛

[2]刘永利,李冬梅,冯丽,等.RP-HPLC同时测定银黄胶囊中绿原酸与黄芩苷含量[J].中成药,2006,28(8):1142-1143.1〛

[3]谷俊峰,徐大明.银黄胶囊中绿原酸和黄芩苷的含量测定[J].中国药业,2005,14(5):40-41.1〛 [4]潘馨.高效液相法测定银黄胶囊中绿原酸及黄芩苷的含量[J].中国现代应用药学杂志,2003,20(6):493-494.1〛

[5]刘冰,王蓉华,徐永波.HPLC法同时测定银黄胶囊中绿原酸、黄芩苷含量[J].中国药事,2006,20(5):303.1〛

[6]徐玫,袁琦,赵辉,等.HPLC法同时测定银黄胶囊中黄芩苷和绿原酸含量的条件考察[J].河南大学学报(医学版),2011,30(3):165-169.