非小细胞肺癌ROS1融合基因与E_省略_和RRM1基因mRNA表达的关系_田玉旺

·1·

基础研究

·论著·

非小细胞肺癌ＲOS1融合基因与EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA表达的关系

田玉旺，许春伟，高文斌，张玉萍，张

［摘要］目的

博

complementationgroup1，探讨ＲOS1融合基因与切除修复交叉互补基因1（excisionrepaircross-应用实时荧光定量PCＲ方法检测257例NSCLC中ＲOS1基因及

EＲCC1）和核苷酸还原酶亚单位M1（ribonucleotidereductasesubunitM1，ＲＲM1）mＲNA在非小细胞肺癌（non-smallcelllungcancer，NSCLC）组织中表达的关系。方法EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA的表达。结果

ＲOS1融合基因及EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA的表达均与患者性别、年

NSCLC组织中

龄、是否吸烟、肿瘤大小、淋巴结是否转移及临床分期无关（P＞0.05）。ＲOS1融合基因与EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA表达水平无关，且EＲCC1基因mＲNA表达水平与ＲＲM1基因mＲNA表达水平无关（P＞0.05）。结论ＲOS1融合基因表达可能与EＲCC1和ＲＲM1基因表达无关。

［关键词］癌，非小细胞肺；ＲOS1；切除修复交叉互补基因1；核苷酸还原酶亚单位M1［中国图书资料分类号］Ｒ734．2

［文献标志码］A

［140X（2014）09-0001-04文章编号］2095-［DOI］10．3969/j．issn．2095-140X．2014．09．001

ＲelationshipsbetweenＲOS1FusionGeneandthemＲNAExpressionofEＲCC1andＲＲM1GeneinTissuesofNonSmallCellLungCancer

TIANYu-wang1，XUChun-wei2，GAOWen-bin3，ZHANGYu-ping4，ZHANGBo2（1．DepartmentofPathology，Gener-alHospitalofBeijingMilitaryAreaCommand，Beijing100700，China；2．DepartmentofPathology，AffiliatedHospitaloftheMilitaryMedicalScienceAcademyofPLA，Beijing100071，China；3．DepartmentofOncology，AffiliatedZhongs-hanHospitalofDalianUniversity，Dalian116001，China；4．DepartmentofPathology，thePeople＇sHospitalofWeifang，Weifang，Shandong261041，China）

［Abstract］Objective

ToexplorerelationshipsbetweenＲOS1fusiongene，excisionrepaircrosscomplement

protein1gene（excisionrepaircross-complementationgroup1，EＲCC1）andnucleotidereductasesubunitsM1（ribonu-cleotidereductasesubunitM1，ＲＲM1）ofmＲNAexpressionsintissuesofnonsmallcelllungcancer（NSCLC）．Meth-ods

LevelsofＲOS1fusiongeneandmＲNAexpressionsofEＲCC1andＲＲM1genein257NSCLCpatientsweredetected

LevelsofＲOS1fusiongene，andmＲNAexpressionsof

withreal-timefluorescentquantitativePCＲmethod．Ｒesults

EＲCC1andＲＲM1genedidnotrelatetogender，age，smokinghistory，tumorsize，lymphnodemetastasisandclinicalstageofpatients（P＞0.05）；expressionlevelofＲOS1fusiongenedidnotrelatetomＲNAexpressionsofEＲCC1andＲＲM1gene，andtheexpressionlevelofEＲCC1mＲNAdidnotrelatetotheexpressionlevelofＲＲM1mＲNA（P＞0.05）．Conclusion

ExpressionofＲOS1fusiongeneintissuesofnonsmallcelllungcancermaynotrelatetotheEＲ-CC1andＲＲM1expressions．

［Keywords］Carcinoma，non-small-celllung；ＲOS1；Excisionrepaircross-complementationgroup1；Ｒibonu-cleotidereductasesubunitM1

2014年公布的全球癌症统计结果显示肺癌仍

［1］

为发病率和病死率最高的恶性肿瘤，其中非小细

［基金项目］吴阶平医学基金会临床科研专项资助基金项目（320．6750．1360）

［作者单位］100700北京，北京军区总医院病理科（田玉旺）；100071北京，军事医学科学院附属医院病理科（许春伟、张博）；116001辽宁大连，大连大学附属中山医院肿瘤科（高文斌）；261041山东潍坊，潍坊市人民医院病理科（张玉萍）［E-mail：zenwo@qq．com通讯作者］张博，

smallcelllungcancer，NSCLC）约占肺胞肺癌（non-［2-4］

。经经典临床试验IPASS研究癌的80%～85%

NSCLC治疗时代已从传统的化疗进入经基因检后，

［5］

测的分子靶向个体化治疗。目前进行常规的分EML4-ALK和ＲOS1融子靶向检测包括EGFＲ基因、

合基因。目前大型临床研究发现肺癌患者切除修复complementa-交叉互补基因1（excisionrepaircross-tiongroup1，EＲCC1）低表达型对铂类为基础的化疗有效率提高，核苷酸还原酶亚单位M1（ribonucle-

·2·

医药杂志2014年9月第26卷第9期Med＆PharmJChinPLA，Vol．26，No．9，Sep．2014

otidereductasesubunitM1，ＲＲM1）低表达型对他滨

［6-8］

。NSCLC患者目前类为基础的化疗有效率提高

GP（顺常用的化疗方案为NP（顺铂+长春瑞滨），

铂/卡铂+吉西他滨）。本文通过多中心研究回顾分析257例I～IV期NSCLC患者中ＲOS1融合基因与EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA表达情况并对其相互关系进行分析，了解NSCLC患者ＲOS1基因与组织中这两种耐药相关基因表达情况的关系，为进一EML4-ALK融合基因检测阴性步探索EGFＲ野生型、

而ＲOS1融合基因检测阳性患者更有效的个体化治疗方案。11.11.1.1

材料与方法材料

核酸蛋白质浓度测量仪检测所提取ＲNA的纯度并判断是否符合要求，如符合标准测其浓度；按照肿瘤相关基因表达检测试剂盒（EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA表达检测试剂盒）在ABI7500实时荧光定量PCＲ仪中进行扩增。EＲCC1基因mＲNA相对定量

－3

ＲＲM1基因mＲNA相对定标准均值为4．29×10，

－3

量标准均值为11．37×10。

1.3统计学方法采用SPSS19．0软件进行数据

2

分析，计数资料以率（%）表示，采用χ检验及Fish-

er确切概率法，α=0．05为检验水准。22.1

结果

ＲOS1融合基因及EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA表达与临床特征的关系257例NSCLC组织中

标本：收集2004年11月—2013年11月北

京军区总医院、大连大学附属中山医院、山东省潍坊市人民医院NSCLC蜡块标本257例，肿瘤临床分期

ＲOS1融合基因阳性5例（1．95%）。ＲOS1融合基

因及EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA的表达情况均与患者性别、年龄、是否吸烟、肿瘤大小、淋巴结是否转移及临床分期无关（P＞0.05），见表1。2.2

ＲOS1融合基因与EＲCC1基因mＲNA表达水平的关系5例ＲOS1融合基因阳性的NSCLC中，

依据2009年国际抗癌联盟（UICC）和国际肺癌研究会（IASLC）公布的第7版肺癌国际分期标准及第6版AJCC（AmericanJointCommitteeonCancer）标准。入组条件为：①标本均经石蜡固定，并经病理科诊断确诊为NSCLC组织；②所有标本EGFＲ野生型和EML4-ALK融合基因检测阴性；③取得组织前未经过放、化疗、分子靶向治疗及生物免疫治疗等，蜡块

EＲCC1和ＲＲM1基因标本进行ＲOS1融合基因，mＲNA检测。1.1.2

试剂和仪器：DNA及ＲNA提取试剂盒均购ＲOS1融合基因表达检测试自德国QIAGEN公司，

剂盒及肿瘤相关基因表达量相对定量检测试剂盒

（EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA表达检测试剂盒）均购自福建厦门艾德有限公司，核酸蛋白质浓度测量

500购自上海创萌生物科技有限公司，ABI7500仪B-实时荧光定量PCＲ仪购自美国lifetech公司。1.2方法1.2.1

ＲOS1融合基因检测：用显微镜观察已制成

玻片的石蜡组织，将肿瘤细胞密集区从玻片上刮下，

EＲCC1基因mＲNA高表达3例（60．00%），低表达

2例（40.00%）；252例ＲOS1融合基因阴性的NSCLC中，EＲCC1基因mＲNA高表达119例（47.22%），低表达133例（52.7%）。NSCLC组织中ＲOS1融合基因与EＲCC1基因mＲNA表达水平一致136例（52．92%），不一致121例（47．08%），

2

P=0．909）。两者表达关联不显著（χ=0．013，2.3

ＲOS1融合基因与ＲＲM1基因mＲNA表达水

平间的关系5例ＲOS1融合基因阳性的NSCLC

ＲＲM1基因mＲNA高表达4例（80．00%），中，低表达1例（20.00%）；252例ＲOS1融合基因阴性的NSCLC中，ＲＲM1基因mＲNA高表达155例（61.51%），低表达97例（38.49%）。NSCLC组织中ＲOS1融合基因与ＲＲM1基因mＲNA表达水平一致101例（39．30%），不一致156例（60．70%），两

2

P=0．705）。者表达关联不显著（χ=0．143，

EＲCC1与ＲＲM1基因mＲNA表达水平的关系

122例EＲCC1基因mＲNA高表达的NSCLC中，ＲＲM1基因mＲNA高表达者72例（59．02%），低表达者50例（40.98%）；135例EＲCC1基因mＲNA低ＲＲM1基因mＲNA高表达者87表达的NSCLC中，

例（．44%），低表达者48例（35.56%）。EＲCC1与ＲＲM1基因mＲNA两者表达水平一致者120例（46．69%），不一致者137例（53．31%），两者表达

2

P=0．371）。关联不显著（χ=0．800，2.4

置于1．5ml的EP管中；按照提取基因组ＲNA试剂

盒说明书提供的方法提取组织ＲNA，应用核酸蛋白质浓度测量仪检测所提取ＲNA的纯度并判断是否符合要求，如符合标准测其浓度；按照ＲOS1融合基因表达检测试剂盒说明书提供的方法在ABI7500实时荧光定量PCＲ仪中进行扩增。1.2.2

EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA表达的检测：

用显微镜观察已制成玻片的石蜡组织，将肿瘤细胞密集区从玻片上刮下，置于1．5ml的EP管中，应用

医药杂志2014年9月第26卷第9期Med＆PharmJChinPLA，Vol．26，No．9，Sep．2014

表1临床特征性别男女年龄（岁）＜59≥59吸烟史是否

肿瘤大小（cm）≥5＜5淋巴结转移是否临床分期III+III+IV

2323

103149

0．000

90162

1．000

4082

5283

0514

99153

0．652

122130

0．000

1．000

4775

5877

0．916

0．339

59100

3365

0．419

6062

6372

0．522

0．470

70

3563

0．311

2350

136116

3．360

122130

1．752

0．186

5270

4788

0．162

0．687

7287

5147

1．733

0．067

6062

6768

1．650

0．199

6792

3266

1．110

非小细胞肺癌257例ＲOS1融合基因及EＲCC1和ＲＲM1基因mＲNA表达与临床特征的关系（例）

阳性

ＲOS1融合基因

2

阴性χ

0．028

P0．867

6557

7362

0．005

0．943

8079

4751

2．303

高

EＲCC1基因mＲNA

2

低χ

0．016

P0．8

9267

4652

0．135

高

ＲＲM1基因mＲNA

2

低χ

2．909

·3·

P0．088

0．714

0．129

0．292

0．188

0．577

3讨论

ＲOS1属于II类受体酪氨酸激酶（receptortyro-sinekinase，ＲTK）的胰岛素受体家族。ＲOS1受体酪氨酸激酶参与激活多条下游信号转导通路，包括ＲASMAPK/EＲK、PI3K/AKT/mTOＲ、JAK/STAT3、PLCγ/IP3和SHP2/VAV3。其中ＲASMAPK/EＲK、PI3K/AKT/mTOＲ和JAK/STAT3途径与肿瘤细胞增而PLCγ/IP3和SHP2/VAV3则介导殖与存活有关，

细胞形态转化和参与肿瘤细胞转移和迁移

［9-12］

EＲCC1的高表达率的研究一致。NSCLC中，

［23-24］

。为47．47%（122/257），略高于其他研究

NSCLC组织中ＲＲM1高表达率为61．87%（159/等

［25］

257），且EＲCC1及与其他研究结果基本一致，ＲＲM1表达水平均与患者性别、年龄、吸烟情况、肿

［22］

瘤大小、淋巴结转移情况和病理分期无关。

本研究发现，在NSCLC组织中ＲOS1融合基因与EＲCC1和ＲＲM1表达水平均无关，且在吸烟与不

［13］

吸烟患者未见显著性差异，这与Takeuchi等和Bergethon等［21］结果不一致，分析原因可能为：①本研究样本量偏小，从而导致阳性样本量偏小；②本研究中吸烟患者样本量在总样本量所占比例偏小。本研究结果还显示，在NSCLC组织中EＲCC1与ＲＲM1

［25］表达水平无关，这与Ｒeynolds等研究结果不一致，但目前对于EＲCC1和ＲＲM1表达的关系仍存在争议，需要更多研究进一步证实，且目前很多研究已

。在

NSCLC中目前已发现至少有9种不同的ＲOS1融合

基因，包括最早发现于神经胶质母细胞瘤中的FIG-ＲOS1及CD74-ＲOS1、SLC34A2-ＲOS1、TPM3-ＲOS1、SDC4-ＲOS1、EZＲ-ＲOS1、LＲIG3-ＲOS1、KDELＲ2-ＲOS1ＲOS1和CCDC6-［13-17］

。近年来多项大型临床研究证

实显示，核苷酸切除修复（nucleotideexcisionrepair，NEＲ）是导致肿瘤细胞对铂类耐药的一个重要机制。EＲCC1是NEＲ和链内交联修复这两种DNA修复途径中的关键基因

［18］

证实，根据EＲCC1和ＲＲM1表达水平选择用药存在

［26］

合理性，且可以延伸到NSCLC患者。本研究未发现ＲOS1融合基因阳性的NSCLC中EＲCC1和ＲＲM1表达水平有差异。本研究仅对一线化疗药中的铂类和他滨类药物耐药基因与ＲOS1融合基因进行研究，并未对一线化疗药中的微管类药物耐药基因TUBB3和胸苷酸合成酶耐药基因TYMS基因mＲNA进行研究。因此期待关于ＲOS1融合基因与微管类耐药基因TUBB3和胸苷酸合成酶耐药基因TYMS基因mＲNA研究进一步探索

，其过表达可使停滞在G2或M

［19-20］

。期的损伤DNA迅速修复导致其对铂类耐药

ＲＲM1为DNA合成与修复提供脱氧核糖核酸［21］。克唑替尼为ＲOS1融合基因的选择性抑制剂，

其在NSCLC临床试验中收到了较好的效果，且不良I～IV期反应小，患者耐受性好。本研究结果显示，

NSCLC中ＲOS1融合基因阳性率为1．95%（5/

［13］

257），Bergethon等［21］和Davies与Takeuchi等、

·4·

医药杂志2014年9月第26卷第9期Med＆PharmJChinPLA，Vol．26，No．9，Sep．2014

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06-17）修回时间：2014-

更有效的个体化治疗方案，特别是EGFＲ野生型、

EML4-ALK融合基因检测阴性而ＲOS1融合基因检ＲOS1融合基因选择性抑制剂克唑替尼原发测阳性，

或继发耐药部分患者个体化治疗方案的研究报道。［参考文献］

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