建立洁净度（沉降菌）的检验标准操作规程，为沉降菌检查人员提供正确的标准操
作方法。 2 范围
适用于本公司洁净度（沉降菌）检查的全过程。 3 责任
QA对本规程的有效执行承担监督检查责任，QC对本规程的实施负责。 4 程序
4.1 概述：本标准对尘粒及微生物污染规定需进行环境控制的房间或区域。其建筑结构、
装备及其使用均具有减少对该区域内污染源的介入、产生和滞留的功能。 4.2 测试方法 4.2.1 方法提要：
本标准按国家技术监督局发布的《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》，
采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。 4.2.2 仪器
仪器包括：培养皿、培养基、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器。 4.2.2.1 培养皿
一般采用90mm×15mm规格的培养皿。 4.2.2.2 培养基
大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的
培养基。 4.3 测试前的规则： 4.3.1 测试状态；
4.3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换
气次数、空气流速必须控制在规定值内。洁净室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。
4.3.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。
4.3.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告
中注明测试状态。
4.3.1.4 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为
不大于4h。
4.3.2 测试人员：
4.3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.3.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。 4.3.3 测试时间：
4.3.3.1 对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正
常运行不少于10min后开始。
4.3.3.2 对非单向流，如B级、B级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行
不少于30min后开始。 4.3.4 注意事项：
4.3.4.1 测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 4.3.4.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。 4.3.4.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。
4.3.4.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细
观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。
4.3.4.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 4.3.4.6 对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流方向；对于
非单向流洁净室（区），采样口向上。
4.3.4.7 布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口；采样时，测试人员应站
在采样口的下风侧，并尽量少走动。
4.3.4.8 培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，宜同时进行
对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿（TSA或SDA）一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。
4.4 测试步骤： 4.4.1 采样方法：
4.4.1.1 仪器和用具：培养皿。 4.4.1.2 方法：
a 采样点一般在离地面0.8m高度的水平面上均匀布置。
b 采样点多于5点时，也可以在离地面0.8m～1.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5点。
c 打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 最少采样点数目 面 积 （m2） ＜10 ≥10～＜20 ≥20～＜40 洁 净 度 级 别 A 2～3 4 8 B 2 2 2 B 2 2 2 面 积 （m2） ≥200～＜400 ≥400～＜1000 ≥1000～＜2000 A 80 160 400 洁 净 度 级 别 B 20 40 100 B 6 13 32
≥40～＜100 ≥100～＜200 16 40 4 10 2 3 2000 800 200 63 注：表中的面积，对于单向流洁净室，是指送风口面积。对于非单向流洁净室是指房间的面积。 最少培养皿数 洁净度级别 A B C D 4.4.2 培养：
4.4.2.1 仪器和用具：培养箱、天平（万分之一）、称量纸、锥形瓶（1000ml、150ml）、
量筒（1000ml）、高压蒸汽灭菌锅。
4.4.2.2 培养基：
4.4.2.2.1大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）：
a） 成分：酪蛋白胰酶消化物 15g 大豆粉木瓜蛋白酶消化物 5g 氯
化钠 5g 琼脂 15g 纯化水 1000ml
b） 制法：取上述成分除琼脂，混合，微热溶解，调节pH值使灭菌后为7.3±0.2，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿（90mm）中。加盖后在室温放至凝固。
4.4.2.2.2 沙氏培养基（SDA）：
a）葡萄糖 40g 酪蛋白胰酶消化物、动物组织的胃酶消化物等量混合
10g 琼脂 15g 纯化水 1000ml
b）制法：取上述成分除琼脂，混合，微热溶解，调节pH值使灭菌后为5.6±0.2，加入琼脂，加热溶化后，分装，灭菌，冷却至约60℃，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿（90mm）中。加盖后在室温放至凝固。
4.4.2.3 方法：全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养，采用大豆酪蛋白
琼脂培养基（TSA）配制的培养皿在30～35℃培养箱中培养，时间不少于2天；采用沙氏培养基（SDA）配制的培养皿在20～25℃培养箱中培养，时间不少于5天。每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。
4.4.3 菌落计数：
4.4.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，
有否遗漏。
4.4.3.2 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落
计数。
4.4.4 结果计算：
所需φ90mm培养皿数（沉降0.5h计） 14 2 2 2 4.4.4.1 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。 4.4.4.2 平均菌落数的计算，见式。
M1+M2+…+Mn
平均菌落数M= n
式中 M—平均菌落数；
M1—1号培养皿菌落数； M2—2号培养皿菌落数； Mn—n号培养皿菌落数； n—培养皿总数。 4.4.5 结果评定：
用平均菌落数判断洁净室（区）空气中的微生物。
4.4.5.1 洁净室（区）内的平均菌落数必须低于所选定的评定标准。
4.4.5.2 在静态测试时，若某洁净室（区）内的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则必
须对此区域先进行消毒，然后重新采样两次，测试结果均须合格。
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