维普资讯 http://www.cqvip.com ・ｌＯＯ・ 黑龙江医药科学２００２年８月第２５卷第４期 荧光法检测抗核抗体的实验室应用 李雅江－胡伟新－张吉生。高红。张巍。张德玉 （Ｉ．佳木斯大学临床医学院；２．绥化市药品拴验所） 关键词荧光法；抗核抗体；实验室 中图分类号Ｒ４４６文献标识码Ｂ文章编号ｌ００８－Ｏｌ０４（２００２）０４・０ｌＯ０－０ｌ 抗核抗体是以真核细胞胞核成分为靶抗原的自身抗体的总 脏，用生理盐水冲洗，以除去更多红细胞后，用组织剪或手术刀 称。目前，医院通常以酶联免疫电转移印斑法或用试剂盒检测抗 片切下切面约Ｏ ５ｃｍ 的肝组织一块。③将切下的肝组织切面，在载 核抗体的存在。此法造价较高，不适合在教学中采用。本试验探 玻片上均匀地涂抹成硬币大小的薄膜，薄膜不宜太厚。④晾干，丙 讨了在实验室制备异硫氰酸荧光素标记抗体的过程，利用荧光显 酮固定切片ｌ ｌ５ｍｉｎ后再晾干备用。 微镜，通过标记第二抗体的方法，检测抗核抗体。通过本实验， ２．３间接免疫荧光染色。 更好地促进实验教学的开展． ①取核抗原片置室温，空气干燥２０ｍｍ。②病人血清ｆ即待测 ｌ仪器、试剂和动物 血清）作倍比稀释，从ｌ：ｌ０开始，一股稀释至ｌ：ｌ６Ｏ。③将不同 ＲＦＡ．３型落射荧光显微镜。ＣＪ一８８ｌ磁力搅拌器。ｐＨ ７．４ 稀释病人血清ｌ滴（约Ｏ．０５ｍ１）。分别加于固定的鼠肝印片上，平置 Ｏ ０１ｍｏｌＦＬ磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）。碳酸盐缓冲液（ＣＢ）。异硫氰酸荧 于有盖的湿盒内，置３７￣Ｃ温箱保温３０ｍｉｎ。④以ＰＢＳ冲洗鼠肝片 光素（ＦＩＴＣ），丙酮。昆明种系小鼠（ ８Ｗ龄）。 上未结合的病人血清，分别溶于盛ＰＢＳ的玻璃缸中，振荡浸洗 ２实验部分 ５ｍｉｎ，反复浸洗三次。⑤取出玻片，吹干，加ｌ滴（约Ｏ ０５ｍ１）最适 ２．１ 荧光素标记抗体的制备 工作浓度的ＦＩＴＣ－兔抗人免疫球蛋白。３７￣Ｃ湿盒保温３０ｍｉｎ。⑥取 ①以ｐＨ９、０ Ｏ．０２５ｍｏｌ／Ｌ ＣＢ将抗体溶液的蛋白浓度校正为 出玻片，重复步骤２、３、４，洗去未结合的荧光抗体。⑦玻片吹干， ２０ｍｇ／ｍｌ置一带塞三角烧瓶内。②以ｐＨ９．５ Ｏ、０５ｍｏｌ／Ｌ ＣＢ将ＦＩＴＣ 加ｌ滴缓冲甘油封固剂，覆以盖玻片。镜下观察． 配成浓度为Ｏ、２ｍｇ／ｍｌ，溶液量为抗体溶液量的１／１０。③在电磁搅 ３讨论 拌下，将ＦＩＴＣ缓慢滴入抗体溶液中，勿使产生气泡（搅拌速度要 通过上述实验步骤，在荧光显微镜下，可以看到边缘清晰的 慢）并经常测定ｐＨ，如ｐＨ降低，可用Ｏ．２ｍｏｌ／ＬＮａｚＣＯ３调整ｐＨ至 亮绿色荧光。根据不同病人的血清类型，可得到不同核型的实验 ９．０－－９．５。④荧光素加毕，将反应物移入４。Ｃ，继续缓慢搅拌 ｌ２ｈ。 结果。在实验课上，以往用荧光法检测抗核抗体，由于荧光素具 ⑤将标记溶液在流水中透析５ｍｉｎ后，用大量ｐＨ７．４ Ｏ．０１ｍｏｌＦＬＰＢＳ 有半衰期，成本试剂盒价格昂贵，且荧光标本又不易保存，所以 ４。Ｃ，充分透析，勤换透析液，透析４－－８ｈ。⑥准备Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ一２５（或 课堂上学生只能观看示教，而且结果又模糊不清，而我们自制的 Ｇ一５０）柱（１．２×３０ｃｍ），用ｐＨ７．４ ０．０ｌｍｏｌＦＬ ＰＢＳ液平衡后上样，上 荧光标记抗体和核抗原片，既可使学生掌握了操作的全过程，又 样量≤ｌ５ｍ１．用ＰＢＳ液洗脱，收集第一着色峰（即为荧光抗体）过 看到了清晰的实验结果：既达到了基本技能训练的目的，又节省 柱后，柱用０ ｌｍｏｌＦＬ ＨＣＬ处理Ｏ．５ｈ，再依次用蒸馏水，ＰＢＳ液洗 了大量资金。加深了学生对知识的记忆，较好地开发学生的科学 涤、平街、即可重复使用． 思维能力，提高了实验教学效果。该方法值得在有检验专业的大 ２．２核抗原片的制备 学、中专等院校推广应用． ①取小鼠－－，ｑ（４－ｓｗ龄），脱颈椎处死．②剪开腹腔，取出肝 （２００２－０４—０８收稿） Ｄｉｅｕｌａｆｏｙ病的诊治体会 许长春谷峰 （桦南县人民医院外一科１ ５４４００） 关键词ＤｉｅＵｌａｆｏｙ病；恒经动脉；胃壁楔形切除术 中图分类号Ｒ５７３．２文献标识码Ｂ文章编号１００８—０１０４（２００２）０４．０１００．０ｌ Ｄｉｅｕｌａｆｏｙ病是一种粘膜浅表溃疡下恒经动脉破裂所致 位于胃小弯侧距贲门６ｃｍ以内。本病临床表现主要是无诱 胃肠道出血性疾病．是上消化道出血的罕见原因之一，现 因上消化道大出血，平素身体健康，多无肝硬化及溃疡病 就我院１９９０－－２００１年诊治的８例Ｄｉｅｕｌａｆｏｙ病，报道如下。 史．急诊内镜检查对Ｄｉｅｕｌａｆｏｙ病诊断具有重要的价值，应 ｌ 一般资料 做为首选诊断方法．内镜所见胃粘膜局灶性缺损伴有喷射 本组８例，男６例。女２例。年龄５０－－７２岁，平均６２ 性出血，或胃粘膜浅表溃疡中有血管走行，表面有血凝块 岁。症状：８例均有呕血．黑便６例。８例病人均行胃镜检 附着，偶可见小血管突出正常粘膜表面，且有搏动性出血。 查，其中６例可见溃疡并有喷射状出血。另２例阴性。 胃镜检查疑及本病应避免活检，以避免引起大出血。胃镜 ２方法 漏诊原因多由于病灶较小易被忽视，而活动性出血时，胃 在硬膜外麻醉或全麻下施手术，术中剖开胃壁后仔细 腔内大量积血或血凝块掩盖了病灶，本组２例漏诊病人均 探查，其中６例见浅表溃疡及喷射状出血，另２例胃腔内 多为上述原因。胃肠血管造影对该病的诊断亦具有重要的 血凝块较多，未见活动出血，局部冲洗，凝血块脱落后见 价值，但必须是在活动性出血时作该项检查，且出血速度 喷射状出血．８例病人均行包括病灶的胃壁楔形切除术。 大于Ｏ．５ｍｌ／ｍｉｎＩ １。Ｄｉｅｕｌａｆｏｙ病的治疗首选手术治疗。术中 ３结果 仔细探查，必须切开胃腔判明出血部位，常可见到ｌｍｍ左 ８例病人均痊愈出院．术后病理证实：均为胃粘膜下 右的出血点及以此为中心的浅表溃疡或粘膜缺失。手术方 血管恒经伴出血． 式宜选择包括病灶的胃壁楔形切除术．近年来亦有报道行 ４讨论 胃镜下注射硬化剂，双极电凝，激光或微波凝固等方法治 Ｄｉｅｕｌａｆｏｙ病是上消化道出血的罕见原因之一．占上消 疗Ｄｕｅｙｋａｆｏｙ病． 化道出血病因的６％以下１ Ｉ．此病由Ｄｉｅｕｌａｆｏｙ于ｌ８９８年首 参考文献 次报道，故得此病名．本病病理特征是胃粘膜局限性缺损 Ｉ Ｐｏｉｎｔｅｒ Ｒ．ｓｃｈｗａｂ Ｇ，ｋｏｎｉｇｓｍｉｎｅｒ Ａ，ｅｔ ａｌ Ｅｎｄｏｓｃｏｐｉｃ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ 和粘膜下恒经动脉出血，而粘膜下恒经动脉无血管炎，粥 样硬化或血管瘤形成。常因饮酒、食物摩擦等因素致胃粘 Ｐｉ肖元初＿ｅｕ 何祖平Ｄｉｄｉｓｅａｅｓｅ［ ｌａＪｆ］Ｇａｏｙ氏病［ｓｔｒｏ ｅＪｎｔ】ｌ腹部外科，ｅｒｌｏｇｙ．１９８．８：１９９９；９４ ５１６３－５６２：２５７～２５８６ …． 膜损伤或浅表糜烂，致粘膜下恒经动脉破裂出血。病变多 【 －ｕ４．１２仪确） 作者简介：许长春（１９６８～）男，黑龙江桦南人，医师．
