Sac I
G A G C T C C T C G A G
运输温度：-20℃ Takara Code：D1078A 保存温度：-20℃ 包 装 量：500 Units
附带试剂： 10×L Buffer 500 μl 10×Loading Buffer 500 μl
纯 度：
1） Overdigestion Test：≥15 Units 2） Ligation-Recutting Test： Ligation Effi.：＞99%,Recutting Effi.：100% 3） pKF3 Cloning Test：＜2%
●酶贮存液： 10 mM Tris-HCl, pH7.5 100 mM KCl 0.1 mM EDTA 1 mM DTT 0.01 % BSA 0.15 % TritonX-100 50 % Glycerol
●起 源：Streptomyces achromogenes
●一般反应体系：Sac I 1 μl 10×L Buffer 2 μl DNA ≤1 μg 灭菌水 up to 20 μl
●反应温度：37℃
●反应时间：
在上述20 μl的反应体系中，37℃反应5分钟可以完全切断λDNA，满足各种实验需求。针对特殊酶切底物DNA，如果得不到良好的酶切效果时，可以将反应时间延长至1小时。
●活性确认：
在50 μl反应液中，37℃温度下反应1小时，将1 μg的λDNA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。
●纯度检测：
1） Overdigestion Test：在1 μg DNA中加入过量的该限制酶，
进行长时间（24小时）酶切反应，然后进行琼脂糖电泳，确认切出的DNA片段的电泳谱带不发生变化。
2） Ligation-Recutting Test：在经过10倍量该酶切出的DNA片
段中，加入 T4 DNA Ligase，使其连接，然后再使用该酶进行切断反应，判断Ligation-Recutting效率。
3） pKF3 Enforcement Cloning Test：使用10倍量的该酶，将
Enforcement Cloning Vector pKF3 DNA切开，然后再进行连接后，转化至TH2感受态细胞中，判断该酶切位点受到影响的重组体所占的比率。
●在各种 Universal Buffer中的相对活性：
L M H K T（+BSA）
相对活性(%)
100
60
＜20
＜20
80
●各种
DNA的切断数： λ Ad2 SV φX pBR pUC pUC M13 Col 40 174 322 19 119 mp18 E1 2
16
0
0
0
1
1
1
0
●甲基化的影响：
不受CG methylase的影响。
●Star活性：
高甘油浓度条件下，识别序列会发生变化。
●Basal Buffer组成： 10 mM Tris-HCl, pH8.0 7 mM MgCl2 7 mM 2-Mercaptoethanol 0.01 % BSA
●Universal Buffer组成（-20℃保存）：
1.10 × L 100 mM Tris-HCl,pH7.5 4.10 × K 200 mM Tris-HCl,pH8.5 100 mM MgCl2 100 mM MgCl2 10 mM Dithiothreitol 10 mM Dithiothreitol 2.10 × M 100 mM Tris-HCl,pH7.5 1,000 mM KCl 100 mM MgCl2 5.10 × T 330 mM Tris-Ac,pH7.9 10 mM Dithiothreitol (BSA 100 mM Mg-Ac 500 mM NaCl －Free) 5 mM Dithiothreitol 3.10 × H 500 mM Tris-HCl,pH7.5 660 mM K-Ac 100 mM MgCl2 6. 0.1% BSA 10 mM Dithiothreitol 7. 0.1% Triton X-100 1,000 mM NaCl ●10×Loading Buffer组成 （开封后室温保存） 0.9% SDS 50% Glycerol 0.05% Bromophenol Blue
使用时添加反应液量的1/10，即可停止反应，进行电泳。-20℃保存时，会出现SDS沉淀，请于温水浴中溶解后使用。在室温下保存时，SDS有时也会出现沉淀，此时同样请在温水浴中溶解后使用。
V2011.12
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