QuEChERS前处理液相串联质谱检测葡萄中35种农药残留

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第47卷，第3期2021年6月安徽化工ANHUICHEMICALINDUSTRYVol.47，No.3Jun.2021125QuEChERS前处理液相串联质谱检测葡萄中35种农药残留张忆萍，贾晓菲，黎小鹏，林庆昶，温馨，谭淑铧（中山市农产品质量安全检验所，广东中山528437）

摘要：运用简便高效的QuEChERS前处理方法，液相-质谱联用测定葡萄中35种农药残留。结果：35种农药方法检出限为0.01～4.23ng/g，加标回收率62.37%～118.56%，相对标准偏差1.01%～9.21%。标准曲线线性良好，相关系数0.9951～0.9999。此方法操作简便，试剂用量少，灵敏度和精密度高，适合用于葡萄中多种农药残留的高效率检测。关键词：农药残留检测；QuEChERS；液相串联质谱；葡萄doi：10.3969/j.issn.1008-553X.2021.03.038中图分类号：O657.63；TS255.7

文献标识码：A

文章编号：1008-553X（2021）03-0125-05

近几年，迅猛发展的广东葡萄产业暴露出不少问题。当地高温多湿易造成葡萄病害、枝蔓徒长、产量和品质下降等。部分果园采用“超密植”和“超负荷”的种植模式，导致果实成熟迟，不均匀，品质低，果实营养不足，抗病力下降，生理和病理病害严重等[1]。为了应对此类问题，部分果园过度使用农药，对环境以及消费者的健康造成影响。本实验将针对葡萄进行35种农药残留的高效检测。

QuEChERS前处理方法是2003年由美国农业部

号5982-5056），内含150mgPSA、900mg硫酸镁，安捷司；35种农药标准品：灭蝇胺，霜霉威，涕灭威亚砜，多菌灵，涕灭威砜，灭多威，噻虫嗪，3-羟基克百威，吡虫啉，啶虫脒，涕灭威，克百威，氯吡脲，甲拌磷亚砜，甲萘威，嘧霉胺，甲霜灵，氯虫苯甲酰胺，烯酰吗啉，甲拌磷砜，多效唑，嘧菌酯，咪鲜胺，酮，除虫脲，灭幼脲，甲维盐；虫酰肼；吡唑醚菌酯，二嗪磷，辛硫磷，甲拌磷，氟啶脲，哒螨灵，阿维菌素，农业部环境质量监督检验测试中心；21个葡萄抽检样品，中山市各镇区葡萄种植基地。

Anastassiaeds.M等[2]提出的一种非常简易便捷的方法，被广泛应用于农药多残留分析。该方法采用乙腈提取，硫酸镁和氯化钠盐析，无水硫酸镁与PSA分散固相萃取净化，可以大大缩减前处理时间，适用于质谱仪多农药残留的检测。使用配有AgilentZORBAXSB-C18色谱柱的Agilent1200Infinity高效液相色谱系统进行分离，使用配有安捷伦电喷雾离子源（ESI）的Agilent10液质联用系统，采用动态多反应离子监测模式（Dynam⁃icMRM）结合低量基质进样，进一步减少了基质干扰，提高了定性定量准确度，有效地提高检测灵敏度，对35种农药残留的检测达到了高效率低消耗的效果。

[3]

2实验方法

2.1样品处理

2.1.1样品的制备

抽取不少于1000g的新鲜葡萄，去柄充分混匀放

入食物料理机中粉碎匀浆，分装保存制成待测样，于-18℃冰箱中保存，备用。2.1.2样品的提取和净化

准确称取10.00g样品于50mL塑料离心管中，加

乙腈10.0mL、氯化钠约5g和陶瓷均质子，振荡混合20min，4000r/min离心5min。取约5mL上清液于15mL分散固相萃取农残净化管中，涡旋混合1min，4000r/测[4]。

1仪器与材料

VORTEX2旋涡振荡器；ThermoST40高速离心机；Agi⁃lent1200-10高效液相串联质谱。

乙腈，LCMS级色谱纯，色谱科公司；甲酸，优级纯，

HZTA500电子天平；IKAKS-501振荡器；KAmin离心5min，取上清液100μL加入900μL水混匀待2.2仪器条件液相部分：色谱柱为安捷司ZORBAXSB-C18，

默克公司；实验用水，屈臣氏蒸馏水；氯化钠，分析纯，广州化学试剂厂；15mL分散固相萃取农残净化管（部件

2.1mm×150mm，3.5μm；柱温40℃；进样体积50μL；流速0.400mL/min；流动相A相为0.1%（V/V）甲酸水，B

收稿日期：2021-02-25

作者简介：张忆萍（1993-），女，毕业于广东药科大学，助理工程师，从事农残检测工作，907588762@qq.com；通讯联系人：贾晓菲，女，工程师，从事农产品质量安全检测工作，45086358@qq.com。

相为乙腈，梯度洗脱程序：洗脱程序：0～1.5min，10%B；1.5～3.0min，10%～50%B；3.0～6.0min，50%～60%B；6.0～8.5min，60%～100%B；8.5～11.5min，100%

表1

名称灭蝇胺霜霉威涕灭威亚砜多菌灵涕灭威砜灭多威噻虫嗪3-羟基克百威

吡虫啉啶虫脒涕灭威克百威氯吡脲甲拌磷亚砜甲萘威嘧霉胺甲霜灵氯虫苯甲酰胺

保留时间（min）

1.1382.0132.4482.7943.7124.5595.7916.1596.2356.3986.7797.2907.4007.4517.4627.5567.6628.130

定量离子167.0>125.01.2>102.1207.3>132.0192.2>160.0223.1>86.1163.2>88.1292.1>211.2238.3>163.0256.1>175.1223.2>126.0213.2>.1222.3>165.1248.1>129.0277.1>143.0202.2>145.1200.2>107.0280.1>220.2484.0>452.9

后运行3min。

8.5L/min；雾化器压力38psi；正模式，扫描类型Dynam⁃icMRM。

质谱部分：ESI源；干燥气温度250℃；干燥气流速

B；11.5～12.3min，100%～10%B；12.3～13.5min，10%B；

35种农药的色谱质谱参数

名称烯酰吗啉甲拌磷砜多效唑嘧菌酯咪鲜胺酮除虫脲灭幼脲甲维盐虫酰肼吡唑醚菌酯二嗪磷辛硫磷甲拌磷氟啶脲哒螨灵阿维菌素

保留时间（min）

8.3078.3108.3188.8879.0819.0779.2979.5949.8359.84610.32910.35810.47810.50411.19211.69611.744

定量离子388.1>301.1293.4>171.0294.2>70.0404.1>372.0376.1>307.9294.0>69.1311.0>158.0309.0>156.0886.6>158.2353.3>133.13.1>105.1305.1>169.1299.0>129.0261.4>75.10.0>383.0365.1>147.10.5>305.2

定性离子388.1>165.1293.4>115.0294.2>125.0404.1>344.0376.1>265.9294.0>197.0311.0>141.0309.0>139.0886.6>82.3353.3>297.23.1>149.1305.1>153.1299.0>97.0261.4>47.10.0>158.2365.1>308.90.5>113.1

定性离子167.0>108.01.2>144.1207.3>.1192.2>132.1223.1>148.0163.2>106.1292.1>181.1238.3>220.1256.1>209.0223.2>90.0213.2>116.1222.3>123.0248.1>155.0277.1>199.0202.2>127.1200.2>168.1280.1>192.2484.0>285.9

3结果与讨论

3.1标准曲线配置与基质效应、回归方程、相关系数

35种标准品用甲醇配成质量浓度为10mg/L的混合标准贮备液，贮存于-16℃冰箱中，有效期6个月；标准曲线用空白葡萄基质配成0.01mg/L、0.02mg/L、0.04用，使用液质联用仪按2.2所述仪器条件进行测定，以mg/L、0.08mg/L、0.10mg/L混合标准工作溶液，现配现各定量离子色谱峰面积为纵坐标，样品浓度为横坐标

分别进行线性回归处理，结果显示，35种农药中除虫脲等24种农药在0.08mg/L、0.10mg/L浓度点偏离度较大，标准曲线相关系数达不到要求。在增加浓度等级，并缩小标准曲线最高浓度至0.02mg/L后，线性基本符合要求。

考虑到LC-MSQQQ普遍存在基质效应，基质常对分析有显著干扰，并影响分析结果的准确性，尽可能减少最终提取液中的基质成分是有效清除基质效应的方

法[5]。为得到准确结论，对标准曲线配制采用两组对照进行，A组用空白葡萄基质各配成0.001mg/L、0.002mg/L、0.004mg/L、0.008mg/L、0.012mg/L、0.016mg/L、0.020mg/L混合标准工作溶液，现配现用；B组采用空白0.02mg/kg、0.04mg/kg、0.08mg/kg、0.12mg/kg、0.16mg/葡萄样品，按2.1.1制备，按2.1.2称取7个平行样品后分别添加混合标准物使其标准品含量达到0.01mg/kg、kg、0.20mg/kg，提取净化，得到0.001mg/L、0.002mg/L、0.004mg/L、0.008mg/L、0.012mg/L、0.016mg/L、0.020mg/L的基质-溶剂混合标准溶液。A组混合标准工作溶

应越小，比值越小则基质效应越大[3]。本次实验中，基质效应≈A组标准曲线斜率k1/B组标准曲线斜率k2，对比发现，基质效应最明显的分析物为甲拌磷砜、多效

127唑、甲拌磷、氟啶脲和阿维菌素，其k1/k2值均小于0.1，基质抑制效应强烈。以0.020mg/L为例，A组甲拌磷砜为2195。

为保证低浓度样品分析结果的准确性，以及尽量降低基质干扰，最终确定B组方案配置标准曲线。35种农药在0.001～0.020mg/L范围内呈良好的线性关系，相关系数0.9951～0.9999。以3倍基线噪声所对应的标准品浓度（ng/mL）为仪器的检出限，最低方法检出限为0.01ng/g，低于国家标准的限量值要求[6]，各项实验数据见表2、表3。

响应值仅为2456，甲拌磷响应值为628，氟啶脲响应值

液及B组提取净化后样品按2.2所述仪器条件进行测定，以各色谱峰面积为纵坐标，样品浓度为横坐标分别进行线性回归处理。按基质效应=基质匹配标准曲线斜率/纯溶剂标准曲线斜率，斜率比越接近1，则基质效

表2

名称灭蝇胺霜霉威涕灭威亚砜多菌灵涕灭威砜灭多威噻虫嗪3-羟基克百威

吡虫啉啶虫脒涕灭威克百威

k1/k21.1411753.8674440.6172070.6019920.4002320.6819580.282220.1539340.4713380.6101140.2490950.310057

35种农药基质效应比较名称

k1/k20.7244090.4129870.1001860.4714370.67550.2800130.4630860.0173180.0773110.790.7850.371669

名称除虫脲灭幼脲甲维盐虫酰肼吡唑醚菌酯二嗪磷辛硫磷甲拌磷氟啶脲哒螨灵阿维菌素

k1/k20.3860290.2165250.1617720.4508750.717250.3115630.2195560.0060430.0267990.3599990.053191

氯吡脲甲拌磷亚砜甲萘威嘧霉胺甲霜灵氯虫苯甲酰胺烯酰吗啉甲拌磷砜多效唑嘧菌酯咪鲜胺酮

3.2

回收率和方法精密度

本实验采用在空白样品（经检测不含目标化合物）

0.01mg/kg和0.02mg/kg的2个水平浓度（简称1组、2

组），每个浓度检测6次，结果见表3。2个添加浓度水平下35种农药的回收率在62.37％～118.56%之间，相对标准偏差1.01％～9.21%。

中加标的方法进行回收率和方法精密度测试。取12个空白样品进行加标，分别添加混合标准物使样品含量为

安徽化工

葡萄糖中35种农药残留的回归方程、相关系数、方法检出限、回收率及相对标准偏差

加标回收率（%）RSD（%）名称回归方程

y=780.131076x+1800.051073相关系数

R20.99760.99980.99900.99980.99780.99990.990.99960.99900.99940.99740.99990.99990.99970.99940.99970.99990.99940.99870.99510.99980.99970.99930.99940.99910.99960.99850.99860.99800.99930.99880.99870.99690.99960.9952方法检出限（ng/g）

0.110.070.050.090.180.100.310.040.100.160.200.010.030.030.070.030.020.070.050.290.061.480.350.070.070.060.050.040.100.010.031.040.140.0.230.01(mg/kg)0.02(mg/kg)0.01(mg/kg)0.02(mg/kg)62.3787.21.88118.29100.96118.5687.3375.7392.6399.9695.72110.3783.2585.9881.5776.98104.3878.8486.0086.8088.5197.70.5285.9888.57104.7982.1069.7688.3790.7791.92.7991.7778.24

.32103.59110.3587.5187.5777.2575.76

5.441.081.491.015.681.611.421.936.092.449.015.425.932.163.213.252.702.2.039.212.723.042.921.275.903.005.951.353.071.2.234.813.601.791.961.691.683.121.617.933.132.853.714.492.115.011.942.161.102.741.851.442.001.595.223.991.501.582.861.412.612.513.611.351.782.212.511.261.624.02灭蝇胺霜霉威涕灭威亚砜多菌灵涕灭威砜灭多威噻虫嗪3-羟基克百威

吡虫啉啶虫脒涕灭威克百威氯吡脲甲拌磷亚砜甲萘威嘧霉胺甲霜灵氯虫苯甲酰胺烯酰吗啉甲拌磷砜多效唑嘧菌酯咪鲜胺酮除虫脲灭幼脲甲维盐虫酰肼吡唑醚菌酯二嗪磷辛硫磷甲拌磷氟啶脲哒螨灵阿维菌素

y=98717.2573x-2101.250714y=13745.601281x-1843.679531y=10812.471248x-1070.945656y=29750.3519x+45.9656y=80424.218653x+77.904770y=35962.667750x+3503.276865y=20090.7410x-3567.371814y=2031.234963x+3268.870346y=5865.715588x+2942.755136y=7653.081192x+1099.241345y=2772.721381x-852.012680

y=6130.515836x-1442.196171

y=10372.444183x+156.495621

117.59116.25110.98.9193.87111.8484.7881.0173.1577.6282.7796.8071.7182.3799.0994.8596.6277.0290.7984.2591.98117.8075.4669.8295.9885.2985.79

y=1284.9703x-228.705369

y=48885.870082x-15579.324233y=62269.6531x-15239.766719y=276.856816x-107.218532y=173568.3818x-27372.588096y=82698.319109x-18506.948130y=60983.723057x-21568.798781y=44522.003414x-13147.997026y=18765.4839x+1449.863909y=13035.212193x+566.450635y=6626.201413x-356.823261y=6513.342322x-7.8884

104.30

y=98047.635700x-28513.721626y=260909.086084x+7912.559750y=550580.357739x-167771.7283y=13377.509460x-858.2132y=4401.180132x-35.065903y=3610.176863x+20.190374

y=210451.2314x+20175.5662y=2719.7730x+321.9328y=35.276616x+2812.6096

3.3结果与讨论

本次实验前处理较为简单，主要难点在于去除共提取基质干扰物对定量准确度、灵敏度及仪器污染的影响[7]。在使用分散固相萃取农残净化管进行前处理提取的基础上，进一步稀释上机提取液以减少最终进入仪器的基质含量，并将制备标准曲线的过程与前处理结合，更大程度上减少干扰和缩小误差，提高方法准确性。对于多农残检测时回收偏低的灭蝇胺，此方法亦保证了较为稳定的回收率，且基本不低于60%。

用此法检测21个葡萄样品，共检出14项农残，其中8

表4

名称霜霉威嘧菌酯苯醚甲环唑吡唑醚菌酯烯酰吗啉氯虫苯甲酰胺噻虫嗪

检出率（%）MRL（mg/kg）2957296229192425251—

129项为杀菌剂，4项为杀虫剂，2项为植物生长调节剂，结果见表4。根据GB2763-2019中规定农药最大残留限量

[6]

（MRL）对检测结果进行判定，未有MRL规定的2个农药

品种不作判定。其中7号样品的氯吡脲和8号、9号样品的霜霉威测定值接近MRL；13号样品氯吡脲测定值为0.05mg/kg，等于最大残留限量值，存在超标风险；7号、8号、9号、12号、14号5个样品单个最高检出项目大于等于行为，同类型农药残留较多，对这部分种植户加大监管力度及科普宣传，将有利于提高食品质量，保障食品安全。

6项。检测结果表明，个别葡萄种植户存在过度依赖农药

21个葡萄样品35种农药残留检测结果超标样品数

000000—

名称氯吡脲吡虫啉啶虫脒嘧霉胺多效唑多菌灵甲霜灵

检出率（%）

10191919101010MRL（mg/kg）0.05124—31超标样品数

0000—000.5

综上所述，本文建立了使用QuEChERS前处理结合液质联用仪同时快速检测葡萄中35种农药残留的方法，该方法可同时检测多种农药；使用QuEChERS前处理，具有处理快速，提取效率高，有机溶剂用量少，对环境友好，灵敏度高，准确性高，重复性好等特点；使用Agilent1200Infinity高效液相-质谱联用系统，采用动态多反应离子监测模式，进一步减少基质干扰，有效提多种农残的最终目的。

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Multi-ResiduesAnalysisofAgriculturalPesticidesinGrapeUsingthe“QuEChERS”Method&

LC-MSQQQ

ZHANGYi-ping,JIAXiao-fei,LIXiao-peng,LINQing-chang,WENXin,TANShu-hua

（ZhongshanAgriculturalProductsQualityandSafetyInspectionInstitute,Zhongshan528437，China）

Abstract:AsimpleandefficientQuEChERSpretreatmentmethodwasusedtodetermine35kindsofthepesticideresiduesingrapebyLC-MSQQQ.Conclusionsofdetectingmethods:Thedetectionlimitofthemethodfor35kindsofpesticideswereintherangeof0.01~4.23ng/g.Therecoveryratesofstandardadditionrangedfrom62.37%to118.56%andRSDrangedfrom1.01%to9.21%.Thecalibrationcurvesfor35pesticidesallhadgoodlinearrelationshipswithcorrelationcoef⁃ficients0.9951~0.9999.Thismethodwaseasytooperatewithlessorganicsolventconsumption,havingbetterprecisionandsensitivity,suitableforefficientdetectionofpesticideresiduesingrape.Keywords:pesticidesmulti-residue;QuEChERS;LC-MSQQQ;grape

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