2016年11月 第37卷第22期 DOI:10.3969 ̄.issn.1005—6521.2016.22.002 Food Research And Development 食品研究与并发 基础研究 赤苍藤和密蒙花多糖的含量测定及抗氧化研究 潘乔丹・,黄元河--,唐海燕 ,农静羽 ,韦贤 ,陆海峰 ,黄锁义 (1.右江民族医学院,广西百色533000;2.梧州职业学院,广西梧州543000) 摘要:采用苯酚一硫酸比色法测定两种药食同源植物赤苍藤和密蒙花多糖的含量,并采用DPPH法、水杨酸法、ABTS 法以及FRAP法测定其粗多糖的抗氧化性能。结果表明,赤苍藤和密蒙花的多糖含量分别为30.78、190.89mg/g;赤苍藤 多糖和密蒙花多糖清除・OH和ABTS+-的能力均强于V ,其Fen还原/抗氧化能力均强于V ,且赤苍藤多糖的清除 DPPH・能力和Fe 还原/抗氧化能力均强于V ,密蒙花多糖清除・OH能力强于Vc。 关键词:赤苍藤;密蒙花;多糖含量;抗氧化 Content Determination and Antioxidant Activity of Polysaccharides of Erythropalum scandens Bi.and Buddleja oficifnalis Maxim PAN Qiao—dan HUANG Yuan-he ’,TANG Hai—yan2,NONG Jing-yu , WEI Xian ,LU Hai—feng ,HUANG Suo—yi (1.Youiiang Medical University for Nationalities,Baise 533000,Guangxi,China;2.Wuzhou VocationaI College,Wuzhou 543000,Guangxi,China) Abstract: nle contents of polysaccharides of Erythropa!um scandens B1.and Buddleja oficifnalis Maxim were 基金项目:中医药公共卫生专项“国家基本药物所需中药原料资源调查和监测项目”(财社[2011176号);中医药行业科研专项“我MR,表性 区域特色中药资源保护利用”(201207002);广西高校中青年教师基础能力提升项目(KY2016YB350) 作者简介:潘乔丹(198O一),女(汉),副教授,硕士,主要从事天然产物化学研究。 通信作者:黄元河(】979一),硕士,主要从事中药资源研究。 I◆一I'O-◆iiI◆Il◆●◆li◆I◆lIl,◆◆◆Il●I●II●t l●◆I◆●◆◆lIl●●I●I◆● 术『J1.中国水产,2006(1 1):4_4—45 [6]黄世英,郭文韬,杨志伟,等.人工养殖大鲵肉营养成分分析【JJ_时 珍国医国药,2009,2O(5):1-2 究 食品工业科技,2007,13(2):78—85 [16】冯锦聪,李诚,姚尧,等.谷氨酰胺转氨酶对鹅肉肉糜凝胶特性的 影响[J].食品工业,2013,34(1 1):66-70 [17]耿敬章,李新生,党娅.中国大鲵营养成分和功能因子研究进展 [7]李媛,姚俊杰.大鲵资源的保护【J].科技咨询导报,2007(30):110 [8】张宝奎,王秀珍,任洪忱,等.肉糜产业的国内现状与发展趋势【JJ. 肉类工业201 1(2):5—6 [J1.氨基酸和生物资源,2013,35(2):9—12 [18]程珍珠,赵伟,杨瑞金.膳食纤维对鱼糜凝胶丁艺特性的影nlal[J1. 食品与机械,201 l,27(6):75—79 『91段传胜,单杨.淡水鱼鱼糜加lT的研究进展与关键性技术探讨【J】_ 农产品加工(学刊),2007(7):52—58 [1O1黄国宏,沈要林.鱼糜加工过程中凝胶性能的影响因素研究进展 IJ1.现代食品科技,2007,23(1):107—1 10 【1 1]Hennansson A M.Gel Characteristics—Structure as Related to Tex— ture and Waterbinding of Blood Plasma Gels[J].Journal of Food Sci— ence,1982,47(6):1965—1972 I】9】罗永康,张爱荣.糖基化反应改善蛋白质功能特性的研究进展…. 食品科技,2004,2(7):4—10 [20]张茜,夏文水.壳聚糖对鲢鱼糜凝胶特性的影响[J』.水产学报, 2003(3):342—348 [21]周锦晶,吴红,徐欢,等.糖基化反应对提高鱼糜蛋白质凝胶性的 影响[JJ_浙江科技学院学报,2012,24(1):48-53 【221 Ramirez J A,Barrera M,Morales O G.Effect of xanthan and locust bean gums on the gelling properties of myofibrillar protein[J].Food Hydrocolloids,2002,l6(1):l 1-16 【l2】刘淑华,陈兴才门金秋膘洗和擂溃工艺对鳊鱼鱼糜凝胶强度的 影响【Jl_福建农林大学学报,2007,36(2):176—179 『l31朱玉安,刘友明,张秋亮,等.加热方式对鱼糜凝胶特性的影响[J1 .食品科学,201 1,32(23):107—110 【23】刘卫民.浅谈肉糜的持水机理fJ】_扬州大学烹饪学报,2005,22(3): 50-53 l l4】陈海华,薛长湖.不同添加物对鲤鱼鱼糜蛋白凝胶品质改良的研 究 食品与发酵工业,2008,34(10):79—84 I151刘茹,熊善柏,赵思明,等.鱼糜冻藏过程中的品质变化动力学研 收稿日期:2016一Ol一04 基础研究 潘乔丹,等:赤苍藤和密蒙花多糖的含量测定及抗氧化研究 7 determined by phenol—sulfuric acid colorimetry method,and their antioxidant activity was estimated by DPPH, salicylic acid,ABTS and FRAP method.The results showed that the content of polysaccharides of E.scandens and B.Maxim were 30.78 m g and 190.89 mg/g respectively.The polysaccharides of E scandens and B.Maxim scavenging‘OH and ABTS activity were higher than VE.reducing Fe。 antioxidant activity were higher than Vc.The polysaccharides of E sc觎如瑚scavenging DPPH‘activity and reducing Fe antioxidant activity were higher than VE,and the polysaccharides of B.Maxim scavenging OH activity was higher than Vc. Key words:Erythropalum scandens B1.;Buddleja oficifnalis Maxim;the content of polysaccharides; antioxidant activity 药食同源植物赤苍藤(Erythropalum¥cartdens B1.) 为铁青树科植物,别名为蚂蟥藤、十丈藤、龙须藤等。 其性平,微苦,具清热利湿、祛风活血的功效,主治水 肿、/J顺不利、黄疸、半身不遂、风湿骨痛和跌打损伤等【11, 在民间用于清热利湿、去黄疸,其嫩叶、茎可食用。药 食同源植物密蒙花(Buddleja ofifeinalis Maxim)为马钱 科植物,又名小锦花、蒙花、黄饭花等。其味甘,性微寒,有 清热养肝、明目退翳之功,具有治疗眼部疾病、抗炎、降 糖等生物涪I生[21,“三月三”节日期间,广西壮族^民喜用 其煮水,作为黄色染料,浸泡糯米染色,制作五色糯米 饭。至今为止有关赤苍藤和密蒙花的多糖含量及其抗 氧化性能方面的研究鲜见报道。因此本研究测定赤苍 藤和密蒙花多糖的含量,并对其抗氧化性能进行考察, 为赤苍藤和密蒙花的进一步开发利用提供理论参考。 1材料与方法 1.1仪器 DHG一9070A型电热恒温鼓风干燥箱、HHS一21—4 电热式恒温水浴锅:江苏金坛宏凯仪器厂;FA1004型电 子天平:上海舜宇匣平科学仪器有限公司;KQ5200DB型 数控超声波清洗器:昆山市超声仪器有限公司;RE一 52AA型旋转蒸发仪:上海亚荣仪器厂;Tu一1800紫外 可见分光光度计:北京普析通用仪器有限责任公司。 1.2药材 赤苍藤(Erythropalum scandens B1.)的茎和密蒙花 (Buddleja ofifcinalis Maxim)的花:均采自广西百色,干 燥粉碎后备用。 1-3试剂 葡萄糖标准品:J&K CHEMICAL LTD;1,1一二苯 基一2一苦基肼自由基(DPPH):上海楷洋生物技术有限 公司;2,2 一连氨一(3一乙基苯并噻唑林一6一磺酸)二氨 盐(ABTS):生工生物公司;三吡啶三吖嗪(tripyridyl— triazine,TPTZ):Aladdin;Vc:天津博迪化工股份有限公 司;V :上海楷洋生物技术有限公司;其他试剂均为分 析纯。 1.4方法 1.4。1多糖的提取 称取赤苍藤和密蒙花的干燥粉末各50.0 g,分别 先用石油醚回流脱脂两次(1 h/次),再用95%乙醇回 流提取两次(2 h/次),以除去单糖和低聚糖,将药渣烘 干备用。将已处理好的药渣加入蒸馏水后用超声波提 取两次,合并提取液浓缩至一定量后加4倍量的95% 乙醇,置低温(4 oC)静置过夜后,在3 000 dmin下离心 20 arin,收集沉淀,沉淀物经醇沉后真空干燥至恒重, 再加适量蒸馏水重新溶解,再用Sevage法重复多次脱 蛋白(直至260 Bin和280 nm处紫外扫描无吸收为 止),过滤,浓缩干燥后得赤苍藤和密蒙花粗多糖分别 为1.454 1、2.85 3 g。分别称取赤苍藤和密蒙花多糖各 0.05 g,用蒸馏水稀释至0.50 mg/mL的溶液备用。 1.4.2葡萄糖标准曲线的绘制 配置标准葡萄糖浓度为1.0 mg/mL,稀释成不同浓 度,采用苯酚一硫酸法测定网,在最大吸收波长490 nm 处测定吸光度。以吸光度A与浓度c进行直线回归, 得回归方程。将供试溶液稀释成0.005 mg/mL,并吸取 2.0 mL进行多糖含量的测定,通过葡萄糖回归方程计 算赤苍藤和密蒙花中多糖的含量,其计算公式为: 多糖含量(mg/g)=多糖质量(mg)/原料质量(g) 1.4.3抗氧化性能考察 1.4_3.1 DPPH法 参照Kim和杨强等『4_5j的方法,取2.0 mL样品溶 液,加入0.4 mmol/L DPPH溶液2.0 mL,避光30 min后 于515 nm处测吸光度。计算对DPPH・的清除率: 清除率/%:垒 二 ×100 A 0 式中: 。为溶剂代替样品的吸光度;A 为样品的 吸光度;A 为无水乙醇代替DPPH的空白对照组。 1.4.3.2水杨酸法 利用WeiZheng反应法嘲。取2.0mL样品溶液,加 潘乔丹,等:赤苍藤和密蒙花多糖的含量测定及抗氧化研究 基础研究 入1.0xl0 mol/L FeSO4 1.0 mL,1.OxlO mol/L水杨酸一 乙醇溶液2.0 mL,最后加入30%H O2 2.0 mL启动反 应1 h后于510 nm处测吸光度。平行操作3次,取均 值,计算对・OH的清除率: 清除率/%: [ ×100 A 0 式中: 。为以溶剂代替样品液的吸光度;A 为样 品组的吸光度;4。 为蒸馏水代替H:O 的空白对照组 吸光度。 1.4.3.3 ABTS法 参考RetTl等的方法,取2.0 mL样品溶液,加人 4.0 mLABTS+ ̄,O定液,振荡30 S,测定在734 nm波长处 的吸光度,平行操作3次,取均值,计算对ABTS ・的清 除率: 清除率/%: 拉二 盥xlO0 A测定液 1.4-3.4 FRAP法 参照Orhant81的方法,取2.0mL样品溶液,加入 2.0 mLFRAP工作液,于593 nm处测吸光度,平行操作 3次,取均值,计算对Fe 还原肮氧化能力,结果均以 FeSO 当量(即每克样品的总抗氧化能力相当于FeSO 的微摩尔数)表示。 2结果与讨论 2.1多糖含量的测定 2.1.1多糖含量测定 葡萄糖的回归方程为A=20.93C-0.0845(r=o.9996), 浓度在0.01 mg/mL~0.05 mg/mL之间呈现良好的线性 关系。根据回归方程计算出赤苍藤和密蒙花干燥粉末 中多糖的含量分别为30.78、190.89 mg/g。 2.1.2重复性、精密度、稳定性和加样回收试验 取赤苍藤和密蒙花粉末各5份,按2.1项下的方 法制备赤苍藤多糖和密蒙花多糖溶液,测定多糖含 量,其RSD分别为1.02%、0.96%(n=5),表明该检测 方法的重现性较好。 精密吸取同一赤苍藤多糖和密蒙花多糖溶液,测 定多糖含量,其RSD分别为0.93%、0.87%(n=6),说 明精密度良好。 精密吸取赤苍藤多糖和密蒙花多糖溶液,按标准 曲线制备项方法操作,每隔30 min测定1次吸光度, 共测6次。吸光度在2.5 h内无明显变化,比较稳定, RSD分别为0.94%、0.98%。 分别向已知质量分数的赤苍藤多糖和密蒙花多 糖溶液中分别加入一定量的葡萄糖对照品溶液进行 试验,平均回收率分别为99.52%、100.35%,RSD分别 为0.98%、1.05%(n=5),表明该法回收率良好。 2-2抗氧化性能测定 2.2.1 DPPH法 赤苍藤多糖和密蒙花多糖清除DPPH・的半清除 率浓度(Ic如)见表1。 表1赤苍藤多糖和密蒙花多糖的抗氧化活性 Table 1 Antioxidant activity of polysaccharides from Erythropalum scandensBI.andBuddleja ofifcinalisMaxim DPPH法 水杨酸法 ABTS法 FRAP法/ 中=F口日 IC (mg/mL)IC√(ms/mL)Ic√(mg/mL) ( m01/g) 半清除率浓度Ic∞与清除能力大小成负相关的关 系(即Ic∞越小则清除能力越强),结合表1,可以得出 清除DPPH・能力的强弱顺序为:V >赤苍藤多糖>V > 密蒙花多糖。 2.2.2水杨酸法 赤苍藤多糖和密蒙花多糖清除・OH的能力见表1 和图1。 谢 烬 浓度,(mg/mL) 图1赤苍藤多糖和密蒙花多糖清除・OH作用 Fig.1 Effect of scavenging。OH of polysaccharides from Erythropalum scandensBI.andBuddlejaofifcinalisMaxim 从图1可看出,在试验浓度范围内,赤苍藤多糖和 密蒙花多糖均具有一定的清除・OH的能力,并且呈一 定的量效关系(即清除率随着浓度的增加而增高)。根 据表l的IC卯值得出清除・OH能力的强弱顺序为:密 蒙花多糖>V >赤苍藤多糖>V 。 2.2.3 ABTS法 赤苍藤多糖和密蒙花多糖清除ABTS+.作用见 表1和图2。 由图2可知,在试验浓度范围内,赤苍藤多糖和密 蒙花多糖对ABTS+.均表现出一定程度的清除能力,并 呈明显的量效关系。由表1的IC卯值可知清除ABTS+・ 基础研究 潘乔丹,等:赤苍藤和密蒙花多糖的含量测定及抗氧化研究 100 80 60 蓬 4o 20 0 0 0.005 0.0l0 0.015 0.020 0.025 浓度/(mg/mL) 图2赤苍藤多糖和密蒙花多糖清除ABTS ・作用 Fig.2 Effect of scavenging ABTS 。of polysaccharides from Erythropalumscandens131.andBuddlejaofficinalisMaxim 能力的强弱顺序为:Vc>密蒙花多糖>赤苍藤多糖>V 。 2.2.4 FRAP法 在593 nm处,FeSO 浓度X(Ixmol/L)与吸光度y 在一定范围内呈线性剂量关系,线性回归方程为:l,= 0.000 3X一0.126 l(r=O.999 5)。根据各样品反应后的吸 光度,在标准曲线上求得相应的FeSO 当量(I ̄mol/g), 见表1。由表l的FeSO 当量值可知,各样品的Fe 还 原/抗氧化能力的强弱顺序为:赤苍藤多糖>V >密蒙花 多糖>Vc。 3结论 自由基生物学和自由基医学的飞速发展表明,自 由基与癌症、衰老、各种心血管疾病、帕金森综合症等 各种急性和慢性疾病密切相关 砌。寻找安全、有效的 天然自由基清除剂已成为当前研究的热题。研究发 现,植物多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗衰老、降血糖等 多种生物活性、毒副作用小和不易造成残留等优点[11】。 鉴于植物多糖的诸多优点,本研究采用超声波提取赤 苍藤多糖和密蒙花多糖,并用苯酚一硫酸比色法测得 赤苍藤多糖和密蒙花多糖的含量分别为30.78 mg/g、 190.89 mg/g,密蒙花多糖的含量较高,具有较好的开发 应用价值。其测定结果重现性、精确度和稳定性好,可 作为检测赤苍藤多糖和密蒙花多糖含量的优选方法。 本研究还采用了清除DPPH・、・OH、ABTS 和Fe 的还 原航氧化等方法研究赤苍藤多糖和密蒙花多糖的体 外抗氧化性能,通过比较半抑制浓度Ic卯值或FRAP 9 当量值,并与V 和V 这两种天然抗氧化剂比较。结果 表明,赤苍藤多糖和密蒙花多糖清除・OH和ABTS+.的 能力均强于v ,其Fe 还原/抗氧化能力均强于v ,且 赤苍藤多糖的清除DPPH・能力和Fe 还原肮氧化能 力均强于v ,密蒙花多糖清除・OH能力强于v 。赤苍 藤多糖和密蒙花多糖均有不同程度的抗氧化性能,且 抗氧化能力很强,若能进一步分离纯化,其抗氧化效 果可能更佳。 参考文献: …1 厉福强,梁永江,陈杰.遵义烟区南北生态区域的划分【J].中国烟 草科学,2009,3O(3):33—36 [2 郭雷,2]朱文成,刘超.密蒙花化学成分及生物活性研究进展[J】.食 品研究与开发,2012,33(7):222—225 【3】郁玮,杨小明,刘伟民,等.苯酚一硫酸法测定无花果中多糖含量的 研究叨.食品科技,2009,34(10):256—262 【4] Kim D,Lee K W,Lee H J,et a1.Vitamin C equivalentanti0xidant Ca— pacity(Ve EAC)of phenolicphytochemicals[J].J Agric Food Chem, 2002,5o(13):3713 【5]杨强,李新华,王琳,等.银杏果多糖的物化性质及抗氧化活性研 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