高效液相色谱分析市售皮蛋,咸蛋中的苏丹红

【化学测定方法】

高效液相色谱分析市售皮蛋、咸蛋中的苏丹红

刘虹,谢承恩,曾远伟,黎大禹

(广州市越秀区疾病预防控制中心,广州　510155)

[摘要]　目的:对广州市售咸蛋、皮蛋中的苏丹红染料进行分析。方法:采用高效液相色谱(HPLC)法等度洗脱。结果:

苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ在0132～2156mg/L时其峰面积与进样质量浓度呈良好的线性关系,其线性相关系数为019999、

019996、019995和019997,加标样品测定的相对标准偏差(RSD)为116%、219%、214%和611%(n=6)。苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的最小检出限均为10μg/kg。苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ回收率均为90%～105%。结论:这种等度洗脱的高效液相色谱法测量苏丹红快速、灵敏、可靠、简便、重现性好。[关键词]　咸蛋;皮蛋;苏丹红Ⅰ;苏丹红Ⅱ;苏丹红Ⅲ;苏丹红Ⅳ;高效液相色谱+

[中图分类号]　O657172　　　　[文献标识码]　A　　　　[文章编号]　1004-8685(2009)12-2847-03

Highperformanceliquidchromatographyfordeterminationofsudandyesinsaledandpreservedeggs

LIUHong,XIECheng2en,ZENGYuan2wei,LIDa2yu

(YuexiuCenterforDiseaseControlandPrevention,Guangzhou510155,China)

[Abstract]　Objective:Todetectsudandyesinsaledeggandpreservedegg1Methods:Byreversed-phasehighperformanceliquidchromatography1Results:Sudandyeshavegoodlinearityintherangefrom0132to2156mg/L,thecorrelationcoefficientsare019999,019996,019995and019997respectivelyforfourSudandyes1Therelativestandarddeviationsofspikedsampleare116%,219%,214%and611%(n=6)1ThedetectionlimitsofallfourSudandyesare10μg/kg1Theaveragerecoveryoffoursudandyesis90%to105%1Conclusion:Thismethodisrapid,sensitive,simple,accurateandreproducible1

[Keywords]　Saltedegg;Preservedegg;SudandyeⅠ;SudandyeⅡ;SudandyeⅢ;SudandyeⅣ;Highperformanceliquidchromatography(HPLC)

　　苏丹红(Sudandyes)是一种人工合成的偶氮类、油溶性的化工染料,被广泛用于溶剂、油、蜡和汽油的增色以及鞋、地板的增光,共分为苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ,都有致癌毒性,其中苏丹红Ⅳ毒性最大,已被国际癌症研究机构列为三类致癌物之一,禁止作为色素添加剂在食品和饲料中使用,而其残留在动物体内对食用者的健康和生命安全都存在潜在的威胁[1]。我们应用高效液相色谱法[2,3]对市售咸蛋和皮蛋黄中的四种苏丹红染料进行测定。

1　材料与方法111　仪器

Waters2695型高效液相色谱仪,PDA检测器,自动进样

标准使用液:吸取标准储备液011,012,014,018,116ml,用乙

腈定容至25ml容量瓶,此标准系列的浓度为0132、01、1128、2156mg/L;乙腈(色谱纯);乙酸水(165+1000)。113　色谱条件

11311　色谱柱　DiamondC18415×250mm色谱柱,柱温

40℃;流动相:乙酸水(165+1000):乙腈(色谱纯)(10:90),流速110ml/min,进样量50μl。

11312　波长　经过扫描确定苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ在500nm

处有很好的吸收,采用500nm波长进行检测。114　样品处理

准确称取蛋黄510g,加入20ml乙腈,搅匀,超声波提取30min,离心10min,吸取上清液过0145μm滤膜,上机待测。

2　结果与讨论211　标准曲线

器,四元梯度泵,MILLIPORE公司的超纯水仪,KQ-50DB型

数控超声波清洗器。112　试剂

苏丹红标准储贮备液:分别精密称取10mg苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ溶于少量乙腈,移入250ml容量瓶中加乙腈至刻度,混匀,每升含苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各40mg,冰箱保存;苏丹红

[作者简介]　刘虹(1977-),女,硕士,主管技师,主要从事理化

在上述实验条件下,分别取苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ标准使用

液,以峰面积对含量绘制标准曲线,结果如下:

检验研究。

2848中国卫生检验杂志2009年12月第19卷第12期　ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Dec2009;Vol19　No12

苏丹红Ⅳ线性方程及相关系数:以y=-51324417e+003x+

112069042e+005,r=019997,式中:x-浓度;y-峰面积

图5　苏丹红Ⅳ标准曲线212　精密度在重复性条件下获得的两个测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。按此方法测定样品中苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ含量,平行测定7份,以峰面积计算苏丹红Ⅰ的相对标准偏差为116%;苏丹红Ⅱ的相对标准偏差为219%;苏丹红Ⅲ的相对标准偏差为214%;苏丹红Ⅳ的相对标准偏差为

611%,满足实验要求。213　回收实验

采用添加回收实验来考查方法准确度,测定食品中苏丹红加标回收实验结果见下表,均在9413%～10116%之间,准确性很好。

表1　食品中苏丹红Ⅰ加标回收实验结果

样品名称样品

本底值

(mg/kg)016

加标量

(mg/kg)0134

测量值

(mg/kg)0198501975

回收率

(%)9917961516961998169618

平均回收率

(%)9714

011125811266

119221021505

表2　食品中苏丹红Ⅱ加标回收实验结果

样品名称样品

本底值

(mg/kg)01658

加标量

(mg/kg)0134

测量值

(mg/kg)0198501984

回收率

(%)961295199713951996109719

平均回收率

(%)9719

011128111272

11922150121537

(下转第2870页)

2870中国卫生检验杂志2009年12月第19卷第12期　ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology,Dec2009;Vol19　No12

图3　本法-参考法测定值回归曲线

216　干扰试验

在本法测定条件下,胆红素少于20mg/dL、甘油三酯少于

750mg/dL、血红蛋白少于100mg/dL、抗坏血酸少于4mg/dL对37U/L腺苷脱氨酶测定无干扰。

3　讨论

后,pH值控制在pH815±015,酶反应得以很大程度抑制。酶

反应终止液中的盐酸胍为一种蛋白酶抑制剂,它的加入使酶反应得到有效抑制。实验必须选择合适的盐酸胍浓度,浓度过小,不能完全抑制血清ADA的继续反应;浓度过大则易使显色不稳定。试验结果表明,40g/L的盐酸胍能达到理想效果。

实验还考察了Brij聚氧乙烯月桂基醚系列、Tween失水山梨醇聚氧乙烯系列、TrionX-100、乳化剂OP、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯苯基醚、聚氧乙烯-聚氧丙烯聚醚等不同类型非离子型表面活性剂对测定体系的影响,试验结果表明,在R1中加入TrionX-100和Tween-80可使反应灵敏度增加,显色稳定期延长,并使PNP、XTO、POD等酶的稳定性显著,尤其以012%Tween-80、011%TritonX-100的混合溶液效果最佳。

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[3]王桂菊,刘少君,侯风喜,等1白血病患者血清腺苷脱氨酶活性测

血清ADA的测定方法已经发展了五代,目前最常用的测定方法为测定氨生成速率[7]及有色醌生成速率[8]的连续监测法,这两种方法可实现血清ADA的自动化分析,方便、快捷,但检测时依赖价格昂贵的全自动生化分析仪,在基层实验室无法开展应用,且前者在测定血清ADA含量时易受内源性氨的干扰。本文在测定有色醌生成速率[8]的连续监测法的基础上,建立了以盐酸胍为反应终止剂、嘌呤核苷磷酸化酶-黄嘌呤氧化酶-过氧化物酶(PNP-XTO-POD)偶联的可见光匀相终点法,该法灵敏快速,抗胆红素、甘油三酯、血红蛋白及维生素C干扰能力强,且不受内源性氨干扰,使用普通的分光光度计即能完成测试,检测结果可与全自动生化分析仪相媲美,特别适合在基层实验室开展使用。

在PNP-XTO-POD偶联可见光匀相终点法测定血清ADA中,酶反应终止液的pH值及盐酸胍浓度对检测结果的准确与否有着重要影响。本法工作液一的pH值控制在pH718±015,在此pH值下ADA的活性得以完全发挥;加入工作液二

(上接第2848页)

表3　食品中苏丹红Ⅲ加标回收实验结果

样品名称样品

本底值

(mg/kg)01638

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(收稿日期:2009-06-17)

214　干扰实验

平均回收率

(%)10116

加标量

(mg/kg)0134011192

测量值

(mg/kg)01980

0198311297112932158021593

回收率

(%)100161011510310102131011110112

试剂空白测定结果显示试剂在食品中苏丹红测定均少于最低检出限。

215方法最低检出限

按三倍信噪比计,得最低检出限为10μg/kg。

216　测定结果

对广州市售的162份皮蛋、咸蛋进行分析测量,均未检出苏丹红。

[参考文献]

平均回收率

(%)9413

[1]黄曙海,庞维群1苏丹红染料毒性研究及食品中苏丹红检测方法

表4　食品中苏丹红Ⅳ加标回收实验结果

样品名称样品

本底值

(mg/kg)012

加标量

(mg/kg)0134011192

测量值

(mg/kg)01980

0195811230112332147921437回收率

(%)991492199119921395179315简述[J]1广西预防医学,2005,11(6):380-3831

[2]GB/T19681-20051食品中苏丹红染料的检测方法-高效液相色

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[3]仲岳桐,陈春晓,徐锦洪,等1食品中苏丹红一号的检测方法研究

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(收稿日期:2009-08-26)