602 中国美容医学2012年4月第21卷第4期Chinese Journal of Aesthetic Medicine.Apr.2012.Vo1.21.No.4 ・论著・ 普萘洛尔对血管瘤内皮细胞的抑制作用 杨永勤,孙沫逸,李建虎,梁亮,中志远 (第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科陕西西安71 0032) [摘要]目的:探讨不同浓度普萘洛尔在不同时间段内对血管瘤内皮细胞的抑制作用。方法:收集手术切除的新鲜婴幼儿血管瘤 标本,采用组织块法培养内皮细胞,免疫荧光法对培养的细胞进行鉴定;通过绘制生长曲线和流式细胞仪检测普萘洛尔 (propranolo1)对血管瘤内皮细胞增殖影响。结果:伴随普诺洛尔浓度增大(0 ̄g/ml,201xg/ml,40 ̄g/mt,60 ̄g/ml,801 ̄g/ml, 1 O0 ̄g/ml,120 ̄g/m1)及作用时间的增加(24h,48h,72h)对血管瘤内皮细胞的抑制作用明显增强;流式细胞4V,5 ̄'1定不同浓度普 萘洛尔作用不同时段后血管瘤内皮细胞凋亡明显。结论:普萘洛尔能抑制血管瘤内皮细胞的增殖并促进其凋亡,抑制血管瘤的 生长。 [关键词]普萘洛尔;血管瘤内皮细胞;凋亡 [中图分类号]R7 32.2 [文献标识码]A [文章编号]1 008—64 55(2012)O4—06O2一O3 Effects of propranolol on proliferation of hemangioma endothelial cells from infantile YANG Yong—qin SUN Mo—yifLI Jian—hufLIANG LiangfSHEN Zhi-yuan (Department of Oral and Maxillofacial Surgery,School of Stomatology,The Fourth Militiary Medical University,Xi an 710032,Shanxi,China) Abstract:Objective To investigate the Effects Of propranolol on proliferation of hemangioma endothelial cells from infantile.Methods In this study.we treated the vascular endotheliaI cells Of hemangioma in 96一wel1 plates with diferent dose(01ag/ml to 1 20 ̄g/m1)of propranolo1.the survival and proliferatoin of the vascular endothelial cells of hemangioma were evaluated by the 3-(4,5一dimethylthiazol一2-y1)-2,5-diphenyl tetra-zoloum(MTT)assay and crystal violet assay. The effects of propranolol on the vascular endothelial cells of hemangioma were observed by cell growth curves and flow cytometry.Results With the augmentation of the concentration of propranolol(Opg/ml,20pg/ml,40t ̄g/ml,60t ̄g/ml, 80pg/ml,100#g/ml,1201ag/m1)and the lengthening of action time(24h,48h,72h),proliferation of hemangioma endothelial cells are inhibiting apparently.AnnexinV-PI assay were aslo performed.propranolol could inhibit the growth of vascular endothelial cells of hemangioma and advancing apoptosis.Conclusion Propranolol is able to inhibit the proliferation of the hemangioma endothelial ceils,and to advance apoptosis of vascular endothelial cells,resulting in inhibition of hemangioma. Key wOrds:PrOpranOIOI:hemangioma endothelial cells ̄apoptosis 针对血管瘤,目前临床常用的药物主要有糖皮质激素、干扰 素n、环磷酰胺、长春新碱等,然而,这些药物均有其不同程度的 1.2主要试剂和仪器:DMEM/F一12培养基培养基(Hyclone)、 胰蛋白酶(Amresco)、青霉素+链霉素、胎牛血清(胎牛血 清),D’hanks(武汉谷歌生物),鼠抗人Ⅷ因子、MTT(北京索 莱宝)、DMSO(北京索莱宝)、Annexin V—FITC细胞凋亡检测试 不良反应,因此在临床使用中受到不同程度的限制。自2008年, 法国Bordeaux儿童医院L6 aut6一Labr6 ze等医生在美国 嘶英格兰医学杂志》报道了他们应用普萘洛尔(proprano1oi) 治疗婴儿血管瘤的重大发现。报道用 受体阻断剂一普萘洛尔 剂盒(凯基生物),96孔培养板(Corning)、CO 恒温培养箱 (SANYO)、FAC—SCalibur型流式细胞仪(Becton Dickinson 公司)、计算机数据处理软件(BD公司Cellquest软件)。 (propranolo1)成功治疗小儿血管瘤患者后,因普萘洛尔耐受 良好,相比类固醇有较少的副作用,或将成为药物治疗血管瘤的 新选择。本实验采用组织块法培养出血管瘤内皮细胞,并将不同 浓度普萘洛尔添加到传代后的血管瘤内皮细胞培养基中进行培 养。探讨普萘洛尔是否对血管瘤内皮细胞有抑制作用,进而证明 其对血管瘤是否有治疗作用。 1材料和方法 1.1标本来源:第四军医大学口腔医院手术切除的血管瘤标本。 1.3血管瘤内皮细胞分离和培养:①标本,4 ̄C无菌D ̄Hank 液试管中保存;②用D-Hank液及PBS液冲洗标本至肉眼观 察冲洗液颜色清亮,无浑浊及脱落组织;⑧去除多余的皮肤 及脂肪,选择瘤体组织,适当修剪成i~2cm。的组织块, 0.25%胰蛋白酶中37 ̄C振荡消化10 ̄20 min,加入含10%胎 牛血清(fetalbovine serum,FBS)培养液中止消化;④将消 化后的组织微粒,接种于事备好的培养皿内,静置10 min;然 后加入约0.5ml完全内皮细胞培养基(成分DMEM/F一12培养 通讯作者:孙沫逸,教授,主任医师,博士生导师:E-mail:moyisun@fmmu.edu.cn 生 羞容医学2012年4月第21卷第4期Chinese Journal of Aesthetic Medicine.A 2012.Vo1.21.N0.4 605 [参考文献] [6】冷婷婷,霍然.血管瘤和血管畸形的诊断及治疗现状『J].中国美容 [1]Le aut6一Labre ZeC,DumasdelaRoqueE,HubichheT,et a1.Propranol 医学,2007,16(12):1748—1752. ol for severe hemangngiomas ofinfancy[J].N Engl J MED,2008,358 [7]Theletsane T,Redfern A,Raynham O,et a1.Life threatening r24):2649—265 1. hemangioma:a dramatic response to propranolol[J]_J Eur Acad 【2】秦中平,刘学健,李克雷等小剂量普萘洛尔口服治疗婴儿血管瘤的近 Dermatol Venereol,2009,23(12):1465—1466. 期疗效与安全性评价 .中华医学杂志2009,89(44):3 1 30—3 1 34. [8]徐兵,王忠荣,王德生,等l,J、儿血管瘤局部注射疗法的评价fJ].实用 [3]李丽,马琳.普萘洛尔治疗婴儿重症血管瘤的疗效及不良反应【J]. 医学杂志.2001,17(1 1):32—33. 国际皮肤性病学杂志,2Ol0 36(6):325—327. [9]郑家伟,周琴。王延安,等.口腔颌面部血管瘤治疗指南[J].中国口腔 [4]孙强,赵静,杜爱英,等.血管瘤细胞培养及其生物学特性分析Ⅲ.中 颌面外科杂志201 1。9f11:1673—3244. 国现代普通外科进展 2005.8(5):307 308. [5]伍尚敏,鲁开化.血管瘤药物治疗的现状[J].中国美容医学,2007,16 [收稿日期1201 1-12—22 [修回日期]2012—02.28 (1)133—137. 编辑/张惠娟 ・论著・ 皮肤色素及厚度对皮肤光敏感性的影响 夏米娜 ,王学民 ,刘彦群 ,袁超 ,邹颖 ,樊国彪 ,吴佩兰2李宁 (1.徐州医学院附属第三医院江苏徐州 221 002;2.上海市皮肤病医院皮肤与化妆品研究室) [摘要]目的:研究皮肤色素及厚度对皮肤光敏感性的影响。方法:采用目光防护指数测定仪对31名健康志愿者后背及臀部皮肤 进行照射,获取两种波长紫外线照射下的最小红斑量(minima1 erythema dose,MED)和最小持续性黑化量(minima1 per si stent Pigment darkening dose,MPPD)。照射前用皮肤黑素和红色素测定仪、皮肤扫描比分光光度仪和皮肤B超测定试 验部位。结果:MPPD与b 、MI、Depth呈负相关,MED与b 、MI、Depth呈正相关,相关系数均有统计学意义。相同能量UVA照射后 的不同皮肤反应性与b 、Depth呈正相关;相同能量UVB照射后的不同皮肤反应性与MI、EI、b 、Depth呈负相关,且相关系数有 统计学意义。结论:肤色、皮肤黑素、皮肤厚度,能影响皮肤对紫外线的敏感性。肤色、皮肤黑素和血红素、皮肤厚度,能影响皮肤 黑化反应和红斑反应的程度。 [关键词]光敏感性;皮肤色素;皮肤厚度;MED;MPPD [中图分类号]R364.2 3 [文献标识码]A[文章编号]1 008-6455(2 012)04-0605—04 The effects of skin pigment and thickness on skin photosensitivity XlA Mi-na’,WANG Xue—rnin ,LIU Yan—qun’,YUAN Chao ,ZOU Yin ,FAN Guo—biao ,WU Pei-lan ,LI Ning (1.Affiliated The Third Hospital of Xuzhou Medical College,Xuzhou 221002,Jiangsu,China;2.Skin&Cosmetic Research Department,Shanghai Skin Disease Hospita1) Abstract:Objective ]-o investigate the effects of skin pigment and thickness and the association of skin photosensitivity.Methods 31 subjects were exposed to two different Ultraviolet rays,before what Mexameter MX 16, Chromameter CR400 and skin B—ultrasonic were used to assess the text sites,then minima J erythema dose(MED)and minimal persistent pigment darkening dose(MPPD)were obtained.Results MPPD was negatively correlated with b , MI,Depth,though MED was positively correlated with the three,and all of the correlation coefficients were statistically significant.Different skin photoreaction with the same UVA energy was affected by b ,Depth.and different skin photoreaction with the same UVB energy was affected by MI,El,b ,Depth,and the correlation coefficients were statistically significant.Conclusion Skin UV sensitivity can be influenced by skin color,melanin and skin thickness The tanning and erythematous degree after UV irradiation can be influenced by skin color,melanin,haemoglobin and skin thickness. 众所周知,紫外线照射可诱发多种光损害,如皮肤红斑、 皮肤肿瘤等。寻找一种结合皮肤特征预测紫外线损害的方 老化、光敏性疾病、异常的DNA合成、DNA损伤、免疫抑制以及 法,是目前较为关注的话题,多数学者推荐的金标准是光试 通讯作者:王学民,男,教授,主任医师_| _海市皮肤病医院;g-mai1:dermxmwang@126.com 刘彦群,男,教授,主任医师;徐州医学院附属第三医院:E-maii:xyfylyq ̄sohu.c。m