实验与检验医学２０１４年 箜３ 鲞箜鱼塑垦 卫 垦 ｒａ ， 墼：２Ｑ ， １３ ，盟 ：鱼 ・检验与临床・ 中性粒细胞ＣＤ６４定量检测在感染性疾病检测中的应用 蔡鹏威 ｆ福建医科大学省立临床医学院福建省立医院检验科，福建福州３５０００１） 摘要：目的探讨中性粒细胞ＣＤ６４定量检测在感染性疾病检测中的应用。方法选取３８２例ＩＣＵ住院患者，将其分为 非细菌感染组、局部感染组和脓毒血症组，同期选取３０例健康体检，应用流式细胞仪检测中性粒细胞ＣＤ６４，同时检测外周 血白细胞计数（ＷＢＣ）及中性粒细胞比例（ＮＥ％）、Ｃ反应蛋白（ｃＲＰ）和降钙素ＩＮ．（ＰＣＴ）。结果局部感染组和脓毒血症组的中性 粒细胞ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％均高于健康对照组及非细菌感染组（Ｐ＜０．０５），脓毒血症组的中性粒细胞ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、 ＷＢＣ、ＮＥ％高于局部感染组（尸＜０．０５），中性粒细胞ＣＤ６４的ＲＯＣ曲线下面积最大（Ｏ．９０３），当其临界值取１５００ ＭＥＳＦ时，敏感 性为９４．５％。特异性为９０．６％。 结论与ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ及ＮＥ％相比，中性粒细胞ＣＤ６４可作为检测和监测感染性疾病的 敏感指标。 关键词：ＣＤ６４：中性粒细胞；Ｃ反应蛋白；降钙素原；感染性疾病；流式细胞术 中图分类号：Ｒ４４６．６２，Ｒ４４６．１１＋１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４—１１２９（２０１４）０６—０７１９—０３ ＤＯＩ：１０．３９６９￣．ｉｓｓｎ．１６７４－１１２９．２０１４．０６．０２５ 感染性疾病是临床最常见的疾病之一，也是 Ｓｙｓｍｅｘ公司ＸＥ ５０００型血液分析仪进行分析． 导致ＩＣＵ病人死亡的主要原因之一．而在临床诊 ＰＣＴ检测使用法国梅里埃公司的ｍｉｎｉ—ＶＩＤＡＳ 疗过程中．细菌感染和非细菌感染性疾病常依靠 ＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥ ＰＥ标准微球和中性粒细胞ＣＤ６４检 外周血白细胞计数ｆＷＢＣ１及中性粒细胞比例 测试剂由美国ＢＤ公司生产：ＣＲＰ检测试剂为西门 （ＮＥ％１、Ｃ反应蛋白（ＣＲＰ）、降钙素Ｉｇ．（ＰＣＴ）等实验室 子公司配套试剂：血常规试剂为日本Ｓｙｓｍｅｘ公司 检查加以判断 近年来，多项研究发现中性粒细胞 配套产品。ＰＣＴ为法国梅里埃公司配套试剂．都严 ＣＤ６４定量分析是早期诊断和鉴别细菌感染的可 格按照操作说明书操作 靠的敏感指标 本研究通过对本院重症ＩＣＵ ３８２例 １．４中性粒细胞ＣＤ６４的检测方法ＱｕａｎｔｉＢＲＩＴＥ 标本的中性粒细胞ＣＤ６４进行定量分析．探讨中性 ＰＥ标准微球是用ＰＥ标记使用的．当在同一台流 粒细胞ＣＤ６４对细菌感染的诊断价值 式细胞仪检测ＱｕａｉｌｔｉＢＲＩＴＥ ＰＥ标准微球后．因为 １材料与方法 已知每个抗体上和微球上标记ＰＥ荧光分子的数 １．１研究对象选取本院２０１３年８月至２０１４年６ 量，就可将ＦＬ２坐标轴上的荧光强度换算为每个 月入院４８ ｈ内ＩＣＵ住院患者为研究对象．共３８２ 细胞所结合ＰＥ分子的数量．故可通过每个细胞上 例．依据临床症状和血培养结果分为３组：（１）非细 ＰＥ荧光分子的数量而得出每个细胞结合抗体的数 菌感染组１２３例．男７５例，女４８例，年龄１９～６８ 量，即单个细胞抗原结合数量（ＡＢＣ１。 岁：（２）局部感染组１７４例，男１００例，女７４例，年 １．５统计学方法所有数据采用ＳＰＳＳ １３．０统计软 龄ｌ６～７０岁．平均年龄４４．１±１０．３岁：（３）脓毒血症 件进行处理。结果以 ±ｓ表示．组间比较采用ｔ检 组８５例．年龄２０～７３岁，平均年龄４３．７＿＋１２．５岁。 验．Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义 绘制受试者工作 正常对照组为我院健康体检者３０例．男１８名，女 特征（ＲＯＣ１曲线，计算感染指标的敏感性和特异 １２名，年龄１６～６９岁，平均年龄４０．７±１０．５岁。 性。 １．２标本采集清晨采集空腹静脉血４ｍｌ，其中２ ２结果 ｍ１于促凝管中．３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｒａｉｎ。分离血清用 ２．１非细菌感染组、局部感染组、脓毒血症组及健 于检测ＣＲＰ和ＰＣＴ；采集２ｍｌ ＥＤＴＡ—Ｋ 抗凝静脉 康对照组中性粒细胞ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％ 血用于进行血常规和中性粒细胞ＣＤＣＭ的测定。 检测结果见表１ ｌ＿３仪器与试剂中性粒细胞ＣＤ６４检测使用美国 局部感染组和脓毒血症组的中性粒细胞 ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ流式细胞仪：ＣＲＰ检测使用西门 ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％均高于健康对照组及 子公司ＢＮ ＩＩ全自动特定蛋白仪：血常规采用Ｅｔ本 非细菌感染组ｆＰ＜Ｏ．０５１，脓毒血症组的中性粒细胞 ．７２０． 实验与检验医学２０１４年１２月第３２卷第６期ＥｘＤｅｆｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｗ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｄｅｃ．２０１４．Ｖｏ１．３２．Ｎｏ．６ 表１非细菌感染组、局部感染组、脓毒血症组及健康对照组中性粒细胞ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％检测结果（；±ｓ） 注：与健康对照组及非细菌感染组比较， Ｐ＜０．０５；非细菌感染组与健康对照组比较；‘ ｐ＜Ｏ．０５，脓毒血症组组与局部感染组比较， Ｐ＜Ｏ．０５。 ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％高于局部感染组 ＜ ０．０５），非细菌感染组的ＷＢＣ、ＮＥ％高于健康对照 ＣＲＰ是由肝细胞合成的，能与肺炎链球菌Ｃ 多糖反应形成复合物的急性时相反应蛋白，半衰 组ｆ尸ｌ＜Ｏ．０５）。 ２．２绘制中性粒细胞ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％ 评价感染性疾病的ＲＯＣ曲线图见图１。 １・斜 确Ｅ 圈１中性粒细胞ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％评价感染性 疾病的ＲＯＣ曲线图 从ＲＯＣ曲线图中可以计算出中性粒细胞 ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ及ＮＥ％曲线下面积分别 为０．９０３、０．８９６、０．８１６、０．６１８及０．６７７。 ２－３分别计算中性粒细胞ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、 ＮＥ％评价感染性疾病的敏感性和特异性结果见 表２ 表２中性粒细胞ＣＤ６４、ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％评价感染性 疾病的敏感性和特异性 ３讨论 感染性疾病可以分为细菌感染和非细菌感 染．细菌感染是ＩＣＵ病人常见的病因之一。也是 ＩＣＵ病人常见的并发症之一 细菌培养是诊断细菌 感染的金标准．但由于细菌培养检测周期较长，敏 感性较低．加之现在抗生素的广泛使用．细菌培养 的阳性率都比较低．因此，临床迫切需要新的细菌 感染检测指标，ＣＲＰ、ＰＣＴ和中性粒细胞ＣＤ６４先 后应用于临床．为细菌感染诊断提供了较好的实 验依据 期为５～７ｈ．ＣＲＰ在感染后６ １２ｈ升高，４８ｈ左右达 到高峰．炎症消退后迅速下降．因此ＣＲＰ水平与炎 症反应程度呈正相关，本研究显示：脓毒血症组和 局部感染组的ＣＲＰ高于健康对照组和非细菌感染 组（Ｐ＜０．０５），而且脓毒血症组的ＣＲＰ也高于局部感 染组ｆＰ＜０．０５）。此外ＣＲＰ不受性别、年龄、抗生素等 其它因素影响．因此常作为细菌感染的诊断和疗 效判定的指标之一．虽然ＣＲＰ敏感性较高，但特异 性有限【１】 本研究显示：当ＣＲＰ的临界值定为５ ｍｇ／ Ｌ时。敏感性为８８．３％，高于ＷＢＣ和ＮＥ％。却低于 ＰＣＴ和中性粒细胞ＣＤ６４；特异性为７６．５％．仅高于 ＷＢＣ．却低于ＮＥ％、ＰＣＴ和中性粒细胞ＣＤ６４， ＣＲＰ的ＲＯＣ曲线下面积为０．８１６．也比ＰＣＴ和中性 粒细胞ＣＤ６４低．因此ＣＲＰ作为细菌感染检测的 指标不如ＰＣＴ和中性粒细胞ＣＤ６４好 ＰＣＴ是降钙素的前肽物质．是无激素活性的糖 蛋白．由１１６个氨基酸组成．相对分子量为１３ｘ １０３．ＰＣＴ在甲状腺ｃ细胞中生成并裂解出降钙素， 正常人体含量极低。当机体受到非细菌感染时，体 内的ＰＣＴ不升高或仅轻度升高．但当机体受到细 菌感染时．体内的ＰＣＴ可迅速升高．而且感染程度 越重．升高越明显．其机制可能是细菌内毒素脂多 糖或细胞因子等诱导体内甲状腺外组织产生大量 的ＰＣＴ，因而．ＰＣＴ是一种较为敏感和特异的细菌 感染检测指标 。本研究显示：局部感染组和脓毒 血症组的ＰＣＴ高于健康对照组及非细菌感染组 ｆＰ＜０．０５），而且脓毒血症组的ＰＣＴ高于局部感染组 ０．０５），故ＰＣＴ与细菌感染的程度呈正相关。ＰＣＴ 的ＲＯＣ曲线下面积为０．８９６．仅次于中性粒细胞 ＣＤ６４，但优于ＣＲＰ、ＷＢＣ、ＮＥ％，其诊断的敏感性 ｆ８９．２％）和特异性（８７．３％）也较高，故ＰＣＴ是一种不 错的细菌感染检测指标．但目前ＰＣＴ检测的费用 还比较高．限制了其应用。 ＣＤ６４即ＩｇＧ受体Ｆｃ＾ｙ ＲＩ，是Ｆｃ受体之一，Ｆｃ 受体属于免疫球蛋白超家族．分布于白细胞表面． 实验与检验医学２０１４年１２月第３２卷第６期Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｄｅｃ．２０１４。Ｖｏ１．３２，Ｎｏ．６ 它们参与先天及后天免疫应答。它们在吞噬细菌 者的应用价值还需进一步研究。 和免疫复合物的过程起着非常重要的作用。ＦｃＴＲ 参考文献 ｆＣＤ６４１ Ｉ为一种相对分子量为７２０００的跨膜糖蛋 【１］Ｊａｙｅ ＤＬ，Ｗａｉｔｅｓ ＫＢ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｅ— 白，属Ｉｇ超家族，是ＩｇＧ高亲和力受体，是介导体 ｄｉｅｔｒｉｅｓ［Ｊ］．Ｐｅｄｉａｔｒ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ Ｊ，１９９７，１６（８）：７３５－７４６． 液免疫和细胞免疫的桥梁 正常生理情况下ＣＤ６４ ［２］Ａｓｓｉｃｏｔ Ｍ，Ｇｅｎｄｒｅｌ Ｄ，Ｃａｒｓｉｎ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｈｉｇｈ ｓｅｒｕｍ ｐｒｏｅａｌｅｉｏｎｉｎ ａｓ ａ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｉｎ ｅｍｅｒｇｅｎｌｙ ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ：ａ 表达于巨噬细胞、单核细胞和树突状细胞表面，中 ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ，２００２，３４（７）：８９５－９０１． 性粒细胞不表达或低表达 而当中性粒细胞受到 【３］Ｍｃｕｒｕｎａ Ｐ，Ｎｅｄｅｌｎｉｋｏｖａ Ｋ，Ｇｕｒｌｉｃｈ Ｒ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｇｅｎｅｔｉｃｓ ｏｆ 微生物细胞壁成份（如：脂多糖、补体物质）和某些 ｐｒｏｅａｌｅｉｔｏｎｇｉｎ｛Ｊ｝．Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｓ，２０００，４９（Ｓｕｐｐ１）：Ｓ５７一Ｓ６５． 细胞因子（如：ＩＦＮ一 ，ＴＮＦ一仅，ＩＬ一８，ＩＬ一１２）刺激４～ 【４］Ｗｒｏｄｙｃｋｉ Ｗ．Ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ ｏｆ ｐｌｓａｍａ ｐｒｏｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ（ＰＣ ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｔｏ ６ｈ后．ＣＤ６４表达就会增加．增加的程度与细胞因 ｄｉａｇｎｏｓｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔｓ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｐｒｚｅｇｌ Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ，２００３，５７（１）：２１ １－２１９． 子刺激的强度相关．而且ＣＤ６４的表达量与细菌感 ［５］Ｅｌｇｈｅｔａｎｙ ＭＴ，Ｌａｃｏｍｂｅ Ｆ．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ｖａｒｉａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｉｅ 染的严重程度、预后及患者的死亡密切相关，同时 ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ａｇｅ，ｇｅｎｄｅｒ，ｐｒｅｇｎａｎｃｙ，ｒａｃｅ，ａｎｄ ＣＤ６４表达水平不受性别和年龄等因素影响『５＇ｌ２１。因 ｓｔｒｅｓｓ［ＪｌＪ Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ｂｉｏｌ，２００４，７５（２）：１５７－１６２． 此．中性粒细胞ＣＤ６４是细菌感染检测的理想指 【６］Ｈｏｆｆｍａｎ ＪＪ．Ｎｅｕｔｏｒｐｈｉｌ ＣＤ６４：ａ ｄｉｇａｎｏｓｔｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｆｏ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ 标。本研究结果表明：局部感染组和脓毒血症组的 ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ，２００９，４７（８）：９０３－９１６． 【７］Ｏｋａｙａｍａ Ｙ，Ｋｉｒｓｈｅｎｂａｎｍ ＡＳ，Ｍｅｔｅａｌｆｅ ＤＤ，ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ａ 中性粒细胞ＣＤ６４高于健康对照组及非细菌感染 ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｈｉｇｈ—ａｆｆｉｎｉｔｙ ＩｇＧ ｒｅｃｅｐｔｏｒ，Ｆｃ ｇａｍｍａ ＲＩ，ｏｎ ｈｕｍａｎ ｍａｓｔ 组ｆＰ＜Ｏ．０５），而且脓毒血症组的中性粒细胞ＣＤ６４高 ｃｅｌｌｓ：ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｂｙ ＩＦＮ－ｇａｍｍａ【ＪＪ－Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２０００，１６４（８）： 于局部感染组ｆＰ＜Ｏ．０５１，故细菌感染的程度越重，中 ４３３２－４３３９． 性粒细胞ＣＤ６４表达量越高．而且中性粒细胞 【８］Ｌｉｖａｄｉｔｉ Ｏ，Ｋｏｔａｎｉｄｏｕ Ａ，Ｐｓａｒｒａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ＣＤ６４ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＣＤ６４的ＲＯＣ曲线下面积最大．达到０．９０３．说明 ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ＩＬ－８：ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｅａｒｌｙ ｍａｒｋｅｒｓ ｏｆ ｓｅｖｅｒｉｔｙ ａｎｄ ｏｕｔｃｏｍｅ ｉｎ 中性粒细胞ＣＤ６４的诊断价值最高．加上中性粒细 ｓｅｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ，２００６，３６（５－６）：２８３－２９０． ［９ ａｅ￣ｏｆｉ Ｇ，Ｈｏｋａｎｓｓｏｎ ＬＤ，Ｐａｕｋｓｅｎｓ Ｋ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ＣＤ６４ 胞ＣＤ６４的敏感性（９４．５％）和特异性（９０．６％）优于其 （ＦｃＴＲＩ）ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｓ ａ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：Ａ 它指标．所以中性粒细胞ＣＤ６４是检测细菌感染的 ｓｔｕｄｙ ｏｎ ｔｈｅ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｍａｊｏｒ ｓｕｒｇｅｒｙ［Ｊ】．Ｓｃａｎｄ Ｊ 最佳指标。 Ｉｎｆｅｃ Ｄｉｓ，２００７，３９（６—７）：５２５—５３５． 综上所述．中性粒细胞ＣＤ６４在细菌感染的检 【１０］Ｆａｒｉａｓ ＭＧ，ｄｅ Ｌｕｃｅｎａ ＮＰ，Ｂ６ ＳＤ，ｅｔ ａ１．Ｎｅｕｔｏｒｐｈｉｌ ＣＤ６４ ｅｘｐｒｅｓ— 测和监测中具有重要的作用，其ＲＯＣ曲线下面积、 ｓｉｏｎ ａｓ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｉｆｎｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｐｓｉｓ ｉｎ ｈｏｓｐｉｔａｌ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ，２０１４，Ａｕｇ ３０．ｐｉｉ：Ｓ００２２－ 敏感性和特异性均优于ＰＣＴ、ＣＲＰ、ＷＢＣ和ＮＥ％。 １７５９（１４１００２４３－９． 因此．对ＩＣＵ患者进行中性粒细胞ＣＤ６４检测．能 ［１ １］Ｇａｃｏｕｉｎ Ａ，Ｒｏｕｓｓｅｌ Ｍ，Ｌｅ Ｐｒｉｏｌ Ｊ＇ｅｔ ａ１．Ａｃｕｔｅ ａｌｃｏｈｏｌ ｅｘｐｏｓｕｒｅ 够较早判断和发现细菌感染．及时采取合理的治 ｈａｓ ａｎ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｉｍｐａｃｔ ｏｎ Ｃ－ｒｅａｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｌｅｖｅｌｓ，ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ 疗措施．改善ＩＣＵ患者的预后，也有助于防止因滥 ＣＤ６４ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ ｓｕｂｓｅｔｓ ｏｆ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｗｈｉｔｅ ｂｌｏｏｄ ｃｅｌｌｓ ｄｉｆ－ 用抗生素而导致耐药菌的产生 临床上应将以上 ｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｂｙ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｉｎ ｎｏｎｔｒａｕｍａ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ１．Ｓｈｏｃｋ， ２０１４，４２（３）：１９２－１９８． 几个项目进行联合检测．以提高阳性率．同时还需 【１２】黎海东，谢文锐，洪卓凡．Ｃ反应蛋白检测在急性肺源性心脏病ｌ临 结合临床表现综合加以评价 由于所选病例均为 床诊断中的价值分析叨．实验与检验医学，２０１３，３１（３）：２５６—２５７． ＩＣＵ患者．故中性粒细胞ＣＤ６４对临床其它疾病患 （收稿日期２０１４—０８—０６；修回日期２０１４—０９—１９１ （上接第６９３页）ＢＬ肺炎克雷伯菌的耐药性对比『Ｊ］．１ｌ缶床医学工 的比较［Ｊ］．现代诊断与治疗，２０１１，２２（２）：１０７—１０８． 程；２０１２．１９（４）：５９８—５９９． ［８】屈玲，李芳芹，艾芳．肺炎支原体快速培养法在儿童呼吸道感染中 ［４］ｎｆ／￣妩，王毓三，申子瑜．全国临床检验操作规程［Ｍ】．第３版．南京： 的应用 延安大学学报：医学科学版，２００９，７（３）：１２１． 东南大学出版社．２００８：８０９． 【９］Ｍｏｒｏｚｕｍｉ Ｍ，ｈｏ Ａ，Ｍｕｒａｙａｍａ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ａｓｓｅｓｓｍｅｎｇｔ ｏｆ ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ＰＣＲ 『５１胡晓彦，桂炳东，王伶，等．ＢＯＸ—ＰＣＲ技术在肺炎链球菌检测中应 ｆｏｒ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ Ｍｙｃｏｐｌｓａｍａ ｐｎｅｕｍｏｒｎｉａ ｉｎ ｐｅｄｉａｔｒｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ［Ｊ］． 用［Ｊ】．实验与检验医学，２０１０，２８（３）：２０９—２１１． Ｃａｎ Ｊ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ，２００６，５２（２）：１２５－１２９． 【６】王荣山，吴亦栋，高世强，等．实时荧光定量ＰＣＲ检测细菌方法的 【１０】张梦宇，郑磊，温淑娟，等．荧光定量ＰＣＲ检测侵袭性曲霉菌感染 建立及其临床应用［Ｊ】．中华围产医学杂志，２００５，８（４）：１４２—２４５． 方法的建立【Ｊ】．南方医科大学学报，２００７，２７（５）：７３１—７３３． 『７１胡周才，丽燕玲．荧光定量ＰＣＲ法与培养法在检测解脲支原体中 （收稿日期２０１４—０８—２５；修回日期２０１４—０９—１７１