西北药学杂志２０１０年１Ｏ月 第２５卷第５期 ３５７ ・药理・ 白芍总苷对体外培养的成骨细胞和破骨细胞的影响 贾 敏，张 寒（西安医学院，陕西西安７１００２１） 摘要：目的 研究白芍总瞽（ＴＧＰ）对成骨及破骨细胞的影响。方法 分别取１ ｄ龄ＳＤ大鼠颅骨及５ ｄ龄ＳＤ大鼠四肢股骨、胫 骨分离培养成骨细胞和破骨细胞。实验分为正常对照组及ＴＧＰ５Ｏ，５，ｏ．５，ｏ．０５和ｏ．００５ ｇ・Ｌ 组，采用ＭＴＴ法检测成骨细 胞、破骨细胞活力，金氏法测定成骨细胞培养上清中碱性磷酸酶（ＡＫＰ）含量。结果ＴＧＰ５０ ｇ・Ｌ－１对成骨细胞的存活能力有明 显的抑制作用，但对ＡＫＰ活性影响不明显；ＴＧＰ５和０．５ ｇ・Ｌ 对成骨细胞的存活能力有明显增强作用，使ＡＫＰ活性明显增 强；ＴＧＰ ０．０５ ｇ・Ｌ 对成骨细胞的存活能力影响不明显，但能明显增强ＡＫＰ活性；ＴＧＰ５和０．５ ｇ・Ｌ 对破骨细胞存活均有明 显的抑制作用。结论 白芍总苷可促进成骨细胞存活、增强成骨细胞的ＡＫＰ活性，过高浓度时则可抑制成骨细胞存活，但对其 活性影响不明显；ＴＧＰ还具有抑制破骨细胞存活的作用。 关键词：白芍总苷；成骨细胞；破骨细胞；碱性磷酸酶 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—２４０７．２０１０．０５．０２１ 中图分类号：Ｒ９６５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４—２４０７（２０１０）０５—０３５７—０３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ ｏｆ ｐｅｏｎｙ ｏｎ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ＪＩＡ Ｍｉｎ。ＺＨＡＮＧ ＨＡＮ（Ｘｉ＇ａｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａａｎｘｉ ｘｉ＇ａｎ ７１００２１） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ ｏｆ ｐｅｏｎｙ（ＴＧＰ）ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ（ＯＢ）ａｎｄ ｏｓｔｅｏ— ｃｌａｓｔｓ（０Ｃ），ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＫＰ ｏｆ ＯＢ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ０Ｂ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｋｕｌｌ ｏｆ ＳＤ ｒａｔｓ ａｇｅｄ １ ｄ ａｎｄ ＯＣ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｔｈｉｇｈ— ｂｏｎｅ ａｎｄ ｓｈｉｎｂｏｎｅ ｏｆ ＳＤ ｒａｔｓ ａｇｅｄ ５ ｄ．Ｔｈｅ ｓｕｒｖｉｖａ１ ｏｆ ＯＢ ａｎｄ ＯＣ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＭＴＴ ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＫＰ ｏｆ ＯＢ ｗａｓ ｅｘａｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｋｉｎｇ－Ａｍｓｔｒｏｎｇ ｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＯＢ ｗａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ ｂｙ ｔｈｅ ＴＧＰ ５０ ｇ・Ｌ一 ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｒｅｉｎｆｏｒｃｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＫＰ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ．Ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｔｉｍｅ，ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＯＢ ｗａｓ ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｅｄ ｅｖ— ｉｄｅｎｔｌｙ ｂｙ ｔｈｅ ５ ｇ・Ｌ ａｎｄ ０．５ ｇ・Ｌ一 ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＫＰ ｃｌｅａｒｌｙ．Ａｎｄ ０．０５ ｇ・Ｌ一 ｈａｓ ｌｉｔｔｌｅ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＯＢ ｂｕｔ ｉｔ ｃａｎ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＡＫＰ ｄｉｓｔｉｎｃｔｌｙ．Ａｄｄｉｔｉｏｎａｌｌｙ．ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ０Ｃ ｗａｓ ｉｎ— ｈｉｂｉｔｅｄ ｍａｒｋｅｄｌｙ ｂｙ ｔｈｅ ＴＧＰ ５ ｇ・Ｌ～ａｎｄ ０．５ ｇ・Ｌ－。．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ＴＧＰ ｃｏｕｌｄ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ０Ｂ ａｎｄ ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉ— ｔｙ ０ｆ ＡＫＰ，ｂｕｔ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃａｐａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ＯＢ ｗａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｈｙｐｅｒ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ＴＧＰ，ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｎｏｔ ｒｅｉｎｆｏｒｃｅ ｔｈｅ ａｅ— ｔｉｖｉｔｙ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ．Ｔｈｅ ＴＧＰ ｃｏｕｌｄ ｒｅｓｔｒａｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ０Ｃ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｔｏｔａｌ ｇｌｕｃｏｓｉｄｅｓ ｏｆ ｐｅｏｎｙ；ｏｓｔｅｏｂｌａｓｔｓ；ｏｓｔｅｏｃｌａｓｔｓ；ＡＫＰ 白芍为毛茛科植物芍药（Ｐａｅｏｎｉａ ｌａｃｔｉｆｌｏｒａ） 用前加入１Ｏ 胎牛血清（ｆｅｔａｌ ｂｏｖｉｎｅ ｓｅｒｕｍ，ＦＢＳ）。 的干燥根，具有通络、止痹、益气、养血的功效，用于治 胎牛血清：杭州四季青生物材料研究所产品，５６℃水 疗风湿、类风湿性关节炎、自身免疫性疾病。近代药 浴３０ ｍｉｎ灭活后使用，于一２Ｏ℃保存备用。胰酶：购 学研究表明，白芍中有效成分主要为一组糖苷类物质 自Ｓｉｇｍａ公司，Ｉ临用前用ＰＢＳ平衡盐溶液配成０．２５ 即白芍总苷（ｔｏｔａｌ ｇｌｕｅｏｓｉｄｅｓ ｏｆ ｐｅｏｎｙ，ＴＧＰ）＿１ ；白 胰酶消化液，用０．２２肚ｍ微孔滤器过滤除菌，于４℃ 芍总苷具有多途径抑制自身免疫反应，对类风湿性关 保存备用。Ⅱ型胶原酶：购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，临用 节炎（ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，ＲＡ）有确切疗效＿２Ｊ。但 前用无血清ＭＥＭ培养液配成１ ｇ・Ｌ Ⅱ型胶原酶 其是否对参与骨代谢过程的成骨细胞和破骨细胞也 消化溶液，用０．２２肚ｍ微孔滤器过滤除菌，于４℃保 有直接的作用未见报道，本实验观察了白芍总苷对体 存备用。ＭＴＴ：购自Ｓｉｇｍａ公司，临用前用ＰＢＳ平 外培养的大鼠成骨和破骨细胞的影响。 衡盐溶液配成５ ｇ・Ｌ＿。，用０．２２ ｍ微孔滤器过滤 １材料与方法 除菌，于４℃避光保存。碱性磷酸酶（ＡＫＰ）测定试 １．１ 动物 １ ｄ、５ ｄ龄ＳＤ新生大鼠，均由南京中医 剂盒：购自南京建成生物工程研究所第一分所，批号 药大学实验动物中心提供，合格证号：ＳＹＸＫ（苏） ２００７０５２３。其他试剂均为分析纯。 ２００５—０００９。 １．３ 主要仪器 ３１１１型ＣＯ２培养箱（美国Ｆ０ＲＭＡ １．２ 药品和试剂 ＴＧＰ（纯度７５ ）由安徽医科大 ＳＣＩＥＮＴＩＦＩＣ公司）；ＩＸ７１型相差显微镜（日本Ｏ— 学临床药理研究所提供，批号２００７０３１２，用含１Ｏ ｌｙｍｐｕｓ公司）；６８０型全自动酶标仪（美国ＢＩＯ—ＲＡＤ ＦＢＳ的ＭＥＭ培养液配成５０ ｇ・Ｌ ＴＧＰ溶液，０．２２ 伯乐公司）；ＴＧＬ一１６ＧＡ型台式高速离心机（上海安 “ｍ微孔滤器过滤除菌，于４℃保存备用。ＭＥＭ培 亭科学仪器厂产品）；７５２紫外光栅分光光度计（上海 养粉：购自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司，临用配以２ ｇＮａＨＣＯ３， 光谱仪器有限公司）。 １Ｏ万ｕ／Ｌ青霉素，１Ｏ万ｕ／Ｌ链霉素，加三蒸水配成１ １．４ 大鼠成骨细胞的分离和培养 出生１ ｄ的ＳＤ Ｌ，调ｐＨ为７．４，用０．２２ ｍ微孔滤器过滤除菌，临 乳大鼠５只，无菌取头盖骨，放人含青霉素、链霉素的【）Ｉ ｈｔｔｐ：／／ｘｂｙｚ．ｅｈｉｎａｊｏｕｒｎａ１．ｎｅｔ．ａｎ ３５８ 西北药学杂志２０１０年１Ｏ月 第２５卷第５期 Ｈａｎｋｓ平衡盐溶液中，洗２～３次，加入０．２５ 胰酶，３７ ℃振荡消化３０ ｍｉｎ，用１ ｍＬ无菌注射器吸弃上清，用Ｉ）Ｉ Ｈａｎｋｓ平衡盐溶液洗２～３次，剪成１ ｍｍ。大小的骨 ０．１ ｍＬ，每组设８个复孔，３７℃、５ Ａｃｏｔ细胞培养箱中 ｏ培养４８ ｈ，收集各孑Ｌ上清液，于１ ５００ ｒ・ｍｉｎ 离心５ ｍｉｎ，取上清，立刻用检测试剂盒测定ＡＫＰ活性，碱 性磷酸酶分解磷酸苯二钠，产生游离酚和磷酸，酚在 块，移入培养瓶中，加入１ ｇ・Ｌ Ⅱ型胶原酶５ ｍＬ 于３７℃振荡消化１ ｈ，轻轻吹打，收集消化液。沉淀 中再加入１ ｇ・Ｌ Ⅱ型胶原酶５ ｍＬ，同上重复消化 碱性溶液中与４一氨基安替吡啉作用经铁氧化 生成红色醌衍生物，根据红色深浅可以测定酶活力的 高低。结果以金氏单位表示（１个金氏单位为１００ ｍＬ 样品在３７℃与基质作用１５ ｍｉｎ产生１ ｍｇ酚）。 １．８统计学分析实验结果以ｚ±ｓ表示，采用单因 １次，将２次消化液合并，过２００目细胞筛，于１ ０００ ｒ・ｍｉｎ 离心１０ ｍｉｎ，弃上清；用培养液洗２次，以洗 去细胞表面消化酶，细胞计数后用含１Ｏ ＦＢＳ的 ＭＥＭ配制后移入培养瓶，每瓶接种细胞约２×１Ｏ ／ 素方差分析法。所有实验数据采用ＳＰＳＳ ｌ１．５软件 Ｌ，５％ＣＯ。、３７℃培养；１２ ｈ后换液，以去除未贴壁细 进行统计学处理。 胞，每２ ｄ换液１次，长满后０．２５ 胰酶传代。 ２结果 １．５ 大鼠破骨细胞的分离和培养 出生５ ｄ的 ２．１ ＴＧＰ对培养的成骨细胞及破骨细胞存活的影 ＳＤ乳大鼠５只，无菌取四肢长骨，放入含青霉素、链 响 见表１。 霉素的冷Ｉ）＿Ｈａｎｋ Ｓ平衡盐溶液中，小心剥离肌肉组 表１ ＴＧＰ对培养的成骨细胞及破骨细胞存活的影响 织，将软组织去除干净，洗２～３次，并将干骺段剪去； （ｉ士ｓ。ｎ＝８） 然后将骨置于５ ｍＬ含１０ ＦＢＳ的冷ＭＥＭ中，先横 向剪成４～５ ｍｍ长的骨段，再纵向剪开暴露骨干内 侧，用吸管反复吹打５～１０ ｍｉｎ，使贴附在骨基质上 的０Ｃ脱落下来；收集含骨髓细胞的培养液，于３５ ｍｍ培养皿中静置１０ ｍｉｎ，收集未贴壁的细胞悬液过 ２００目细胞筛，于１ ０００ ｒ・ｍｉｎ 离心１０ ｍｉｎ使细胞 沉淀；细胞计数后用含１Ｏ％ＦＢＳ的ＭＥＭ配制后移 入培养瓶，每瓶接种细胞约１×１０ ／ｍＬ，５ ＣＯ ３７ 往：与正常对照组比较 Ｐ＜０．０５，“Ｐ＜０．０１ ℃培养，１２ ｈ后换液，去除红细胞和未贴壁细胞，以 表１结果显示，与对照组比较，ＴＧＰ５０ ｇ・Ｌ 组成骨 后每２天换１次液，观察并照相。 细胞存活降低，说明高剂量的ＴＧＰ对成骨细胞存活具 １．６ ＭＴＴ比色法测定成骨细胞和破骨细胞存活＿３ ］ 有明显的抑制作用（Ｐ＜０．０５），过高剂量的ＴＧＰ对成 收集传代的成骨细胞悬液，于１ ０００ ｒ・ｒａｉｎ 离心ｌ０ 骨细胞有一定的细胞毒作用；ＴＧＰ５和０．５ ｇ・Ｌ－ 组成 ｍｉｎ，弃上清，Ｄ－Ｈａｎｋｓ平衡盐溶液洗两遍；细胞计数 骨细胞存活明显升高，还能明显抑制破骨细胞生长 后用含１Ｏ ＦＢＳ的ＭＥＭ调细胞浓度至１ ｘ １０ ／ （Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），说明ＴＧＰ在０．５和５ ｇ・Ｌ ｍＬ，加入９６孔板，每孔０．１ ｍＬ，另加入终浓度为５Ｏ， 剂量范围能促进成骨细胞存活、抑制破骨细胞生长， ５，０．５，０．０５和０．００５ ｇ・Ｌ 的ＴＧＰ；同时设立空白 并呈浓度依赖性。 对照组每孔０．１ ｍＬ，每组设８个复孑Ｌ，３７℃、５ Ｃ０ ２．２ ＴＧＰ对成骨细胞培养上清中ＡＫＰ含量的影响 见表２。 细胞培养箱中培养４８ ｈ。于培养结束前４ ｈ，每孔加 表２ ＴＧＰ对成骨细胞培养上清中ＡＫＰ含量的影响 ５ ｇ・Ｌ 的ＭＴＴ２０ Ｌ，４ ｈ后，将培养基吸出，加入 （ 士 ，，ｌ＝８） １００￣ＬＤＭＳＯ。用６８０型全自动酶标仪在４９０ ｎｍ波 长处测各孔的吸光度（Ａ）值，间接反映细胞存活。 按１．５方法获取的破骨细胞直接接种于９６孔板 中，每孔０．１ ｍＬ，１２ ｈ后换液，以去除红细胞和未贴 壁细胞，同上分组加药，同前法测定吸光度（Ａ）值， 间接反映细胞存活。 １．７金氏法测定成骨细胞培养上清中ＡＫＰ含量Ｅ５３ 注：与正常对照组比较”Ｐ＜０．０１ 收集传代的成骨细胞悬液，于１ ０００ ｒ・ｍｉｎ 离心１０ 表２结果显示，与对照组比较，ＴＧＰ５，０．５和０．０５ ａｒｉｎ，弃上清，工）ＩＨａｎｋｓ平衡盐溶液洗两遍，细胞计数后 ｇ・Ｌ 能明显升高成骨细胞培养上清中ＡＫＰ含量 用含１Ｏ ＦＢＳ的ＭＥＭ调细胞浓度至１×１０ ／ｍＬ，加入 （Ｐ＜０．Ｏ１），说明ＴＧＰ在０．０５～５ ｇ・Ｌ 剂量范围 ９６孔板，每孔０．１ ｍＬ，另加入终质量浓度为５０，５，０．５， 能促进成骨细胞分泌ＡＫＰ，增强成骨细胞活性，并呈 ０．０５和０．００５ ｇ・Ｌ 的ＴＧＰ同时设立空白对照组每孔 浓度依赖性。 西北药学杂志２０１０年１Ｏ月 第２５卷第５期 ３５９ ３讨论 健康成人的骨骼是动态的不断变化的组织，循环 重复着骨吸收一骨重建，该过程是：在骨吸收处首先出 现破骨细胞产生骨吸收，通过细胞凋亡导致破骨细胞 二姜止痛胶囊抗胃溃疡作用的实验 研究 徐晶晶，黄 萍，陈秋铃，邝兆进（广州中医药大学中药 药理教研室，广东广州５１０００６） 摘要：目的研究二姜止痛胶囊的抗胃溃疡作用，为其进一步 消失后¨６］，出现成骨细胞，形成新骨，再被内衬细胞覆 盖。这一过程处于动态平衡状态，从而保持全身骨骼 的强度和完整。在ＲＡ的骨损伤处，特别是增殖的滑 膜向骨内侵入的最前线，可见大量分化功能亢进破骨 细胞，打破了上述平衡，因而产生了骨损伤。目前，临 床治疗类风湿性关节炎的中药主要为雷公藤，但其副 作用大，不良反应多，而且对于逆转ＲＡ晚期的骨质 破坏没有明显的疗效＿７］。白芍总苷作为抗类风湿性 开发应用提供依据。方法 采用大鼠幽门结扎型胃溃疡、水 浸应激型胃溃疡、大鼠醋酸损伤型胃溃疡、大鼠盐酸乙醇型胃 溃疡４种模型进行实脸，观察二姜止痛胶囊对胃溃疡的抑制 作用。结果 二姜止痛胶囊对大鼠幽门结扎型胃溃疡、大鼠 水浸应激型胃溃疡、大鼠醋酸损伤型胃溃疡、大鼠盐酸乙醇型 胃溃疡均有明显的抑制作用。结论抗胃溃疡作用。 二姜止痛胶囊有明显的 关节炎药主要是关于抗炎、抗免疫研究，但对于ＲＡ 炎症后期造成的不可逆骨损伤是否有保护作用未见 有系统报道。 关键词：二姜止痛胶囊；抗胃溃疡；大鼠 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００４—２４０７．２０１０．０５．０２２ 本研究发现，ＴＧＰ能显著提高成骨细胞存活，并 明显抑制破骨细胞生长，对成骨细胞和破骨细胞有直 中图分类号：Ｒ９６５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００４—２４０７（２０１０）０５—０３５９－０３ 接作用，并呈浓度依赖；ＴＧＰ能明显升高成骨细胞培 养上清中ＡＫＰ含量，ＡＫＰ是成骨细胞分化的特异性 标志之一，骨形成时成骨细胞可分泌大量的ＡＫＰ参 与骨的矿化，ＡＫＰ活性可以反映成骨细胞的活跃状 消化性溃疡、慢性胃炎等胃黏膜损伤性疾病是最 常见的一类消化系统疾病。目前在临床上治疗胃炎 及胃溃疡的西药不少，这些药物虽然见效快，但复发 率很高。二姜止痛胶囊由高良姜和干姜等药物组成， 具有温中止痛功效，主治胃寒证所致的胃脘疼痛。本 实验研究了二姜止痛胶囊的抗胃溃疡作用。 １材料 况，并呈浓度依赖性；而过高剂量（ＴＧＰ５０ ｇ・Ｌ ）对 成骨细胞有一定的细胞毒作用，可抑制成骨细胞存 活，但对成骨细胞分泌ＡＫＰ影响却不明显；提示 ＴＧＰ可能通过直接促进成骨细胞活性，抑制破骨细 胞存活，从而调节骨吸收一骨重建动态平衡来防治ＲＡ 骨质破坏。 １．１ 药物二姜止痛胶囊（广州中医药大学新药研 究中心，批号２００１０８２３），给药前将内容物用蒸馏水 配成０．１２，０．２４和０．４８ ｇ・ｍＬ 的溶液，灌胃给药。 阳性对照药：胃乃安（广州中药一厂，批号 参考文献： ［１］沈玉先，魏伟，徐叔云．白芍总甙的药理作用及机制 ［Ｍ］．上海：第二军医大学出版社，１９９７：１６２—１６７． Ｉ－２－１王豫巍，王永钧．白芍总苷在自身免疫性疾病中的药理 ０１０７００４９）；雷尼替丁（澳大利亚福尔丁药业集团佛山 康宝药业有限公司，批号０１０７０３７）；胃康Ｕ（广药集 团广州侨光制药厂，批号０１０４１９）。 １．２动物中心。 研究与临床应用［Ｊ－１．浙江中医药大学学报，２００７，３１ （２）：２４０—２４１，２４４． ＳＤ大鼠，购自广州中医药大学动物实验 数据结果均以平均值士标准差（ｚ Ｅ３－１刘江涛，王永清，张卫国，等．用酶消化一连续组织块法培 养ＳＤ大鼠成骨细胞的研究［Ｊ］．中国中医骨伤科杂志， ２００６，１４（６）：４６－４８． １．３统计方法±Ｓ）表示，实验数据用ＳＰＳＳ １３．０统计软件采用单 因素方差分析法进行分析。 ２方法与结果 ［４－１赵宏艳，鞠大宏，刘梅洁，等．左归丸含药血清对破骨细 胞骨吸收功能的影响以及成骨细胞对其的介导作用 ［Ｊ］．中国中医基础医学杂志，２００６，１２（９）：６６２—６６４． Ｅｓ］郑铁生，叶立新，薛锦．乳鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性检 测方法初探［Ｊ］．中国现代医学杂志，２００６，１６（１０）： １４９５—１４９７，１５００． ２．１ 二姜止痛胶囊对大鼠幽门结扎型胃溃疡的影 响＿】 选取健康ＳＤ大鼠６Ｏ只，雌雄各半，体质量为 ２００￣２５０ ｇ，随机分组为模型对照组、胃乃安组、雷尼 替丁组、二姜止痛高、中、低剂量组。每日灌胃给药１ 次，连续给药７ ｄ。模型组给等体积生理盐水。实验 前，大鼠先禁食４８ ｈ，自由饮水。实验时用乙醚将动 物轻度麻醉，固定，常规消毒，自胸骨剑突下沿腹中线 剪开腹壁（２～３ ｃｍ），将胃轻轻钩出，在胃幽门下穿 线并将幽门结扎（注意不损伤及结扎邻近血管），并于 十二指肠给药１次，对照组给等量蒸馏水。缝合腹壁 ［６］Ｐａｅｉｆｉｃｉ Ｒ．Ｅｓｔｒｏｇｅｎ，ｃｙｔｏｋｉｎｅ，ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ Ｂｏｎｅ Ｍｉｎ Ｒｅｓ， １９９６，１１（８）：１０４３－１０５１． ［７］邱颖文，吴松武，吴贤仁．雷公藤多苷的不良反应ＥＪ］． 西北药学杂志，２００４，１９（５）：２２０－２２２． （收稿日期：２０１０－０４—２０）
