维普资讯 http://www.cqvip.com 复里亏握（医学版） Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖ Ｊ Ｍｅｄ Ｓｃｉ 人尿中金雀异黄素和黄豆苷原的测定 郑力行 诸建辉 常 浩 （复旦大学公共卫生学院劳动卫生教研室上海２０００３２） 【摘要】 目的建立测定人尿中金雀异黄素和黄豆苷原含量的高效液相色谱方法。方法 采用了高效液相色 金雀异黄素的工作曲线范围０．０２８ ４－－１．４２＞ｇ／ｍＬ，回归方程为：ｐ＝９７．１８ 此方法 谱法。条件为ＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３ ４．６ ＩＴＩＩｎ×２５０ ＩＴＩＩＴＩ，５／ａｎ色谱柱；流动相为甲醇：水：冰醋酸（７０：３０：０．２）；检测波长 ２６０ ｒｉｍ；流速为０．７ ｍＬ／ｍｉｎ。结果Ａ＋１９．３５；黄豆苷原的工作曲线范围０．０４３ ２－－２．１６＞ｇ／ｍＬ，回归方程为：ｐ＝８７．５３Ａ＋２６．０３。结论提取简单，准确度与重现性均符合测定要求。 【关键词】人尿； 高效液相色谱法；金雀异黄素； 黄豆苷原 【中国图书馆分类法分类号】Ｒ １５５．５ ３ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ａｎｄ Ｄａｉｄｚｅｉｎ ｉｎ Ｈｕｍａｎ Ｕｒｉｎｅ ＺＨＥＮＧ Ｌｉ—ｘｉｎｇ，ＺＨＵ Ｊｉａｎ—ｈｕｉ，ＣＨＡＮＧ Ｈａｏ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌＨｅａｌｔｈ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，Ｆｕｄａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０００３２） 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ｅｕｒｐｏｓｅ Ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｔＯ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ａｎｄ ｄａｉｄｚｅｉｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｕｒｉｎｅ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ＨＰＬＣ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｗｉｔｈ Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－３ ４．６ ｍｒｎ×２５０ ｍｒｎ，５／ａｍ，ｔｈｅ ｍｏｂｉｌｅ ｐｈａｓｅ ｗａｓ ｍｅｔｈａｎｏｌ：ｗａｔｅｒ：ｇｌａｃｉａｌ ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ（７０：３０：０．２）．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ Ｗａｓ ２６０ ｎｒｎ，ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ０．７ ｍＬ／ ｍｉｎ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ Ｗａｓ ０．０２８ ４～１．４２ ｔ￣ｇ／ｍＬ，ｔｈｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｃｕｒｖｅ ｅｑｕａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐ＝ ９７．１８Ａ＋１９．３５ ｆｏｒ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ；ａｎｄ ０．０４３ ２～２．１６ ｔ￣ｇ／ｍＬ，ｐ＝８７．５３Ａ＋２６．０３ ｆｏｒ ｄａｉｄｚｅｉｎ． Ｃｏｎｃｌｕ－ ｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｉＳ ｓｉｍｐｌｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉＳ ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒａｐｉｄ ａｎｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ． 【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】ｈｕｍａｎ ｕｒｉｎｅ；ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ； ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ；ｄａｉｄｚｅｉｎ 目前研究表明亚洲人群心血管病、骨质疏松、乳 腺癌和前列腺癌的发生率较西方人低，研究发现这 材料和方法 仪器ＨＰＩ１００高效液相色谱仪，二极管阵列 与亚洲人群的饮食习惯有关。人们喜食以低脂、高 糖类的谷类、水果、蔬菜和黄豆类制品，特别是在豆 制品中存在较大量的植物雌激素一异黄酮，它的结 构类似雌激素己烯雌酚，具有雌激素和抗雌激素的 特征。目前在人体中发现的异黄酮有两种主要形 式检测器配３Ｄ化学工作站；ＳＥＰ—ＰＡＫ Ｃ】８柱（ｗａ— ｔｅｒｓ公司）；ＳＢ一２２００型超声波清洗仪（上海必能信超 声有限公司）。 试剂金雀异黄素和黄豆苷原购自美国Ｓｉｇｍａ公 司；甲醇（唧Ｃ级）；冰醋酸、醋酸钠均为分析纯；重蒸 水；０．２ ｒｍｌ／Ｌ醋酸钠一醋酸缓冲液ｐＨ ４．０溶液。 标准品溶液的制备精密称取金雀异黄素３．５５ ｍｇ和黄豆苷原５．４０ ｍｇ置于５０ ｍＬ容量瓶中，加 甲醇稀释到刻度作为贮备液，金雀异黄素７１／￣ｇ／ｍＬ 和黄豆苷原１０８／￣ｇ／ｍＬ。 式：金雀异黄素（ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ）和黄豆苷原（ｄａｉｄｚｅｉｎ）。 它们分别从植物中的两个前身物鸡豆黄素 （ｂｉｏｃｈａｉｎｉｎ—Ａ）和７羟基４ 甲氧基异黄酮（ｆＯ卜 ｍｏｎｏｎｅｔｉｎ）转化而来…。测定人尿中的金雀异黄素 和黄豆苷原对跟踪人群饮食与疾病、防病关系具有 重要作用。 测定人尿中金雀异黄素和黄豆苷原有气相色 谱一质谱联用［２，３］、高效液相色谱法【４，５］。高效液相 尿中金雀异黄素和黄豆苷原提取 将尿液于 一２０℃冰冻，然后在室温下缓缓解冻，离心（２ ５００ ｒ／ｍｉｎ×１０ ｍｉｎ），取上清液２０ ｍＬ，加入０．２ ｔｏｏｌ／Ｌ 醋酸钠一醋酸缓冲液５．０ ｍＬ，混匀后将２５ ｍＬ溶 液注入ＳＥＰ－ＰＡＫ柱（预先经过３ ｍＬ甲醇及３ ｍＬ 色谱法一般都使用了梯度洗脱法，本实验改良了提 取方法，改变了色谱条件，使用了恒洗脱法。 维普资讯 http://www.cqvip.com 郑力行，等．人尿中金雀异黄素和黄豆苷原的测定 ４０９ 醋酸钠一醋酸缓冲液预处理）。先用２ ｍＬ醋酸 钠一醋酸缓冲液淋洗，再用甲醇淋洗，弃去前７滴。 准确收集以后的２ ｍＬ甲醇，并依次加入无水乙醇２ ｍＬ，再加入盐酸１ ｍＬ，在８３℃水浴迥流９ ｈ，用无 结 果 工作曲线范围 取空白尿液２０ ｍＬ，加入不同 量的金雀异黄素和黄豆苷原成一系列标准溶液，按 前述提取方法和色谱方法测定，进样２０ Ｌ，测量峰 面积，以浓度（｜０）对峰面积（Ａ）进行线性回归。得 到：金雀异黄素的工作曲线范围０．０２８ ４～１．４２ ｇ／ ｍＬ’回归方程为：Ｊ０＝９７．１８Ａ十１９．３５；相关系数为 ０．９９２。黄豆苷原的工作曲线范围０．０４３ ２～２．１６ ｇ／ｍＬ，回归方程为：』０＝８７．５３Ａ十２６．０３；相关系数 为０．９９４。 水乙醇加到总体积５．０ ｍＬ。将此溶液离心（２ ５００ ｒ／ｍｉｎ×１０ ｒａｉｎ），取上清液进样２０ Ｌ。 色谱条件Ｉｎｅｒｔｓｉｌ ＯＤＳ－３ ４．６ ｌ＇ｎｌＴｌ×２５０ ｒｎｌＴｌ，５ ｍ色谱柱；流动相为甲醇：水：冰醋酸（７０：３０： ０．２）；检测波长２６０ ｒｉｍ；流速为０．７ ｍＬ／ｍｉｎ；样品 保留时间：金雀异黄素的保留时间为８．９ ｒａｉｎ，黄豆 苷原的保留时间为６．８ ｒａｉｎ，整个色谱过程１８ ｒａｉｎ。 高效液相色谱法系统适用性参数：以标准品金雀异 黄素为基准，理论塔板数为５ ４００；金雀异黄素和黄 豆苷原的分离度为２．３；金雀异黄素的拖尾因子为 精密度试验取空白尿液２０ ｍＬ，加入不同量 的金雀异黄素和黄豆苷原后配制成高、中、低３个浓 度，每个浓度做５份。按前述提取方法和色谱方法 测定，测定的精密度见表１。 表ｌ金雀异黄素和黄豆苷原的测定精密度 Ｔａｂ １ Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ａｎｄ ｄａｉｄｚｅｉｎ（”＝５） ０．９７（图１）。外标法定量。 Ｂ Ｃ Ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ １ Ｄａｉｄｚｅｉｎ Ｓｐｉｋｅ ｃｏｎｅ ＲＳＤ Ｓｐｉｋｅ ｏｏｎｅ ＲＳＤ （ ／ｎ１Ｌ） （％） （ｔ￣ｇ／ｍＬ） （％） 定量限度ＬＩ）Ｑ取尿液２０ ｍＬ，按前述提取方 Ｌ． Ｌ．．Ｊ．．Ｊ．．．Ｌ－Ｌ 法和色谱方法测定它们的检测限，金雀异黄素为 ０．０２８／￣ｇ／ｍＬ，黄豆苷原为０．０２３ ｔ＊ｇ／ｍＬ。 ０ １Ｏ 加样回收率试验图１ 金雀异黄素和黄豆苷原的色谱 Ｆｉｇ ｌ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ａｎｄ ｄａｉｄｚｅｉｎ 取空白尿液２０ ｍＬ，加入金 雀异黄素和黄豆苷原对照品，配制成高、中、低３个 浓度，每个浓度做５份。按前述提取方法和色谱方 法进行测定，将测得的结果与未经提取的对照品进 行对比，得到绝对回收率，数据见表２。 Ａ ｂｌａｎｋ（ｕｒｉｎｅ ｆｒｏｍ ｐｅｒｓｏｎ ｗｈｏ ｄｉｄ ｒｉｏｔ ｔａｋｅ ｂｅａｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ ｔｗｏ ｄａｙｓ）；Ｂ ｓｔｎｄａｒｄｓ ａｏｆ ｄａｉｄｚｅｉｎ ａｎｄ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ；Ｃ ａｎ ｕｒｉｎｅ ｅｘｔｒａｃｔ（ｕｒｉｎｅ ｆｒｏｍ ｐｅｒｓｏｎ ｗｈｏ ｔｏｏｋ ｂｅａｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ） 表２金雀异黄素和黄豆苷原的回收率 Ｔａｂ ２ Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ ａｎｄ ｄａｉｄｚｅｉｎ （”＝５） 样品测定两个志愿者食用不同的豆制品后取 在亚洲人的日常饮食中，许多食品或多或少含 有金雀异黄素和黄豆苷原，因此，要取得一个绝对不 含金雀异黄素和黄豆苷原尿样不太可能。我们采用 不同的时段尿液，按实验设计的方法进行测定。取 志愿者１在８．５、１５、１８ ｈ得金雀异黄素浓度为 １．６３、０．４２、０．１２ ｔ＊ｇ／ｍＬ和黄豆苷原４．７８、０．５４、 ０．１１ ｔ＊ｇ／ｍＬ。取志愿者２在４、５．５、９．５ ｈ得金雀异 黄素浓度为０．１８、０．１５、０．６９ ｔ＊ｇ／ｍＬ和黄豆苷原 ０．１４、０．２５、１．８２ ｔ＊ｇ／ｍＬ。 禁食豆制品类食品２ ｄ后，使金雀异黄素和黄豆苷 原的量减到最小值时的尿样作为空白。 尿样提取的好坏直接关系到色谱分离的结果。 采集的尿液置于冰箱一２０℃冷冻，然后再缓缓解冻 （下转第４１７页） 讨 论 维普资讯 http://www.cqvip.com 邹建洲，等．急性肾功能衰竭伴全身炎症反应综合征临床分析 ４ Ｋｎａｕｓ峭，ＷａｇｎｅｒＤＰ，Ｄｍ￣－ＥＡ，ｅｔ ａ／． ｅＡＰＡＣＨＥｍ Ｐｒｃ￣ｍｏｓｆｉｃ Ｓｙｓｔ￣ｎ：ＲｉｓｋＰｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆＩ－ｋ￣ｉｔｌＭｏｒａｔｌａｉＷｆｏｒＣｒｉｉｔｃａｌｌｙ１］Ｉ Ｉ－ｂｓｐ，ｔａｌ－ ＂４１７ １９９７。２７７（１９）：１５３１ ８ Ｖａｎ－Ｂｍｍａｅｌ ＥＦＨ，Ｈｅｓｓｅ ｃＪ，Ｊｕｎｅ ， ａ１．ＩｍｐａｃｔｏｆＣｏｎｔｉｎＬ￣ｕｓ ｔｚｅｄＡｄｕｌｔｓ．Ｃｈｅｓｔ，１９９１，１００（６）：１６１９ ５ ＢｒｅｍＤ。ＢｉｈａｒｉＤ．Ａ￣ＬＫｅ ｒｅｎａｌｆａｉｌｕｒｅ ａｓ ８ ｐａｒｔ ０ｆｍｕｌｔｉｐｌｅｏｒｇａｎｆａｉｌｕｒｅ： Ｈｍ＇ｌｏｆｉｌｔｒａｆｉｏｎ ｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ ｉｎ Ｏｌｉｇｕｒｉｃ Ｐａ— ｄｅｎｔｓ Ｓｕｆｆｅｒｉｎｇｆｒｃｒｎ Ｓｙｓｔｍ＇ｉｆｃ ＩｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙＲｅｓｐｏｎｓｅ Ｓｙｎｄｒ￣ｎｅ Ｒｅ— Ｔｈｅ ｓｌｉｐｐｅｒｙ ｓｌｏｐｅ ｏｆ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｉｌｌｎｅｓｓ．Ｋ／＆ｕ，ｙ ｌｎｔ，１９９８，５３（Ｓｕｐｐｌ ６６）： Ｓ２５ ｔ Ｆａｉｌ，１９９７，１９（３）：４４３ ９ Ｂｅｌｋｘｎｏ Ｒ．Ｔｉｐｐｉｎｇ Ｐ。Ｂｏｙｃｅ Ｎ．Ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ ｖａ１ ｖ日 ｌｓ ｈｅｍｏｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ 、 ｔｈ ｄｉａｌｙ ｓ ｒ￣ｍｏｖｅｓ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｆｒｃｒｎ ｔｈｅ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｐｔｉｃ ｐａｔｉｎｔｅｓ． Ｃｒｉｔ ＣａｒｅＭｅｄ，１９９３，２１：５２２ ６ Ｐｏｒｔｅｒ ＪＭ，ＩｖａｔｕｒｙＲＲ，ＡｚｉｍｕｄｄｉｎＫ，ｅｔ ｏ．／．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｔ ∞ｐｙｉｎｔｈｅ ｐｒｅｖｅｎｔ ｏｆｏｒｇａｎ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ ｓｙｎｄｙＥｌＴ￣ａｎｄｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ￣ｎｐｌｉｃａｔｉｏｍａｆｔｒ ｅｔｒｓＬｒｆ￣ｅａｒｌｙ ｒｅｓｌｔｕｓ ｏｆ ８ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｒａｎ＆ｒａｋｅｄ ｓｔＬ由．Ａｍ Ｓｕｒｇ， １９９９，６５（５）：４７８ ７ Ａｂｒａｈａｍ Ｅ，Ｇ１＆ｕｓｅｒ ＭＰ，Ｂｕｔｌｒ Ｔ，ｅｔｅ ａ／．ｐ５５ Ｔｕｍｏｒ Ｎｅｃｒｏｓｉｓ Ｆａｃｔｏｒ ＲｅｃｅｐｔｏｒＦｕｓｉｏｎＰｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅＴｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｈＳｅｖｅｌｔ＇ｅＳ ｉｓ １Ｏ丁小强，叶志斌，蔡金根，等．连续性肾脏替代疗法治疗急性肾功 能衰竭伴多脏器衰竭．中华肾脏病杂志，１９９８，１４（５）：３０７ １１ ＳｔａｒＲＡ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｒｅｎａｌ ｆａｉｌｕｒｅ Ｋ ｎｅｄｌｍ，１９９８。５４：１８１７ ａｎｄ Ｓｅｐｔｉｃ Ｓｌ￣ｃｋ：ＡＲａｎｄｏｍｉｚｅｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒ ａ１．ＪＡＭＡ．ｅ （收稿日期：２００２—０１—２２）（编辑：刘忠英） 出乖 筇 希 铂 尔 希 希 乔 尔 芥 乔 尔 希 乔 希 钎 铂 场 （上接第４０９页） 和离心可除去尿液中的大量盐分、组织黏液等干扰 性物质。从回收率的情况来看，如尿样中待测物的 本法可用于流行病学调查或服用某些中药后体 内金雀异黄素和黄豆苷原量变化的研究。 参考文献 含量较大时回收率将有所下降，究其原因可能是如 果待测物含量较大时ＳＥＰ—ＰＡＫ柱有超载的现象，因 此尿样不可多于２０ ｍＬ。实验时将尿样注入ＳＥＰ— ＰＡＫ柱并用醋酸一醋酸钠缓冲液处理后，用甲醇洗 李承慧．植物雌激素的探讨．国外医学・计划生育分册，２０００，１９ （２）：８７ ２ Ａｄｌｅｒｃｒｅｕｔｚ Ｈ，Ｍａｒｋｋａｎｅｎ Ｈ，Ｗａｔａｎａｂｅ Ｓ，Ｐｌａｓｍａ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ 脱，弃去前７滴甲醇，这样既可除去多余的缓冲盐又 可保证样品的回收率。经过这样处理的尿样在色谱 分析时可采用恒洗脱方法进行，而不必采用梯度洗 脱法。 ｐｈｙｔｏ－ｏｅｓｔｒｏｇｅｎｓ ｉｎ Ｊａｐａｎｅｓｅ ｍｅｎ．ＬＡＮＣＥ丁，１９９３，３４２（１３）：１２０９ ｔｏｎ ＭＳ，Ｗｉ１ｃｏｘ Ｇ，Ｗａｈｌｑｖｉｓｔ ＭＬ．ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｉｇ— ３ Ｍｏｒｈａｎｓ ａｎｄ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｆｅｍａｌｅ ｐｌａｓｍａ ｆｏｌｌｏｗｉｇ ｄｉｎｅｔａｒｙ ｓｕｐ— 由于尿样中的杂质太多，在本实验中除用保留 时间来确定待测物外，同时结合３Ｄ软件中的光谱 图将尿样中的待测峰与对照品的峰进行光谱对比来 进一步确证。此外还进行了多次盲试实验，即让一 ｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＪＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１９９４，１４２：２５１ ４ Ｆｒａｎｋｅ ＡＡ．Ｃｕｓｔｅｒ ＬＪ．Ｈｉｇｈ－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ８８一 ｓａｙ ｏｆｉｓｏｆｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄ ｃｏｕｍｅｓｔｒｏｌｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｕｒｉｎｅ．ＪＣｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ，１９９４，６６２：４７ ＴｈｏｍａｓＢＦ，Ｚｅｉｓｅｌ ＳＨ，ＢｕｓｂｙＭＧ，ｅｔ ａ１．Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆｔｈｅ ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ｓｏｙ ｉｓｏｆｌａｖｏｎｅｓ ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ，ｄａｉｄｚｅｉｎ ａｎｄ ｇｌｙｃｉｔｅｉｎ，ａｎｄ ｔｈｅｉｒ 位志愿者在２ ｄ内食用不同量的豆制品，分别采集 尿样用同样的方法测定；同时让志愿者在食用豆制 品后收集不同时间段尿液用来测定，发现其中的金 雀异黄素和黄豆苷原的量与时间的关系曲线与文献 ｐｒｉｍａｒｙ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓｍａ ａｎｄ ｕｒｉｎｅ ｕｓｉｇ ｒｅ—ｎ ｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ ｈｉｇｈ—－ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗｉｔｈ ｕｌｔｒａｖｉｏ．． １ｅｔ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ Ｂ，２００１，７６０：１９１ ［５］报道相符。 （收稿日期：２００２一叭一１７）（编辑：张秀峰）
