酶解法制备植物抗氧化肽及其应用

源以及植物抗氧化肽的应用，为植物抗氧化肽的制备和应用提供借鉴。关键词：酶解；植物肽；抗氧化活性

中图分类号:TS214. 2 文献标志码：A 文章编号= 1003-6202(2019)06-0016-05Preparation of plant antioxidant peptides by enzymatic hydrolysis and its applicationJIANG Shan,ZHANG Kang-hua,MA Qing-lin, DAI Long,GAO Peng(School of Pharmacy, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250300, China)ABSTRACT: As a kind of natural antioxidant, plant antioxidant peptides have high antioxidant activity and high safety. The raw

materials are cheap and easy to obtain, and the preparation process is simple, which has attracted the attention of various indus­

tries. This paper mainly reviews the preparation of antioxidant peptides from enzymatic sources, the plant sources and applica­

tion of plant antioxidant peptides in recent years, which provides reference for the preparation and application of antioxidant peptides from enzymatic sources.KEYWORDS:Enzymatic hydrolysis； plant peptide； antioxidant activity天然、廉价、高效、低毒已成为目前抗氧化剂发 展的一个必然趋势，并且从天然植物中寻找自由基 消除剂也将是现代食品和药品行业的发展趋势。氧

副产物少等优点，因此是制备植物源抗氧化肽的主 要方法。酶解技术用到的酶的分类如表1所示。植 物种子类抗氧化肽制备多采用植物种子提取植物用 油后留下的副产品进行酶解制备,原料廉价易得，产

化是使食物变质的主要因素，脂质的氧化更会使食

物产生不理想的气味并且可能会诱发毒性，缩短食

物抗氧化活性高，表2为近年植物源抗氧化肽的来 源整理。品保质期，阻碍食品工业发展。通过化学方法合成 的抗氧化剂毒性较大，风险较高。从植物蛋白获得 的活性肽被认为是安全抗氧化剂的天然来源。植物 抗氧化肽的制备有多种途径，主要包括化学水解法、

表1动物蛋白酶酶解技术用到的酶的分类植物蛋白酶菠萝蛋白酶木瓜蛋白酶无花果蛋白酶微生物蛋白酶霉菌蛋白酶胰蛋白酶胃蛋白酶凝乳酶酶解法、发酵法和重组DNA技术合成法。其中酶 解法获得的植物活性肽主要为小肽或寡肽形式而非

细菌蛋白酶酵母蛋白酶单个氨基酸工，能提高氧化抑制率和消化利用率且 成本较低，备受各个产业重视，酶水解植物蛋白制备 抗氧化活性肽已成为一种趋势。2酶解法制备抗氧化肽2.1 植物蛋白提取前处理大多数植物种子富含油脂，对蛋白质提取存在 影响，黄秋葵种子约含有20%的蛋白质，脱脂后可

1酶种类及植物活性肽来源经过酶水解得到小肽或者寡肽,产物氧化抑制

率高，与化学水解反应相比,酶水解法具有无化学试

达55%口7〕。因此，可预先对植物种子进行脱脂预处

理或者直接用工业提取油脂后剩余的饼粕作为原 料。徐清莹等［以将紫花芸豆粉用正己烷脱脂6 h,

剂污染、安全性高、条件温和、易于控制、专属性强、

收稿日期：2019-02-16；修回日期：2019-05-12基金项目：国家自然科学基金项目(81073031);山东省重点研发计划项目(2017GSF19102)。 作者简介：姜 珊(1996-),女，硕士研究生，研究方向为中药新制剂、新剂型研究。通讯作者:高 鹏(1978-),男，副教授，研究生导师，研究方向为中药新制剂、新剂型研究。姜 珊等：酶解法制备植物抗氧化肽及其应用/2019 617取前要进行破壁处理,Montone等口8讨论了机械和 化学7种破坏顽固组织的方法，优选出玻璃珠研磨 顽固性组织破壁的方案。经前处理后的植物原料通

离心取沉淀物烘干后进行蛋白质提取。施文卫等⑷

将一定量的鹰嘴豆种子粉碎过筛后用石油醴反复浸

泡脱脂，脱脂豆粉用于蛋白质提取。海洋藻类由于 具有坚固的细胞壁和非蛋白干扰化合物，蛋白质提

植物来源常采用碱提酸沉法提取植物蛋白。抗氧化活性测定指标表2植物源抗氧化肽酶种类肽序文献大豆碱性蛋白酶碱性蛋白酶， 中性蛋白酶Tyr-Glu, Asp-Tyr-ArgLeu-Tyr, Leu-Ala-Gly -ArgPhe-Ser-ArgDPPH自由基清除能力、径基自由基清除能 力、超氧阴离子清除能力.ABTS自由基清

除能力、还原力[2]DPPH自由基清除能力氧自由基清除能力：3]黑豆碱性蛋白酶，中性 蛋白酶，风味蛋白酶Tyr-Asn-IleTyr-Asn-ProAsn-Arg-Tyr-His-GluRQLPR[4][5]鹰嘴豆碱性蛋白酶DPPH自由基清除能力，轻基自由基清除能

力，超氧阴离子清除能力，亚油酸自氧化的 抑制率超氧阴离子清除能力胰蛋白酶麦胚胰蛋白酶 碱裡蛋自酶碱性蛋白酶中性蛋白酶AREGETVVPGDPPH自由基清除能力总抗氧化能力小麦大米Pro-TyrLeu-TyrAla-Pro-Ser-TyrLeu-Gln-Pro-TyrWPRGYFL GPDRPKFLGPF WYGPDRPKFL SDWDRF蛋白酶k（自主发酵制得）碱性蛋白酶DPPH自由基清除能力斜纹夜蛾微藻红藻DPPH自由基清除能力 ABTS自由基清

除能力口0]Corolase PP. A碱性蛋白酶Ser-AspIle-Thi^Arg-Pro-Gly-Gly-Gln-Me 等 17 个肽氧自由基清除能力铁还原能力口1]：12]番茄种子杏仁LIRHVIQSR GHSVIYVQVal-Leu-Tyr-Ile-TrpSer-Val-Pro-Tyr-GluDPPH自由基清除能力轻基自由基清除能力DPPH自由基清除能 力还原力过氧自由基清除活性ABTS自由基清除能 力碱性蛋白酶风 味蛋白臨碱性蛋白酶碱性蛋白酶蛋白酶kE13]口4]刺桐DGLGYY SKDAPY山核桃螺旋藻LAYLQYTDFETRPro-Asn-AsnABTS自由基清除能力轻基自由基清除能 力DPPH自由基清除能力[15]口6]DPPH自由基清除能力 羟基自由基清除

能力超氧阴离子清除能力2.2 酶解前处理2.2.1热处理未经处理的植物蛋白分子高度压缩、结构紧密,

总黄酮和植物油也」。它的机械作用和空化作用可

以加速细胞内有效成分的扩散释放，使蛋白质的结 构展开，增加酶与肽键的碰撞频率，使酶解液中疏水

水解比较困难，蛋白质在水解前进行热处理可使蛋 白质构象改变，改变蛋白质的二级结构，使被包埋的

性氨基酸含量升高，从而提升植物肽的抗氧化能力。 但是超声功率太小，对细胞壁的破碎程度不足，超声 功率过大蛋白质过度水解，导致具有自由基清除能 力的结构破坏，使得超声处理达不到预期效果妙扛

酶解位点暴露，增加蛋白质的酶解敏感性，提高原料 的利用率［珂。例如，玉米蛋白分子由于氢键、疏水

键、二硫键等作用，使肽键卷曲于蛋白质分子内部近 此外，过高的超声功率瞬间热效应过于明显，使局 部温度过高而导致酶变性、活性下降,也会影响植物 肽的抗氧化性能。似于球状，且玉米黄粉中的淀粉与蛋白紧密结合在 一起形成层层包裹的复合体，导致玉米蛋白的酶解 速度、原料的利用率以及玉米生物活性肽得率较低。

2.2.3 高压处理高压可以改变蛋白质三级、四级结构的非共价

玉米蛋白经30 min 110°C处理，水解度比未处理玉

米蛋白提高了 9. 80%跑。键，但对大多数球状蛋白质的二级结构影响较小。 压力仅通过体积变化影响内部蛋白质相互作用。因 此,压力不会像温度那样诱导共价键的破坏。超高 压处理可以使蛋白结构变松散，更容易被酶水

2.2.2 超声波处理超声波是一种弹性机械波，广泛应用在食品工 业中，不仅能用于制备植物抗氧化肽,还能辅助提取

18解〔旳。例如蛹虫草蛋白质在高温高压的情况下，肽

姜 珊等：酶解法制备植物抗氧化肽及其应用/2019 £Rg 6 ffl离状态;影响酶和底物的结合，影响酶促反应的进

键断裂数目明显增加，有利于小肽产品的生成〔旳。 行。底物的物理状态也会影响酶解反应速度，比如 将蛋白块切小，可增加和酶接触面积,从而使反应速 率加快。因此，通常需要通过单因素实验、正交实

Zhang等〔旳对鹰嘴豆的实验结果表明，200 MPa的 处理压力足以破坏维持蛋白质构象的弱键，肽链的

特定排列被破坏，有助于更大程度地暴露碱性蛋白 酶的反应位点，可显著增加酶解反应的水解速度和 水解度，明显提高水解产物的抗氧化活性。验、响应面实验对酶的最佳反应条件进行筛选。徐 飞等［旳在单因素的基础上，以dpph自由基清除 能力、径基自由基清除率和水解度为响应值,采用响 应面(RSM)中心组合实验，确定出玉米肽酶解最佳 工艺条件。刘进杰等匚阿以轻基自由基清除率、DP-

2.2.4高压脉冲处理近年来，随着食品、化学等领域对高压脉冲电场 技术(PEF)研究的不断深入，高压脉冲电场作用于

PH自由基清除率和总还原力为评价指标，在单因 蛋白质和多肽的研究逐渐增多。张鸣镐等〔旳研究

高压脉冲电场技术对于红松籽抗氧化肽活性的影 响,PEF处理的电场强度n. 5 kV/cm,脉冲频率

1 500 Hz,流速4. 8 ml/min,在此最佳工艺条件下， 1~3 kDa红松籽抗氧化肽的DPPH清除率可达

(86. 93士0.31)%。与未处理样品的DPPH清除率

(6& 16 + 0. 25)%比较，经高压脉冲电场处理后， 1〜3 kDa红松籽抗氧化肽的抗氧化活性提高了

1& 77%。分析其原因可能是，1〜3 kDa红松籽抗

氧化肽的R2C=CH2键和 一CHs发生改变导致 其活性升高。2.2.5微波处理微波辐射技术涉及众多领域，如冰冻食品解冻、

食品杀菌、干燥、橡胶硬化处理、焦煤处理等等。近 年来,微波辅助酶解工艺的优势逐步显现出来。有

资料表明,微波辅助处理蛋白质，可使其结构变得更 松散，使大豆蛋白变性,暴露出更多的作用位点与酶 结合,缩短反应时间，提高酶解效率,进一步提高水 解度，最终提高产率。王楠等跑在微波功率 300 W、微波时间5 min、酶添加量5%、底物含量

8%的条件下，甲鱼蛋白抗氧化肽的DPPH自由基

清除率达(8& 79 士 0.68)%，对应的水解度为

12. 99%,较未被微波处理的肽DPPH自由基清除

率(77. 45 + 0. 76)%,提高 11.34%。2.3 温度、pH值、底物浓度等对酶解的影响酶解植物蛋白所用的酶和酶解条件的筛选优化 是获得抗氧化肽的关键。酶的筛选要综合考虑酶的 特性、原料蛋白的来源及目标产物类型等。而酶解

条件主要指优选反应pH值、反应温度和底物浓度， 从而控制酶解程度和酶解速度匚旳。温度对酶具有

双向影响,在适宜的温度范围内，温度每升高io°c, 酶解速率可以提高1〜2倍，但温度过高又会导致酶 变性失活。酶在最适范围内表现出最强活性，pH 值可以影响酶发挥催化活性所依赖的侧链基团的解

素试验基础上，进行了正交试验。结果表明，在最佳

条件下中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧化肽的羟基 自由基清除率是92. 790%,DPPH自由基清除率为

18.941%，代表总还原力大小的吸光度为1.507。

有研究表明，水解度与酶解肽的抗氧化活性不是简

单的线性关系，水解过度会引起一部分具有抗氧化

能力的肽段发生部分水解，降解成活性较小或者丧 失活性的肽段或者氨基酸口口。因此,需要应用水解 度和其他指标共同进行最佳酶解条件筛选，制备抗

氧化活性肽。3抗氧化肽的应用3.1 抗疲劳与抗氧化研究发现,抗氧化与缓解体力疲劳具有一定的 关系。戴维斯等人在1982年研究发现了运动诱发

自由基生成增多的直接证据，人体运动时产生的大

量自由基,使得脂质过氧化增加，破坏生物膜脂质双

层结构，同时攻击膜内疏基，最终能够导致功能降低

而使机体产生疲劳凹」。抗氧化黑豆肽的相对分子 质量约在450~920,具有Phe、Val、Pro、Met疏水性

氨基酸和Thr、Cys、His等含量较高的氨基酸组成 特点，可以延缓由自由基引发的疲劳购。3.2饲料肽制品不仅本身具有丰富的营养价值,又有防

病抗病等多种功能。可以预见，肽制剂将成为继维 生素、氨基酸之后在饲料中又一种必不可少的添加

物叫大量研究表明，小肽能促进蛋白质合成，避 免氨基酸竞争吸收，促进矿物质吸收利用，提升机

体的免疫性能〔旳。通过添加0. 5%植物小肽后，中

国白兔平均日增重增加，平均日采食量明显降低。 中国白兔日粮中添加植物小肽还可以增强断奶至2 月龄中国白兔生长性能和免疫性能〔遡。2%植物小

肽组能显著增加哺乳期母猪采食量，显著提高乳猪

日增重量，降低乳猪腹泻率并且能提升乳猪成活

姜 珊等：酶解法制备植物抗氧化肽及其应用/2019 6[参考文献]19率卩5」。添加生物活性肽能够提高凡纳滨对虾免疫

力和抗氧化能力，增强凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感 染的能力阿。tn梁方方，郑兰红.海洋生物抗氧化肽的综合应用研究进展m.

食品工业，2017(10):236-239.3.3 化妆晶皮肤被自由基过度氧化会造成皮肤干燥、暗淡、

[2] 刘文颖，陈亮,谷瑞增，等.中试规模酶解制备的大豆低聚肽

中抗氧化肽和ACE抑制肽的分离和鉴定(英文)□].现代食

晶科技，2017(9):153-1.黑眼圈和皮肤松弛等问题，因此抗自由基对于护肤 必不可少。化妆品中加入抗氧化剂不仅可以增加化 妆品稳定性,还能赋予其抗皮肤氧化功效〔遡。目前

[3] 刘文颖，谷瑞增，鲁军，等.大豆低聚肽中抗氧化駄的分离纯

化及结构鉴定[J].食品与发酵工业，2017(2):48-52.M刘恩岐，巫永华,高兆建，等.抗氧化黑豆肽的分离纯化与结构

鉴定[J].中国粮油学报，2016, 31(2)=33-37.抗衰老化妆品的发展更加注重所添加活性成分的天

然性与综合应用，消费者对化妆品安全、无刺激性的

[5] 李艳红.鹰嘴豆蛋白酶解物的制备及其抗氧化駄的研究[D].

需求则促进了天然活性成分一生物多肽在化妆品 中的应用。植物抗氧化肽有较强的DPPH自由基 清除能力、轻基自由基清除能力、超氧阴离子清除能

力，能有效对抗由过量自由基导致的皮肤衰老。樊 金娟等研究发现,高剂量(500 mg/kg bw)米糠抗氧

化肽可明显降低脑mtDNA缺失突变水平，米糠抗

氧化肽能够提高D-gal致衰老小鼠的抗氧化能 力〔叭3.4食話抗氧化添加剂食品在贮运过程中易发生油脂氧化导致食物色

泽改变、产生腐臭味，破坏食品体系的稳定性。有研 究表明，在食品中添加抗氧化肽可抑制脂质过氧化， 防止食物酸败，从而保持食品的营养价值及新鲜度O

植物蛋白是天然抗氧化剂的重要来源，原料廉价易

得，安全性高，相比化学合成的抗氧化剂，具有一定

的优势。4展望抗氧化肽活性的体内实验目前大多处于实验室 阶段，抗氧化肽的功效研究多采用体外试验，如抑

制脂质氧化、清除自由基、化学试剂方法等,体内抗

氧化性研究较少。生物体内的氧化过程极其复杂， 因而导致在采用体外化学法评价抗氧化肽活性时，

显示较高的抗氧化活性肽未必在生物体内也能取得

良好的抗氧化效果。因此，抗氧化肽在生物体中的 应用具有一定的局限性。抗氧化肽的分离制备技术

由于成本高、耗时耗力、蛋白回收率不高等缺点在一 定程度上阻碍了抗氧化肽的商品化进程，探索新型

快速并能大规模从植物源蛋白中制备抗氧化活性肽 的方法迫在眉睫植物活性肽作为一种活性成

分添加在食品、化妆品、饲料中时，是否会和其他成 分发生相互作用，降低活性或者产生毒性还有待于 开展更深一步的实验研究。无锡：江南大学，200&[6] 施文卫，王伟，胡冰，等.胰蛋白酶制备鹰嘴豆抗氧化肽的

条件优化[J].食品科学，37(15),185-191.[7] 陈思远，刘永祥,曹小舟，等.从麦胚清蛋白分离制备高活性抗

氧化肽[J].中国农业科学，2016, 49(12)：2 379-2 38&[8] 刘文颖，谷瑞增，鲁军，等.小麦低聚肽中抗氧化肽的分离纯

化及结构鉴定[J].食品工业，2016(6)=106-10&[9] 赵晓蕾，田甜,胡远亮，等.大米抗氧化肽的分离纯化及结构

鉴定[J].华中农业大学学报，2017(2):102-107.[10] MONTONE C M , CAPRIOTTI A L , CAVALIERE C , et

al. Peptidomic strategy for purification and identification of

potential ACE-inhibitory and antioxidant peptides in Tet-

radesmus obliquus microalgae]J]. Analytical and Bioanatical

Chemistry, 2018,15：3 573-3 586.口 1] PADRAIGI N A. HARNEDY, OKEEFFE M B , FITZ­

GERALD R J , et al. Fractionation and identification of an­

tioxidant peptides from an enzymatically hydrolysed Palmaria

palmata protein isolate [J]. Food Research International,2017, 100(1):416.[12] NASIM M , ALIREZA S M , FARAH H , et al. Production

of antioxidant peptide fractions from a by-product o£ tomato

processing： mass spectrometry identification of peptides and

stability to gastrointestinal digestionEJj. Journal of Food Sci­ence and Technology, 2018(9) : 3 498-3 507.口3] ZHANG H , XUE J , ZHAO H , et al. Isolation and Struc­

tural Characterization of Antioxidant Peptides from Degreased

Apricot Seed Kernels [J]. Journal o£ AOAC International,2018, 101(5):l 661-1 663.口4] INTIQUILLA A , JIME NEZ-ALIAGA, KARIM, GUZ­

MAN» FANNY, et al. Novel antioxidant peptides obtained

by alcalase hydrolysis of, Erythrina edulis, (pajuro) protein

EJJ. Journal of the Science of Food and Agriculture, 2018,30

(5)：2 420-2 427.口5] HU F , CI A T , WANG H , et al. Ident田cation and hy­

drolysis kinetic of a novel antioxidant peptide from pecan meal

using Alcalase]J]. Food Chemistry, 2018, 261 ：301-310.[16] YU J , HU Y , XUE M , et al. Purification and Identifica­

tion of Antioxidant Peptides from Enzymatic Hydrolysate of Spirulina platensis[J]. J Microbiol Biotechnol, 2016, 26(7):

1 216-1 223.[17] 郭 淑，田 硕,程安玮，等.酶解黄秋葵籽蛋白制备抗氧化肽

20的工艺优化［J］.食品研究与开发,2018,39(24):91-97.姜 珊等：酶解法制备植物抗氧化肽及其应用/2019£H6ffl化肽的工艺优化［J］・食品工业科技,2015,36(21):218-222.口 8］徐清莹，马 萍，陆 涛，等.响应面优化紫花芸豆蛋白水解及

多肽抗氧化研究［J］•中国食品添加剂，2017(7):73-79.［30］ 刘进杰，岳思涵，邹宁，等.中性蛋白酶水解螺旋藻制备抗氧

化肽的工艺研究［J］•食品工业,2018,39(11):27-31.口 9］胡佳丽.基于超声/热处理的玉米蛋白抗氧化肽制备及其特性

研究［D］.镇江:江苏大学，2016.［31］ 马萍，郭增旺,迟志平，等.双酶分段水解制备紫花芸豆肽工

艺优化及抗氧化测定［J］.中国食品添加剂，2018(2):166-

［20］ 王晓杰，刘晓兰,丛万锁，等.原料热处理对玉米醇溶蛋白结构

性质和酶解效率的影响［J］.现代食品科技，2015(11):170-

176.［32］ 曹海信，赵启权，李世明.生物自由基与运动性疲劳的研究进

展［J］.四川体育科学，2006(4):33-35.176.［21］ 班若男，康兴兴，张圣燕.超声波辅助酶解法提取冬枣叶中总

黄酮工艺的研究［J1山东化工，2018,47(17):42-44.［33］ 刘恩岐，李 华,巫永华，等.黑豆肽的抗氧化活性与缓解体力

疲劳作用［J］.食品科学，2013, 34(11):273-277.［22］ 杨雪，李云亮,王禹程，等.超声波预处理对大米蛋白酶解产

物ACE抑制率的影响［J］.中国食品学报,2018,18(12):150-

［34］ 蒋金津，陈立祥.小肽的营养特性及其在动物生产中的应用

［J］.中国畜牧兽医,2010, 37(6):17-20.［35］ 赵必迁.植物小肽对热应激哺乳母猪生产性能的效应［J］.养

猪,2016(6):7-8.156.［23］ 王章存，徐贤.超高压处理对大豆蛋白酶解物的影响口］.中

国酿造，2009, 28(2):132-134.［36］ 仪凤菊.植物小肽对中国断奶白兔生长性能的影响「□.山东

畜牧兽医,2018(4):7-8.［24］ 张新武，麦雄健.酶与高压蒸煮耦合水解蛹虫草蛋白质的工艺

研究「J1 食品工业,2018(4)： 129-133.［37］ 王玲.生物活性肽对凡纳滨对虾生长、免疫及抗氧化性能的

影响「DL广州：华南农业大学,2016.［25］ ZHANG T, JIANG B,MIAO M,et al. Combined effects of

high-pressure and enzymatic treatments on the hydrolysis of

chickpea protein isolates and antioxidant activity of the hy­

E38］徐石鹏，许 锋，伍 娟，等.海洋肽类物质的性质及其在化妆

品中的应用口］.广东化工，2017(18):103-104.drolysates口］. Food Chemistry,2012,135(3) ：831-839.［26］ 张鸣镐，姜源，李雄，等.高压脉冲电场技术提高红松籽抗

氧化肽活性口］.农业工程学报,2015,31(14) ：272-277.［39］ 樊金娟，付岩松,宗立立，等.米糠抗氧化肽的抗衰老作用口］.

食品科学,2010,31(23):40-43.［40］ 曹小舟，刘永祥，俞凌，等.植物蛋白源抗氧化肽活性的评价

方法及作用机制的研究进展［J］.食品工业科技，2016, 37

［27］ 王 楠，陈晓媛,饶桂维，等.微波辅助酶解对甲鱼蛋白肽抗氧

化活性的影响口］.中国食品学报，2017(11),136-142.(13):355-359.E28］王竹清，李八方.生物活性肽及其研究进展［J］.中国海洋药

物,2010(2):60-68.(责任编辑:梅竹)［29］徐飞，成向荣,施用晖，等.双酶水解玉米醇溶蛋白制备抗氧Rhyzoperthadominica (F) (Coleoptera： Bostrychidae) [J].

(上接第12页)[10] KORUNIC, Z. Diatomaceous earths, a group of natural in-

Pest Manag Sci,2005,61:660-666.[15] KORUNIC Z. Rapid assessment of the insecticidal value of

secticidesEJ], J Stored Prod Res, 1998,34：87-97.Ell] ATHANASSIOU C G, VAYIAS B J, DIMIZAS C B, et al.diatomaceous earths without conducting bioassays [ J ]. J

Stored Prod Res,1997,33：219-229.口6] FIELDS P G, KORUNIC Z. The effect of grain moisture

Insecticidal efficacy of diatomaceous earth against Sitophiluso-

ryzae(L. ) (Coleoptera： Curculionidae) and Triboliumconfu-

sumdu Vai (Coleoptera： Tenebrionidae) on stored wheat: in­

fluence of dose rate, temperature and exposure interval[J]. J Stored Prod Res,2005,41 ：47-55.口2] SEHGAL B, SUBRAMANYAM B H. Efficacy o£ a new del-

content and temperature on the efficacy of diatomaceous earths from different geographical locations against stored-

product beetles]〕]. J Stored Prod Res,2000,36 ：1-13.[17] ARTHUR F H. Immediate and delayed mortality of Oryzae-

philussurinamensis (L. ) exposed on wheat treated with dia­

tamethrin formulation on concrete and wheat against adults of laboratory and field strains of three stored-grain insect species

tomaceous earth: effects o£ temperature, relative humidity and exposureinterval[J^|. J Stored Prod Res,2001,37 ； 13-21.口 8] ARTHUR F H. Survival ofSitophilusoryzae (L. ) on wheat

[J]. J Econ Entomol, 2014,107,2 229-2 23&口3] SEHGAL B, SUBRAMANYAM B H, ARTHUR F H,et

al. Variation in susceptibility of laboratory and field strains of

treated with diatomaceous earth: impact of biological and en­

three stored-grain insect species to (3-cyfluthrin and chlorpyri- fos-methyl plus deltamethrin applied to concrete surfaces]」].

vironmental parameters on product efficacy]J]. J Stored Prod

Res,2002,38:305-313.[19] BIAN Q, KINGSLY ARP, SUBRAMANYAM B H. Effect

o£ chaff on bulk flow properties of wheat [J]. J Stored Prod

Pest Manag Sci,2014,70：576-587.[14] KAVALLIERATOS N G, ATHANASSIOU C G, PASHA-

LIDOU F G, et al. Influence o£ grain type on the insecticidal efficacy of two diatomaceous earth formulations against

Res,2015,:21-26.(责任编辑:梅竹)