微生物的分布实验报告

微生物的分布实验报告

篇一：微生物实验报告 微生物实验报告

一环境中的微生物的检测和分离纯化 实验目的：

1 学习并掌握无菌操作技术原理和方法 2 学习用稀释涂布法分离微生物

3 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的原理 实验材料：

1 土样溶液0.5ml，无菌生理盐水

2 取液器(1000μL一支，100μL一支)，培养箱，培养皿(12个)，无菌有帽试管，三角瓶，无菌涂棒，接种环，1000μL无菌吸头若干，记号笔，酒精灯，火柴，试管架 实验步骤：

A培养基的制备(已提前制备好)

B周围环境中的微生物的检测，在牛肉膏蛋白胨培养基平板上作如下实验

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1 取三个平板，用100μL的取液器分别吸取100μL的河水、豆浆、豆奶，均匀加在三个培养基上，并用无菌玻璃涂棒涂布均匀(要多涂几次，时间约1-2分钟，使细菌均匀分布)。 2 再取三个平板，三个同学分别用手指(未洗过)在培养基上涂抹几秒钟，一个同学对应一个平板。 3 再取一个平板，其中一个同学将手用肥皂洗过后，再在培养基上涂抹。

4 再取一个平板，打开皿盖，一个同学对着培养基咳嗽，使口腔中的气流和飞沫落到培养基上。

5 再取一个平板，打开皿盖，在空气中放置10min左右，关上皿盖。

6 将上述9个平板放置在35℃的培养箱中培养24h。 C土壤中分离微生物

1 采土样，制备土壤稀释液(已准备好)

2 取三个平板，每个培养基上用取液器添加100μL的土壤稀释液，并用无菌玻璃涂棒涂布均匀(要多涂几次，时间约1-2分钟，使细菌均匀分布)。

3 将平板依旧放在35℃的培养箱中培养24h。 D菌落计数

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培养24h后，取出培养平板，算出每个平板上的菌落数量。其中，土样中的微生物含量可用以下式子计算 土壤中的细菌含量(个/g土壤)=菌落平均数×10×稀释倍数

实验结果及数据： 实验结果如附图。 开盖10min 手指直接按压 手指直接按压手指直接按压

1号的手指经肥皂洗后按压对着培养基咳嗽 豆奶河水

土壤溶液土壤溶液 豆浆土壤溶液 实验讨论及感想：

1根据你对周围环境中微生物存在的观察，你认为无菌操作要注意什么？

在进行无菌操作的时候，应该要注意始终在明火旁边操作，既不能离得太远，也不能离得太近。因为在明火旁边可以减少空气中的微生物进入操作器具中的概率。

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2在日常生活中如何让讲究饮食和生活卫生？ 生活中，剩菜剩饭应该存放在冰箱内或是干燥低温处，尽量避免适宜微生物生长繁殖环境。

3试解释夏天时煮好的饭如果放在锅中保持盖着锅盖不动，不容易变质，而一旦盛在碗里饭就容易变质，如果是吃剩的剩饭就更容易变质的原因。

煮好的饭由于高温，本身含有的微生物被杀死，保持盖着锅盖不动，外界的微生物难以进入，但是一旦盛在碗里，抑或是吃剩的剩饭，由于跟空气直接接触，大量微生物会在其表面生长繁殖，导致其变质。

4根据实验结果，试从微生物的角度批驳“洁癖行为”。 完全的洁癖行为是不存在的。就算东西收拾的再干净，也有无数肉眼看不见的微生物依然停留在器具表面，无法完全清除掉，所以，“洁癖行为”是永远无法达到的。 二固定化酵母细菌发酵啤酒实验与酸奶制作 实验目的：

1 了解固定化细胞技术的方法和意义 2 了解酵母发酵产生啤酒的过程 3 学习酸奶制作方法

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4 了解纯种发酵和传统发酵在无菌操作方面的区别 实验材料：

1 无菌滴管，无菌封口膜封好的100ml三角瓶 2 发酵培养基：100ml8%-10%的麦芽汁装于250ml三角瓶中

3 浓度为2.5%的海藻酸钠溶液5ml，灭菌 4 浓度为1.5%的CaCl250ml，灭菌 5 浓度为0.9%的无菌生理盐水，5ml 6 袋装巴氏消毒的牛奶， 7 啤酒菌种：啤酒酵母 8 酸奶菌种：市售酸奶 实验步骤：

A固定化酵母细胞发酵啤酒

1 菌体培养：将培养了24h的新鲜斜面菌种接种于三角瓶中培养。

2 细胞固定化：在预热至35℃的海藻酸钠溶液中加入2ml预热至35℃的酵母培养液，混合均匀，以无菌滴管(离液面5cm以上，离液面太近无法制得凝胶珠)缓慢而稳定的

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滴入CaCl2溶液中，即可得到直径约为3mm左右的凝胶珠。注意无菌操作。钙化30分钟左右。 3 固定化细胞发酵啤酒：在无菌玻璃棒的帮助下倒掉CaCl2溶液，将生理盐水倒入制得的固定化好的酵母细胞的瓶子中，洗一次凝胶珠，倒掉生理盐水。将100ml发酵培养基(麦芽汁)倒入制得的固定化小球的瓶子中，用无菌封口膜封好瓶口。20-28℃静置培养24h。注意无菌操作。

4 放置在4℃的冰箱中冷藏一段时间，品尝啤酒。 B制作酸奶

1 取1000ml鲜奶搅拌煮沸消毒，加白糖60g搅拌溶解，乘热分装到干净无菌的100ml三角瓶中，用无菌封口膜封好瓶口。让其自然冷却(冷却中最好能摇晃三角瓶2-3次，以免乳脂结皮)。用洁净的封口膜将三角瓶口盖住。冷至40℃(不烫手)时，取市面上销售的未经过灭菌的原味酸奶按5%(体积分数)比例倒入溶解好的糖的牛奶中，摇匀。 2 或直接把是受经过巴氏消毒的“无抗牛奶”分装到干净无菌的100ml三角瓶中，加入6%(质量分数)白糖，摇晃确保使糖分充分溶解，取市面上销售的未经过灭菌的原味酸奶按5%(体积分数)比例倒入溶解好糖的牛奶中，摇匀。三角瓶可用一次性纸杯或塑料杯代替，封口膜可用白纸代替。

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3 在42℃的情况下，三角瓶(纸杯或塑料杯)静置发酵培养6-8h(如果用纸杯盛牛奶，白纸封口，由于传热慢，需要发酵10-12h)。牛奶变为不流动的酸奶时，停止发酵。 4 置于4℃的冰箱中24h以上，待冷却老熟后便得到酸奶。 5 品尝酸奶。 实验附图 我制作的酸奶 实验讨论及心得 我制作的酸奶

1 谈谈固定化细胞技术的意义。

固定化技术就是将生物酶或细胞固定在一定的基质上。与传统方法相比，该技术具有能多次使用菌体的特点，简化了操作步骤。

2 试述纯种发酵和传统发酵在无菌操作方面的差异。 纯种发酵对无菌操作的要求较高，因为是在成分单一的发酵基质中，仅接入一种微生物，通过对该种微生物的培养，得到纯度较高的单一性产物，所以对无菌操作的要求也较高一些。

3 为何有的同学用无菌滴管把海藻酸钙与酵母菌混合

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液滴加入CaCl2溶液时，未得到凝胶珠，而得到了不规则形状的固体？

可能是在滴加的时候没有保证逐滴加入，使得大量的混合液聚集在一起，形成了不规则形状的固体。

4 在制作酸奶时，为什么要使用“无抗奶”作为原料？ “无抗奶”即不含抗生素的牛奶，在制备酸奶的时候，如果不使用无抗奶的话，牛奶中含有的抗生素会杀死原味酸奶中的乳酸菌，导致无法正常发酵，也就无法制成酸奶。 篇二：微生物学实验报告

XX级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: XX304090 班级: 制药12-2班 指导老师：王健 日期：XX.6.11 一、实验目的

1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的

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菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。

7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容

1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 ˉˉ

1.1 实验原理：染色原理：G+菌与G菌细胞壁不同，G+菌比G菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+ ˉ

菌比G等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥；

②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面；

1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域；

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②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥；

1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 三、分离培养

1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这

些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。 2实验步骤 2.1示教：观察普通平板、麦康凯平板、血平板、四区分离划线平板，手机摄像。 2.2 分离划线培养：

预实验：以灭菌接种环与普通平板背面做四区分离划线； 正式试验：○1以灭菌接种环取细菌少许，在普通平板上划

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线，划线区域约占整个平板的1/10~1/5,划线间不能有交叉现象；○2以灭菌接种环自第一区2~3个交叉，然后依次分离划线，约占整个区域的1/3~1/4；○3依上法进行3、4区分离划线；○4倒置平皿置37℃温箱培养24h，观察记录实验结果，手机摄像。

四、细菌初步生化反应：

1实验原理：具有的细菌，能催化过氧化氢生成水和新生态氧，继而形成分子氧出现气泡。 2实验步骤

2.1色素试验：取滤纸条，两次对折，以折角小心取菌落少许，小心展开，观察记录，手机拍照；

2.2 氧化酶试验：取上述含菌滤纸条，滴加氧化酶试剂一滴，观察记录，手机拍照； 2.3 触酶试验：以灭菌接种环取细菌少许，置一洁净玻片表面，另设NS对照，各加一滴新制的3%H2O2, 观察记录，手机拍照； 五、细菌药敏试验：

1实验原理：将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸取平板中的水分溶解后并不断先向纸片周围扩散，形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内的细菌的生长被抑制，形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反应测试细菌对测定药物的敏感程度，并

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与该药物对测试菌的MIC呈负相关（抑菌圈越大，MIC越小）。 2实验步骤：

2. 1以灭菌接种环取细菌少许，与普通平板做密集划线； 2.2 以无齿镊小心夹取定量药效纸片，按六边形贴于培养及表面，倒置平皿置37℃温箱培养24h，观察记录实验结果，手机拍照。 3 实验结果： 六．实验分析与讨论

1无菌操作：所有取菌种前都要将接种环灭菌，取菌时培养基也不能开太大的口，取完以后应及时盖好并放好，以防止菌种被污染。操作应当在火焰旁做。

2冷却操作：加热灭菌接种环后，应室温下冷却，否则会因高温杀死细菌。。

3接种操作时应当执笔式握接种环，轻轻触碰菌种，再接种到有生理盐水的玻片上，太少或者太多对实验都有所影响。

4染色操作：边染色边轻轻晃动以让染色剂充分覆盖菌种，冲洗时不要倾斜太大角度，不可直接对着菌落冲洗,以防把细菌冲洗下去。

5分离培养琼脂很软，划线时注意手腕用力，只在其表

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面划线。

6生化实验过程中细菌出现气泡说明细菌中有过氧化氢酶。用试纸取菌种注意是否取到，否则做出来是无色的。对照实验时注意菌种没有加生理盐水，而空白对照式生理盐水，触酶实验时注意及时拍照。

7药敏实验：纸片旁边出现抑菌环。贴纸片时应注意力度不要把琼脂划破。

篇三：微生物实验报告(微生物形态观察、分布、灭菌消毒) 微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌 细菌形态观察 一、实验目的 1. 2. 3.

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4.

5. 掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 掌握细菌的三种形态 掌握临床常见细菌的形态及染色 掌握细菌的特殊结构 了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理

1. 普通光学显微镜（油镜）的使用

1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时

停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护

1. 移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前

2. 油镜用毕后， 要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最

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后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头

3. 镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4. 做好使用记录 3． 微生物知识 1． 细菌按形态分类：

球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）

杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）

螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2． 细菌的基本结构

细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3． 细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌

鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌

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菌毛

芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4． 微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。

原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体

真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5． 真菌

单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌 多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。如：霉菌 6． 白假私酵母菌（白念）

生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落 厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定

致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、 内脏感染、CNS感染 微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生

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孢子、假菌丝 7． 新型隐球菌

生物学性状 ：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）

致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢 性脑膜炎

微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体 外围有宽厚荚膜为阳性 三、实验材料

记号笔：1支；大镊子：1支；火柴： 1盒；蜡笔：1支；试管架： 1个；酒精灯：1个；接种环： 1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个 四、实验内容 1. 观察细菌三种形态 1）球菌

链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双

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球菌（蚕豆形）、四联菌 2）杆菌

破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌 3）螺形菌

弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌

2. 观察细菌的特殊结构

芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌

3. 绘图

葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira) 五、实验结果

绘8幅细菌镜下图，已交。

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六、思考与讨论

1． 显微镜高倍镜使用时看不清楚的常见原因 （1） 未滴加镜油 （2） 镜头不干净

（3） 标本放置反了，所以达不到对焦平面 （4） 制片问题：标本太厚、染色误差等 细菌分布 一、实验目的

1. 掌握固体培养基的制备

2. 掌握机体常见部位及环境中的细菌采样、培养、及初步鉴定

3. 掌握革兰氏染色方法及结果判定 二、实验原理 1. 培养基：

1． 细菌生长所需营养物质：水、碳源、氮源、无机物和生长因子

2． 培养基分类：

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（1）根据营养物质：营养培养基、选择培养基、鉴别培养基

（2）根据物理性质：液体培养基、固体培养基和半固体培养基

3． 细菌在培养基中的生长状况：表面生长、均匀浑浊生长、沉淀生长 2. 革兰氏染色：

革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖(peptidoglycan)层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，通道弯曲，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过，因而将染料洗去而被脱色。 三、实验材料

咽拭子、羊血培养皿：1套/人；大号普通培养皿：1块/2人；载玻片：1片/人； A、B菌：6套/桌；NS：1份/人；滤纸：1张/人；消毒液：4套/桌；三角瓶、电天平、营养琼脂、称药纸、称药勺、量筒：1套/桌 四、实验内容 1. 培养基制备

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1）按产品要求称取营养琼脂 2）每实验桌制备200ml

3）高压蒸汽灭菌后，在洁净工作台内倒平皿 4）所制备的普通平皿用于空气培养 2. 机体不同部位的细菌采样、培养 1）咽部正常菌群的采样、培养

咽拭子擦拭咽部，平行划线法接种于羊血平皿。 2）手指消毒前后细菌的采样培养

未消毒手指平行划线法接种于普通平皿；同一手指碘酒、酒精消毒后平行划线法接种于普通平皿。 3. 环境中细菌采样培养 1）空气培养

将培养皿打开暴露于空气中，20分钟后盖好平皿盖儿 2）流通纸币（或硬币）的细菌采样培养 将硬币正反面分别在培养基上充分接触

3）采样结束后，将培养皿底部朝上放入铁丝筐，统一置培养箱：37℃ 18-24小时

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4. A、B、C菌鉴定（革兰氏染色法） 1）. 细菌涂片制备程序：

（1）取一干净玻片，火焰上方缓缓通过三次去油 （2）蜡笔画线将玻片分割为A、B、C三区域 （3）接种环取生理盐水分别滴入A、B两区域各一滴 （4）分别取少许A、B 、C菌 ，与生理盐水充分混匀成菌液，风干后形成菌膜

（5）固定（火焰上方缓缓通过三次） （6）革兰氏染色

（7）滤纸吸干水分，油镜观察 2）. 革兰氏染色： （1）细菌涂片、火焰固定 （2）结晶紫初染 1min （3）卢戈氏碘液媒染 1min （4）95%乙醇脱色 30-40s （5）沙黄复染 1min 五、实验结果

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A：G+，球菌，推测为金黄色葡萄球菌； B：G-，短杆菌，推测为大肠杆菌； 六、思考与讨论

1． 影响革兰氏染色的因素： （1）细菌本身因素：

菌龄：如果菌龄太大，可能出现假阴性 （2）操作因素

涂片：取菌应适量，涂片要均匀，如果某个部分菌层太厚，可能在脱色时达不到，会导致局部假阳性

固定：固定温度太高或时间太长都会导致细菌结构破坏而出现假阴性；但是固定不够，细菌会在水洗时被冲掉 初染：初染时间虽然说是1分钟，但是可以适当延长，时间太短会出现假阴性；染色滴加不均匀可能出现半阴半阳 媒染：和初染一样

脱色：脱色时间不能过长，基本上用酒精滴过之后马上水冲就可以了，否则容易出现假阴性

复染：复染时间需足够长，否则可能会染不上

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