液相⾊谱作为⼀个既能⽤于微量组分的分析测定,⼜能⽤于⼤量的制备分离的仪器,具有灵活多样的特点,其应⽤范围已超过其他各种分离⽅法,尤其在中药样品的分析分离⽅⾯更为突出。在液相⾊谱使⽤过程中,⽐较常见的峰形异常⼀般有下列⼀些情况: 1)所有峰均为负峰。解决⽅法:信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒;光学装置尚未达到平衡。
2)所有峰均为宽峰。解决⽅法:系统未达到平衡;溶解样品的溶剂极性⽐流动相差很多;⾊谱柱尺⼨及类型选择不正确;⾊谱柱或保护柱被污染或柱效降低;温度变化造成的影响。
3)⾊谱图中未出峰。解决⽅法:系统未进样或样品分解;泵未输液或流动相使⽤不正确;检测器设置不正确;针对以上情况成因作相应调整即可。
4)⼀个峰或⼏个峰是负峰。解决⽅法:流动相吸收本底⾼;进样过程中进⼊空⽓;样品组分的吸收低于流动相。
5)所出峰⽐预想的⼩。解决⽅法:样品黏度过⼤;进样品故障或进样体积误差;检测器设置不正确;定量环体积不正确;检测池污染;检测器灯出现问题。
6)出现双峰或肩峰。解决⽅法:进样量过⼤;样品浓度过⾼;保护柱或⾊谱柱柱头堵塞;保护拄或⾊谱柱污染或失效;柱塌陷或形成短通道。
7)前伸峰。解决⽅法:进样量或样品浓度⾼;溶解样品的溶剂较流动相极性强;保护柱或⾊谱柱污染或失效。
8)拖尾峰。解决⽅法:柱超载,降低样品量;增加柱直径采⽤较⾼容量的固定相;峰⼲扰,对样品进⾏清洁过滤;调整流动相;硅羟基作⽤,加⼊三⼄胺,⽤碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相pH值;柱内烧结不锈钢失效,更换烧结不锈钢;加在线过滤器,对样品进⾏过滤;死体积或柱外体积过⼤,将连接点降⾄最低;尽可能使⽤内径较细的连接管;柱效下降,更换柱⼦;采⽤保护柱,对柱⼦进⾏再⽣。 9)出现⿁峰。解决⽅法:进样阀残余峰,在每次进完样后⽤充⾜的时间来平衡和清洗系统;样品中存在未知物,改进样品的预处理;流动相污染,更换新流动相,尽可能现配现⽤,隔夜的流动相再次使⽤时要过滤;尽可能使⽤HPLC级试剂;流路中有⼩的⽓泡,打开Purge阀,加⼤流速排除。
10)出现平头峰。解决⽅法:检测器设置不正确;进样体积太⼤或样品浓度太⾼。
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