实验八 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

【目的】

验证丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。

【原理】

琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验用亚甲蓝（MB）作为受氢体，亚甲蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯白（MBH2）。丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察亚甲蓝颜色消退的程度，可以判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制程度。

COOHCH2CH2COOH琥珀酸 亚甲蓝（蓝色）COOH+MB琥珀酸脱氢酶丙二酸（-）CHCHCOOH延胡索酸+MBH2还原性亚甲蓝（无色）

【器材】

试管及试管架、滴管、剪刀、研钵或20ml匀浆器、电热恒温水浴箱。 【试剂】

1. 0.1mol/L磷酸缓冲液（PH7.4）

取0.1mol/L Na2HPO4溶液19ml和0.1mol/L NaH2PO4溶液81ml混合即可。 2. 1.5% 琥珀酸钠溶液 3. 1% 丙二酸钠溶液 4. 0.02% 亚甲蓝溶液 5.液状石蜡 【操作】

1. 取新鲜动物肌肉或肝5g左右，放入研钵，用剪刀将组织剪碎，然后加入10ml在冰箱中保存的PH7.4的磷酸缓冲液充分研磨均匀（或在匀浆器内进行匀浆，制备成20%匀浆液）。

2. 取4支试管，编号，按下表操作：

表3-11 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用

加入物（滴）

匀浆 1.5%琥珀酸钠溶

液 1%丙二酸钠溶液

蒸馏水 0.02%亚甲蓝溶液

3. 各管混匀后，各加少量液状石蜡覆盖在液体上，置37℃水浴中保温，随时观察各管颜色变化，并记录各管亚甲蓝褪色时间。

【结果及分析】

比较各管亚甲蓝褪色情况，并对实验结果进行分析。 【思考题】

1. 什么是竞争性抑制作用，与非竞争性抑制作用有何不同。

2. 为什么要用石蜡油隔绝空气来进行实验？

1 10 10 － 20 10

2 10 10 10 10 10

3 － 10 10 20 10

4 10 20 10 － 10