论 善 Ｊ Ｍｅｄ Ｒｅｓ，Ｊｕｌ ２０１３，Ｖｏ１．４２ Ｎｏ．７ ｔｒａｌ ａｎｄ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ 高。例如，长期服用咖啡因，一种非选择性的Ａ 受 体拮抗剂，已被许多研究证实与高血压有关¨ 。然 而，这种高血压效应只与服用高剂量的咖啡因有关 （＞２５０ｍｇ／ｄ），服用低剂量咖啡因（＜２５０ｍｇ／ｄ）则与 高血压无关。另一方面，高血压的表型已有报道出现 ２ ｔｏ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ Ａ１ ａｎｄ Ａ２Ａ ｓｕｂｔｙｐｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｇｏｎｉｓｔｓ［Ｊ］．Ｂｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００５，１４４（５）：６４２—６５０ Ａｄａｉｒ ＴＨ．Ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｅｍｅｒｇｉｎｇ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｇｕｌ Ｉｎｔｅｇｒ Ｃｏｍｐ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００５，２８９ （２）：Ｒ２８３—２９６ ３ Ｄｏｆｆｍｕｌｌｅｒ Ｐ，Ｈｕｍｂｅｒｔ Ｍ，Ｐｅｒｒｏｓ Ｆ，ｅｔ ａ１．Ｆｉｂｒｏｕｓ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖｅｎｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ 在Ａ 受体敲除ＣＤ１系小鼠（远系繁殖），但在纯代 １２９Ｓｖ或Ｃ５７ＢＬ／６，以及杂合１２９Ｓｖ和Ｃ５７ＢＬ／６遗传 背景小鼠中未发现高血压 。腺苷是体内重要的炎 症调节因子，可通过外周Ａ： 受体抑制多种炎性细胞 ｗｉｔｈ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ［Ｊ］．Ｈｕｍ Ｐａｔｈｏｌ，２００７，３８（６）：８９３— ９０２ ４ Ｃｈｅｎ ＪＦ，Ｈｕａｎｇ Ｚ，Ｍａ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ａ２Ａ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ａｔ— 的聚集和炎症介质的释放，并可抑制血小板聚集、减 少粒细胞黏附到血管内皮细胞和减轻中性粒细胞诱 ｔｅｎｕａｔｅｓ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｆｏｃａｌ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｉｎ ｍｉｃｅ［Ｊ］． Ｊ Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，１９９９，１９（２１）：９１９２—９２００ ５ Ｄａｙ ＹＪ，Ｈｕａｎｇ Ｌ，ＭｃＤｕｆｆｉｅ ＭＪ，ｅｔ ａ１．Ｒｅｎａｌ ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｉｓｃｈｅｍｉａ ｍｅｄｉａｔｅｄ ｂｙ Ａ２Ａ ａｄｅｎｏｓｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ—ｄｅｒｉｖｅｄ ｃｅｌｌｓ 导的血管内皮细胞功能紊乱，从而发挥抗血管闭塞的 作用。然而，Ａ 受体敲除小鼠未发现肺血管炎症细 胞浸润、水肿、纤维化和肺泡间隔细胞募集或肺泡壁 ６ ［Ｊ］．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ，２００３，１１２（６）：８８３—８９１ Ｍｏｕｄｇｉｌ Ｒ，Ｍｉｃｈｅｌａｋｉｓ ＥＤ，Ａｒｃｈｅｒ ＳＬ．Ｈｙｐｏｘｉｅ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｖａｓｏｅｏｎ— 结构改变等现象，提示Ａ 受体敲除导致的ＰＡＨ并非 通过炎症性肺动脉闭塞的途径而实现。 ７ ｓｔｒｉｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００５，９８（１）：３９０—４０３ Ｔｕｄｅｒ ＲＭ，Ｍａｒｅｃｋｉ ＪＣ，Ｒｉｃｈｔｅｒ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ 本研究发现成年小鼠（１４～１６周）Ａ 受体敲除 ８ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｓｔ Ｍｅｄ，２００７，２８（１）：２３—４２ Ｓｈｉｆｒｅｎ Ａ，Ｄｕｒｍｏｗｉｃｚ ＡＧ，Ｋｎｕｔｓｅｎ ＲＨ，ｅｔ ａ１．Ｅｌａｓｔｉｎ ｉｎｓｕｆｆｉｃｉｅｎｃｙ ｐｒｅｄｉｓｐｏｓｅｓ ｔｏ ｅｌｅｖａｔｅｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｃｉｒｃｕｌａｔｏｒｙ ｐｒｅｓｓｕｒｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｃｈａｒｔ－ 可致ＰＡＨ表型，因此推测Ａ 受体基因缺失可能会在 小鼠的肺发育进程中其影响其肺血管重构，即小鼠孕 早期（Ｐ３～Ｐ８，肺泡快速增殖期）和出生后晚期（Ｐ４２， 肺泡形成期）。如果能对Ａ 受体敲除小鼠出生后早 期（如２～４周龄）进行血流动力学和组织学检测，可 区分肺血管重构是肺动脉高压的诱发因素还是继发 因素。另外对更成熟的小鼠（如ｌ２～ｌ４月龄）进行 血流动力学和组织学检测，可以揭示ＰＡＨ及其相关 病理改变的进展情况。 参考文献 １ Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ ＣＷ．Ｋａｒｃｚ—Ｋｕｂｉｃｈａ Ｍ．Ｔｈｏｒｎｄｉｋｅ ＥＢ．ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｅｎ． ｇｅｓ ｉｎ ｅｌａｓｔｉｃ ａｒｔｅｒｙ ｓｔｒｕｅｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００８，１０５（５）： １６１０—１６１９ ９ 汤秀英，杜军保，石云，等．缺氧性肺动脉高压肺腺泡内动脉结构 重建的超微结构观察［Ｊ］．电子显微学报，２００４，２３（４）：３０３ １０ ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ ＶＶ，ＭｃＧｏｏｎ ＭＤ．Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｉａｌ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ［Ｊ］． Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００６，１１４（１３）：１４１７—１４３１ １ １ Ｗｉｎｋｅｌｍａｙｅｒ ＷＣ，Ｓｔａｍｐｆｅｒ ＭＪ，Ｗｉｌｌｅｔｔ ＷＣ，ｅｔ ａ１．Ｈａｂｉｔｕａｌ ｃａｆｆｅｉｎｅ ｉｎｔａｋｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ ｉｎ ｗｏｍｅｎ［Ｊ］．ＪＡＭＡ，２００５，２９４ （１８）：２３３０—２３３５ （收稿日期：２０１３—０２—２０） （修回日期：２０１３—０２—２２） 脑脊液微量总蛋白检测体系 最低检出限的非参数评估方案 殷 舟 陈屹一 蒋朱秀 邵浙新 摘 要 目的利用非参数统计的评估方案，评估脑脊液微量总蛋白检测体系的最低检出限（ＬｏＤ）。方法根据数据分布 模型，以非参数统计的方法确定空白标本检测结果的第９５百分位数作为空白检测限（ＬｏＢ），通过ＬｏＤ＝ＬｏＢ＋ｔＢ×ｓ１氐 的数学模 型来评估ＬｏＤ。结果脑脊液微量总蛋白检测体系的ＬｏＤ为０．０３６ｇ／Ｌ，通过验证程序证明该ＬｏＤ值有效。结论采用非参数统 基金项目：浙江省教育厅基金资助项目（Ｙ２０１１２２２４６）；浙江省康恩贝医院管理软科学研究基金资助项目（２０１２ＺＨＡ—ＫＥＢ２０５） 作者单位：３１０００３杭州，浙江中医药大学附属第二医院（殷舟、蒋朱秀）；浙江大学医学院附属第一医院（陈屹一、邵浙新） 通讯作者：陈屹一，电子信箱：ｐａｐｅｒ９７５０２２＠ｓｉｎａ．ｃｏｒｎ ・７０・ 医学研究杂志２０１３年７月 第４２卷第７期 ・论 善・ 计原理设计的评估方法可用于空白标本检测结果不符合正态分布，标准曲线为非直线线性的检测体系的ＬｏＤ评估。 关键词 最低检出限 非参数统计非正态分布 Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｌｉｍｉｔ ｏｆ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ Ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ Ｆｌｕｉｄ Ｔｏｔａｌ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｂｙ Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ． Ｙ／ｎ Ｚｈｏｕ，Ｃｈｅｎ Ｙｉｙｉ，Ｊｉａｎｇ Ｚｈｕｘｉｕ，Ｓｈａｏ Ｚｈｅｘｉｎ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ Ａｆｉｌｉｆａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ ３１００００，Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｓｔｉｍａｔｅ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ（ＬｏＤ）ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｌｆｕｉｄ ｔｏｔａｌ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＣＳＦ—Ｐｒｏ） ｂｙ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｔｈｅｏｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｍｏｄｅｌｓ ａｎｄ ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ９５ ｐｅｒｃｅｎｔｉｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｂｌａｎｋ ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｓ ｄｅｉｆｎｅｓ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｂｌａｎｋ（ＬｏＢ），ｔｈｅｎ ＬｏＤ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ＣＳＦ—Ｐｒｏ ｉｓ ｅｓｔｉｍａｔｅｄ ａｓ：ＬｏＤ：ＬｏＢ＋ｔＢ×ＳＤｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ＬｏＤ ｏｆ ＣＳＦ—Ｐｒｏ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｗａｓ ０．０３６ｇ／Ｌ，ａｎｄ ｗａｓ ｐｒｏｖｅｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｂｙ ｖｅｒｉｉｃａｔｆｉｏｎ ｐｒｏｃｅ— ｄｕｒｅｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ａｐｐｒｏａｃｈ ｔｈａｔ ｐａｒｔｌｙ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｗａｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｙ ｏｆ ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｔｈｅｏｒｙ ａｐｐｅａｒｅｄ ｕｓｅｆｕｌ ｆｏｒ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄ ｔｈａｔ ｂｌａｎｋ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎｓ ａｒｅ ａｓｙｍｍｅｔｒｉｃ，ｎｏｎｇａｕｓｓｉａｎ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ，ａｎｄ ａ ｎｏｎｌｉｎｅａｒ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ ｃｕｒｖｅ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ；Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ；Ｎｏｎｇａｕｓｓｉａｎ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ 目前很多医学实验室检测项目的最低检出限 （１ｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ＬｏＤ）评估方案都基于参数统计原 理，只适用于空白标本测定结果符合正态分布、标准 曲线为直线线性的检测体系¨ 。本文探讨应用非 参数统计方案，来确定基于邻苯三酚红钼络合显色法 原理的脑脊液微量总蛋白（ＣＦＳ—Ｐｒｏ）检测体系ＬｏＤ， 并验证其有效性¨’ 。 对象与方法 １．对象：（１）空白标本来源：血液净化室当天制备的不含 Ｘ ｓ１氐 。（３）ＬｏＤ的验证：根据评估结果配制待测物浓度为 ＬｏＤ水平的低值标本，利用当天制备新鲜的空白标本和ＬｏＤ 水平低值标本，各进行ｌＯ次重复检测，连续检测５天，记录５Ｏ 例检测结果。重新计算ＬｏＢ，并检查５Ｏ例ＬｏＤ水平低值标本 的检测结果中高于ＬｏＢ的比例。根据Ｌｉｎｎｅｔ等 关于ＬｏＤ有 效性检验的统计学推断，当这一比例＞８８％时，可认为ＬｏＤ ＊ 有效。 ３．统计学方法：数据用均数±标准差（ ±Ｓ）表示，用ＳＰＳＳ １５．０统计软件软件包进行分析，利用Ｑ—Ｑ正态概率图和 蛋白成分的透析液。（２）低值标本来源：透析液和Ｐｒｏ标准液 （ｃ＝１．Ｏ００ｇ／Ｌ）以一定比例（Ｖ ｉ葭：Ｖ ＝２４：１）充分混匀 后在室温下平衡３０ｍｉｎ，得到低浓度标本（Ｃ＝０．０４０ｇ／Ｌ），在 ２ｈ内完成标本的检测。（３）ＬｏＤ 水平的低值标本来源：透 析液和Ｐｒｏ标准液（ｃ＝１．Ｏ００ｇ／Ｌ）以一定比例（Ｖ ｉ疰：Ｖ ｉ葭 ＝Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ—Ｓｍｉｒｎｏｖ值进行数据分布的正态性检验；两组数 据间的比较用样本ｔ检验；多组数据间的比较用单因素 方差分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 结 果 １．空白标本检测结果的正态性检验：空白标本检 测结果的Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ—Ｓｍｉｒｎｏｖ值为０．２３０（Ｐ＜ ０．００１）；空白标本检测结果的频数分布图（图１Ａ）显 示，所有检测结果在零的单侧分布，不符合对称分布 规则；Ｑ—Ｑ正态概率图（图１Ｂ）上散点的分布基本 不呈一条直线，可认为空白标本检测结果不服从正态 分布。 ２６：１）充分混匀后在室温下平衡３０ｍｉｎ，得到待测物浓度接 近于ＬｏＤ估计值水平的低值标本（ｅ＝０．０３７ｇ／Ｌ），在２ｈ内完 成标本的检测。 ２．方法：（１）检测体系的准备：①仪器的准备：在实验前对 仪器进行日常开机维护、清洗反应杯、检测杯空白、更换孵育 水；②标准曲线的制备：通过多点定标绘制该检测体系在低浓 度范围的标准曲线；③质量控制：分别检测高、低值质控品浓 度，检测结果要求在控制范围内，否则要查明失控原因并做出 相应处理后重新绘制标准曲线，质量控制合格后才能继续。 ２．ＬｏＢ和ＬｏＤ的计算：利用ＳＰＳＳ １５．０统计软件 进行样本ｔ检验并绘制检测结果分布散点图（图 ２），比较后发现：空白标本组检测结果（ｘ 自＝ ０．００６ｇ／Ｌ， 空白＝０．００７４ｇ／Ｌ）和低值标本组检测结果 （ 低值＝０．０４１ｇ／Ｌ， 低值＝０．００８７ｇ／Ｌ）有显著性差异 （２）ＬｏＤ的评估：利用当天制备的新鲜的空白标本和低浓度标 本，各进行ｌＯ次重复检测，连续检测５天。采用非参数统计 方法计算空白标本检测结果的第９５百分位数（Ｐ。 ． 自）：将空 白标本的ｎ 个检测结果按照从小到大的顺序排列，当ｎ × １ （Ｐ＜０．００１）。对各低值标本组进行单因素方差分析 后发现：各组检测结果间方差齐（Ｆ＝１．９２８，Ｐ＝ ０．１２２），结果间无显著性差异（最小显著差值法检 验，Ｆ＝０．９２９，Ｐ＝０．４５６）。对５０例低值标本检测结 果进行正态性检验，可以认为其分布符合正态分布规 则（Ｋｏｌｍｏｇｏｒｏｖ—Ｓｍｉｒｎｏｖ值为０．０９３，Ｐ＝０．２００）。根 ・９５％为整数时，Ｐ９５．空自 ÷［ （ Ⅲ％）＋ （ ９５％＋１）］；当ｎＢ× ９５％为带有小数位时，Ｐ ９ｓ． 自＝ 【…。（ ５％ 】，其中ｔｒｕｎｃ（ａ） 表示对数字ａ舍去小数位数而取其整数。以Ｐ。 ． 自作为空白 检测限（１ｉｍｉｔ ｏｆ ｂｌａｎｋ，ＬｏＢ）。计算５０例低值标本检测结果的 标准差（ ），利用数学模型计算ＬｏＤ：ＬｏＤ＝ＬｏＢ ＋１．６５ ７１・ ・论 善・ 迥 剁 最 ０．０ｏｏ ０．００５ ０．０１０ ０．０１５ ０．０２０ ０．０２５ ０．０３０ Ｐｒｏ（ｇ／Ｌ） 实测值 图１ 空白标本检测结果的频数分布及正态性检查 据非参数统计方法计算Ｐ 空白：将空白标本的５０个 检测结果按照从小到大的顺序排列，Ｐ 空白＝ ［ …（４７ ５）＋１］＝ ４８＝０．０２２ｇ／Ｌ。 ＬｏＢ估计＝Ｐ９５ 白＝ ０．０２２ｇ／Ｌ，ＬｏＤ估计＝ＬｏＢ估计＋１．６５×ｓ低值 ＝０．０２２＋ １．６５×０．００８７＝０．０３６ｇ／Ｌ。 一Ｐｒｏｉ＞０．４３０ｇ／Ｌ才怀疑是否有中枢神经系统炎症、神 经根病变、椎管内阻塞等疾病，因此该检测体系ＬｏＤ在 ０．０３６ｇ／Ｌ时，就已经能够满足临床。 ３．ＬｏＤ的验证：根据以上评估程序得到：当０Ｌ＝Ｂ ＝０．０５时，ＣＦＳ—Ｐｒｏ检测体系ＬｏＤ估计＝０．０３６ ｇ／Ｌ， 为证明ＬｏＤ估计的有效性和实用性，必须通过验证程 序评价其是否适用于本实验室的检测体系。（１）检 测体系的准备、空白标本的制备、标本的检测程序和 ＬｏＤ估计程序中的要求一样，唯一不同的是最低浓度 标本的制备：透析液和Ｐｒｏ标准液（ｃ＝１．０００ｇ／Ｌ）以 一定比例（Ｖ透析液：Ｖ标准液＝２６：１）充分混匀后在室温 富 下平衡３０ｍｉｎ，得到待测物浓度接近于ＬｏＤ估计水平的 最低浓度标本（ｃ＝０．０３７ｇ／Ｌ），在２ｈ内完成标本的 检测。（２）ＬｏＤ估计的验证：观察空白标本和最低值标 本的检测结果的分布（图３）发现，空白标本检测结果 为偏态分布，以非参数统计方法计算得到ＬｏＢ＝ 图２ ＬｏＢ１占”和ＬｏＤ１占＊的计算 ｓ１一ｓ５．低浓度标本（０．０４０ｇ／Ｌ） ０．０２４ｇ／Ｌ。检查５０例最低浓度标本的检测结果发 现：仅有２例结果≤ＬｏＢ，高于ＬｏＢ的样品比例是 ９６％（４８／５０）。从图３可以看出，当＞８８％以上的检 以上点估计的方法，仅仅是利用单一水平低浓度 标本（ 低值＝０．０４０ｇ／Ｌ）检测结果的离散度（ 低值）代 替最低浓度标本（ｅ最低＝ＬｏＤ）检测结果的离散度 （ｓ最低）参与ＬｏＤ估计的计算。但标本中的待测物水平 测结果＞ＬｏＢ时，可以认为ＬｏＢ有效。因此，该检测 体系的ＬｏＢ取０．０２４ｇ／Ｌ时，出现“假阳性”（Ｉ类错 误）和“假阴性”（Ⅱ类错误）的概率被控制在５％以 内，可以认为该ＬｏＤ估计有效。 讨 论 不同时，检测结果的标准偏差并不是固定不变的，它 随着标本浓度的增加而增加 。本实验ＬｏＤ估计＝ ０．０３６ｇ／Ｌ，小于低浓度标本的待测物水平（Ｏ低值＝ ＬｏＤ和精密度、灵敏度、线性一样，都是评价一个 检测体系优劣程度的性能指标，对疾病的筛查、确诊 以及判断毒素、致癌物、违禁品、药物的存在与否至关 重要 。很多微量物质检测体系常以空白响应量 ０．０４０ｇ／Ｌ），因此ｓ最低可能小于 低值，ＬｏＤ的真实水平 可能低于ＬｏＤ估计。为了得到更接近ＬｏＤ真实水平的 ＬｏＤ估计，我们可以配置待测物浓度更低的低值标本继 续试验，直到找出最接近真实ＬｏＤ水平的点。但考虑 到在通常情况下，腰椎穿刺脑脊液标本的ＣＳＦ—Ｐｒｏ在 健康人群中的正常参考范围是０．０８０—０．４３０ｇ／Ｌ，ＣＳＦ ．校准至零点，但空白响应量也是在一定范围内波动 的。因此，评估ＬｏＤ的关键是如何区分那些极低的 响应量是来源于标本中的低水平待测物还是空白响 ７２・ 医学研究杂志２０１３年７月 第４２卷第７期 图３ ＬｏＤ１占”的验证 ｓｌ—ｓ５．最低浓度标本（０．００３７ｇ／Ｌ） 应量的异常波动。在实际评估工作中，许多实验室只 考虑到了仪器的原始响应信号（Ｙ）是符合正态分布 的，而没有去关心仪器给出的检测结果（ ）的分布情 况，想当然地认为空白标本和低值标本的检测数据符 合正态分布。对于那些空白响应量符合正态分布且 在低浓度范围内标准曲线符合一元一次直线线性的 情况，采用参数统计来评估ＬｏＤ是完全合适的。但 对于很多检测方法，特别是基于抗原一抗体反应原理 的免疫学检测方法而言，其标准曲线不是简单的一元 一次直线线性，而是复杂的瞳线线性，所以无法通过 原始响应量来准确计算低浓度范围内的待测物浓度。 而且在临床化学分析中，一些仪器的初始响应量往往 无法获知，仪器直接报告检测结果，并将负值报告为 ０或很小的正值，导致空白标本检测结果变成偏态分 布，因此无法用参数统计的方法计算ＬｏＤ 。正是基 于这些原因，国外多个的研究小组基于非参数统 计原理设计了一系列新的ＬｏＤ评估程序，适用于空 白标本检测结果不符合正态分布，定标曲线为非直线 线性或统计样本量较少的资料 ’ 。 在利用非参数统计方法评估ＬｏＢ、ＬｏＤ的过程 中，空白标本和低浓度标本的基质成分要一致或尽量 接近，如果只是将不含有被分析物的缓冲液作为空白 标本，得到的ＬｏＢ估值可能要低于其真实水平。因 为在真实标本的检测过程中，检测结果的离散程度除 了和待测物浓度有关外还取决于基质内复杂成分的 干扰。所以和空白缓冲液相比，血清基质空白标本的 检测结果离散度更高，且更接近真实情况。至于低浓 度标本的检测，根据多份不同来源的低值标本中得到 的ｓ低值要比用一份标本更具有代表性，因为不同低值 ・论 善・ 标本的基质成分有所差异。考虑到实验结果的天间 差异会给评估带来的可能影响，应尽量避免在同一天 中完成ＬｏＤ的评估工作。由于非参数统计方法来估 计ＬｏＤ实际上是点估计，为了能最快得到最接近ＬｏＤ 真实水平的估值，如何选择低值标本的浓度也很重 要。考虑到正常参考范围下限为０．０８０ｇ／Ｌ，所以本 实验采取０．０４０ｇ／Ｌ作为配置低值标本的浓度水平。 实验证明，真实ＬｏＤ≤０．０３６ｇ／Ｌ，考虑到实际需要，这 一水平已经完全能够满足日常工作的需要，因此没有 对更低水平的ＬｏＤ估计值进行验证。 非参数统计不受样本分布形式的，具有应用 范围广、模型错误可能性小、稳定性高等优点，但由于 方法简单，计量水准较低，因此这一评估方案的缺陷 在于：无法给出足够精确的估计，统计效率低于参数 统计方法 ’ 。所以对于符合正态分布且标准曲线 在低浓度范围内符合直线线性的资料，应尽量采用参 数统计而不是非参数统计方法来评估方法学ＬｏＤ。 参考文献 １ 陈屹一，殷舟，邵浙新．用非参数统计方法评估检测体系的最低检 出限［Ｊ］．中国现代医生，２０１２，５０（２８）：１０８—１１０ ２ Ｚｈａｎｇ Ｄ，Ｆａｎ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｅ— ｍｅｎｔｓ ｂｅｌｏｗ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ［Ｊ］．Ｓｔａｔ Ｍｅｄ，２００９，２８（４）：７００—７１５ ３ Ｌｉｎｎｅｔ Ｋ，Ｋｏｎｄｒａｔｏｖｉｃｈ Ｍ．Ｐａｒｔｌｙ ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉ－ ｎｉｎｇ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ，２００４，５０（４）：７３２—７４０ ４ Ｌｉｎｎｅｔ Ｋ．Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ａ ｂｏｏｔｓｔｒａｐ— ｄｅｒｉｖｅｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒ ｂｙ ａ ｐａｒｔｌｙ ｎｏｎ—ｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ａｐｐｒｏａｃｈ． Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｔｏ ＨＰＬＣ ｄｒｕｇ ａｓｓａｙｓ［Ｊ］．Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ，２００５，４３ （４）：３９４—３９９ ５ Ｒｏｍｄｈａｎｉ Ｈ，Ｌａｋｈａｌ—Ｃｈａｉｅｂ Ｌ．Ｏｎ ｔｈｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｖａｒｉａｂｌｅｓ ｗｉｔｈ ｌｏｗｅｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔｓ［Ｊ］．Ｓｔａｔ Ｍｅｄ，２０１１，３０（２６）：３１３７—３１４８ ６ Ｄｅｓｉｍｏｎｉ Ｅ，Ｂｒｕｎｅｔｔｉ Ｂ．Ａｂｏｕｔ ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅｔｅｒｏｓｃｅｄａｓｔｉｃ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．Ａｎａｌ Ｃｈｉｍ Ａｃｔａ，２００９，６５５（１ —２）：３０—３７ ７ 李飞，王伟佳，温冬梅，等．化学发光免疫法检测Ｂ型利钠肽的检 测限值和功能灵敏度研究［Ｊ］．检验医学与ｌ临床，２０１１，８（１８）： ２ｌ８５—２ｌ８８ ８ Ｚｈａｎｇ Ｄ，Ｆａｎ Ｃ，Ｚｈａｎｇ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｉｒｃ ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｍｅａｓｕｒｅ— ｍｅｎｔｓ ｂｅｌｏｗ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ［Ｊ］．Ｓｔａｔ Ｍｅｄ，２００９，２８（４）：７００—７１５ ９ Ｌａｖａｇｎｉｎｉ Ｉ，Ｂａｄｏｃｃｏ Ｄ，Ｐａｓｔｏｒｅ Ｐ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅｉｌ—Ｓｅｎ ｎｏｎｐａｒａｍｅｔｒｉｃ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ ｏｎ ｕｎｉｖａｒｉａｔｅ ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ，ｉｎｖｅｒｓｅ ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔｓ［Ｊ］．Ｔａｌａｎｔａ，２０１１，１５（８７）：１８０—１８８ １０ ｙａｈ ｄｅｎ Ｈｅｕｖｅｌ Ｅ．Ｅｓｔｉｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ｑｕａｎｔａｉ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｂｉｏａｓｓａｙｓ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍ Ｓｔａｔ，２０１１，１０（３）：２０３—２１２ （收稿日期：２０１２—１２—２８） （修回日期：２０１３—０２—２０） ・７３・
