低聚壳聚糖复配体系对皮肤致病菌的体外抗菌活性研究／程晓静等 ・ ３１３ ・ 低聚壳聚糖复配体系对皮肤致病茵的体外抗菌活性研究 程晓静，黄群峰，徐云龙 （华东理工大学材料科学与工程学院，超细材料制备与应用教育部重点实验室，上海２００２３７） 摘要 采用药敏纸片法和对倍稀释法分别考察了低聚壳聚糖与茶树油对化脓性链球菌、表皮葡萄球菌、金黄 色葡萄球菌和大肠杆茵的抑菌性和最小抑菌浓度（ＭＩＣ）；采用定量法测定了低聚壳聚糖和茶树油复配体系的杀菌 率，并与单组分杀菌率进行对比。结果表明：低聚壳聚糖和茶树油对４种实验茵均有抑菌性的ＭＩＣ分别为０．５ ｇ／Ｌ 和７．５０ ｍＬ／Ｌ；０．５ ｇ／Ｌ低聚壳聚糖与７．５Ｏ ｍＬ／Ｌ茶树油复配后，对４种实验茵均有优异的杀菌率，复配体系明显优 于单组分杀菌效果，其２０ ｍｉｎ杀菌率均达到１００ 。 关键词 低聚壳聚糖茶树油抗菌性复配 中图分类号：ＴＢ３４；Ｒ９４４．１ 文献标识码：Ａ Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｌｏｗ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｗｅｉｇｈｔ Ｃｈｉｔｏｓａｎ Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｓｙｓｔｅｍ Ｔｏｗａｒｄｓ Ｓｋｉｎ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉａ ＣＨＥＮＧ Ｘｉａｏｊ ｉｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｑｕｎｆｅｎｇ，ＸＵ Ｙｕｎｌｏｎｇ （Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｕｌｔｒａ Ｆｉｎｅ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｅａｓｔ Ｃｈｉｎａ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２００２３７） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｌＯＷ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｗｅｉｇｈｔ ｃｈｉｔｏｓａｎ（ＬＭＣ）ａｎｄ ｔｅａ ｔｒｅｅ ｏｉｌ（ＴＴ０）ａｇａｉｎｓｔ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ（Ｓｔ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ），Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ（Ｓｔ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ），Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ（Ｓｔ． ａｕｒｅｕｓ）ａｎｄ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ（Ｅ ｃｏｌｉ）ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ Ｋ－Ｂ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｍｉｎｉｍａ１ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ（ＭＩＣ） ｏｆ ＬＭＣ ａｎｄ ＴＴ０ ｗｅｒｅ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ｔｕｂｅ ｄｉｌｕｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＬＭＣ ａｎｄ ＴＴ０ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｌｉｑｕｉｄ ｗａｓ ｔｅｓｔｅｄ ｂｙ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｍｅｔｈｏｄ．ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ＬＭＣ ｏｒ ＴＴ０．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＬＭＣ ａｎｄ ｒ兀０ ｈａｄ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ａｇａｉｎｓｔ ａｌｌ ｔｅｓｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｗｉｔｈ ｍｉｎｉｍｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ０．５ ｇ／Ｌ ａｎｄ ７．５Ｏ ｍＬ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｆ— ｔｅｒ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｎｇ ０．５ ｇ／Ｌ ＬＭＣ ａｎｄ ７．５０ ｍＬ／Ｌ ＴＴＯ，ｔｈｅ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｓｙｓｔｅｍ ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ ａｎ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ ｒａｔｅ ｔｈａｎ ｂｅｆｏｒｅ，ｔｈｅ ２０ ｍｉｎ ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａ１ ｒａｔｅ ｗａｓ ｕｐ ｔｏ １００ ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ １ＯＷ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ－ｗｅｉｇｈｔ ｃｈｉｔｏｓａｎ，ｔｅａ ｔｒｅｅ ｏｉｌ，ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｙ，ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ０ 引言 皮肤和软组织感染（ＳＳＴＩｓ）是一种极其常见的皮肤疾 子量的增大，抑菌作用逐渐减小且在分子量为５万时抑菌作 用最强。夏文水等＿１。］研究了低聚壳聚糖对一些常见的细菌、 酵母菌及霉菌的抗菌作用。李亚林ｌ＿１ 探究了甲壳低聚糖碘 液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌的杀灭作用， 取得了良好的效果。低聚壳聚糖因具备多种优良性质逐渐 引起关注，但目前对其抑菌方面应用的研究相对较少，全面 探讨其对皮肤感染致病菌抑制效果的研究更为少见。茶树 油是一种植物精油，具有抗菌、抗病毒和抗原生动物的作 病，一般被称作皮肤感染［１］。皮肤感染中最常见致病菌为化 脓性链球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌等口 ］。目前， 细菌性皮肤感染的治疗主要使用抗生素药物。但抗生素的 使用已造成大量耐药菌的出现，可能引发更严重的感染，成 为医学界一大难题。因此找到对人体安全的抗菌药用于皮 肤感染的治疗具有重要意义。 壳聚糖具有抑菌性强¨５］、抗菌谱广＿６ 和生物相容性 好［７ ］等优点，已引起广泛关注。王丽丹等＿ｇ 将壳聚糖与溶 菌酶进行复配用于烧伤感染的治疗，能有效抑制菌种生长。 用口 。茶树油的萜烯类成分能平衡油脂分泌，抑制细菌滋 生口 ，还能调节皮肤功能、促进细胞生长ｌ＿１ 。Ｈａｍｍｅｒ等ｌ＿１８＿ 研究了茶树油对常见丝状真菌和酵母菌的抑制作用，发现对 实验菌的ＭＩＣ和ＭＢＣ大约在０．０３ ～２ 范围内。钟业俊 等＿１叼发现茶树油与丁香酚、柠檬醛复配后，对荔枝黑曲霉的 协同抑菌作用显著增强，且效果持久。 吴大洋等＿ｌ。。将壳聚糖复配制备医用水凝胶，可有效抗菌并促 进创伤愈合。 宋献周等［ｈｉ研究发现，低分子量壳聚糖的抑菌效果优于 高分子量壳聚糖。薛立群等［１ 研究结果表明，随着壳聚糖分 程晓静：女，１９９１年生，硕士生，研究方向为生物医用材料为达到在抑制多种病菌的同时降低病菌产生耐药性的 目的，本实验将低聚壳聚糖与茶树油联合使用，研制一种新 Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｕｙｕ５１０５＠１２６．ｃｏｒｎ徐云龙：通讯作者，男，１９６２年生，博 士，教授，研究方向为生物医药材料及肿瘤靶向制剂 Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｕｙｕｎｌｏｎｇ＠ｅｃｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ ・ ３１４ ・ 材料导报 ２０１６年１１月第３０卷专辑２８ 型安全的复配体系，首先测定了单组分的抑菌性能，进而研 究了复配体系的杀菌性能，并与单组分进行了对比，为低聚 壳聚糖和茶树油的应用提供了一定实验依据。 １．４．２茶树油的最小抑菌浓度 采用混合药剂法测定茶树油对实验菌种的最小抑菌浓 度。用未冷却的液态琼脂培养基与适量茶树油溶液混合均 匀，待培养基冷却凝固后，在培养基表面划线接种实验菌，在 ３７℃培养箱中倒置培养２４ ｈ后观察细菌生长情况，以 １ 实验 １．１ 实验原料 壳聚糖（脱乙酰度９４．５ ，分子量５万）：浙江金壳科技 有限公司；醋酸、吐温一８０（ＡＲ），国药集团化学试剂有限公司； ０．０１ （体积分数）的无菌吐温一８０溶液作为对照。观察浓度 在１．２５４１５ ｍＬ／Ｌ范围内茶树油的抑菌性，完全无菌生长的 茶树油的最小浓度即为最小抑菌浓度（ＭＩＣ），实验重复３ 次。 蛋白胨（ＢＲ）、牛肉浸膏，琼脂粉（ＢＲ），上海天莲精细化工有 限公司；氢氧化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、硫代硫酸钠 （ＡＲ），上海凌峰化学试剂有限公司；大豆卯磷脂（≥９０ ）： 阿拉丁试剂有限公司；脑心浸出液肉汤（ＢＨＩ）：上海瑞楚生物 科技有限公司。 １．２培养基及菌悬液的配制 （１）培养基：按照ＧＢ１５９７９—２００２标准进行配制 。（２） 菌悬液：取出培养至第３～１４代菌株的斜面新鲜培养基 （１８４２４ ｈ，化脓性链球菌为脑心浸出液琼脂培养基，其余菌 种为营养琼脂培养基），用０．０３ ｍｏｌ／Ｉ 的磷酸盐缓冲液 （ＰＢＳ，ｐＨ＝７．２）洗下菌苔，并稀释成含菌数约为０．５麦氏比 浊的菌悬液备用¨２ 。（３）样液的制备：采用１ （体积分数） 的醋酸溶液作为溶剂制备低聚壳聚糖溶液，采用０．０１ （体 积分数）的吐温一８Ｏ溶液作为溶剂制备茶树油溶液。 １．３药敏纸片实验 采用药敏纸片法测定低聚壳聚糖和茶树油对化脓性链 球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌圈。 制作若干直径为５ ｍｍ的滤纸片，灭菌干燥后，滴加低聚壳聚 糖和茶树油样液制成抑菌纸片。在无菌条件下将培养基倒 入培养皿并迅速铺展均匀，厚度约为５ ｍｍ。待冷却凝固后， 用无菌棉签在培养基表面均匀涂布０．５麦氏比浊菌悬液的 １００倍稀释液，将平板转动约６Ｏ。重复涂布操作３次。用无菌 镊子将抑菌纸片平整贴放在接种平板上，阴性对照贴在平板 ，２０ ｍｉｎ后将平板倒置于３７℃恒温培养箱中培养１８～ ２４ ｈ，测量抑菌圈直径（ｒａｍ）。其中，以１ （体积分数）醋酸 溶液和０．０１ （体积分数）无菌吐温一８Ｏ溶液为对照。实验重 复３次，取平均值。 １．４低聚壳聚糖和茶树油的最小抑菌浓度（ＭＩＣ） １．４．１低聚壳聚糖的最小抑菌浓度 采用对倍稀释法测定低聚壳聚糖对实验菌的最小抑菌 浓度［２ 。准备１Ｏ只无菌的５Ｏ ｍＬ锥形瓶并依次编号，向 １—９号瓶中加入１０ ｍＩ 无菌液体培养基，再向１号瓶中加入 １Ｏ ｍＬ ８ ｇ／Ｌ的低聚壳聚糖溶液，充分混匀后用移液移取 １０ ｍＩ 至２号瓶并充分混匀，依次类推，使得１—７号低聚壳 聚糖浓度依次为：４ ｇ／Ｉ 、２ ｇ／Ｌ、１ ｇ／Ｌ、０．５ ｇ／Ｌ、０．２５ ｇ／Ｌ、 ０．１２５ ｇ／Ｌ、０．０６２５ ｇ／ｉ 。在无菌条件下，向１—８号瓶移入 １００ Ｉ 菌悬液，８号瓶为阳性对照，９号瓶为空白对照，向１Ｏ 号瓶中加入１Ｏ ｍＬ壳聚糖溶液作为阴性对照。在３７℃下振 荡培养２４ ｈ后，肉眼观察澄清的低聚壳聚糖溶液的最小浓度 为最小抑菌浓度（ＭＩＣ），实验重复３次。 １．５复配体系的杀菌率 １．５．１ 中和剂的鉴定 本实验使用的无菌中和剂由１０ ｇ／Ｉ 硫代硫酸钠、３０ ｇ／Ｌ 吐温一８Ｏ和１０ ｇ／Ｉ 卵磷脂溶解于ＰＢＳ溶液制成。实验如下： （１）复配体系＋菌液，考察复配体系对实验菌是否有杀菌能 力。（２）复配体系＋菌液＋中和剂，考察被中和后，复配体系 作用后残留的存活菌株能否继续生长。（３）中和剂＋菌液， 考察中和剂本身是否有杀菌能力。（４）复配体系＋中和剂＋ 菌液，考察中和产物是否能抑制实验菌的生长繁殖。（５）ＰＢＳ 溶液＋菌液，阳性对照。（６）无菌ＰＢＳ溶液，阴性对照，排除 ＰＢＳ溶液本身对实验结果的影响。（７）无菌中和剂，阴性对 照，排除中和剂本身对实验结果的影响。（８）无菌培养基，阴 性对照，排除培养基本身对实验结果的影响。 观察实验结果：若第１组无菌或者菌数远少于第２组， 第２组菌数少于第３、４、５组的菌数；第３、４、５组的菌数较为 相近，且误差率不大于１５ ；第６、７、８组无菌生长，则表明所 选中和剂合格［９。 １．５．２杀菌实验 将低聚壳聚糖与茶树油复配后，制成｝昆合样液。 配制０．５麦氏比浊的菌悬液，移取１００ Ｉ 菌悬液加至 １０ ｍＩ 混合样液中，迅速混匀并计时，作用２Ｏ ｒａｉｎ后，用移液 各移取１ ｍＬ至９ ｍＬ中和剂中，充分混匀作用２０ ｒａｉｎ后， 取上述混合液及其１Ｏ倍稀释液各１ ｍＩ 滴在培养皿，再 倒入冷却至４０￣４５℃琼脂培养基１５ ｍＩ ，并转动培养皿充分 混匀。待培养基冷却凝固后倒置于３７℃恒温培养箱培养 ４８ ｈ，作活菌菌落计数。无菌生理盐水作为阳性对照。实验 重复３次，按式（１）计算杀菌率，求平均值。 Ｘ一（Ａ－－Ｂ）／ａ×１００ （１） 式中：ｘ为杀菌率， ；Ａ代表对照样品平均菌落数；Ｂ代表 待测样品平均菌落数。杀菌率Ｘ≥９０ 时代表样品具有杀 菌效果。 ２结果与讨论 ２．１药敏纸片实验 分别考察了浓度在０．１２５４４ ｇ／ｉ 范围内的低聚壳聚糖 以及浓度在５￣２００ ｍＩ…／ｉ范围内的茶树油对化脓性链球菌、 表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌性。实验 结果如表１和表２所示，其中对照组均无抑菌圈。 由表１和表２可知，随着低聚壳聚糖和茶树油浓度的升 高，抑菌圈逐渐增大，即低聚壳聚糖和茶树油溶液对４种实 低聚壳聚糖复配体系对皮肤致病菌的体外抗菌活性研究／程晓静等 验菌的抑菌性都是随其浓度升高而不断增大的，且对不同菌 种的抑菌性有一定差异，两者对化脓性链球菌和金黄色葡萄 照和空白对照均无菌生长。 ・ ３１５ ・ 由表３和表４可知，随着浓度的升高，低聚壳聚糖和茶 树油的抑菌作用都不断增大。由表３可知，低聚壳聚糖对化 脓性链球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的 ＭＩＣ分别为：０．１２５ ｇ／Ｌ、０．２５ ｇ／Ｌ、０．１２５ ｇ／Ｉ 和０．５ ｇ／Ｌ，表 明对于不同菌种，低聚壳聚糖的抑菌性能有所差异，但是当 低聚壳聚糖溶液浓度达到０．５ ｇ／Ｌ时，对４种实验菌均具有 抑菌效果。由表４可知，茶树油对化脓性链球菌、表皮葡萄 球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的ＭＩＣ分别为：２．５Ｏ ｍＬ／Ｌ、 ５．Ｏ０ ｍＬ／Ｌ、５．００ ｍＬ／Ｌ及７．５０ ｍＬ／Ｌ，表明茶树油溶液浓 球菌的抑菌圈均较大，而对表皮葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌 圈相对较小。浓度在０．１２５￣４ ｇ／Ｌ范围内的低聚壳聚糖对 ４种实验菌的抑菌圈均较小，表明低聚壳聚糖有一定的抑菌 性，但效果并不明显。在５￣２００ ｍＬ／Ｌ浓度范围内，茶树油 对４种实验菌种的抑菌圈相对较大，表明茶树油对实验菌的 抑菌作用相对较强。 表１不同浓度低聚壳聚糖的抑菌圈 Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｈａｂｉｔａｔｉｏｎ ｚｏｎｅ ｏｆ ＬＭＣ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ｔｈｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｚｏｎｅ／ｍｍ ｇ／Ｌ Ｓｔ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ｓｔ．ｅｐｉｄｅｍｉｄｉｓ Ｓｔ．口“ｒｅｕｓ Ｅ∞ｌｉ 表２不同浓度茶树油的抑菌圈 Ｔａｂｌｅ ２ Ｉｎｈａｂｉｔａｔｉｏｎ ｚｏｎｅ ｏｆ ＴＴ０ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ Ｔｈｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｚｏｎｅ／ｒａｍ ｍＬ／Ｌ Ｓｔ．ｐｙｏｇｅｎｅｓ Ｓｔ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ Ｓｔ．ａｕｒｅｕｓ Ｅ ｃｏｌｉ ２．２低聚壳聚糖和茶树油的最小抑菌浓度 分别考察了浓度在０．０６２５～４ ｇ／Ｌ范围内的低聚壳聚 糖以及浓度在１．２５￣１５ ｍＬ／Ｌ范围内的茶树油对化脓性链 球菌、表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌性。 结果如表３和表４所示，阳性对照组细菌生长良好，阴性对 表３壳聚糖对实验菌的最小抑菌浓度（ＭＩＣ） Ｔａｂｌｅ ３ ＭＩＣ ｏｆ ＬＭＣ ａｇａｉｎｓｔ ｔｅｓｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ Ｎ（）． 眦 ａｔｉｏｎ Ｔｅｓ ｔｅｄ ｂ ａｃｔｅｒ ｉａ １ ４．００００ 一 一 一 一 ２ ２．００００ 一 一 一 一 ３ １．００００ 一 一 一 一 ４ ０．５０００ 一 一 一 ～ ５ ０．２５００ 一 一 一 ＋ ６ ０．１２５０ 一 ＋＋ 一 ＋＋ ７ ０．０６２５ ＋ ＋＋ ＋＋ ＋＋＋ ８ 阳性对照 ＋＋＋ ＋＋＋ ＋＋＋＋＋＋ ９ 空白对照 一 一 一 一 ｌ０ 阴性对照 一 一 一 一 注：“一”代表琼脂培养基上无菌生长；“＋”代表琼脂培养基上有菌生 长，“＋”越多代表菌落越密集 度达到７．５Ｏ ｍＬ／Ｌ时对４种实验菌均具有抑菌作用。 表４茶树油对实验菌的最小抑菌浓度（ＭＩＣ） Ｔａｂｌｅ ４ ＭＩＣ ｏｆ ＴＩ＇Ｏ ａｇａｉｎｓｔ ｔｅｓｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ Ｎ０＿ ｔｉｏｎ Ｔｅｓ ｔｅｄ ｂ ａｃｔｅｒ ｉａ １ ０．００ ＋＋＋ 十＋＋ ＋＋＋＋＋＋ ２ １．２５ ＋＋ ＋＋＋ ＋＋ ＋＋ ３ ２．５０ 一 ＋＋ ＋ ＋＋ ４ ５．ＯＯ 一 一 一 ＋ ５ ７．５０ 一 一 一 一 ６ １０．ＯＯ 一 一 一 一 ７ １２．５Ｏ 一 一 一 一 ８ １ ５．ＯＯ 一 一 一 一 注：“一”代表液体培养基澄清无沉淀。样品具有抑菌效果；“十”表示 培养基浑浊或有沉淀，样品不具有抑菌效果；“＋”越多代表培养基越浑 浊 ２．３中和剂的鉴定 中和剂的鉴定结果如表５所示。由表５可知，第１组均 无菌生长，第二组有少量细菌生长，且菌落数大于１００ ｃｆｕ／ ｍＬ，第３、４、５组有大量细菌生长，且菌落数误差率不超过 １５％，第６、７、８组无菌生长，可判定该中和剂合格。 表５中和剂鉴定结果 Ｔａｂｌｅ ５ Ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｅｒ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ２．４杀菌率实验 以低聚壳聚糖和茶树油对４种菌均有抑菌作用的最小 浓度（即０．５ ｇ／Ｌ的低聚壳聚糖和７．５０ ｍＬ／Ｌ的茶树油）进 行复配，杀菌率实验结果如表６所示。 由表６可知，０．５ ｇ／Ｌ的低聚壳聚糖和７．５０ ｍＬ／Ｌ的茶 树油对４种菌种均有一定的杀菌作用，但是２０ ｍｉｎ杀菌率均 低于８Ｏ％，远远达不到实验设计的预期效果。从两个单组分 ・ ３１６ ・ 导猿 ２０１６年ｌ】月第３Ｏ卷专辑２８ 来看，７．５０ ｍＩ ／Ｌ的茶树油的杀菌率比０．５ ｇ／Ｌ的低聚壳聚 糖略高。对于不同的菌种，低聚壳聚糖和茶树油的杀菌能力 也有所不同，从实验结果可知，两者对化脓性链球菌的杀菌 作用最强，其次是金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌，而对大 肠杆菌的杀菌效果相对较弱。两者复配后对化脓性链球菌、 表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌都表现出优异的 杀菌能力。且由表６可知，复配体系的杀菌性能明显优于低 聚壳聚糖或者茶树油单独作用时的杀菌性能，且对４种实验 菌的２０ ｒａｉｎ杀菌率均达到１００ 。 表６低聚壳聚糖和茶树油复配体系杀菌率 Ｔａｂｌｅ ６ Ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ ＬＭＣ，ＴＴＯ ａｎｄ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｓｙｓｔｅｍ 目前，对低聚壳聚糖的抑菌机理还没有明确结论。有研 究表明，低聚壳聚糖可以通过渗透作用穿透菌体的细胞壁， 甚至进入菌体细胞内部，破坏细胞内部结构，使其变性、无法 进行正常的生理代谢活动，抑制细菌的繁殖，导致微生物的 死亡［２ 。低聚壳聚糖还能与细胞内带负电的物质（主要是蛋 白质和核酸）结合，阻碍ｍＲＮＡ的合成，从而抑制微生物细 胞繁殖，导致菌体死亡［２ 。 茶树油作为天然产物，是１００多种成分的混合物 ，可 作用于微生物细胞膜上形成穿孔，使细胞内容物（尤其是钾 离子）大量渗出，影响细胞的生理活动，使细胞凋亡 。Ｃａｒ— ｓｏｎ等ｌ２。 通过研究观察到细菌在茶树油作用后会出现核酸 等物质的泄露，菌体内会形成大量中介体，而且细菌对盐的 耐受性降低。 对于复配体系，与４种菌作用时都表现出优异的杀菌性 能，且复配体系杀菌率明显高于单一组分作用时的效果。低 聚壳聚糖溶于酸后，成为一种阳离子型生物絮凝剂，小分子 可通过渗透作用穿透细胞膜进入细胞内，并与菌体内带有阴 离子的细胞质发生絮凝作用，造成菌体生理平衡紊乱［２ 。茶 树油能改变细胞膜通透性，扰乱细胞膜双层结构分子的正常 分布，诱导降解细胞壁的水解酶，刺激细胞的自溶，还能作用 于正常的细胞膜去极化导致细胞死亡［ 。两者复配后，小分 子壳聚糖可进入菌体内．扰乱细胞的代谢活动，同时茶树油 可在细胞膜上形成穿孔，更有利于低聚壳聚糖进入细胞内 部，两者协同作用于细胞壁和细胞膜上，共同促成菌体细胞 壁的破坏和瓦解，加速菌体细胞的裂解死亡，从而起到联合 杀灭菌体的作用。 ３ 结论 低聚壳聚糖及茶树油对化脓性链球菌、表皮葡萄球菌、 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均具有一定的抑菌作用。低聚 壳聚糖和茶树油分别在浓度为０．５ ｇ／Ｌ和７．５０ ｍＬ／Ｉ 时对４ 种实验菌种均具有抑菌作用。低聚壳聚糖和茶树油复配体 系对４种实验菌种均具有优异的杀菌性，且明显优于单组分 的杀菌能力，其２Ｏ ｒａｉｎ杀菌率均达到１００ 。复配体系由天 然成分组成，安全高效，可应用于皮肤感染的治疗等医疗护 肤领域。 参考文献 １ Ｄｒｙｄｅｎ Ｍ Ｓ．Ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｓｋｉｎ ａｎｄ ｓｏｆｔ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ａｎｔｉ— ｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，２Ｏ１０，６５（３）：３５ ２谢松梅，符世平，杨进波，等．皮肤及皮肤软组织感染抗菌药物Ｉ临床 试验设计与评价的特殊考虑＿Ｊ］．中国新药杂志，２００９，１８（１６）：１４９３ ３郑跃，席云，赖维，等．皮肤软组织感染致病菌的菌种构成和药敏变 化趋势分析［Ｊ］．皮肤性病诊疗学杂志，２０１４，２４（１）：２９ ４李东明，蒋丽潇．皮肤细菌感染的病因、症状、诊断和治疗＿Ｊ］．皮肤 性病诊疗学杂，２Ｏ１１，１８（３）：２１８ ５徐群娜，范倩倩，马建中，等．壳聚糖基纳米胶囊的制备及应用研究 新进展【＿、Ｉ］．材料导报：综述篇，２０１５，２９（１）：８１ ６ Ｖｉｓｓｅｒ Ｍ Ｒ，Ｒｏｚｅｎｂｅｒｇ Ａｒｓｋａ Ｍ，Ｂｅｕｍｅｒ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｉｎ— ｖｉｔｒｏ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｐａｒｆｌｏｘａｃｉｎ（ＡＴ－４１４０：Ｐ ６４２０６）．ａ ｎｅｗ ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ［Ｊ］．Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ，１９９１，３５（５）：８５８ ７谢长志，王井，刘俊龙．甲壳素与壳聚糖的改性及应用［Ｊ］．材料导 报，２００６，２Ｏ（６）：３６９ ８马晓莉，姚子华，徐伟伟，等．医用多孔壳聚糖膜的制备及性能研究 ［Ｊ］．功能高分子学报，２００５，１８（３）：４３４ ９王丽丹，钱秀珍，徐云龙．壳聚糖与溶菌酶复配体系的杀菌性能研究 ＿Ｉ１］．华东理工大学学报，２０１３，３９（３）：２８４ １Ｏ吴大洋，李晓琴，汪涛，等．蚕蛹壳聚糖复合水凝胶的抗菌性能及对 创伤的愈合作用ｌ＿ＪＪ．蚕业科学，２０１２，３８（１）：１３５ ｌ１宋献周，沈月新．不同平均分子量的ａ一壳聚糖的抑菌作用明［Ｊ］．【 海水产大学学报，２０００，９（２）：１３８ ｌ２薛丽群，陈盛，林渊智，等．不同分子量壳聚糖的制备及其抑菌性能 的研究［Ｊ］．福建师大福清分校学报，２０１３（２）：５５ ｌ３夏文水，张帆，何新益．甲壳低聚糖抗菌作用及其在食品保藏中的应 用［Ｊ］．无锡轻工大学学报，１９９８（４）：１０ １４李亚林．甲壳低聚糖碘的稳定性研究及杀菌效果观察［Ｉ）］．衡阳： 南华大学，２０１３ １５ Ｃａｒｓｏｎ Ｃ Ｆ，Ｈａｍｍｅｒ Ｋ Ａ，Ｒｉｌｅｙ Ｔ Ｖ．Ｍｅｌａｌｅｕｃａ ａｌｔｅｒｎｉｆｏｌｉａ（ｔｅａ ｔｒｅｅ）ｏｉｌ：Ａ ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ ａｎｔｉｍｉｅｒｏｂｉａｌ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ＿Ｊ］．Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ，２００６，１９（１）：５０ ｌ６李娟，李小瑞．茶树油的性质及其应用［Ｊ］．日用化学工业，２００３，３３ （５）：３２３ １７广宇．澳大利亚茶树油——一种天然的治疗痤疮的抗菌和抗炎剂 ＥＪ］．日用化学工业信息，２００２（１５）：４ １８ Ｈａｍｍｅｒ Ｋ Ａ，Ｃａｒｓｏｎ Ｃ Ｆ，Ｒｉｌｅｙ Ｔ Ｖ．Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｍｅｌａｌｅｕｃａ ａｈｅｒｎｉｆｏｌｉａ（ｔｅａ ｔｒｅｅ）ｏｉｌ ａｇａｉｎｓｔ ｄｅｒｍａｔｏｐｈｙｔｅｓ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ［ｉｌａｍｅｎ ｔｏｕｓ ｆｕｎｇｉ［Ｊ］．Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，２００２，５０（２）：１９５ ｌ９钟业俊，徐欣源，刘成梅，等．茶树油、丁香酚和柠檬醛对荔枝黑曲霉 的抑制作用¨Ｊ］．食品科学，２０１２（１１）：２ｌ ２Ｏ中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局．ＧＢ１５９７９—２００２一次性 使用卫生用品卫生标准［ｓ］．北京：中国标准出版社，２００２ ２１张利云，丁仕力，等．壳聚糖护肤液保湿和抗菌作用的研究［Ｊ］．材 料导报：研究篇，２０１３，２７（１）：６２ ２２邢珂．壳聚糖纳米分散体系构建及抑菌性能研究［Ｄ］．青岛：中国海 洋大学，２００９ （下转第３１９页） Ｍｇ２Ｚｎ０．２Ｍｎ Ｃａ四元生物镁合金的制备与研究，／周 波等 ■＿＿■■ 孔。 Ｍｇ＋Ｈ！（）一Ｍｇ（（）Ｈ）！＋Ｈ２十 （１） Ｉ ’ ～ ’一～ Ｉ ． ：Ｉ１ Ｉ＝． ：： ：：二３结论 （１）随着Ｃａ含量的增加，Ｍｇ２Ｚｎ０．２Ｍｎ』’Ｃａ合金的显微 组织得到细化．同时组织中第二相的含量增加。当 一０．４ 时，Ｍｇ２Ｚｎ０．２Ｍｎ０．４Ｃａ合金的显微组织较细。第二相含量适 中。 （２）Ｃａ的含量对Ｍｇ２Ｚｎ０．２Ｍｒｃ￣’Ｃａ合金腐蚀性能有影 响。 ｊ’０．４时，Ｍｇ２Ｚｎ０．２Ｍｎ０．４Ｃａ合金的耐腐蚀性较 好，腐蚀速率为０．５６９ ｍｍ／ａ。 参考文献 １ Ｚｈｏｕ Ｓ Ｊ．Ｌｉｕ １ ，Ｈｕａｎｇ Ｎ．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｏｎ ｍｉｃｒｏｓｔｒｕｃ
