红树植物红海榄中多糖的提取及其组成的研究

时珍国医国药2010年第21卷第6期

红树植物红海榄中多糖的提取及其组成的研究

覃　亮,鲁湘鄂,刘艳清

(肇庆学院・化学化工学院,广东肇庆　526061)

摘要:目的对红树植物红海榄中多糖的提取及其组成进行研究。方法红海榄叶经热水浸提、Sevage法脱蛋白等方法得

到多糖;经完全酸水解,糖腈乙酸酯衍生化,并用红外光谱仪、气质联用仪对其结构和组成进行了研究。结果红海榄多糖由赤藓糖、D-阿拉伯糖和葡萄糖组成,它们的摩尔比为5∶1∶17。结论红海榄多糖为杂多糖。多糖;　提取;　组分关键词:红海榄;　

中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:100820805(2010)0621393201　　多糖是存在于自然界的醛糖和(或)酮糖通过糖苷键连接在一起的聚合物,它是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一类重要的信息分子,是维持生命活动正常运转基本物质之一。近年来,国际上对药用红树植物的化学成分及其药理研究表明,红树植物具有抗艾滋病、抗肿瘤、抗氧化等活性[1]。尽管红树植物在世界上分布广泛,含有大量活性先导化合物可治疗人类重大疾病,但这一类植物资源在某些方面并未真正得到研究、开发和利用,尤其是其药用价值未得到应有的重视。本实验对红树植物红海榄中的多糖进行提取并对其组成进行了研究。1　材料与仪器1.1　原料红海榄叶(采自湛江东海岛),洗净剪碎,置于通风处阴干,备用。1.2　试剂95%乙醇;无水乙醇;氯仿;正丁醇;丙酮;无水乙醚;硫酸;碳酸钡;吡啶;盐酸羟胺;乙酸酐,以上试剂均为分析纯。1.3　仪器E-5299旋转蒸发仪(巩义市予华仪器有限责任公司);SHB-B95A型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);GCMS-QP2010气相色谱质谱连用仪(岛津制作所);HH-S2系列恒温水浴锅(江苏省全坛市环宇科学仪器厂);FTIR-8400S型红外光谱仪(日本岛津公司);ESJ120-4型电子天平(沈阳市龙腾电子有限公司);202-2型干燥箱(上海市实验仪器总厂);GSP-84-02型磁力恒温搅拌器(山东电讯七厂)。2　方法2.1　多糖提取称取粉碎、干燥好的红海榄叶150g,加入1500ml蒸馏水,超声处理20min后加热到90℃,热水浸提3次,过滤,合并,得棕色滤液。用旋转蒸发仪在浓缩滤液至50ml,抽滤去沉淀,加入3倍体积的95%乙醇沉淀多糖,于冰箱放置过夜,得棕色絮状物,离心收集沉淀。

[2]

2.2　Sevag法去蛋白Sevag试剂的配制:用氯仿与正丁醇以4∶1混合。

上述沉淀加水溶解,即得棕色溶液,加入溶液1/3倍体积的Sevag试剂,剧烈振荡至无白色絮状物析出,然后离心,除去水相与有机相交界处的变性蛋白,剩余液体再加入200ml无水乙醇,充分振荡摇匀,于冰箱静置24h,得棕色絮状物。离心收集沉淀,沉淀经无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤两次脱去脂肪和色素,干燥,得棕色粗多糖1.5g。2.3　红外光谱法(IR)鉴定多糖采用KBr压片制样,在4000～

-1

400cm区间内用红外光谱仪扫描IR吸收。2.4　多糖水解[3]称取30mg粗多糖,加入5ml30mmol/L的硫

收稿日期:2009204228;　修订日期:2009209210基金项目:肇庆学院自然科学研究项目(No.0831)作者简介:覃　亮(19822),男(汉族),广东韶关人,现任肇庆学院化学化工学院助教,硕士学位,主要从事药理学研究工作.

酸溶液,封管,超声片刻,至多糖完全溶解,100℃恒温水浴振荡2h。将试管置于烘箱中于110℃反应6h后冷却至室温,加BaCO3粉末中和、离心、干燥得到水解后的淡黄色单糖混合物0.0136g。2.5　糖腈乙酸酯衍生物的制备称取10mg单糖样品和10mg盐酸羟胺,用20ml吡啶溶解,封管,95℃恒温水浴振荡40min后冷却至室温,加入0.6ml乙酸酐,封管,95℃恒温水浴振荡40min,冷却至室温,得茶色单糖腈乙酸酯衍生物,待测。2.6　单糖衍生物的GC/MS分析2.6.1　色谱条件RTX-5石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm),柱温:80℃,汽化室温度:280℃,载气为高纯度氦气,进样量1μl,升温程序:起始温度80℃,保留时间2min,每分钟5℃升温到260℃,保留1min。2.6.2　质谱条件离子源为EI源,灯丝电流0.6mA,离子源温度200℃,电离能量70eV,接口温度250℃,电子倍增管电压1.20kV,扫描周期0.5s,扫描范围30.00～400.00m/z,溶剂延迟3min。3　结果3.1　多糖红外光谱分析结果红海榄多糖的红外光谱如图1所示,从图谱中可以看出红海榄多糖具有以下结构特征:在3600～

-1

3200cm的一个强峰是O-H的伸缩振动。在3000～2800-1

cm的一组吸收峰是糖类C-H的伸缩振动引起的,1400～1

-1

200cm的不太尖的吸收峰是C-H的变角振动,这两组吸收峰是糖类的特征吸收峰。1665～1625cm-1间吸收峰是糖的水化物的吸收峰。1200～1000cm-1间比较大的吸收峰是由两种C-O伸缩振动所引起的,其中一种是属于C-O-H的,另一种是糖环的C-O-C。该样品具有典型的多糖特征峰。

图1　红海榄多糖的红外光谱图

3.2　单糖衍生物GC-MS分析结果将糖腈乙酸酯衍生物进行GC-MS分析,经计算机内NIST02质谱数据库检索得到分析结

果如表1所示。

赤藓糖,分子式HOCH2(CHOH)2CHO,自然界尚未发现游离的赤藓糖;D2阿拉伯糖又称果胶糖,分子式CH2OH(CHOH)3CHO,自然界D2阿拉伯糖很少见,仅在某些细菌多糖中

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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.6

存在,D-阿拉伯糖通常与其他单糖结合,以杂多糖的形式存在

于胶、半纤维素、果胶酸、细菌多糖及某些糖苷中;葡萄糖是己醛糖,分子式CH2OH(CHOH)3COCH2OH,是自然界分布最广泛的单糖。

表1　单糖衍生物GC/MS分析结果

名称赤藓糖

D-阿拉伯糖D-葡萄糖

RT11.3213.79818.52

4　讨论

研究结果表明该多糖是一杂多糖,由赤藓糖、D2阿拉伯糖和D2葡萄糖组成,它们的摩尔比为:5∶1∶17,该多糖为杂多糖。

参考文献:

[1]　王友绍,何　磊.药用红树植物的化学成分及其药理研究进展[J].

化学式C4H8O4C5H10O5C6H12O6相似度979897

中国海洋药物,2004,2:26.[2]　张晓静,刘会东.植物多糖提取分离及药理作用的研究[J].时珍国

医国药,2003,14(8):495.

[3]　季宇彬.中药多糖的化学与药理[M].北京:人民卫生出版社,

2005:5.

胡芦巴降脂活性部位的筛选

隋　宏,容春娟,王文苹

3

(宁夏医科大学药学院,宁夏银川　750004)

摘要:目的对传统中药胡芦巴的降血脂有效活性部位进行初步分离和筛选,初步确认胡芦巴降血脂作用的活性部位。

方法采用喂饲高脂饲料的方法建立大鼠高血脂模型;采用乙醇回流提取法分离得到胡芦巴总皂苷供试液;残渣挥干乙

醇,加水采用超声波提取法得到胡芦巴多糖供试液;以胡芦巴水提液、总皂苷、多糖、辛伐他汀灌胃治疗;各给药组于第21天摘除眼球采血,测定高血脂大鼠的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)。结果与模型组比较,胡芦巴水提液组、总皂苷组和多糖组的TG,TC,LDL-C明显降低(P<0.05～0.01),HDL-C变化不大;胡芦巴水提液组的TG,TC,LDL-C降低更显著(P<0.01)。结论胡芦巴总皂苷和总多糖均有一定的降血脂作用,水提液降脂效果更为显著。高血脂;　活性部位;　总皂苷;　多糖关键词:胡芦巴;　中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:100820805(2010)0621394202　　高脂血症是动脉粥样硬化及心脑血管疾病的最重要的危险因素[1],极大危害着人类的健康。目前西药降血脂药物仍存在一定的副作用,例如肝脏功能损害、胃肠道功能紊乱、肌肉痛、横纹肌溶解症等[2]。因此,寻找一种安全有效的降血脂药是国内外心脑血管研究人员关注的焦点。

胡芦巴Trigonellafoenum-graecum系豆科蝶形花亚科植物胡芦巴的成熟干燥种子,又名香豆子,胡芦巴是一种集食用、药用、香料、饲料、工业原料于一体的经济作物,是宁夏地道药材。国内外研究表明胡芦巴的水提物有很好的降血脂效果,但其降低血脂的活性部位还不明确。

因此,本课题主要是采用SD大鼠建立高血脂模型,初步考察并确定胡芦巴降低血脂的主要活性部位,为胡芦巴的深入研究和产品开发奠定基础[3]。1　材料与仪器1.1　动物清洁级SD大鼠60只,体质量180～220g,雌雄各30只,由宁夏医科大学动物实验中心提供,合格证号:SCXK(宁)2005-001。1.2　饲料基础饲料(由宁夏医科大学动物实验中心提供);高脂饲料由猪油10%,蛋黄15%,奶粉10%,黄豆15%,鱼肝油10

收稿日期:2009207228;　修订日期:2009211202基金项目:宁夏教育厅科研项目资助(No.【2008】293)作者简介:隋　宏(19662),女(汉族),辽宁海城人,现任宁夏医科大学药学院教授,在读博士研究生,主要从事生物药剂学及新药研发工作.通讯作者简介:王文苹(19772),女(汉族),山东肥城人,现任宁夏医科大学药学院副教授,博士学位,主要从事新型给药系统及载药材料研究工作.

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滴/100g)与基础饲料配制而成。1.3　试剂与仪器OLYMPUS.AU2700型全自动生化分析仪(日本),UV-2550型紫外可见分光光度计(日本岛津),AEu-210型电子分析天平(日本岛津),KQ-500E型超声波清洁器,RE-52AA型旋转蒸发仪。1.4　药物胡芦巴种子(由宁夏伊雪莲大药房提供),经宁夏医科大学药学院生药教研室鉴定为胡芦巴Trigonellafoenum-grae2cum的成熟干燥种子。辛伐他汀片剂(20mg,山东鑫齐药业有限公司,20090104,由宁夏银川胜利街古方药品超市提供)。2　方法

2.1　供试液的制备2.1.1　胡芦巴种子的处理将胡芦巴种子洗净,文火炒至深褐色,粗粉碎后,过10目筛。2.1.2　胡芦巴水提液供试液的制备取炒制的胡芦巴粗粉,用水煎煮3次,分别为60,45,30min,4层纱布过滤,合并滤液,水浴浓缩成640ml的药液,冷藏备用。2.1.3　总皂苷供试液的制备根据本课题组前期实验,选用总皂苷提取的优化工艺制备总皂苷供试液。取炒制的胡芦巴粗粉,加入11倍的75%乙醇,回流提取3次,120min/次,滤纸过滤,合并滤液,水浴浓缩至600ml,冷藏备用。2.1.4　多糖供试液的制备根据本课题组前期实验,选用多糖提取的优化工艺制备多糖供实液。取以上醇提后的残渣,挥干乙醇,加入25倍的水,在70℃下超声提取3次,45min/次,四层纱布过滤,合并滤液,水浴浓缩至600ml,冷藏备用。2.2　动物分组将60只SD大鼠适应性喂养1周,称重并随机分为6组:正常对照组(对照组)8只,高脂饲料组(模型组)12只,胡芦巴水提液组(水提液组)10只,胡芦巴总皂苷组(总皂苷

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