实用医学杂志２０１０年第２６卷第８期 食管鳞癌组织中环氧合酶一２、ｐ５３蛋白的表达及 临床病理学意义 魏华兵 曹子昂 刘强 傅于捷钱晓哲 摘要 目的：研究环氧合酶一２（ＣＯＸ．２）、ｐ５３基因在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法：采用免 疫组化染色Ｓ—Ｐ法检测ＣＯＸ．２、ｐ５３蛋白在６７例食管鳞癌组织及１５例癌旁组织中的表达。结果：ＣＯＸ．２和 ｐ５３在食管癌组织中的阳性表达率分别为７３．５％（４９／６７）和６４．２％（４３／６７），均高于癌旁组织（Ｐ＜０．０５）。 ＣＯＸ．２在高、中、低分化食管癌中的表达率逐渐降低（Ｐ＜０．０５）；有嗜酒史者阳性表达率明显高于无嗜酒史者 （Ｐ＜０．０５）。ｐ５３高表达与食管癌淋巴结转移及嗜酒史有关（Ｐ＜０．０５）。ＣＯＸ一２与ｐ５３表达具有相关性（ｒ＝０．２４９， Ｐ＜０．０５）。结论：ＣＯＸ一２和ｐ５３均可能参与了食管癌的发生过程。不同分化食管鳞癌的ＣＯＸ．２表达率有差异． ＣＯＸ一２表达率与嗜酒可能相关。ｐ５３高表达与食管癌淋巴结转移及嗜酒史可能相关。 关键词食管肿瘤； 环氧合酶一２；ｐ５３蛋白； 免疫组化染色 １．２免疫组化染色试剂与方法兔抗人ＣＯＸ一２单 克隆抗体（工作液浓度为１：５ｏ）及Ｅｎｖｉｓｉｏｎ试剂盒 为美国ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司产品．购自基因有限公司（上 海）：鼠抗人ｐ５３单克隆抗体及免疫组化染色超敏 试剂盒为美国Ｍａｘｉｍ Ｂｉｓｔｅｅｈ公司产品。常规制片 ４ ｍ厚石蜡切片，分别进行ＣＯＸ一２及ｐ５３免疫组 化染色（ｓ—Ｐ法），操作步骤按说明书进行。用柠檬 酸缓冲液微波抗原修复，ＰＢＳ代替一抗作为空白对 照。已知阳性片作为阳性对照。 ｌ＿３结果判断光镜下，ＣＯＸ一２阳性表达于胞质 内，呈棕黄色颗粒；ｐ５３阳性表达于细胞核内，呈棕 褐色或棕黄色颗粒。在高倍镜下（×４００）每张切片 １材料与方法 随机选择５个视野，每个视野计数２００个细胞，计 １．１材料本组６７例癌组织标本及１５例癌旁组 算阳性细胞所占百分比。阴性（一）无阳性细胞；（＋） 织标本均取自本科同一手术组２００３年１至２００４ 阳性细胞＜２５％；（＋＋）阳性细胞介于２５％～５０％； 年１２月食管鳞癌手术标本石蜡组织块。且临床资 （＋＋＋）阳性细胞比例＞５Ｏ％。 料完整，术前均未行放化疗治疗。患者年龄３８～８４ １．４统计学处理所有资料均经ＳＰＳＳ １６．０统计 岁，平均６３．９岁；男５４例，女１３例；有吸烟史（＞２０ 软件包进行数据处理，率的比较采用ｘ 检验；相关 支／ｄ×１０年）４４例；有饮酒史（白酒＞１５０ ｍＬ／ｄ Ｘ 分析采用Ｓｐｅａｒｍａｎ相关分析：统计结果以Ｐ＜０．０５ １０年）３８例。肿瘤部位：上段７例、中段３６例、下段 为差异有显著性。 ２４例；组织学分级：高分化者ｌ９例．中分化者３４ ２结果 例，低分化者１４例。肿瘤浸润Ｔ，～Ｔ４分别为４、１８、 ２．１ ＣＯＸ．２、ｐ５３蛋白的表达在癌旁组织中ＣＯＸ一２ ２９、ｌ６例。有淋巴结转移者２５例，无淋巴结转移者 的阳性表达率２０％（３／１５），３例阳性病理中２例为 ４２例 慢性炎症表现，１例为正常组织；在癌组织切片中， ＣＯＸ．２蛋白表达阳性（＋一＋＋＋）者４９例（阳性率为 ７３．５％），两者表达差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。在 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６—５７２５．２０１０．０８．０１３ 癌旁组织中ｐ５３的阳性表达率６．７％（１／１５），１例阳 作者单位：２００１２７上海交通大学医学院附属仁济医院胸心 性病理为慢性黏膜炎表现；在癌组织中ｐ５３蛋白表 外科（魏华兵，曹子昂，傅于捷，钱晓哲），病理科（刘强） 通信作者：曹子昂Ｅ．ｍａｉｌ：ｄｒ＿ｅａｏ＠１６３．ｅｏｍ 达阳性（＋～＋＋＋）者４３例（阳性率为６４．２％），两者表 食管癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，研究表 明许多基因在食管癌发生过程中异常表达．多基因 的相互作用最终将导致食管癌的发生。了解这些基 因的表达变化及相关机制不仅有助于明确食 管癌的发病机制，而且为食管癌的早期诊断、预防、 治疗提供了新的理论依据。环氧合酶一２（ｃｏｘ．２）及 ｐ５３就是其中之一。目前，国内对研究食管鳞癌组 织中ＣＯＸ．２、ｐ５３蛋白表达的研究较少，本研究应 用免疫组化的方法检测食管癌组织中ＣＯＸ．２及 ｐ５３蛋白的表达，旨在探讨两者在食管癌中的表达 和临床病理参数的关系，并研究两者的关系及可能 的机制。 实用医学杂志２０１０年第２６卷第８期 达差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。免疫组化阳性染 表２ ＣＯＸ一２、ｐ５３表达与食管癌临床病理特征之间的关系 例 色见图１、２。不同分化程度的食管鳞癌细胞中 ＣＯＸ一２和ｐ５３蛋白表达情况见表ｌ。为统计及表述 方便，将表达结果统一分为阳性（＋，包括十一＋＋＋）和 阴性（一）。 表１不同分化程度的食管鳞癌细胞中ＣＯＸ ２和 ｐ５３蛋白表达情况 例 分化程度 小计 小计 好 １ ｌ９ ５ ｌ９ 中 ７ ３４ １２ ３４ 差 １Ｏ １４ ７ １４ 合计 １８ ６７ ２４ ６７ 蠢 图１食管鳞癌组织中ＣＯＸ．２的阳性表达（ｓ—Ｐ×１００） 图２食管鳞癌组织中ｐ５３阳性表达（Ｓ－Ｐ×１００） ２．２ ＣＯＸ一２、ｐ５３表达与食管癌临床病理特征之间 的关系ＣＯＸ．２表达与患者年龄、性别、嗜烟史、肿 瘤长度、部位、浸润深度及淋巴结转移无关（Ｐ＞ ０．Ｏ５），而与嗜酒史、肿瘤分化程度有关（Ｐ＜０．０５）。 见表２。ｐ５３蛋白阳性表达率与患者的性别、年龄、 嗜烟史、肿瘤长度、部位、分化程度、浸润深度无关 （Ｐ＞０．０５），而与嗜酒史、局部淋巴结转移有关 （Ｐ＜０．０５）。见表２。 ２．３食管鳞癌中ＣＯＸ．２与ｐ５３蛋白表达的相关性 本组６７例食管癌中ＣＯＸ．２与ｐ５３蛋白阳性共 表达３５例（５２．３％），相关性分析显示两者呈正相 关（ｒ＝０．２４９，Ｐ＝０．０４２）见表３。 ３讨论 食管鳞状细胞癌的发生与多基因异常表达及 相互作用有关。目前的研究主要着眼于从分子蛋白 水平寻找与癌变相关的生物学指标。并探讨它们在 食管癌发生发展过程中的作用机制，以提高早期诊 断率，改善治疗效果，或针对病因进行预防，或在早 期阶段进行化学干预，以降低发生率。 环氧化酶（ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ，ＣＯＸ）是一种膜结合 蛋白，具有双重酶的功能，是前列腺素类（ＰＧＳ）生 物合成的限速酶。目前发现有两个亚型：ＣＯＸ．１和 ＣＯＸ．２。近年来的研究发现．仅ＣＯＸ一２在肿瘤发生、 分化、转移等方面可能有重要作用。国外有研究报 表３食管鳞癌中ＣＯＸ一２与ｐ５３蛋白表达的相关性例 Ｐ５３ 例数 一 ＋ ｒ值Ｐ值 ｃｏｘ一２— １８ １Ｏ ８ Ｏ．２４９ ０．ｏ４２ ＋ ４９ ｌ４ ３５ 道…，ＣＯＸ．２在食管鳞癌和腺癌中的阳性表达率分 别是９１％和７８％。本研究也显示出ＣＯＸ ２在食管 鳞癌组织中较高的阳性表达率（７３．５％），明显高于 癌旁组织（２０％），但与肿瘤的浸润程度、淋巴结转 移以及分期无关，提示ＣＯＸ．２的异常表达可能仅 参与了食管癌的发生有关。本实验还显示，ＣＯＸ＇２ 的阳性表达主要集中在中高分化程度的食管癌病 例，其表达程度与食管癌的分化程度呈正相关，分 化程度越高，其表达越强，提示ＣＯＸ．２的表达可能 主要存在于较为成熟的食管肿瘤细胞，其过度表达 可能是在食管癌组织分化过程中有着重要地位的 分子变化。多年来的研究表明，食管癌的发生与生 实用医学杂志２０１０年第２６卷第８期 活条件、饮食习惯、存在强致癌物、缺乏一些抗癌因 素及遗传易感性有关，发病因素极为复杂，其中得 到认可的是食物及饮水中的亚硝胺类化合物和真 菌毒素、胃食管反流所带来的胆酸及胆盐、过于粗 糙或过烫的食物、饮酒、吸烟及锌的缺乏等。本研究 发现ＣＯＸ．２的阳性表达与嗜酒史明显相关，说明 ＣＯＸ．２可能参与了饮酒慢性致癌过程。 ｐ５３基因分为野生＿￣（ｗｔｐ５３）和突变￣（ｍｔｐ５３）． 前者为抑癌基因参与ＤＮＡ损伤修复，作为“分子警 察”监视着细胞基因组ＤＮＡ的完整性和复制的准 确性：后者在不同的肿瘤组织内其突变的密码子不 ４参考文献 Ｋｏｏ Ｋ Ｔ，Ｃｈｏｗ Ｋ Ｃ，Ｗｕ Ｙ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｃｌｉｎｉｅｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ 同．突变型ｐ５３基因能起到癌基因的作用［ 。由于 ［１ｊｓｉｇｎｉｉｃａｎｃｅ ｏｆｆ ｅｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ－２ ｏｖｅｒｅｘｐｍｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ 野生型的ｐ５３蛋白半衰期短．仅２０—３０ ｍｉｎ，具有 ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ［Ｊ］．Ａｎｎ Ｔｈｏｒａｃ Ｓｕｒｇ，２００３，７６（３）： 不稳定性，不易检测；突变型ｐ５３蛋白半衰期延长， ９０９—９１４． 易在细胞内累积，因而我们用于免疫组化的ｐ５３均 ［２］Ｉｏａｅｈｉｍ Ｅ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｍ Ｃ，Ｓａｌｍａｓ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｒｏｍ．ｂｏｓｐｏｎｄｉｎ一１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｕｒｏｔｈｅｌｉｌ ｃａａｒｃｉｎｏｍａ：ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｎｉｇｉｆｃａｎｃｅ ａｎｄ 为突变型ｐ５３蛋白。据报道［ ，约５０％的食管癌有 ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔＩｌ Ｐ５３ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ．ｔｕｍｏｕｒ ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ ａｎｄ ｐ５３基因突变。本研究结果显示，６７例食管癌中 ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌｒａ ｍａｔｒｉｘ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ［Ｊ］．ＢＭＣ Ｐｕｂｌｉｃ Ｃａｎｃｅｒ，２００６，６： ｐ５３蛋白表达阳性率为６４．２％（４３／６７），与报道相似， １４０． 明显高于癌旁组织（６．７％）。王启明等［４＿的研究结果 ［３］ｓｈｉ ｓ Ｔ，Ｙａｎｇ Ｇ Ｙ，Ｗａｎｇ Ｌ Ｄ，ｅｔ ａ１．Ｒｏｌｅ ｏｆ ｐ５３ ｇｅｎｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ；ｒｅｓｕｌｔｓ ｆｏｒｍ 显示。从正常食管上皮、癌旁组织到食管鳞癌组织， ｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅ ｍｉｃａｌ ａｎｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｃａｒｃｉｎｏｍａｓ ａｎｄ ｐ５３蛋白阳性表达率逐渐升高．且食管鳞癌组织中 ｎｅｒａｂｙ ｎｏｎ—ｃａｎｃｅｒｏｕｓ ｌｅｓｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１９９９，２０（４）： 阳性表达率与分化程度和淋巴结转移情况、ｉＮＯＳ ５９１—５９７． 和ＶＥＧＦ蛋白的表达无关，提示ｐ５３基因突变是食 ［４］王启明，贺春语，马智勇，等．人食管鳞状细胞癌组织中 管鳞状上皮癌变的早期事件。本试验中ｐ５３阳性表 ｉＮＯＳ、ＶＥＧＦ及Ｐ５３蛋白的表达［Ｊ］．郑州大学学报，２００８，４３ 达与食管癌浸润深度无相关．癌旁组织中阳性的１ （２）：１９９—２０２． 毛志福．Ｃ．ｅｒＢ一４在食管鳞癌中的表达及其ｌ临床意义 例为慢性黏膜炎，也间接支持了ｐ５３是食管癌早期 ［５］孙作永，［Ｊ］．实用医学杂志，２００９，２５（１１）：１７２７—１７２９． 发生事件这一观点。但在ｐ５３阳性患者中其淋巴结 ［６］Ｓｅｐｅｈｒ Ａ，Ｔａｎｔｅｒｅ Ｐ，Ｍａｒｔｅｌ—Ｐｌａｎｅｈｅ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ ｐａｔｔｅｒｎ 转移率有所增高，提示ｐ５３阳性细胞可能具有较强 ｏｆ ＴＰ５３ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｏｆ ｔｈｅ ｅｓｏｐｈａｇｕｓ 的转移特性，预后差［ｓ－。 ｉｎ Ｉｒａｎ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００１，２０（５０）：７３６８—７３７４． 研究发现野生型ｐ５３能通过竞争ＴＡＴＡ结合 ［７］Ｋａｗａｂｅ Ａ， Ｓｈｉｒｎａｄａ Ｙ， Ｕｃｈｉｄａ Ｓ， ｅｔ ａ１．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ一２ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌｏｗｅｒ 蛋白抑制ＣＯＸ一２启动子活性［ 。野生型ｐ５３可抑制 ｐａｒｔ ｏｆ ｔｈｏｒａｃｉｃ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｎｄ ｐ５３ ＣＯＸ．２表达。因而，在正常上皮细胞中，ＣＯＸ．２蛋白 ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２００２，６２（１）：４６—５４． 表达水平很低，而肿瘤组织中ＣＯＸ．２表达增加。原 （收稿日期：２０ｏ９—０８—２８编辑：黄月薪） 癌基因、生长因子、细胞因子等诱导ＣＯＸ．２表达的 同时可能促进突变型ｐ５３表达。我们的结果也显示． ＣＯＸ一２蛋白表达与ｐ５３表达具有相关性（Ｐ＜０．０５）， 在ｐ５３表达阳性的组织中，８１．４％的样本发现ＣＯＸ．２ 表达。但在ｐ５３表达阴性的组织中，多达５８．３％的 样本ＣＯＸ．２表达阳性，提示在野生型ｐ５３病例中， 可能存在其他因素诱导ＣＯＸ一２表达［ 。在对嗜酒的 因素分析中两者同时表现出有意义的结果．也提示 两者可能共同参与此致癌过程，但具体机理尚不清 楚。 关于审稿时限及刊出时间的声明 在平时的工作中，有大量的作者咨询电话，询问论文的审稿结果和刊出时间。这一问题分别在回执和刊用收费通知里已 有明确说明。 《实用医学杂志》审稿周期２个月，也就是从本刊收到您的审稿费，到决定刊用与否、修改与否的时间约为２个月。投 稿后，您可以经常到《实用医学杂志》网刊系统查询。 二、在本刊收到您的版面费之日起，我们将尽力在５个月内将您的论文刊出。 请各位作者细读本刊寄给您的每一份通知，尊重编辑部的辛勤劳动，避免不必要的反复的电话询问。 －一、谢谢您的配合。 本刊编辑部
