ChineseAgriculturalScienceBulletin
朝鲜蓟加工品中多酚含量研究
罗葵1,魏阳吉2,杨丽丽2,满媛2
(1首都医科大学医学实验与测试中心,北京100069;2
中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京100083)
摘要:为研究分析不同产地朝鲜蓟罐头食品中多酚种类、含量的差异,应用液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱方法(LC-MS/MS)进行检测,样品在避光条件下经70%的甲醇水溶液室温震荡提取1h后,进行液相色谱-质谱分析。采用Agilentproshell120EC-C18色谱柱,流动相A为0.1%乙酸-水,流动相B为乙腈,采用线性梯度洗脱。结果表明,此方法共定性定量出朝鲜蓟罐头中17种多酚物质,同一样品中不同多酚含量差异显著,绿原酸含量最高为625.701μg/g,洋蓟素的含量次之,平均值为315.823μg/g;按照不同地区多酚含量比较,亚洲样品中,多酚含量普遍偏低。由此得出,应用LC-MS/MS可以快速高效检测出朝鲜蓟罐头食品中多酚含量,多酚含量因产地不同差异显著。关键词:朝鲜蓟;罐头;多酚;洋蓟素;LC-MS/MS中图分类号:S3
文献标志码:A
论文编号:2012-2721
StudyLuoKuionPolyphenolfromArtichokesCanned
1(1MedicalExperimentand,TestWeiCenter,Yangji2Capital,YangMedicalLili2,UniversityManYuan2
,Beijing100069;
2
CollegeofFoodScienceandNutritionalEngineering,ChinaAgriculturalUniversity,Beijing100083)
Abstract:detectedLC-MS/MSbyToaceticanalysisLC-MS/MS.studydifferencewasTheconductedsamplesofpolyphenolsonareAgilentextractedindifferenthabitatsartichokescannedfood,polyphenolsareproshellwith12070%EC-Cmethanol18columnaqueous(4.6mm×50solutionmm,indark2.7conditions.µm),gradientacidshowedsignificantelution.andwaterTheweredifferencesresultscomprisedshowedinthesamethat,asmobilesample,17kindsphasetheofAcontentpolyphenolsandacetonitrileofchlorogenicwerewasidentified.mobileacidwasThephasethehighest,polyphenolB,usingaitwascontentlinear0.1%
625.701upto
wasμg/gandartichokesisfollowingthatwas315.823μg/g.TheAsiansample,thecontentKeygenerallywords:Cynarascolymuslow.LC-MS/MSL.;cancan;bequicklypolyphenols;andefficientlycynarin;LC-MS/MSdetectedpolyphenolinartichokescannedofpolyphenolfood.0引言
栽培成功,从此成为中国蔬菜市场上的一种新型蔬朝鲜蓟(CynarascolymusL.),又称菊蓟,菜蓟,法国菜。朝鲜蓟以肉质花托和幼嫩的苞片为主要食用部百合,荷花百合,属于多年生草本植物,是一种可药食分,可制作罐头、开胃酒和助消化片剂[2]。
两用蔬菜。原产在地中海及其沿岸地区,如法国、西班因朝鲜蓟中包含蛋白,矿质元素钾、磷、铁,少量油牙、意大利,其产量占世界产量的85%左右,南美等地脂,膳食纤维和大量的生物活性物质多酚,从而引起人朝鲜蓟的食用量正在逐渐增加,其种植历史也达一个们关注[3]。Sánchez-Rabaneda等[4]采用LC-MS/MS测定世纪之久[1]。19世纪传入中国上海,到20世纪80年代在朝鲜蓟叶等废弃物,鉴定出45种酚类物质,其中绿后,浙江、山东、云南、北京、湖北、青海等省市相继引种
原酸、洋蓟素、毛地黄黄酮的含量较高[5]。朝鲜蓟中含
基金项目:公益性行业科研专项“油料产地加工关键技术装备研究与示范”(201303072)。
第一作者简介:罗葵,女,1983年出生,湖南人,硕士,主要从事食品药品安全性评价研究。通信地址:100069北京市右安门外西头条10号首都医科大学医学实验与测试中心,E-mail:sunflower713@126.com。收稿日期:2012-08-10,修回日期:2012-10-11。
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有多种活性物质,科学研究证明,不仅具有助消化、促集中于绿原酸与洋蓟素等已知主要功能性多酚的含量进胆汁分泌,保护肝脏,刺激胆汁分泌,降低胆固醇功检测[11],而对朝鲜蓟及其加工品中功能性多酚全面的效[6],还有抗氧化功能[1],抗微生物活性等功效[7],其中分析检测鲜有报道。为此,笔者主要应用LC-MS/MS多数功能指向均与朝鲜蓟中功能性成分洋蓟素分析不同产地的朝鲜蓟罐头食品中多酚的组成及含量(Cynarin)有关。洋蓟素又称洋蓟酸,朝鲜蓟酸,菜蓟的差异。为生产加工中材料的选择、品质控制等提供素,洋蓟苷,化学名称为1,3-二咖啡酰奎宁酸,它具有抗一定的依据。氧化、抗病毒、抗纤维化、抗血小板活性、抗炎症反应、神1材料与方法经保护作用[8]等多种药理作用。除洋蓟素外,绿原酸1.1试验材料
(Chlorogenicacid)是朝鲜蓟中另外一种重要的功能性购买市售11种朝鲜蓟罐头,详细信息见表1。没成分。绿原酸,又称咖啡鞣酸,3-咖啡酰奎酸,具有抗食子酸、原儿茶酸、龙胆酸、绿原酸、儿茶素、香草酸、咖菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降啡酸、丁香酸、洋蓟素、表儿茶素、香豆酸、芦丁、云杉新血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用[9]。
甙、表儿茶素没食子酸酯、木犀草素、槲皮素、芹菜素、现有朝鲜蓟中多酚的检测方法有高锰酸钾法、酒购自Sigma(美国)。乙腈,乙酸为色谱纯(百灵威科技石酸亚铁法、原子吸收法、紫外分光光度法、有限公司),甲醇为分析纯(北京化学试剂公司)。实验Folin-Ciocaileu比色法等[10],这些方法仅针对总酚进行用水为超纯水(Milli-Q,18.2mΩ)。Agilent1200快速检测,提供整体的多酚含量,不能确切表现出多种功能液相仪,Agilent6460三重四级杆质谱仪,电喷雾电离性多酚之间的组成与比例差异;目前也有报道使用高源(ESI)质谱仪(Agilent,USA);Agilentproshell120效液相色谱-梯度洗脱法检测朝鲜蓟茎叶提取物,但多
EC-C18色谱柱(4.6mm×50mm,2.7µm)。
表1朝鲜蓟罐头样品
序号食品名称主要原料产地1Eroski朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸湖南2万客齐朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸、维他命C中国云南3Cynara朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸湖南4Cidacos朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸秘鲁5maria朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸美洲秘鲁6Progresso朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸、抗坏血酸、氯化钙美国7sanful朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸西班牙8berryl&farm朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸西班牙9Haoks朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸欧洲西班牙10cantfruit朝鲜蓟、水、盐、柠檬酸西班牙11Sacla朝鲜蓟、葵花籽油、葡萄醋、盐、初榨橄榄油、欧芹、蒜意大利1.2样品前处理
表2液相色谱梯度洗脱程序
样品前处理方法参照Wang等[12]、Pandino等[13]方法,有改动。具体方法如下:整个实验需避光。料液比时间/min
0.1%乙酸-水/%
乙腈/%为1:6,破碎,匀浆1min;室温震荡提取1h,4200r/min09010离心15min,取上清液并添加10%体积的70%甲醇水156535溶液混匀4800r/min离心分离10min。2010901.3分析条件
2310901.3.1色谱分离条件柱温:30℃;进样体积:5μL;249010流速0.4mL/min。流动相A为0.1%乙酸-水,流动30
90
10
相B为乙腈,采用线性梯度洗脱,洗脱程序如表2反应监测;离子源温度:325℃;干燥气流量:所示。
10mL/min;鞘气流速:11L/min;鞘气温度:350℃;毛1.3.2质谱条件离子源:电喷雾离子源;检测方式:多
细管电压:3000V,具体见表3。
罗葵等:朝鲜蓟加工品中多酚含量研究
·275·表3质谱条件
编号名称保留时间/min母离子/(m/z)子离子/(m/z)碎裂电压/V
碰撞电压/V扫描方式
功能性
1没食子酸1.922169.112511213—抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒、降糖、降脂[14]
2原儿茶酸3.147153.110910814—抗氧化、抗乙型肝炎病毒(HBV)[15]、
促进脂肪干细胞生长[16]
3龙胆酸3.920153.11099011—抗氧化
4
绿原酸
4.400
353.1
191.1114
13—
抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基、兴奋中枢神经系统[9]5儿茶素5.042289.12451401220317—
调节血脂、抗肿瘤、抗血小板凝集、清除自由基[17]
6香草酸6.019167.1152.1901210819—抗氧化、抗菌活性7咖啡酸6.229179.113511215—抗氧化、抗炎、抗菌、抗蛇毒
8
丁香酸
6.346
197.1
18295
1216716—
抗氧化
9洋蓟素6.370515.3353.216317—
抗氧化、抗病毒、抗纤维化、抗血小板活性、抗炎、
179.130神经保护作用[8]10表儿茶素6.862289.12451501220515—抗氧化,调节血脂[18]
11香豆酸8.642163.11199013—抗氧化、抗癌、利胆、抗凝血[19]
12芦丁9.522609.2300.121541—抑制糖尿病[20]
13
云杉新甙9.617
389.2
227.1160
10185.138—
抗氧化、降血脂、保护心脑血管、保肝[21]
14表儿茶素没169.118食子酸酯9.979441.2289.116513—抗氧化、抑菌[22]
15木犀草素
15.465285.11331703615126—抗氧化、抑菌、抗炎、抗肿瘤、调节免疫、降血脂[23]16槲皮素15.641301.21511542017916—
抗氧化、抑菌、抗炎、保护心脑血管、抗癌[24]、降压
降脂[25]
17芹菜素17.856269.111711740151
24
—
抗氧化、抗炎、镇静、降血压作用[26]、抗癌[27]
1.4数据处理
可以快速、高效的进行分离。
实验应用软件SPSS16.0进行统计分析。2.2不同产地朝鲜蓟制品中多酚的检测
2结果与分析
采用本实验确定的LC-MS/MS方法,对收集到的2.117种多酚LC-MS/MS分析
11个朝鲜蓟加工品多酚组成及含量进行了分析,结果本实验对朝鲜蓟中报道的17种多酚进行分析检如表4所示。从多酚含量分析可以看出,17种多酚中,测,建立了LC-MS/MS分析程序,整个程序在30min绿原酸和洋蓟素的含量最高,平均值分别为625.7μg/g内能较好分离17种多酚,标样的总离子图如图1所和315.8μg/g,这与前人研究报道一致[4,28],但含量远远示,方法加标回收率均达到80%以上,说明此方法有低于Negro等[28]报道多酚含量,以洋蓟素含量为例,效。
6个不同品种新鲜朝鲜蓟花托中洋蓟素含量在11053~在定性定量朝鲜蓟中多酚种类含量方面,LC-MS/28787mg/kgFM,叶片中含量是2655~6832mg/kgMS由于它的选择性,提供了一个很实用的分析工具,
FM,导致结果差异较大原因可能有3个方面:(1)朝鲜
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x105+/-ESI TIC MRM (** -> **) DF-HB-3.d 1.6112234551.5341.41.31.21.110.90.80.70.60.50.40.30.20.11234567891011121314151617181920212223242526272829计数与采集时间/min1没食子酸;2原儿茶酸;3龙胆酸;4绿原酸;5儿茶素;6香草酸;7咖啡酸;8丁香酸;9洋蓟素;10表儿茶素;11香豆酸;
12芦丁;13云杉新甙;14表儿茶素没食子酸酯;15木犀草素;16槲皮素;17芹菜素
图1多酚标样总离子图
蓟品种之间的差异,这在Negro等[28]的研究中也有体物质。总体结果显示,同一样品中,多酚种类、含量差现,6个不同品种朝鲜蓟中多酚含量差异显著;(2)异显著,在中国的朝鲜蓟罐头制品中检出多酚种类最加工处理造成了多酚的损失,这部分在本实验中没少,龙胆酸、槲皮素、丁香酸均未检出,而在欧洲样品有实验进行比较分析,可以在后续实验中设计加工中检测的17种多酚全部都有检出,且含量也高于中过程中多酚的变化规律研究;(3)多酚提取方法,研国的样品。
究中所应用的提取方法与Negro等[28]有少许差异,也2.3不同朝鲜蓟加工品多酚含量的差异
可能造成一定影响,由此也提出,在以多酚为参考指标11个样品按生产地分为中国(3个),美洲(3个),食用朝鲜蓟时,最好食用新鲜朝鲜蓟,以获取更多多酚
欧洲(5个),经分析比较,不同产地的多酚含量有显著
表4多酚检测结果及统计学描述
名称原儿龙胆香豆香没食丁芹木犀儿茶表儿槲皮云杉表儿茶素没芦丁咖啡绿原洋蓟茶酸酸酸草酸子酸香酸菜素草素素茶素素新甙食子酸酯酸酸素Erosk0.4640.1050.0090.0630.2380.0540.0100.0580.0040.06112.234690.624414.832±0.010nd±0±0±0.001nd±0.048±0.016±0.001ndnd±0±0.001±0.011±1.393±5.435±38.261中万客齐0.437nd0.0880.0460.056nd0.2900.1230.0070.0070.0290.003210.447国±0.006±0.003±0.003±0.001±0.002nd0.0816.205351.288±0.001±0.001±0.004±0.001±0.001±0.014±0.125±5.139±1.136Cynara0.539±0.023nd0.1100.0180.0560.3360.085ndnd0.0450.003441.327±0.003±0.001±0.001nd±0.002±0.003nd0.08313.947672.962±0.001±0±0.006±1.665±82.279±50.479Cidacos0.613nd0.3380.1120.0950.0120.1380.0590.0990.107nd0.0540.0431.09217.407617.436458.463±0.003±0.001±0.001±0.009±0.001±0.001±0.001±0.003±0.002±0.002±0±0.670±0.379±4.179±2.077美maria0.417nd0.1180.0550.0370.0090.1670.0480.0150.0150.0440.008310.732洲±0.001±0.003±0.003±0.002±0±0.005±0.006±0±0.001nd0.35511.276607.777±0.004±0.001±0.038±0.398±27.621±16.414progres-0.4850.2760.0880.0210.0330.0460.0070.09514.776535.826309.827so±0.002nd0.2610.0270.0240.012±0.002±0.002±0.001±0±0.024±0.012±0.003±0.008nd±0.004±0.001±0.005±0.248±26.101±22.149罗葵等:朝鲜蓟加工品中多酚含量研究
·277·续表4
名称原儿龙胆香豆香没食丁芹木犀儿茶表儿槲皮云杉表儿茶素没咖啡绿原洋蓟茶酸酸酸草酸子酸香酸菜素草素素茶素素新甙食子酸酯芦丁酸酸素sinful0.4870.2930.0810.0870.0371.9351.0260.0320.0390.35715.609856.864294.739±0.016nd±0.006±0.007±0.001±0.001±0.363±0.019±0.002±0.002nd0.0320.016±0±0.001±0.071±1.499±45.272±21.046brail&fa0.5460.2540.0810.0660.0311.4900.8190.0160.0210.0410.0080.16118.110839.891396.206rm±0.085nd±0.037±0.010±0.012±0.001±0.329±0.191±0.003±0nd±0.003±0.001±0.023±4.937±140.484±90.303Haoks0.398nd0.1220.0310.0340.2430.0400.0240.027nd0.0360.0060.1297.651455.242208.369欧±0.003±0±0.002±0.002nd±0.064±0.010±0.019±0.014±0.001±0.001±0.007±0.400±12.660±2.299洲1.4200.0110.0140.007cantfruit0.0340.0070.09514.321001.022424.641±0.016nd0.1680.1030.1190.0280.4260.237±0.002±0.001±0.003±0.002±0.101±0.007±0.002±0.001±0.001±0.003±0.001±0.0085±1.317±37.790±41.9010.050.012Sacla0.25560.0830.040.0364.1841.5340.0100.012±0.000.0130.0010.1603.301253.7814.471±0.012±0.0±0.00452.144±0.015±0±0.013±0.013±0±01±0±0±0.002±0.056±0.566±0.09307±0.004注:nd代表未检出。
性差异,详细见表5。中国样品中多酚含量除洋蓟素多酚之间的差异。从分类上可以看出,中国云南的样外,其余多酚含量均低于美洲和欧洲多酚含量。
品和欧洲样品多酚含量分布相似,湖南样品和美洲样采用SPSS16.0统计分析软件中系统聚类分析方品含量分布相似。中国朝鲜蓟均为欧洲和美洲引种作法对这11个样品进行分类和鉴别。采用组间平均联物,因此中国朝鲜蓟产品的差异性,除产地不同外,引结法,根据相似系数的大小进行聚类,聚类树形图如图种的品种不同是造成上述分类异化的主要原因。此2所示。从图2中可以看到,聚类分析总体上对欧洲和外,不同加工处理可能使产地和品种造成的差异更加美洲的朝鲜蓟罐头食品有很很高的识别能力,说明二显著。者在多酚品质方面存在较大的差异性。但是对于中国3结论与讨论
生产的朝鲜蓟加工品的分类存在异化,将中国云南(万现在关于朝鲜蓟的研究主要集中在2个方面,一克齐)的样品与欧洲的西班牙(Haoks)和意大利(Sacla)是朝鲜蓟中功能性多酚物质的生物活性,如抗氧化,利分为一类,西班牙的3个样品(Sanful、Berryl&farm、尿,抑菌等;二是研究生长过程中多酚分布及含量情cantfruit)为第二类,中国湖南的2个样品(Eroski和况[28]。对市售成品朝鲜蓟中多酚的保留情况鲜见报Cynara)与秘鲁(Cidacos、Maria)和美国(Progresso)样品道,笔者主要是应用LC-MS/MS技术,检测了11种朝为第三类。
鲜蓟罐头食品中多酚含量,分析朝鲜蓟罐头食品中多本实验中如仅考虑产地因素,分析朝鲜蓟制品中
酚的种类及含量情况,朝鲜蓟加工品中不同多酚的含
表5不同产地多酚含量比较
μg/g
原儿茶胆酸香豆酸香草酸没食子丁香酸芹菜素木犀草儿茶素表儿茶云杉表儿茶素酸酸素素槲皮素新甙没食子酸酯芦丁咖啡酸绿原酸洋蓟素中国0.480b0b0.100.0240.0580c0.280.080.00570.00240b0.0430.0040.0710.8571.6355.51c5b4b8b7b0c9c9a84b51a0b2b4a美洲0.505b0b0.230.0640.0520.0100.190.0640.0450.0510.0480.010.51414.4587.0359.69a8a2b7b3b8b3a8a0b1a90aa9a1b7a欧洲0.621a0.0112a0.180.0680.490.0261.650.730.0180.0220.0030.0310.0070.18011.8681.3265.64b0a0a4a6a1a7b4b85a1a52ba0b6a8b注:小写的不同字母表示0.05水平差异显著。
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图211个朝鲜蓟罐头样品聚类分析树状图
量差异显著,这为朝鲜蓟罐头食品能否成为功能营养食品提供一定数据支持。
参考文献
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different
parts
of
some
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of
globe
artichoke
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