生丌 ＬＥｒｒＩ ＲＳ ＩＮＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ技术通讯…Ｖｏ１．． １ ９一－－Ｎｏ．．６一，Ｏ ｉＮｏｖ．・，２， …００８一 ８２３ 文章编号：１００９－０００２（２００８）０６－０８２３－０３ 研究报告 乳腺癌患者循环肿瘤细胞与癌干细胞相关性的初步研究 曹明刚 ，尤承忠 ，王净 ，王彩莲 ，王永仿 ，李雅婷 ，赵枫姝。，刘胜利 ，窦骏 东南大学ａ．基础医学院病原生物学与免疫学系；ｂ．附属中大医院；江苏南京２１０００９ ［摘要］ 目的：检测乳腺癌患者外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）中循环肿瘤细胞（ＣＴＣ）和具有癌干细胞（ＣＳＣ）标志的ＣＴＣ（ＣＳＣ— ＣＴＣ），探讨患者外周血微转移与ＣＳＣ的相关性。方法：患者和健康者ＰＢＭＣ与磁珠偶联上皮细胞黏附分子单抗孵育后，用 磁性分离法富集ＰＢＭＣ中的上皮细胞。以ＣＫ 为患者ＰＢＭＣ中ＣＴＣ标志，用流式细胞术（ＦＣＭ）检测健康者和患者的ＰＢＭＣ 中ＣＫ 细胞及ＣＫ￣／ＣＤ４４＋／ＣＤ２４一细胞含量，并比较各组间ＣＴＣ、ＣＳＣ—ＣＴＣ含量的差异。结果：用ＦＣＭ在７３．０７％的患者中检 测到ＣＴＣ，在１９例检测到ＣＴＣ的患者中１８例有ＣＳＣ—ＣＴＣ（９４．７４％），ＣＴＣ中ＣＳＣ数量比例平均为１９．０ｌ％，且患者ＰＢＭＣ 中ＣＴＣ和ＣＳＣ—ＣＴＣ比例与临床ＴＮＭ分期相关。结论：初步建立了患者外周血ＣＳＣ—ＣＴＣ的检测方法，结果显示乳腺癌患者 外周血微转移中有ＣＳＣ—ＣＴＣ的参与，临床分期越晚的患者ＣＴＣ和ＣＳＣ—ＣＴＣ的数量越多。 ［关键词］ 乳腺癌；循环肿瘤细胞；癌干细胞；外周血单核细胞；磁性分离 ［中图分类号】Ｒ７３０；Ｒ７３７．９ ［文献标识码】Ａ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ Ｂｅｔｗｅｅｎ Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ Ｔｕｍｏｒ Ｃｅｌｌｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔｅｍ Ｃｅｌｌｓ ｉｎ Ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ Ｂｒｅａｓｔ Ｃａｎｃｅｒ ＣＡ ０ Ｍｉｎｇ－Ｇａｎｇ￣，ＹＯＵ Ｃｈｅｎｇ－Ｚｈｏｎｇｂ，ＷＡＮＧ 窖。ＷＡＮＧ Ｃａｉ－Ｌｉａｎｂ， ＷＡＮＧ Ｙｏｎｇ－Ｆａｎｇ￣，ＬＩ】， 死噶ＺＨＡ０ Ｆｅｎｇ－Ｓｈｕ￣，ＬＩＵ Ｓｈｅｎｇ－Ｌｉ￣ＤＯＵ Ｊｕｎ ａ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ；ｂ．Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｚｈｏｎｇｄａ Ｈｏｓｐｉｔａｌ； Ｓｏｕｔｈｅａｓｔ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１０００９；Ｃｈｉｎａ ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ（ＣＴＣ）ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＣＳＣ）－ＣＴＣ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｓ ｍｉｃｒｏｍｅｔａｓｔｓｉｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ （ＰＢＭＣ）ａｎｄ ＣＳＣ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｔｈｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｆ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｍｏｌｅｃｕｌｅ（ＥｐＣＡＭ）ｗａｓ ｆｉｒｓｔ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰＢＭＣ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌｓ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｍｏｎｏａｎｔｉｂｏｄｙ ｏｆ ＥｐＣＡＭ ｉｎ ＰＢＭＣ ｗａｓ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｂｙ ｍａｇｎｅｔｉｃ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ＣＴＣ ｉｓ ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ（ＣＫ）ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ＰＢＭＣ ａｎｄ ｔｈｅ ＣＫ ｃｅｌｌｓ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ＣＫＶＣＤ４４＋／ＣＤ２４一ｃｅｌｌｓ ｗｅｒｅ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ＰＢＭＣ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈ ｗｏｍｅｎ ｂｙ ｍｕｌｔｉｐａｒａｍｅｔｅｒ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ｆｉｎａｌｌｙ． Ｉｔ ｗａｓ ａｌｓｏ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｅａｌｔｈ ｗｏｍｅｎ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ＣＴＣ ａｎｄ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ＣＳＣ—ＣＴＣ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｓｔａｇｅ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣＳＣ－ＣＴＣ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ９４．７４％（１８／１９）ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ，ｗｈｏ ｈａｄ ＣＴＣ ｉｎ ＰＢＭＣ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｉｏ ｏｆ ＣＳＣ－ ＣＴＣ ｉｎ ＣＴＣ ｗａｓ １９．０１％．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｓｉｇｎｉｉｃａｎｔｆ ｄｉｆｅｒｅｎｃｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆ ＣＳＣ ａｎｄ ＣＳＣ－ＣＴＣ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ａｎｄ ｈｅａｌｔｈ ｗｏｍｅｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ：Ｉｔ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｔｈａｔ ａ ｎｏｖｅｌ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｉｎ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ ＣＳＣ－ＣＴＣ ｆｒｏｍ ＰＢＭＣ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ．ｈｅ ｄａｔＴａ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ＣＳＣ ｗａｓ ｏｆ ｐａｒｔｉｃｉｐａｔｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ， ａｎｄ ｔｈｅｒｅ ｗｅｒｅ ｍｏｒｅ ＣＴＣ ａｎｄ ＣＳＣ－ＣＴＣ ｉｎ ｌａｔｅｒ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｓｔａｇｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ｅａｒｌｙ ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ ｓｔａｇｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ；ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ；ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ；ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ；ｍａｇｎｅｔ— ｉｃ—ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ 血行播散是乳腺癌转移的重要途径，乳腺癌细胞进入外周 血中的微转移是远处转移的前提，肿瘤细胞可以通过血液循环 抵达任何组织和器官。研究显示，检测乳腺癌患者外周血循环肿 瘤细胞（ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ，ＣＴＣ），对其诊断、评估预后及治 生和发展的主要因素。有研究显示【”，乳腺癌细胞中只有一部分 表型为ＣＤ４４￣ＣＤ２４一的细胞具有肿瘤形成能力，而且这部分细胞 还可以非对称分化和自我更新，具有ＣＳＣ活性。鉴于此，我们用 免疫磁性分离（ｍａｇｎｅｔｉｃ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ，ＭＡＣＳ）联合多 ［收稿１３期］２００８—０４—３０ ［基金项目］江苏省卫生厅资助项目（１６２３０００５７７７） ［作者简介］曹明刚（１９８１一），男，硕士研究生 ［通信作者］窦骏，（Ｅ－ｍａｉｌ）ｎｊｄｏｕｊｕｎ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｎ．ａｎ 疗方案的选择具有重要价值。近年提出的癌干细胞（ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ，ＣＳＣ）学说又为乳腺癌微转移提供了新的理论依据。该 学说认为在肿瘤组织中只有少部分细胞不断地增殖，而大部分 肿瘤细胞处于不增殖或有限增殖的状态，只有ＣＳＣ才是肿瘤产 ８２４ 生 物 技 术 通 讯 ＬＥＴＦＥＲＳ ＩＮ ＢＩＯＴＥ。ＣＨＮ０ＬＯＧＹ Ｖｏ１．１９ Ｎｏ．６ Ｎｏｖ．，２００８ 参数流式细胞术（ＦＣＭ）检测乳腺癌患者外周血单核细胞（ｐｅ— ｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ，ＰＢＭＣ）中ＣＤ４４ＶＣＤ２４一ＣＴＣ，以 检测了８例健康志愿者外周血，其中１例有ＣＫ 细胞出现， 其余标本均未检测到ＣＫ 细胞。２６例乳腺癌患者检测结果见表 １，在１９例患者中检测到ＣＫ 细胞（１９／２６，７３．０７％），其中１８例 （１８／１９，９４．７４％）患者检测到ＣＫ＋／ＣＤ４４＋／ＣＩ）２４一细胞。 观察乳腺癌患者外周血微转移与ＣＳＣ之间的相关性。 １材料和方法 １．１材料 ２．２ 乳腺癌患者ＰＢＭＣ中ＣＫ 和ＣＫＶＣＤ４４＋／ＣＤ２４一细胞比例与 临床分期的关系 乳腺癌患者按Ｊ晦床分期不同分为３组，３组之间的ＣＫ 细胞 磁珠标记的抗人上皮细胞黏附分子（ＥｐＣＡＭ）单克隆抗体、 ＭＡＣＳ磁珠分离柱均购自德国美天妮公司；Ｆ１ＴＣ标记鼠抗人细 胞角蛋白（ＣＫ）单克隆抗体、ＰＥ标记鼠抗人ＣＤ４４单克隆抗体购 于美国ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ公司；ＰＥ—ｃｙ５标记鼠抗人ＣＤ２４单克隆抗体 比例和ＣＫ＋／ＣＤ４４＋／ＣＤ２４一细胞比例与临床分期的关系见图１。 ２．３乳腺癌患者ＣＴＣ中ＣＤ４ ／ＣＤ２４－ＣＴＣ的比例 以每例标本所得ＣＫ ＣＤ４４＋／ＣＤ２４一细胞比例除以ＣＫ 细胞 比例，得到每例患者ＣＴＣ中的ＣＳＣ比例。经统计，ＣＳＣ—ＣＴＣ在 购自北京赛驰生物技术公司；ＦＣＭ为ＢＤ公司产品。 １．２一般资料 ＣＴＣ中的比例平均为１９．０１％，其与临床分期的关系见图２。 乳腺癌组病人为２００６—０３～２００７—０５中大医院普外科、肿瘤 科收治的乳腺癌患者，共计２６例，均为女性，年龄４９～７１岁，平 均年龄５９．５岁；ＴＮＭ分期Ｉ期１２人、Ⅱ期ｌ１人、Ⅲ期３人，所 ３讨论 研究表明，ＣＴＣ的出现与乳腺癌患者的临床分期、淋巴结状 况及预后均密切相关㈣，因此临床上对ＣＴＣ的检测可作为早期 表１ 乳腺癌患者ＰＢＭＣ中Ｃ 细胞、ＣＫ十／ＣＤ４４ ＣＤ２４一细胞检测结果 有病例均经病理学检查证实。８例健康志愿者作为对照组，均为 女性，年龄２５～５４岁，平均年龄３８．５岁。 １．３ ＭＡＣＳ富集上皮细胞 常规分离ＰＢＭＣ后加入ＦｃＲ阻断剂（１０／ａ，Ｌ／１０ 细胞），混匀 后４℃孵育３０ ｒａｉｎ；再加入１０ Ｌ磁珠标记的抗人ＥｐＣＡＭ单克 隆抗体，混匀后４℃孵育３０ ｍｉｎ；缓冲液洗涤细胞２次以去除多 余的抗体，以１００ Ｌ分离缓冲液重悬细胞；把分离柱放人磁场 中，加入５００ Ｌ缓冲液，平衡分离柱；加入细胞悬液，稍后加入 １ ５００ ｍＬ缓冲液冲洗，收集阴性细胞；将分离柱移出磁场；用１ ｍＬ缓冲液匀速冲洗，必要时要用泵加压，收集阳性细胞。 １．４ ＦＣＭ检测 分别以ＣＫ—ＦＩＴＣ、ＣＤ４４一ＰＥ、ＣＤ２４一ＰＥ—ｃｙ５单克隆抗体标记 上述分离后的阳性细胞，抗体与样本充分混匀，４℃孵育３０ ｍｉｎ， ＰＢＳ洗２次后以３００ Ｌ １％多聚甲醛重悬，固定。ＦＣＭ检测，以 ＣＫ 细胞比例表示ＰＢＭＣ中的肿瘤细胞含量，以ＣＤ４４＋／ＣＤ２４一细 胞设门，分析ＣＫ＋／ＣＤ４４ ＣＤ２４一细胞比例，以此数据表示乳腺癌 患者ＰＢＭＣ中具有ＣＳＣ活性的肿瘤细胞含量。 ２结果 ２．１ ＦＣＭ检测结果 ４ ３ ● 量 ｚ ３ １ Ｏ ＴＮＭ分期ＴＮＭ分期 图１ 乳腺癌患者ＰＢＭＣ中ＣＫ 细胞与ＣＫＶＣＤ４４＋／ＣＤ２４一细胞比例与临床分期的关系 统计结果显示３组问有显著差异（Ｐ＜０．０５），乳腺癌患者ＰＢＭＣ中ＣＫ 细胞与ＣＫＶＣＤ４４ＶＣＤ２４一细胞比例均与临床分期相关 曹明刚等：乳腺癌患者循环肿瘤细胞与癌干细胞相关性的初步研究 ８２５ 一 一ｎｌ上Ｏ。０∞ｕ Ｈ Ｉｌｌ ＴＮＭ分期 图２乳腺癌患者ＣＴＣ中ＣＤ４４￣／ＣＤ２４一ＣＴＣ的比例与临床分期的关系 统计结果显示３组问无显著差异（尸＞Ｏ．０５），乳腺癌患者ＣＴＣ中ＣＤ４４＂／ ＣＤ２４一ＣＴＣ的比例与临床分期没有明显相关性 诊断的依据，对于更好地判断预后并以此制定合适的个体化治 疗方案有一定的临床价值＿５１。但在乳腺癌患者外周血中检测到 ＣＴＣ并不意味着一定会形成转移，乳腺癌患者的大部分ＣＴＣ在 血循环中很快就会凋亡旧。而ＣＳＣ学说认为在肿瘤组织中只有少 部分细胞不断增殖，大部分肿瘤细胞处于不增殖或有限增殖的 状态，只有ＣＳＣ才是肿瘤产生和发展的主要因素Ｆ 。因此，非 ＣＳＣ癌细胞由于不具备肿瘤形成能力，即使到达转移的组织或 器官也不易形成新的肿瘤，只有具有ＣＳＣ活性的ＣＴＣ（ｃｓｃ— ＣＴＣ）才可以在继发组织、器官形成转移灶。 我们检测了乳腺癌患者ＰＢＭＣ中ＣＤ４４＋／ＣＤ２４一ＣＴＣ，并以 健康志愿者作为对照。分离ＰＢＭＣ后，以抗ＥｐＣＡＭ单克隆抗体 直接偶联的免疫磁珠富集乳腺癌患者外周血中的肿瘤细胞，提 高了外周血样本中肿瘤细胞浓度，从而提高了ＦＣＭ检测ＣＴＣ的 敏感性。再以ＦＩＴＣ—ＣＫ、ＰＥ—ＣＤ４４、ＰＥ—ｃｙ５一ＣＤ２４等３种单克隆 抗体标记富集后的ＰＢＭＣ，用ＦＣＭ同时分析ＣＫ、ＣＤ４４、ＣＤ２４共 ３种细胞表面分子，以ＣＫ 细胞为ＣＴＣ的标志，而以ＣＫ＋／ＣＤ４４＋／ ＣＤ２４一细胞为ＣＳＣ—ＣＴＣ的标志，对乳腺癌患者ＰＢＭＣ中的ＣＴＣ 及ＣＳＣ—ＣＴＣ的比例进行定量分析。结果表明，该方法可以有效 检测乳腺癌患者ＰＢＭＣ中ＣＤ４４＋／ＣＤ２４一ＣＴＣ，而在８例健康志 愿者中，有１例检测到ＣＫ 细胞，可能为采血或操作过程中污染 所致。 在１９例（７３．０７％）乳腺癌患者外周血中检测到了ＣＫ 细胞， 其中ｌ８例均有ＣＤ４４＋／ＣＤ２４一ＣＴＣ出现（９４．７４％）。可见，乳腺癌 患者外周血微转移中有ＣＳＣ的参与，且ＣＳＣ可能在乳腺癌外周 血微转移中扮演着重要角色。另外，ＣＫ＋／ＣＤ４４＋／ＣＤ２４一细胞比例 与临床分期相关，即临床分期越晚，随着进入外周血中的肿瘤细 胞增加，外周血中存在的具有ＣＳＣ标志的乳腺癌细胞也越多。检 测结果还显示，乳腺癌患者ＰＢＭＣ中ＣＳＣ—ＣＴＣ占总体ＣＴＣ的比 例平均为１９．０１％，但在各期乳腺癌患者中，ＣＴＣ中ＣＳＣ的比例 并无差异。有报道，在原位乳腺癌中ＣＳＣ的比例小于１０％ｔ ０１。导 致这种结果可能有２种机制。第一，ＣＳＣ具有更强的转移侵袭能 力。人们很早就发现转移是一个高度选择非随机的过程，最近的 研究表明，相比于非ＣＳＣ乳腺癌细胞，ＣＳＣ具有更强的转移侵 袭能力ｒ）】，也就是说ＣＳＣ进入外周血的几率更大。第二，由于非 ＣＳＣ的乳腺癌细胞在外周血中凋亡所致。早在２００１年，Ｍｅｈｅｓｔ￣ 等研究发现乳腺癌患者外周血ＣＴＣ大部分都趋于凋亡，这是由 于外周血微环境与原位肿瘤不同所致，ＣＳＣ则可能由于具有干 细胞特性而可以适应于血循环的微环境中免于凋亡。因此，由于 外周血中的非ＣＳＣ—ＣＴＣ乳腺癌细胞因凋亡而减少，从而致使 ＣＳＣ的比例升高。Ｂａｌｉｃｔ“ 等检测了５０例乳腺癌患者骨髓中表型 为ＣＤ４４ＶＣＤ２４一的弥散肿瘤细胞（ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ ｔｕｍｏｒ ｃｅｉｌｓ， ＤＴＣ），发现所有检测到ＤＴＣ的患者骨髓中均含有ＣＳＣ—ＤＴＣ，且 ＤＴＣ中ＣＳＣ的比例高达７２％。这个结果提示，由于非ＣＳＣ—ＣＴＣ 乳腺癌细胞不断凋亡，最后能够进入骨髓的大部分甚至全部都 是ＣＳＣ，这些ＣＳＣ在骨髓中增殖分化形成新的肿瘤，骨髓中的 ＣＳＣ的比例又会随之降低。 综上所述，我们建立的ＭＡＣＳ联合多参数ＦＣＭ检测方法可 以有效地检测乳腺癌患者外周血ＣＳＣ—ＣＴＣ，乳腺癌患者外周血 微转移中有ＣＳＣ参与，ＣＳＣ—ＣＴＣ的数量与临床分期相关，ＣＴＣ 中ＣＳＣ—ＣＴＣ的比例高于已报道原位肿瘤中的ＣＳＣ比例。 参考文献 ［１】Ａ１一Ｈａｊｊ Ｍ，Ｗｉｃｈａ Ｍ Ｓ，Ｂｅｎｉｔｏ－Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｉ— ｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ啪．Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ，２００３，１００：３９８３—３９８８． 『２ Ｓｔ２Ｊａｔｈｏｐｏｕｌｏｕ Ａ，Ｇｉｚｉ Ａ，Ｐｅｒｒａｋｉ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｒｅａｌ—ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＫ一１９ ｍＲＮＡ－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａ］ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎ－ ｃｅｒ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｌｉｇｈｔｃｙｃｌｅｒ ｓｙｓｔｅｍ田．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ，２００３， ９：５１４５—５１５１． 【３］Ｔａｕｂｅｒｔ Ｈ，Ｂｌｕｍｋｅ Ｋ，Ｂｉｌｋｅｎｒｏｔｈ Ｕ，ｅｔ ａ１．Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｄｉｓｓｅｍｉｏａｔ— ｅｄ ｔｕｍｏｒ ｃｅｉｌｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ： ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｔｏ ｎｏｄａｌ ｓｔａｔｕｓ ａｎｄ ｏｃｃｕｒｒｅｌｌｃｅ ｏｆ ｍｅｔａｓｔａｓｅｓ［Ｊ］．Ｇｙｎｅｃｏｌ Ｏｎｃｏｌ，２００４，９２：２５６—２６１． 『４】 Ｃｒｉｓｔｆｏａｎｉｌｌｉ Ｍ，Ｂｕｄｄ Ｇ Ｔ，Ｅｌｌｉｓ Ｍ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｕｍｏｒ ｃｅｌｌｓ，ｄｉｓｅａｓｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｉｎ ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ［Ｊ］．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ，２００４，３５１：７８１—７９１． 【５］曹明刚，窦骏．乳腺癌患者循环肿瘤细胞检测的研究进展【Ｊ］．生物 技术通讯，２０ｏ７，１８：３１３—３１５． 【６】Ｍｅｈｅｓ Ｇ，Ｗｉｔｔ Ａ，Ｋｕｂｉｓｔａ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｃｅｌｌｓ ａｒｅ ｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙ ａｐｏｐｔｏｔｉｃ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐａｔｈｏｌ。２００１．１５９：１７—２０． 【７】Ｐｏｎｔｉ Ｄ，Ｚａｆｆａｒｏｎｉ Ｎ，Ｃａｐｅｌｌｉ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｂｒｅａｓｔ ｃａｎｃｅｒ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ：ａｎ ｏｖｅｒｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｊ Ｃａｎｃｅｒ，２０ｏ６．４２：１２１９－１２２４． ［８】唐权，窦骏，顾宁．癌干细胞研究现状［ＪＪ．东南大学学报（医学版）， ２００Ｓ．２４：２７６—２７９． ［９】潘猛．从鼠黑色素瘤分离和鉴定ＣＳＣ的初步研究［Ｄ】．东南大学，硕 士学位论文，２００６． 【１０】Ａｂｒａｈａｍ Ｂ Ｋ，Ｆｒｉｔｚ Ｐ，ＭｃＣｌｅｌｌａｎ Ｍ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ＣＤ４４Ｖ ＣＤ２４Ｖｌｏｗ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｂｒｅａｓｔ ｃａｕｃｅｒ ｍａｙ ｎｏｔ ｂｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｌｉｎｉ— ｃａｌ ｏｕｔｃｏｍｅ ｂｕｔ ｍａｙ ｆａｖｏｒ ｄｉｓｔａｎｔ ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ ．Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ， ２００５．１１：１１５４—１１５９． 【１ １】Ｂａｌｉｃ Ｍ，Ｌｉｎ 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