河北农业科学，２０１０，１４（８）：１３７—１３８，１４９ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ 编辑杜晓东 西瓜枯萎病菌分离及致病力测定 纪莉景，王连生，栗秋生，王翠霞，孔令晓 （河北省农林科学院植物保护研究所，河北省农业有害生物综合防治工程技术研究中心，河北保定０７１０００） 摘要：对采自我国不同地区的西瓜枯萎病病株，进行了病原菌分离鉴定和致病性测定。结果表明：西瓜枯萎病 病原菌是尖孢镰刀茵，对西瓜幼苗的平均病株率为７２．８％；分离到的茄镰刀菌和半裸镰刀茵对西瓜幼苗也有一 定的致病力，造成西瓜幼苗下胚轴基部水浸状腐烂，平均病株率分别为ｌ８．１％和２０．０％。尖孢镰刀茵不同菌株 的致病力也存在差异，除来自海南的菌株外，来自其他各地区的菌株平均病株率均＞７０％；只有采自海南的菌 株中出现了对西瓜幼苗没有致病力的菌株，海南所有菌株的平均病株率仅为３３％。２０１０年研究结果显示．来自 海南的菌株与来自其他地区的菌株之间存在致病力差异。 关键词：西瓜；西瓜枯萎病；尖孢镰刀菌；病原鉴定；致病性 中图分类号：￥４３２．４ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００８．１６３１（２０１０）０８－０１３７－０２ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ Ｗｉｌｔ ＪＩ Ｌｉ—ｊｉｎｇ，ＷＡＮＧ Ｌｉａｎ—ｓｈｅｎｇ，ＬＩ Ｑｉｕ—ｓｈｅｎｇ，ＷＡＮＧ Ｃｕｉ—ｘｉａ，ＫＯＮＧ Ｌｉｎｇ—ｘｉａｏ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｆｏｒｅｓｔｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＩＰＭ Ｃｅｎｔｒｅ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｗｉｌｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ｄｉｓｅａｓｅｄ ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｐｌａｎｔｓ ｉｎ Ｃｈｉｎａ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｗａｓ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ７２．８％．Ｆ．ｓｏｌａｎ ａｎｄ ｓｅｍｉｔｅｃｔｕｍ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｉｓｏｌａｔｅｄ，ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｄｅｖｅｌｏｐ ｌｉｇｈｔ—ｃｏｌｏｒｅｄ．ｗａｔｅｒ ｓｏａｋｅｄ ａｒｅａｓ ０ｎ ｔｈｅ ｂａｓｅ ａｎｄ ２０．０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ ｏｆ ｈｙｐｏｃｏｔｙｌ。ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆ １８．１％Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｗａｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ．Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｏｆ Ｆ．ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ．Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ａｂｏｖｅ ７０％，ｅｘｃｅｐ ｆｏｒ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ Ｈａｉｎａｎ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎｃｉｄｅｎｃｅ ｒａｔｅ ｏｆ ３３％．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｂｏｖｅ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｓｏｌａｔｅｓ ｆｒｏｍ Ｈａｉｎａｎ ｗａｓ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｒｏｍ ｔｈｏｓｅ ｆｒｏｍ ｏｔｈｅｒ ｒｅｇｉｏｎｓ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ；Ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｗｉｌｔ；Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ；Ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ 西瓜枯萎病是１种是由尖孢镰刀菌西瓜专化型 （Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｏｘｙｓｐｏｒｕｍ ｆ ｓｐ．ｎｉｖｅｕｍ）引起的世界性土传病 害，在我国各西瓜产区均有发生 ’ 。近年来由于西瓜 西瓜品种为京域二号（北京京域威尔农业科技有限 公司）。 １．２方法 １．２．１ 西瓜枯萎病标样采集和病原菌的分离 ２０１０年 种植面积扩大，加之种植模式单一，致使西瓜枯萎病的 为害呈逐年加重趋势，一般年份发病率为２０％～４０％， 严重年份达８０％以上甚至绝收，西瓜枯萎病已经成为 西瓜生产中的主要病害 。目前生产上利用嫁接技术有 在河北、河南、山东、海南、福建和新疆等西瓜产地， 采集具有西瓜枯萎病症状的西瓜病株。用流水冲洗干 净，将根茎部浸于７５％的酒精后将酒精烧去，用已灭 菌的解剖刀切去表皮组织，切取其中小块变色的维管束 组织，置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ＰＤＡ）上，在 ２５℃条件下培养，每皿放置病组织５片。待菌落长出 后，采用挑取单孢子的方法进行纯化。纯培养物于 一效地控制了西瓜枯萎病的发生 ，嫁接大多用南瓜作砧 木。对西瓜枯萎病的病原菌及其致病力进行研究，旨为 探讨嫁接西瓜连续种植在控制枯萎病的同时，是否会引 起其他根部病害发生提供理论基础。 １材料与方法 １．１材料 ２０ ｑＣ的甘油中冷冻保存。 对分离到的病原 １．２．２ 西瓜枯萎病菌致病力的测定菌进行西瓜幼苗致病力测定。打取纯化菌株的菌盘于 ＰＤ液体培养基中，摇床振荡培养４ ｄ。将培养液用双层 纱布过滤，获得病原菌孢子悬浮液。将孢子悬浮液调至 收稿日期：２０１０－０６—１１ 基金项目：公益性行业（农业）科研专项（２００９０３０４９－０９） 孢子浓度１０ 个／ｍＬ，采用拌菌土的方法，即将孢子悬 浮液１０ｍＬ拌人含无菌基质（蛭石与沙土按体积１：１混 合）的盆钵中，每个菌株重复６次，每盆种２粒经过表 面消毒的西瓜种子，置于２５～２８℃的温室中进行培养。 作者简介：纪莉景（１９７９一），女，河北深泽人，博士，助理研究员， 主要从事植物病害研究。 通讯作者：孑Ｌ令晓（１９６４一），女，四川华阳人，研究员，主要从事 植物病害研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｋｏｎｇｌｉｎｇｘｉａｏ＠ｓｏｈｕ．ｃｏｌｎ。 ・１３８・ 河北农业科学 ２０１０芷 出苗后，逐日观察幼苗的发病情况，调查病株率。 分离频率为３４．８％；此外，还分离到茄镰刀菌、离蠕孢 菌、半裸镰刀菌、丝核菌和腐霉菌（表１）。 舳 ∞册２结果与分析 ２．１西瓜枯萎病菌的分离结果 在分离过程中发现，病原菌的获得与病样采集时期 关系较大。一般在发病初期病株中分离得到尖孢镰刀菌 的几率较大；到发病后期整株植株萎蔫时，一般分离得 到其他菌或土壤中的腐生菌。 ２０１０年在河北、河南、山东、海南、福建和新疆等 地共采集具有西瓜枯萎病症状的病株２９３株，经病原菌 分离、纯化和形态鉴定，得到尖孢镰刀菌菌株１ｏ２株， ∞∞ 铝 表１西瓜枯萎病病原菌分离结果 标样来源地 海南 河北 （株Ｊ 半裸镰刀菌 ４ Ｔａｂｌｅ １ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｗｉｌｔ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ 病株数量 尖孢镰刀菌 加∞茄镰刀菌 ９ ８ ６ 离蠕孢菌 丝核菌 ９ ｌ 一 腐霉菌 河南 一 福建 山东 一 新疆 上海 ４ 一 一 合计 ｌ７ ４ １０ ２．２西瓜枯萎病菌的致病力 一２ Ｏ 一一５ — ７ 的海南菌株进行致病力分析。 ∞ｓ｝舳阳∞∞如∞∞ｍ 对分离到的１０２株尖孢镰刀菌和其中的９株茄镰刀 菌、３株半裸镰刀菌进行西瓜幼苗致病力测定，结果 （图１）表明，１０２株尖孢镰刀菌菌株的平均病株率 （７２．８％）明显高于茄镰刀菌和半裸镰刀菌的平均病株 斟 蜷 溪 率（茄镰刀菌、半裸镰刀菌的平均病株率分别为 １８．１％和２０．０％）。其中，尖孢镰刀菌接种后７ ｄ即表 现症状引起急性枯萎，症状表现为下胚轴基部变褐缢 缩，发生猝倒死亡，或者胚轴顶端呈现失水状，子叶萎 蔫下垂；而茄镰刀菌和半裸镰刀菌造成西瓜幼苗下胚轴 基部水浸状腐烂，发病时间晚，表现为胁迫条件下幼苗 慢性萎蔫，这２种菌虽然也能引起西瓜幼苗发病，但发 病症状不同于尖孢镰刀菌引起的西瓜枯萎病症状。 Ｓ 酱 嚣 茄镰刀茸 半裸镰刀菌 尖孢镰刀菌 镰刀菌种类 图ｌ不同的镰刀菌对西瓜幼苗的致病力 Ｆｉｇ１ Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆＦｕｓａｒｉｕｍ ｓｐｐ． ｔｏ ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｓｅｅｄｌｉｎｇ 尖孢镰刀菌不同菌株的致病力也存在差异，１０２株 菌株引起的西瓜幼苗病株率为０～１００％，除来自海南的 菌株外，来自其他各地区的菌株平均病株率均＞７０％ （图２）；只有采白海南的菌株中出现了对西瓜幼苗没有 致病力的菌株，且采白海南所有菌株的平均病株率仅为 ３３％。２０１０年研究结果显示，来自海南的菌株与来自其 他地区的菌株之间存在致病力差异，今后还需要对更多 第８期 金立平等：５％己唑醇悬浮剂防治苹果斑点落叶病田间试验 ・１４９・ 防治效果（％）＝［１一（对照区药前病情指数× 处理区药后病情指数）／（对照区药后病情指数×处理 区药前病情指数）］×１００ ９３．４０％和９２．０８％，与药剂对照的防治效果 （９３．２３％）相当，差异不显著（表１），且对作物安全。 表明５％己唑醇悬浮剂是防治苹果叶片斑点落叶病较好 的药剂，对苹果叶片斑点落叶病有较好的治疗作用，能 够有效控制苹果叶片斑点落叶病的为害。从经济角度考 虑，认为喷施５％己唑醇悬浮剂１ ５００倍液 ２结果与分析 ５％己唑醇悬浮剂１ ０００倍液、１ ２００倍液、１ ５００倍 液对苹果叶片斑点落叶病的防治效果分别为９４．５６％、 （３３．３ ｍｇ／ｋｇ）为宜。 表１ ５％己唑醇悬浮剂对苹果斑点落叶病的防治效果 Ｔａｂｌｅ １ Ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ５％ｈｅｘａｃｏｎａｚｏｌｅ ＳＣ ｏｎ ａｐｐｌｅ ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｌｅａｆ ｓｐｏｔ ３小结 ［２］曹子刚．北方果树病虫害防治［Ｍ］．北京：中国农业出 版社，１９９５． 苹果叶片斑点落叶病是苹果树病害中较难防治的 ［３］潘金菊，慕卫，翟茹环，等．９种杀菌剂对苹果斑点落 １种病害。试验结果表明，５％己唑醇悬浮剂是防治苹果 叶病菌和轮纹病菌的比较［Ｊ］．农药科学与管理，２００６， 叶片斑点落叶病较好的药剂。在发病初期，喷施５％己 （６）：１６—１８． 唑醇悬浮剂１ ０００倍液（５０．０ ｍｒ，／ｋｇ）、１ ２００倍液 ［４］时春喜，樊民周，段双科，等．阿米西达防治苹果黑星 （４１．７ ｍｇ／ｋｇ）和１ ５００倍液（３３．３ ｍｇ／ｋｇ），隔１０～ 病和斑点落叶病的效果［Ｊ］．西北农业学报，２００４， １４ ｄ喷１次，连喷３～４次，均可有效控制苹果叶片斑 （４）：５５—５８． ［５］李恩才，时春喜，李亚玲，等．２５％阿米西达ｓｃ防治苹 点落叶病的发生为害，平均防效在９２％以上。其中喷施 果斑点落叶病田间药效试验［Ｊ］．石河子大学学报（自 １ ５００倍液（用量为３３．３ ｍｅ，／ｋｇ）较为经济。 然科学版），２００４，（１）：１４５—１４７． ［６］农业部农药检定所生测室．农药田间药效试验准则二 参考文献： ［Ｋ］．北京：中国标准出版社，２００４． ［１］邱强．原色苹果病虫图谱［Ｋ］．北京：中国科学技术 出版社，１９９６． （上接第１３８页） 性鉴定以及病菌致病力的测定。 ￡ｓｐ．ｃｕｃｕｒｂｉｔａｅ ｒａｃｅ １，ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ｇｒａｆｔｅｄ ｗａｔｅｒ一 ｍｅｌｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｉｎ Ｓｐａｉｎ［Ｊ］．Ｂｕｌｌｅｔｉｎ ＯＥＰＰ，２０００， 参考文献： ３０（２）：１７９—１８３． ［１］张学炜，钱笑丽．西瓜病害及其发生情况调查报告［Ｊ］． ［６］ Ｐａｔｅｒｎｏｔｔｅ Ｓ Ｊ．Ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ ｆ．ｓｐ．Ｃｌｌ，ｏ 中国西瓜甜瓜，１９９０，（Ｉ）：４２—４４． ｃｕｒｂｉｔａｅ ｒａｃｅ １ ｔｏ ｃｏｕｒｇｅｔｔｅ［Ｊ］．Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ ［２］臧君彩，罗维德，孟昭萍．西瓜枯萎病发生危害与综合 Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，１９８７，９３：２４５—２５２． 防治［Ｊ］．植物保护，２００１，２７（５）：４８． ［７］Ｇａｒｃｉａ—Ｊｉｍ６ｎｅｚ Ｊ，Ａｒｍｅｎｇｏｌ Ｊ，Ｍｏｙａ Ｍ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｆｉｒｓｔ ｒｅｐｏｒｔ ［３］王德旭，李兵川．西瓜枯萎病的诊断与防治［Ｊ］．农机 ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ￡ｓｐ．ｃｕｃｕｒｂｉｔａｅ Ｒａｃｅ １ ｉｎ Ｓｐａｉｎ ｌ Ｊ １． 安全监理，２００２，（１）：１３． Ｐｌａｎｔ Ｄｉｓｅａｓｅ，１９９７，８１：１２１６． ［４］Ｍｉｇｕｅｌ Ａ，Ｍａｒｏｔｏ Ｊ Ｖ，Ｓａｎ Ｂａｕｔｉｓｔａ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｇｒａｆｔｉｎｇ ｏｆ ［８］周凤珍，康国斌．西瓜部分抗枯萎病材料的抗性遗传研 ｔｒｉｐｌｏｉｄ ｗａｔｅｒｍｅｌｏｎ ｉｓ ａｎ ａｄｖａｎｔａｇｅｏｕｓ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ｔｏ ｓｏｉｌ ｆｕｍｉ— 究［Ｊ］．中国西瓜甜瓜，１９９６，（２）：１７一ｌ８． ｇａｔｉｏｎ ｂｙ ｍｅｔｈｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅ ｆｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｗｉｌｔ ｌ Ｊ １． ［９］肖荣凤，刘波，朱育菁，等．西瓜枯萎病原菌鉴定及 Ｓｃｉｅｎｔｉａ Ｈｏｒｔｉｃｕｈｕｒａｅ．２００４，１０３（１）：９—１７． 其生物学特性的研究［Ｊ］．武夷科学，２００４，２０：７０— ［５］Ａｒｍｅｎｇｏｌ Ｊ，Ｊｏｓｅ Ｃ Ｍ，Ｍｏｙａ Ｍ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｓｏｌａｎｉ ７３．
