诱导多能干细胞来源间充质干细胞对大鼠骨关节炎的治疗作用

◊药学研究◊诱导多能干细胞来源间充质干细胞对大鼠骨关节炎的治疗作用何继晨1,严君逸2，程琢玉1，程润1，赵英杰1，魏伟1严尚学1作者单位：1安徽医科大学临床药理研究所、抗炎免疫药物教育部重点实验室、抗炎免疫药物安徽省协同创新中心，安徽合肥230032 ；2安徽医科大学第一临床医学院，安徽合肥230032通信作者严尚学，男，副研究员，硕士生导师,研究方向为抗炎免疫药理学,E-mail: yan-shx@ 163 .com基金项目：国家级大学生创新创业训练计划项目(201710366007)摘要：目的研究诱导多能干细胞来源间充质干细胞(PSC-MSCs)对大鼠骨关节炎(OA)的治疗作用。方法采用Hulth法建

立大鼠OA模型，编号后运用Excel表格随机分组功能将其分为模型组、iPSC-MSCs组、人脐带来源间充质干细胞(hUC-MSCs) 组、玻璃酸钠(HA)阳性对照组，另设假手术组作为对照，每组10只。除HA组动物多次给药(每周1次,共给药5次)外，其它 各组均单次给药，每次每只动物在术侧关节腔注射50 ,L药物PSC-MSCs和hUC-MSCs,假手术组和模型组同法给予生理盐

水。给药5周后处死动物，观察iPSC-MSCs对关节直径差值、关节腔结构及评分、关节面评分、病理学评分等指标的影响;检测 膝关节基质金属蛋白酶(MMP) -13、\"型胶原(COagen\")及解聚蛋白样金属蛋白酶(ADAMTS)-表达情况。结果iPSC-

MSCs 和hUC-MSCs给药均可显著降低膝关节面PeCetier评分、关节直径和病理Mankin评分，改善关节腔结构，降低X线评分

和关节肿胀，且iPSC-MSCs较hUC-MSCs给药在降低Pelletier评分［(1. 22 ±0. 67)比(2. 00 ±0. 71 ),P=0. 021 ］方面差异有统

计学意义;相比于模型组,iPSC-MSCs关节腔注射给药可显著增加软骨层Collagen \"表达［(35. 87 ±8.52)比(69. 90 ± 7. 65 ),

P<0. 01］，降低 MMP-13［(59. 25 ±5. 56)比(33. 75 ± 5. 85 ),P<0. 01］和 ADAMTS-5 ［(52. 25 ± 10. 47)比(22. 25 ±6. 13) ,P <

0.01］表达水平，且与hUC-MSCs给药差异有统计学意义，iPSC-MSCs组与hUC-MSCs组Clagen \"、MMP-13、ADAMTS-5值分

别为［(69.90 ±7.65)比(61.00 ±5. 52) , P =0.010 ］、［( 33.75 ±5. 85)比(43.25 ±6.02) , P = 0. 028 ］、［( 22.25 ±6. 13)比 (36. 50 ±4. 65) ,P =0. 011］ %结论 关节腔注射iPSC-MSC-可显著改善0A大鼠关节病理，具有明显的软骨保护作用％ 关键词:骨关节炎；脐血干细胞移植；注射,关节内；诱导多能干细胞；间质干细胞；软骨损伤；大鼠Therapentic rolet of induced pluripotent stem cell-derived mesenchymaS stem cells on experimental model of osteoarthritisHE Jichen1 ,YAN Junyi2, CHENG Zhuoyu1, CHENG Run1 ,ZHAO Yingjia1 ,WEI Wei1 ,YAN Shangxue1Author Affaiatiobs :1 Insthutr of Clinical Phamacology ,Anhut Meeical UnmersPh ,Key Laboratory yf Anh-irnflammatory

and Immune :显^ O the Educahog Ministry O China, Co-Inno'vatiog Centerfor Anti-imlammatory and Immune

( Anhui, China ) , Hefei, Anhui 230032 , China ；2 Fist School O Clinical Medmine, Anhui Meeical UniversPh, Hefei, Anhui 230032 , ChinaAbstrach: Objective To elucidate the protective effects of induced pluripotent stem cell-derived mesenchymal stem cells ( iPSC-MSCs) on osteoarthritis ( OA) in rats. Methods The OA model was established by Hulth method and 50 rats were randomized intosham group ( control group) , model group, iPSC-MSCs group, human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells ( hUC-MSCs)

geoup, and hya5ueonicacid ( HA) poeiiieeconieo5geoup, and each geoup wiih 10 eaie.Raiein iheHAgeoup weeegieen mu iip edoeing

(once a week, a total of 5 times) , rats in sham and model groups were dealt with 50 ,L saline, Xi the other rats were injected with 50

,L drugs in the joint of the suraera side. At the end of 5s week, rats were sacrificed by cervical dislocation. The joint diameter dmer-

enco, joint cavity structure and score, articular surface score, patholoxicai score and other indicators were observed. The expression of maieiymeiaeopeoieinase ( MMP) -13,iype \" coeagen ( Coeagen \" ) and depoeymeeiyed peoiein-eikemeiaeopeoieinase ( ADAMTS) -5

were detected. Reselts Administration of iPSC-MSCs and hUC-MSCs markedly reduced the knee joint Pelletier score, joint diameterand paihoeogicaeMankin scoee, impeoeed ooinicaeiiysieuciuee, and deceeased X-eayscoeeand ooinisweing.ThePeeiieescoeein hUC-

MSCs group ad iPSC-MSCs group has statistical dmerenco '(2. 00 ± 0. 71 ) vs. ( 1. 22 ± 0. 67),P = 0. 021 ］. Compared with model group,adminmtration with iPSC-MSCs significantly increased the expression of Collagen \" in the cartilage layer ［ ( 35. 87 ± 8. 52 ) vs.

(69. 90 ±7. 65) ,P <0. 01 ］,inhibited the expression - MMPP3 ' (59. 25 ±5. 56) e (33.75 ±5. 85) ,P <0. 01 ］ ad ADAMTS-5 '(52. 25 ± 10. 47) vs. (22. 25 ±6. 13) ,P <0. 01 ］. Compared with hUC-MSCs group,administration with iPSC-MSCs was more eCeo-

安徽医药 Anhui Medict ad Pht■macwtmt Journt 2019 Aug,23 (8)・1497・tive in increasing Collaaen \" levei [ ( 69. 90 ± 7. 65 ) vs. ( 61. 00 ± 5. 52 ), F = 0. 010 ] , and reducing the expression of MMP-13

'(33. 75 ±5. 85) < (43. 25 ±6. 02) ,F = 0. 028 ] and ADAMTS- ' (22.25 ±6. 13) < (36. 50 ±4. 65),F=0. 011]. Conclusion

iPSC-MSCs couiy improve the joint patholoay of OA rats and may exert the obvious protective eaects on cartilaae.Key words: Osteoarthritis ； Cord blood stem celi transplantation ； Injections, inOa-articular； Induced pluripotent stem cells;Mesenchymal stem ceas； Cartilaae injury； Rats骨关节炎(osteoarthritis, OA)是一种通常发生

在中老年人身上的慢性关节疾病,表现为关节僵 硬、持续性疼痛甚至残疾，并伴随不同程度的炎症 和软骨缺损［1］%随着人口老龄化的加剧，0A的发

病率逐年增高，已经发展成为突出的社会问题。0A 是一种退行性疾病，目前尚无有效的治疗措施。临 床上主要通过关节腔内注射润滑补充剂［2］或使用 非笛体类药物、类固醇等缓解症状，减轻疼痛并控

制炎症，以及在0A晚期运用关节置换等外科手术

治疗方法［3］。然而这些方法只能暂时缓解病人疼

痛和病情，并不能逆转软骨损伤和炎症进程⑷。采

用细胞疗法修复和再生关节组织的结构和功能成 为一种新的治疗选择。间充质干细胞(mesenchymai stem cells，MSCs) 具有多向分化潜能，能够分化成骨、软骨、脂肪、神

经等多种成体细胞，而且还具有广泛的免疫调节特'

性，现已被应用于免疫和炎症性疾病5-］。骨髓源

MSCs是最早研究的MSCs，但因其取材侵袭性强，体

内数量有限等，已经逐渐被其他来源的MSCs所取 代。人脐带来源的 MSCs ( human umbilicai card de­rived MSCs,hUC-MSCs)是MSCs的另一种重要细胞

来源,因为其容易分离培养、低免疫原性和强大的 体外扩增能力而被广泛运用％有研究发现,hUC- MSCs可抑制IL(白细胞介素)-10诱导的炎症反应，

并通过向软骨分化从而修复损伤的软骨组织［7］%

诱导多能干细胞来源MSCs(induced pluripotent stem celi-derived mesenchymai stem cells, iPSC-MSCs)是将

成熟体细胞制成单细胞悬液后加入特定转录因子

重编程回到胚胎状态，然后在MSCs培养基中进行 扩增并诱导分化成MSCs% iPSC-MSCs作为一种新

型干细胞，比传统干细胞具有更有效、更可靠的再

生能力，更容易从成人组织中通过重编程获得，并 显示出更大的增殖潜能，可产生大量功能均一的

MSCs⑻％有研究表明，iPSC-MSCs可诱导成骨分

化,iPSC-MSCs来源的外泌体可促进血管生成，防止

股骨头坏死等30］; iPSC-MSCs移植可促进新西兰

兔关节表面缺损处生成新的透明软骨［11］，也可通过 旁分泌途径分泌一些因子抑制半胱氨天冬氨酸蛋白酶的裂解从而参与炎症调节过程'12］% iPSC-MSCs 已经成为骨髓源、脐带源等MSCs和再生药物治疗

0A的一种很有前途的替代细胞来源％尽管关于iP­

SC-MSCs 治疗OA的研究很多，但是iPSC-MSCs的

疗效、副作用及其作用机制仍有待进一步确认和深 入研究％基于iPSC-MSCs的优良特性和在软骨损伤方面

的修复能力，本研究通过建立大鼠实验性骨关节动 物模型，观察关节腔内注射iPSC-MSCs对0A大鼠 的治疗作用并探讨其软骨保护作用机制％研究 止时 为 2017

11 至 201810月％1材料与方法1.1实验动物 SD大鼠50只，每只180-200 g, 雌雄各半，由安徽医科大学动物实验中心提供［医

学实验动物许可证号SYXK(皖)2017-006 ；合格证

号 Na. 34000200000978,2017-10 ］,自由饮食饮水％ 动 方

医 学

研究验动物伦理委员会批准(伦理号LLSC20170382) %1.2 药品与试剂 iPSC-MSCs (批号 NCIMP2018013101,

4 x 108个细胞/毫升)和hUC-MSCs (批号NCMP2018013101,4 q108个细胞/毫升)由安徽中盛溯源

生物科技有限公司提供,给药前均经表型鉴定、计

数和活力检查，细胞代次均为第3代％玻璃酸钠注 射液(hyaluronate, HA) ,25 mg： 2. 5 mL,上海景峰制

药有限公司产品(批号20171013 )%抗MMP-13多 克隆抗体(ab39012 )、抗 Collagen \" ( ab34712)多克

隆抗体、抗ADAMTS-5多克隆抗体(ab41037 )为 Abcam 产 %1.3 OA模型的建立 采用Hulth法建立大鼠 0A模型，造模前大鼠禁食12 h%用3%戊巴比妥

钠腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位置于手术台上,常

规备皮消毒右侧后肢膝关节，从離骨旁内侧切开关节,

副 带, 关节 ；随 ,

带 和 带,确定

带是

；板％术中确保关节面无损伤％最后，彻底止血后,

组 不 带、

-1498 -安徽医药 Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2019 Aug,23 (8)交叉韧带和内侧副韧带、半月板外，其余处理均 同模型大鼠。术后不予固定手术侧膝关节,同 时，所有大鼠每天肌内注射20万单位青霉素预

防感染，持续3 d。术后1周以后，每天用小动物

转棒仪对各组大鼠进行运动训练,以加重OA大 鼠患肢负重［13］ %1.4实验分组和给药方案 术后第12周，编号后,

运用Excel表格随机分组功能，将模型大鼠随机分 为4组：模型组、iPSC-MSCs组(2.0 x 106个细胞/

只)、hUC-MSCs组(2.0 x106个细胞/只)和HA组 (10 mg/mL)%另设假手术组作为对照％每组10

只％ iPSC-MSCs组和hUC-MSCs组每只大鼠一次性

在术侧关节腔注射50 ,L细胞;HA组大鼠每周一 次关节腔注射50 ,L HA,共5次;假手术组大鼠同

法注射50 ,L磷酸盐缓冲液。所有大鼠于给药5周

后处死％1.5指标检测1-5.1关节直径差值检测术后每天观察大鼠的

饮食和活动情况，并观察伤口愈合情况％每周测量

和记录动物体质量，处死动物后用游标卡尺测量每

只动物手术侧和对侧膝关节的直径，并计算两侧膝

关节直径的差值％1-5.2 X线检查 给药结束后1周，每组取4只大

鼠以3%戊巴比妥钠麻醉，行X线检查大鼠手术侧 膝关节，并从膝关节腔大小、骨质硬化、骨赘形成等

方面变化按凯尔格伦-劳伦斯(Kellgren-Lawrence )分 级标准［14］进行评分％1.5.3 大鼠膝关节Pelletier评分 给药结束处死

大鼠后，留取膝关节标本，在手术显微镜下暴露关

节腔，观察股骨課和胫骨平台关节面是否平整，并

根据股骨内、外課及胫骨平台等软骨表面退变情况

按照Pelletier大体评分标准［15］进行评分，评分越高 表示关节面软骨损伤越严重％1.5.4

大鼠膝关节病理学检查 处死大鼠后，取

股骨内課关节面，经体积分数10%的甲醛溶液室

温固定48 h，脱钙，石蜡纵向包埋，切片后HE染 色％由观察者根据Mankin评分标准'16(对每 只动物的软骨结构、软骨细胞数量及潮线完整度

进行组织学评分，评分越高表示软骨结构破坏越

严重%1.5.5 膝关节软骨基质金属蛋白酶(MMP)-13、\"

型胶原(Collayen \")、解聚蛋白样金属蛋白酶(AD- AMTS) -5的检测采用免疫组织化学方法检测

MMP-13、CoXagen^、ADAMTS劳在大鼠膝关节中的% 鼠 关节 、 向 片 ，

分别用乙二胺四乙酸(EDTA)抗原修复液和3%过

氧化氢进行抗原修复并阻断内源性过氧化物的干

扰，一抗孵育4 S过夜，3遍磷酸缓冲盐溶液(PBS)

洗涤后滴加生物素二抗室温孵育25 min，染色、封片

后在光镜下观察％染色结果用Image J软件分析 化%1.6统计学方法 计量数据以L±.表示，采用 SPSS 16.0软件单因素方差分析进行多组间比较,

多组间的两两比较采用LSD--检验的方法;等级资

料采用秩和检验分析％ F <0. 05为差异有统计学

意义％2结果2.1 iPSC-MSCs对OA大鼠膝关节直径差值的影

响 实验结果如图1所示,与假手术组大鼠相比，模

型组大鼠膝关节直径差值显著增大，提示手术侧膝

关节直径显著增大、关节变形,0A模型诱导成功；

与模型组相比,iPSC-MSCs、hUC-MSCs给药均可显 著降低大鼠膝关节直径差值［(1-00 ±0. 40 )比

(2. 34 ±0.44) ,F<0.01(、［(1.33 ±0. 41)比(2. 34 ±

0. 44) ,F < 0. 020 ］, HA给药也有类似作用'(1.48 ± 0. 21)比(2. 34 ±0- 44) ,F<0- 049］%2.2 iPSC-MSCs对OA大鼠膝关节X线评分的影

响X线检查结果如表1所示％与假手术组相比,

模型组大鼠出现明显的关节腔狭窄,部分形成可见

的骨赘和骨质硬化,提示0A模型诱导成功;与模型

组相比,iPSC-MSCs给药可降低大鼠膝关节X线评

分等级和重度(3、4级)0A动物数量，改善关节腔结

构、减少骨赘形成和骨质硬化作用％表1 0A大鼠膝关节X线评分与模型组的比较/只X线评分等级组别01234假手术组。31000模型组00121iPSC-MSCs (2.0x106)组1312100hUC-MSCs (2.0x106)组001210HA (10 mg/mL)组d02110注：与模型组比较,\"Z ==2. 381, F=0029 ；bZ =2205, F =0. 029 ；迄= 1.517,F = 0. 200；吃=0. 168,P-0. 1142.3 iPSC-MSCs对OA大鼠膝关节Pelletied评分

的影响解剖动物膝关节可见，假手术组大鼠关节

面光滑平整，形态结构正常,关节腔内未见明显的

关节积液及滑膜增生％模型组大鼠关节磨损严重,

安徽医药 Anhui Medical and Pharmvceutical Journal 2019 Aug,23 (8)-1499 -软骨面粗糙,关节面色泽暗淡,部分动物出现软骨 剥落，软骨下骨质暴露％图2结果显示，与假手术组 比较，模型组大鼠PeCetiar评分显著增高；与模型组

相比，给予iPSC-MSCs和hUC-MSCs均能显著降低

Pelletier 评分：(1.22 ±0.67)比(3.22 ±0. 83) , P <

0. 01 (、［( 2.00 ± 0.71 )比(3.22 ± 0. 83 ) , P <

0.01 ］,改善软骨损伤，且iPSC-MSCs降低Pelletier 评分较 hUC-MSCs［(1.22 ±0. 67)比(2. 00 ±0.71),

P=0. 021］和 HA［(1.22 ±0.67)比(1. ±0.60),

P=0- 045］给药差异有统计学意义％2.4 iPSC-MSCs对OA大鼠膝关节病理的影响病理组织学检测结果及评分如图1所示，假手术组 大鼠关节骨组织正常，软骨细胞分布均匀，排列规

律整齐,4层结构清晰可见,潮线完整平滑％模型组

大鼠软骨边缘部分缺损，软骨细胞排列紊乱，成簇

分布,可见炎性细胞浸润和不规则裂隙深达辐射

层，潮线漂移中断或出现多重潮线。相比于模型 组,iPSC-MSCs给药可显著减轻关节软骨退变状况，

减少炎性细胞浸润，改善关节病理［(5. 50 ±1.29)

比(1.75 ±0.50),P<0.01］。与 hUC-MSCs 组和阳

性药HA组比较,iPSC-MSCs对软骨结构的改善和 降 病 Mankin 评 差异有统计学意义［ ( 3.25 ±

1.26)比(1.75 ± 0. 50 ) , P = 0. 041 ］、［(4. 00 ± 0. 82)比(1.75 ±0. 50) ,P=0. 004］。2. 5 iPSC-MSCs 对 OA 大鼠膝关节中 Collagen

H、MMPd3、ADAMTS-5表达的影响 免疫组织

化学方法检测大鼠膝关节软骨中Collagen \"、MMP-

13、ADAMTS-5含量，阳性结果为软骨细胞胞质内出

现棕黄色染粒。结果如图2~4所示,与假手术组相 比，模型组大鼠关节软骨中Collagen H降解严重，表

达显著减少［(66. 97 ±2. 82)比(35. 87 ± 8. 52) ,P< 0.01 ］；与模型组相比，iPSC-MSCs和hUC-MSCs给

药组能显著增加软骨基质中Collagen \"表达 ［(35. 87 ± 8. 52 )比(69. 90 ± 7.65 ) , P < 0.01 ］、 ［(35. 87 ±8. 52)比(61. 00 ±5.52) ,P<0.01］,阳性

药HA组Collagen \"表达水平低于iPSC-MSCs组

［(49.31 ±12. 32)比(69. 90 ±7.65) ,P =0.010］，提 示iPSC-MSCs可减少OA软骨基质的破坏,保护软 骨基质。检测MMP-13和ADAMTS-5结果显示，模

型组大鼠关节软骨中MMP-13和ADAMTS-5表达显 著高于假手术组［(59.25 ± 5. 56 )比(21.50 ± 4.51) , P <0. 01 ］、［( 52.25 ± 10.47 )比(14.50 ±

4- 20) ,P <0.01］；各组给药均可显著降低模型大鼠 膝关节软骨MMP-13和ADAMTS-5表达水平，其中 iPSC-MSCs组MMP-13和ADAMTS-5的表达水平明

显低于 hUC-MSCs 组［(33.75 ±5.85)比(43. 25 ±

6.02) ,P =0.028 ］、［( 22.25 ± 6. 13 )比(36.50 ± 4.65) , P=0. 011 ］和 HA 组［(33.75 ± 5. 85 )比

(51. 75 ± 5. 56) , P < 0. 01 ］、［(22.25 ± 6. 13 )比 (40.75 ±5.56) , P= 0.001 ］,提示 iPSC-MSCs 可以

下调关节软骨中MMP-13和ADAMTS-5表达，降低

软骨基质降解酶的水平。3讨论Hudh模型是研究OA的一种经典造模方法,

通过切除内侧副韧带暴露大鼠关节腔,再切除内

侧半月板和前后交叉韧带,破坏关节结构,导致关

节应力失衡，增加关节间的摩擦，从而达到类似与

人OA的病理改变。但由于动物术后的活动情况

不一致等原因，模型成型率及0A严重度均不甚理

想。为了提高模型的成型率，我们在动物手术1 周后每天用小动物转棒仪对模型大鼠进行运动训

练10 min,转速从慢到快，加速、加重患肢的负担,

显著提高了 0A大鼠模型的成型率和严重度。造 模12周后，大鼠手术侧膝关节出现增粗、硬骨变 形,X线检查结果显示手术侧关节腔变窄，骨赘形

成，出现骨质硬化，提示0A大鼠造模成功，总体成

模率达90%。iPSCs是类似于胚胎干细胞的一种新型多能干

细胞，可由病人自身的特定体细胞诱导，细胞质量 可控，来源广泛，可以克服hUC-MSCs存在的伦理

学、来源受限等问题,被认为是治疗各种组织损伤 有希望的疗法“⑻。本研究发现，iPSC-MSCs可显

著降低大鼠手术侧和非手术侧膝关节直径差值，降

低大鼠膝关节面Pelletier评分和X线评分，改善关 节腔结构，减轻骨质硬化程度和骨赘等形成，提示

iPSC-MSCs可缓解由于手术造成的关节不稳,对膝

关节面之间摩擦而引起的骨质增生和硬化具有保

护作用；iPSC-MSCs关节腔注射可减少软骨层缺损，

改善潮线完整度并降低病理学评分，修复后的软骨

具有与正常软骨相似的典型透明特征,提示PSC- MSC OA 鼠具有明显的治

,且 降Pelletiar评分、改善关节病理和软骨基质退变方面

较上市制剂HA以及脐带源MSC-具有一定的

优势。细胞外基质及软骨下骨合成和降解的失衡是

0A发生的重要机制。关节软骨基质中硫酸软骨

素蛋白多糖(aggrecan)与糖胺多糖透明质酸形成

巨大的聚集体,吸水后膨胀的聚集体受另一种软

・1500・安徽医药 Anhui MSict ad 911130X1104 Journt 2019 Aug,23 (8)骨成分Collagen \"网的束缚，这种复合结构赋予软 骨基质抗压强度及减震性能[19]%基质金属蛋白酶

家族MMP-13是降解软骨细胞外基质的主要酶系,

可以通过过度切割软骨基质中含量最多的

Collagen \"，促进Collagen \"三螺旋结构的裂解膨

胀'20(,在0A病人关节软骨中，MMP-13含量升高

引起软骨基质网状\"型胶原结构被破坏，从而导

致关节软骨缺损。Aggrecan是构成软骨基质的另

一重要组成部分,可以保持软骨的弹性、含水量和

结构完整性。解聚蛋白样金属蛋白酶家族中AD-

AMTS-5 可以通过降解aggrecan,导致软骨结构完

整性丧失和关节功能受损，其含量与0A疾病的严

重程度呈正相关[21]% iPSC-MSCs关节腔注射可抑 制基质降解酶MMP-13和ADAMTS-5的表达，并增

加基质中Collagen \"的表达,提示iPSC-MSCs关节

腔注射可以抑制软骨降解、促进\"型胶原形成，发

挥软骨保护作用％综上，iPSC-MSCs关节腔注射对大鼠0A具有

明显的治疗作用,其机制与恢复软骨基质合成与降

解的失衡有关。(本文图1,2见插图8-1；图3 ,4见插图8-2)参考文献[1( MEI L, SHEN B , LUG P, et al. Culture-expanded tloaenio adi­

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诱导多能干细胞来源间充质干细胞对大鼠骨关节炎的治疗作用(正文见1496页)200 pm200 pm注:a表示潮线，b表示软骨面缺损或平整性,c表示炎性细胞浸润，d表示软骨细胞；与假手术组相比,。P<0. 01；与模型组相比,fP<0. 05,sP<0. 01；与 iPSC-MSCs 组相比,8P<0. 05,1P<0. 01图1 iPSC-MSCs对大鼠膝关节病理的影响:A为假手术组,B为模型组，C为iPSC-MSCs(2. 0 < 10$ )组，D为hUC-

MSCs(2. 0x10$)组,E为HA( 10 mg/mL)组,A ~ E图均HE染色X100 ；F为各组大鼠膝关节病理Mankin评分图2 iPSC-MSCs对OA大鼠膝关节Collagen !表达的影响：A为假手术组,B为模型组，C为iPSC-MSCs(2. 0x10$ )

组,D为hUC-MSCs(2. 0x10$ )组,E为HA( 10 m/mL)组,A ~ E图均免疫组织化学染色X100；F为各组大鼠膝关节

Colla/en !表达插图8-1诱导多能干细胞来源间充质干细胞对大鼠骨关节炎的治疗作用(正文见1496页)d80-|

a

Ic注:与假手术组相:,aP< 0. 01 ；与模型组相比,'P < 0. 01 ；与iPSC-MSCs组相比,cp < 0. 05 , dP<0.01

图3 iPSC-MSCs对0A大鼠膝关节MMP-13表达的影响:A为假手术组,：为模型组,C为iPSC-MSCs(2. 0x10$)组, D为hUC-MSCs(2.0x10$)组,E为HA(10 m/mL)组,A~E图均免疫组织化学染色x1 000；F为各组大鼠膝关节 MMP513 表达

80-.a

d软舉a曲s

,0 040

20 0

2

b注:与假手术组相比,<0.01 ；与模型组相比，” <0. 01 ；与iPSC-MSCs组相比\"P + 0. 05 ,dP<0. 01

图4 MSCs对OA大鼠膝关节ADAMTS-5表达的影响：A为假手术组,：为模型组，C为iPSC-MSCs(2. 0 < 10$ %组, D为hUC-MSCs(2.0x106 %组,EH HA (10 mg/mL)组,A~E图均免疫组织化学染色x1 000； F为各组大鼠膝关节

ADAMTS-5 表达插图8-2