３９３２ 重庆医学２０１３年１１月第４２卷第３２期 ・基础研究・ 复苏液体对重度失血性休克大鼠心肌热休克蛋白９０ａ表达的影响 杨晓鲲，徐明元，徐责森△ （成都军区总医院急诊科，成都６１００８３） 摘 要：目的 用不同种类液体对重度失血性休克大鼠进行复苏后，对比大鼠心肌组织中热休克蛋白（ＨＳＰ）９Ｏａ的表达、变 化规律及大鼠生存率，为临床治疗失血性休克选择复苏液体提供参考。方法 建立失血性休克大鼠模型，分别运用乳酸林格液、 聚明胶肽注射液、高渗氯化钠右旋糖酐进行液体复苏，测定大鼠心肌组织中ＨｓＰｇ０ａ蛋白的表达及大鼠死亡率。结果 重度失血 性休克后运用不同种类液体进行复苏，大鼠心肌组织ＨＳＰ９０ａ表达、大鼠死亡率差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。结论 重度失血 性休克可以诱导大鼠心肌组织中ＨＳＰ９０ａ的表达，当用不同液体进行复苏后各组ＨＳＰ９０ａ的表达不同且具有一定的规律性，提示 ＨＳＰ９０ａ作为一个重要的调控分子参与失血性休克后心肌组织的保护机制。 关键词：复苏液体；失血性休克；热休克蛋白９Ｏａ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８３４８．２０１３．３２．０３２ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１ ８３４８（２Ｏ１３）３２ ３９３２－０３ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＨＳＰ９０ｃｔ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃｌｅｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｉｔｈ ｓｅｖｅｒｓ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｈｏｃｋ ｂｙ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｎｇ ｆｌｕｉｄ Ｙａｎｇ Ｘｉａｏｋｕｎ，Ｘｕ Ｍｉｎｇｙｕａｎ，Ｘｕ ＧｕｉＳｅｎ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏ Ｅｍｅｒｇｅｎｃｙ，Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｍｉｌｉｔａｒｙ Ｃｏｍｍａｎｄ Ａｒｅａ，Ｃｈｅｎｇｄｕ，Ｓｉｃｈｕａｎ ６１００８３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ＨＳＰ９０￣ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃｌｅｓ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅｓ ｉｎ ｒａｔｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｆｌｕｉｄｓ ｔｏ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｅ ｔｈｅ ｓｅｖｅｒｓ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｈｏｃｋｅｄ ｒａｔｓ，ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｈｏｃｋ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ ｆｌｕｉｄｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｕｎｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｈｏｃｋ ｒａｔｓ ｍｏｄｅｌ ｗａｓ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ｕｓｉｎｇ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｓａｌｉｎｇｅｒ ｌｉｑｕｉｄ，ｐｏｌｙ ｐｅｐｔｉｄｅ ｉｎｊ ｅｃｔｉｏｎ ｇｅｌａｔｉｎ，ｈｙｐｅｒｔｏｎｉｃ ｓｏｄｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ ｄｅｘｔｒａｎ ｆｏｒ ｆｌｕｉｄ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｃｈｅｃｋｅｄ ｔｈｅ ＨＳＰ９０￣ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ａｎｄ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅｓ ｉｎ ｒａｔｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ ＨＳＰ９０ａ ｉｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｔｉｓｓｕｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ｉｎ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｆｔｅｒ ｕｓｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ ｆｌｕｉｄｓ ｉｎ ｓｅｖｅｒｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｈｏｃｋ ｒａｔｓ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＨＳＰ９０￣ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｍｕｓｃｌｅｓ ｏｆ ｒａｔｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｓｅｖｅｒｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｈｏｃｋ，ｔｈｅ ＨｓＰｇ０￣ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｙ ａｎｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ａｆｔｅｒ ｕｓｉｎｇ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｎｇ ｆｌｕｉｄｓ，ｉｔ ｉｍｐｌｉｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ＨｓＰｇ０ａ ｐｌａｙｅｄ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｉｎ ｔｈｅ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｒａｔｓ ｃａｒｄｉａｃ ａｓ ａ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｆａｔｏｒ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｎｇ ｆｌｕｉｄｓ；ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｈｏｃｋ；ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ９０ａ 众所周知，液体复苏是休克早期治疗的重要手段之一［＝１］。 目前有关休克液体复苏的液体种类有晶体液和胶体液，晶体液 主要有乳酸林格液，胶体液主要有血浆以及各种代血浆制品， 脉、股静脉和右颈动脉插管（导管内径０．５８ ｍｍ，外径０．９６５ ｍｍ），股动脉插管经三通管连接汞血压计和玻璃注射器，供观 察血压和放血，经插管注射肝素钠生理盐水（５００ Ｕ／ｋｇ）抗凝， 股静脉插管给药。 最近有报道显示高渗氯化钠右旋糖酐对恢复失血性休克血容 量有较好效果Ｅ２－ａ］。休克特别是重度失血性休克发生后，机体 各脏器处于一种应激受损状态，由于心脏的特殊地位，其功能 的变化对于休克患者的血流动力学会产生直接的影响，进而影 响其余各个脏器的功能，所以对于研究心脏的保护机制具有特 １．２材料乳酸林格液（ＬＲ），聚明胶肽注射液（汉华龙生物 制药有限公司生产，ＨＥＳ），高渗氯化钠右旋糖酐（７．５ Ｎ￣Ｃ１／ ６ Ｄｅｘｔｒｉｎ４０，ＨＳＤ），羊抗大鼠ＨＳＰ９０ａ多克隆抗体（Ｍｅｒｃｋ 公司）；辣根过氧化物酶标记的兔抗山羊ＩｇＧ（武汉博士德公 别重要的意义。作者早期的研究发现热休克蛋白（ＨＳＰ）９０ａ 作为一种调控分子（分子伴侣）与其他分子（如ＨＩＦ－Ｉ￣）一道间 接参与保护心肌组织的过程［４ ］。本实验通过对实验大鼠相同 司）；硝酸纤维素膜（北京鼎国生物技术公司）；考马斯亮蓝法蛋 白定量检测试剂盒（南京建成生物技术公司）；垂直电泳仪及半 干转移电泳仪；紫外分光光度仪；免疫组化试剂盒（北京中山公 司）。 程度失血性休克采用不同液体进行复苏，并对复苏后不同时间 点心肌细胞中ＨＳＰ９０ａ含量进行测定，同时观察不同组别中大 １．３方法将实验动物按随机数字表法分为对照组（Ｃ组，不 鼠的存活率，以评估不同复苏液体对休克大鼠心肌的保护作用 及对大鼠生存率的影响。 １材料与方法 补液组）、ＨＥＳ组、ＨＳＤ组、ＬＲ组，各６ｏ只；ＬＲ组的补液量与 失血量一致，ＨＥＳ组按２０ ｍＬ／ｋｇ补入，ＨＳＤ组按６ ｍＩ ／ｋｇ补 入，然后各组以４５ 放血量分别做休克模型，休克后根据实验 ＳＤ大鼠（由本院实验动物中心提供）２４０只， １．１实验动物设计给予相应液体复苏＿６］。分别于休克前，输液后１、３、６、１２、 ２４ ｈ剖杀大鼠（ 一３Ｏ）取心脏，行免疫组化和心肌组织内 １４～１６周龄，雌雄各半，体质量（２２３．０±１９．２）ｇ。所有大鼠实 验前禁食、自由饮水，实验当日用戊巴比妥钠麻醉，于右侧股动 ＨＳＰ９０ａ表达含量测定。另外各组剩余大鼠（”一３Ｏ）观察２４ ｈ ＊ 基金项目：四川省科技厅资助项目（２０１０ＪＹ０１８６）。 作者简介：杨晓鲲（１９７８～），主治医师，博士，主要从事急诊创伤外科研究。 讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｇｕｉｓｅｎｘｕｃｄｚｙ＠１２６．ＣＯＩＴＩ。 通 ３９３４ 重庆医学２０１３年１１月第４２卷第３２期 的作用是通过与ＨＩＦ １ 的ｂＨＬＨ—ＰＡＳ功能域相结合，发挥分 子伴侣的作用，通过使ＨＩＦ一１ａ降解减少，使得ＨＩＦ－１ａ在胞核 内短时间大量聚集，顺利地发挥ＨＩＦ—ｌａ促红细胞再生，促进 糖酵解关键酶的生成以使机体更有效地利用氧以及促进血管 再生的生物功能。而本研究则在此基础上更进一步地深入了 解了不同复苏液体对于心肌组织内ＨＳＰ９０ａ表达的影响，以发 掘出更为安全有效的复苏液体类型。从研究结果中可以看出， ［４］陈星宇，杨晓鲲．缺氧诱导乳鼠心肌细胞ｈｓｐｇ０表达及变 化［Ｊ］．兰州大学学报：医学版，２００７，３３（２）：１７ ２Ｏ． ［５］党永明，黄跃生，陈丽峰．烫伤诱导大鼠心肌细胞缺氧诱 导因子一１ａ定位表达的研究［Ｊ］．第三军医大学学报， ２００３，２５（１８）：１６０２—１６０５． ［６］李涛，刘良明，刁有芳，等．几种不同液体复苏失血性休克 大鼠的适宜量研究［Ｊ］．第三军医大学学报，２００８，３０（３）： １９９—２Ｏ２． 相同程度失血性休克后，不同类型液体进行复苏，能够明显地 影响ＨＳＰ９０ａ表达从而进一步产生对ＨＩＦ－１ａ产生过程的影 响，本研究中，大鼠心肌组织中ＨＳＰ９０ａ蛋白的表达明显不同， 同时各组大鼠的存活率也不同。其中以ＨＳＤ组ＨＳＰ９０ 表达 ［７］马计，张端莲，高凌，等．糖尿病大鼠心肌组织中Ｓｕｒｖｉｖｉｎ 蛋白表达的影响［Ｊ］．数理医药学杂志，２００８，２１（２）：１５４— １５６． 最强且持续时间最久，ＨＥＳ组其次，而ＬＲ组表达弱且持续时 间较短，同时各组大鼠存活率比较Ｉ Ｒ组长于ＨＥＳ组长于 ［８］Ｃｓｅｒｍｅｌｙ Ｐ，Ｓｃｈｎ“ｉｄｅｒ Ｔ，Ｓｏｔｉ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ９０ ｋＤａ ｍｏｌｅｃ— ｕｌａｒ ｃｈａｐｅｒｏｎｅ ｆａｍｉｌｙ：ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，ｆｕｎｃｔｉｏｎ，ａｎｄ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐ— ＨＳＤ组。这说明了此３种复苏液体中ＬＲ能够最有效地复苏 失血性休克机体，机制尽管可能是多方面的，但本研究说明其 能有效地保护心肌组织，以更早、更有效地恢复机体的有效循 环，ＨＥＳ组次之，而ＨＳＤ组效果则不如前二者。此前尽管有 ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ．Ａｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ ｒｅｖｉｅｗ［Ｊ］．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ， １９９８，７９（２）：１２９ １６８． ［９］Ｄｏｙｌｅ ＪＡ，Ｄａｖｉｓ ＤＰ，Ｈｏｙｔ ＤＲ．Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｏｎｉｃ ｓａ ｌｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｔｒａｕｍａｔｉｃ ｂｒａｉｎ ｉｎｊｕｒｙ［Ｊ］．Ｔｒａｕ— ｍａ，２００１，５０（２）：３６７—３８３． 报道认为，７．５ 高渗氯化钠能提高血清渗透压，将组织间隙的 液体吸入血管床，有较好的血流动力学效果 ］，还可促进肿胀 内皮的液体回流，改善微循环，提高组织灌流，同时抑制中性粒 细胞释放炎性细胞因子ｌ１ ］。但至少本研究表明在重度失血 性休克的机体中，其发挥的功效远不如ＨＥＳ和ＬＲ，作者考虑 ［１Ｏ］Ｅｍｉｎ ＫＡ，ＶｉｊａｙＶＫ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈｙｐｅｒｔｏｎｉｃ ｄｅｘｔｒａｎ ｉｎ ｈｙ ｐｏｖｏｌｅｍｉｃ ｓｈｏｃｋ：ａ ｐｒｏｓｐｅｃｔｉｖｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｔｒａｉｌ［Ｊ］．Ｉｎｊ ｕｒｙ， ２００４，３５（５）：５００ ５０６． ［¨］Ｇｕｒｆｉｎｋｅｌ Ｖ，Ｐｏｇｇｅｔｔｉ ＲＳ，Ｆｏｎｔｅｓ Ｂ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｅｒｔｏｎｉｃ ｓａ ｌｉｎｅ ｉｍｐｒｏｖｅｓ ｔｉｓｓｕｅ ｏｘｙｇｅｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｄｕｃｅｓ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｎｄ ｐｕｌｍｏｎａｒｙ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｃａｕｓｅｄ ｂｙ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ 由于高渗氯化钠含有大量的氯离子，大量输注后会引起高氯性 酸中毒，可能是其复苏效果不如另外两者的原因之一，另外其 他方面的原因尚需要进一步的了解，因此在对机体复苏时应用 ｓｈｏｃｋ［Ｊ］．Ｊ Ｔｒａｕｍａ，２００３，５４（６）：１１３７． 应该适当地进行限制。此外在选择复苏液体时，每一种复苏液 体的用量也是值得考虑的问题，有学者提倡在保证机体有效循 环灌注的前提下，给予延迟（限制性）液体复苏 ，这方面的具 ［１２］余伶俐，简道林，吕作均．高渗高胶液对失血性休克大鼠 细胞免疫功能的影响［Ｊ］．华中医学杂志，２００６，３０（４）： ３Ｏ９ ３１０． 体机制仍需做进一步的研究以证实。另外不同的复苏液体到 底是通过何种信号途径来对心肌组织内ＨＳＰ９０ａ的表达产生 变化并进而对整个机体产生影响的，这也是下一步研究的方 向。 参考文献 Ｅ１３］周小洁，潘景业，金可可，等．失血性休克再灌注大鼠血液 ＮＯ、ＮＯＳ的改变和丹参的作用［Ｊ］．浙江临床医学，２００５， ７（７）：６７６－６７７． ［１４］李秀梅，王蕾，甘子明，等．大鼠失血性休克及再灌注后小 动脉的形态学改变［Ｊ］．新疆医科大学学报，２００６，２９ （１１）：ｌ０４７ １０４９． Ｌ１］蒋荣成，吕志诚．失血性休克液体复苏研究的新进展［Ｊ］． 中国急救医学，２００４，２４（６）：４３２－４３３． ［１５］Ｋｉｍ ＳＨ，Ｓａｆａｒ Ｐ，Ｃａｐｏｎｅ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｈｙｐｏｔｈｅｍｉａ ｉｓ ａｎｄ ｍｉｎｉｍａｌ ｆｌｕｉｄ ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｆｔｅｒ ｕｎｃｏｎ— ［２］刘智舜，王筑生．高渗氯化钠在低血容量休克中的作用 ［Ｊ］．中华医学写作杂志，２０００，７（６）：６６１—６６２． ［３］陈耀清，江宗贤，张彩文，等．闭合性腹部多脏器２６例分 析［Ｊ］．衡阳医学院学报，１９９９，２０（１２）：１０９４—１０９６． （上接第３９３Ｉ页） ｔｒｏｌｌｅｄ ｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃ ｓｈｏｃｋ ｉｎ ｒａｔｅ［Ｊ］．Ｊ Ｔｒａｕｍａ，１９９７，４２ （２）：２１３—２２２． （收稿日期：２０１３－０７—０８修回日期：２０１ ３ ０８～ｌ３） ［１３］Ｓｌｅｅ ＥＡ，Ｏ Ｃｏｎｎｏｒ ＤＪ，Ｌｕ ｘ．Ｔｏ ｄｉｅ ｏｒ ｎｏｔ ｔｏ ｄｉｅ：ｈｏｗ ｄｏｅｓ ｐ５３ ｄｅｃｉｄｅＥＪ］．０ｎｃｏｇｅｎｅ，２００４，２３（１６）：２８０９—２８１８． ［１４］袁丽华，郭武华，肖志华，等．ＳＵＭＯ一１基因沉默对肝癌细 ［９］张亚密，彭轶霞，管宏钟．山仙颗粒合并介入疗法治疗肝 癌观察［Ｊ］．陕西中医学院学报，２００５，２８（１）：３１ ３２． ［１Ｏ］高英堂，张世光，宋文芹，等．四株肝癌细胞系的抑癌基因 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