第２Ｏ卷２期 １０２ ２０１４年３月 天津医科大学学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｖ０１．２０．Ｎｏ ２ Ｍａｒ．２０１４ 文章编号１００６—８１４７（２０１４）０２—０１０２—０３ 电刺激促进大鼠骨骼肌细胞ＧＬＵＴ４转位并激活Ａｋｔ 信号通路 李青’，郭刚’，Ｂｉｌａｎ Ｐｈｉｌｉｐ ，Ｋｌｉｐ Ａｍｉｒａ （１．天津医科大学代谢病医院内分泌研究所，卫生部激素与发育重点实验室，天津３０００７０；２．加拿大病童医院 细胞生物学实验室，多伦多Ｍ５Ｇ１Ｘ８） 摘要 目的：利用Ｌ６细胞模型研究电脉冲刺激对骨骼肌细胞ＧＬＵＴ４转位及其信号通路的影响。方法：将稳定过表达 ＧＬＵＴ４ｍｙｅ—ＡＳ１６０的Ｌ６一ＧＬＵＴ４ｍｙｅ—ＡＳ１６０大鼠骨骼肌细胞体外培养于６孔培养板中，用含２％胎牛血清的细胞分化液诱导 分化为肌管，将６孔板随机分成对照组、胰岛素组和电脉冲刺激（ＥＰＳ）组，用终浓度为１００ ｎｍｏｌ／Ｌ的胰岛素或电刺激仪对细胞 刺激，对照组不做任何处理。ＥＬＩＳＡ测定细胞膜上的ＧＬＵＴ４ｍｙｅ含量，免疫印记法测定蛋白激酶Ｂ（Ａｋｔ）和Ｒａｂ—ＧＴＰａｓｅ激活蛋 白ＡＳ１６０的磷酸化。结果：与对照组相比，１ ｈ电刺激显著增加细胞膜表面ＧＬＵＴ４ｍｙｅ水平并磷酸化Ａｋｔ及Ｒａｂ—ＧＴＰａｓｅ激活蛋 白ＡＳ１６０。结论：电刺激促进Ｌ６骨骼肌细胞ＧＬＵＴ４ｍｙｅ转位，激活Ａｋｔ信号通路。 关键词 电刺激；骨骼肌；葡萄糖转运子４；蛋白激酶Ｂ；ＡＳ１６０；胰岛素 中图分类号Ｒ５８ 文献标志码Ａ Ｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｕｌｓｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＧＬＵＴ４ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ａｋｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ Ｌ６一 ＧＬＵＴ４ｍｙｃ—．ＡＳ１６０ ｍｙｏｔｕｂｅｓ ＬＩ Ｑｉｎｇ ，ＧＵＯ Ｇａｎｇ ，Ｂｉｌａｎ Ｐｈｉｌｉｐ ，Ｋｌｉｐ Ａｍｉｒａ （１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｄｉｓｅａｓｅｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｈｏｒｍｏｎｅ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ， Ｍｉｎｉｓｔｙｒ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００７０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔｈｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｆｏｒ Ｓｉｃｋ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ，Ｐｒｏｇｒａｍ ｉｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｍ５Ｇ １Ｘ８，Ｃａｎａｄａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｉｃ ｐｕｌｓｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ（ＥＰＳ）－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌ ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ＧＬＵＴ４ｍｙｃ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｉｎ Ｌ６一 ＧＬＵＴ４ｍｙｅ—ＡＳ１６０ ｍｙｏｔｕｂｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｌ６一ＧＬＵＴ４ｍｙｃ—ＡＳ１６０ ｍｙｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｉｎ ６－ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅｓ．ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｔｏ ｍｙｏｔｕｂｅｓ ｗｉｔｈ ２％ＦＢＳ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｍｅｄｉａ，ａｆｔｅｒ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ３ ｇｒｏｕｐｓ ｆＥＰＳ，ｉｎｓｕｌｉｎ，ｃｏｎｔｒｏ１）ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｆｒｓｔ ｔｗｏ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ １００ ｎｍｏｌ／Ｌ ｉｎｓｕｌｉｎ ｏｒ ｃｏｎｔｒａｃｔ ｃｅｌｌ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇＹｏｕｐ ｒｅｃｅｉｖｉｎｇ ｎｏ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ＧＬＵＴ４ｍｙｃ ｏｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｗａｓ ｍｅａｓｕｒｅｄ ｂｙ ＥＬＩＳＡ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ Ｂ ｆＡｋｔ）ａｎｄ Ｒａｂ—ＧＴＰａｓｅ ＡＳ１６０ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｔｉｎｇ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ＥＰＳ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ＧＬＵＴ４ｍｙｃ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎ ｌｈ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｋｔ ａｎｄ ＡＳ１６０ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ ｐｈｏｓｏｈｏｒｙｈｅｄ ｂｙ ＥＰＳ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＥＰＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＧＬＵＴ４ｍｙｅ ｃａｎ ｂｅ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ａｎｄ ａｃｔｉｖａｔｅ ｔｈｅ Ａｋｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｐｕｌｓｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ；ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ；ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ ４：ＰＫＢ；ＡＳ１６０；ｉｎｓｕｌｉｎ 胰岛素和运动是骨骼肌细胞中促进葡萄糖利 用的两个重要的生理刺激，多种葡萄糖转运子在骨 骼肌细胞中表达，而葡萄糖转运子４（ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓ— ｐｏｒｔｅｒ，ＧＬＵＴ４）是骨骼肌细胞中转运葡萄糖的主要 转运子，胰岛素和运动刺激增加的葡萄糖摄取主要 通过促进位于骨骼肌细胞内的ＧＬＵＴ４从胞内储存 囊泡转位到细胞膜表面。胰岛素诱导的葡萄糖摄取 尿病的发展而且有益于胰岛素抵抗的病人 。然而 运动或肌肉收缩带来的这些有益影响的分子机制 尚不明确，目前提出骨骼肌细胞收缩促进葡萄糖摄 取的３ 个主要机制为骨骼肌横纹肌中钙离子的增 加，能量消耗和机械拉伸，但是其影响ＧＬＵＴ４转位 和相关调节信号通路还了解不完全，由于分离的动 物肌肉组织结构的特点很难对每一个细胞表面的 ＧＬＵＴ４含量进行检测，因此细胞株可以解决这个问 题并且合适的细胞模型将有助于研究这一复杂生 理现象的信号分子机制，所以我们选择不具有收缩 能力的Ｌ６大鼠骨骼肌细胞作为细胞模型，采用电 的信号通路主要包括胰岛素受体下游一１（ＩＲＳ一１）、 ＰＩ３Ｋ、Ａｋｔ和Ｒａｂ—ＧＴＰａｓｅ激活蛋白ＡＳ１６ｆｆ”。适当的 运动具有广泛的生理作用，例如增加葡萄糖利用、 改变骨骼肌肌纤维类型、血管生成的感应以及调节 免疫系统｝２Ｊ。并且，充足的运动不但能够延缓２型糖 作者简介李青（１９８７一）。女，硕士在读，研究方向：生物化学与分子 生物学；通信作者：郭刚。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｕｏｇａｎｇｔｊ＠１２６．ｃｏｍ。 刺激的方法体外模拟运动收缩刺激，目的为研究排 除机械拉伸及肌肉收缩消耗能量的因素，电刺激对 ＧＬＵＴ４转位的影响及其相关的信号通路。在Ｌ６大 第２期 李青，等．电刺激促进大鼠骨骼肌细胞ＧＬＵＴ４转位并激活Ａｋｔ信号通路 １０３ 鼠骨骼肌细胞中Ｒａｂ—ＧＴＰａｓｅ激活蛋白ＡＳ １ ６０表达 量很低，很难用免疫印记法来检测其磷酸化水平， 加拿大Ａｍｉｒａ Ｋｌｉｐ实验室在Ｌ６大鼠骨骼肌细胞中 成功稳定过表达了此蛋白，此研究利用过表达 ＧＬＵＴ４ｍｙＣ—ＡＳ１６０的Ｌ６大鼠骨骼肌细胞株检测电 刺激对ＧＬＵＴ４转位的调节作用并检测其对Ａｋｔ和 ＡＳ１６０磷酸化水平的影响。 １材料和方法 １．１材料稳定过表达ＧＬＵＴ４ｍｙｃ—ＡＳ１６０的Ｌ６ 大鼠骨骼肌细胞株（Ｌ６一ＧＬＵＴ４ｍｙｃ—ＡＳ１６０）由加拿 大Ａｍｉｒａ Ｋｌｉｐ教授提供。抗生素、 ～ＭＥＭ（加拿大 Ｗｉｓｅｎｔ Ｉｎｃ，Ｓｔ—Ｂｒｕｎｏ公司），胎牛血清ｆ美国ＨｙＣｌｏｎｅ 公司），胰岛素（加拿大Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ公司），不含脂肪酸 的牛血清蛋白（瑞士Ｒｏｃｈｅ公司），山羊血清（加拿 大Ｗｉｓｅｎｔ公司），抗ｍｙｃ抗体（美国Ｓｉｇｍａ公司），抗 磷酸化Ａｋｔ和ＡＳ１６０抗体（美国ｃｅｌｌ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ），偶联 辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）的山羊抗兔抗体、增强化学 发光底物检测试剂盒（美国Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ公司）。 １．２方法 １．２．１细胞培养用含有１０％胎牛血清的 一ＭＥＭ 培养基，于３７℃，５％ＣＯ２条件下培养Ｌ６一ＧＬＵＴ ４ｍｙｃ—ＡＳ１６０大鼠骨骼肌细胞，将接种在６孔培养 板中的细胞用含有２％胎牛血清的细胞分化液诱 导分化为肌管，隔天换液，于接种后的第６天用于 实验。 １．２．２ ＥＬＩＳＡ检测细胞膜ＧＬＵＴ４ｍｙｃ将６孔板的 细胞随机分为对照组、胰岛素组和电刺激组。胰岛 素组加入终浓度为１００ ｎｍｏｌ／Ｌ的胰岛素刺激２０ ｍｉｎ，其它组加入不含有胎牛血清及抗生素的仅～ ＭＥＭ，对照组不做任何处理，电刺激组分别用电刺 激仪在２４ ｍｓ，２０ Ｖ，１ Ｈｚ的刺激条件下刺激不同时 间（２０、３０、４０、６０ ｍｉｎ）。细胞处理后，３％多聚甲醛固 定，甘氨酸淬灭，５％（ｖ／ｖ）山羊血清封闭，用１：５００抗 ｍｙｃ抗体冰上孵育１ ｈ；用１：１ ０００偶联ＨＲＰ的山羊 抗兔抗体冰上孵育１ ｈ．力Ⅱ人底物邻苯二胺溶液，反 应约２０～３０ ｍｉｎ后用３ ｍｏｌ／Ｌ盐酸终止，取上清，测 定在４９２ ｎｍ的吸光度，重复４次。增加的细胞表面 ＧＬＵＴ４ｍｙｃ水平＝电刺激组（或胰岛素组）吸光度值／ 对照组的吸光度值。 １．２．３免疫印记检测Ａｋｔ，ＡＳ１６０的磷酸化 在６ 孔板上，将细胞分为对照组、胰岛素组和电刺激组， 每组２个复孔。处理细胞后，裂解细胞，９７ ｃＩ＝加热５ ｍｉｎ，１０％（ｖ／ｖ）ＳＤＳ—ＰＡＧＥ电泳，免疫印迹检测Ａｋｔ 和ＡＳ１６０的磷酸化，一抗用各自的磷酸化抗体，二 抗用偶联ＨＲＰ的山羊抗兔抗体，以ＧＡＰＤＨ作为内 参，增强化学发光底物试剂盒检测，曝光。用Ｉｍａｇｅ Ｊ 软件处理，各蛋白的磷酸化水平增高倍数＝电刺激 组（或胰岛素组）灰度值／对照组的灰度值。 １．３统计学方法采用ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ６统计软件 进行统计学分析，对符合正态分布的正态计量以均 数±标准误（ ）表示，用单因素方差分析比较多组 均数间的差异，以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。 ２结果 ２．１ 各电刺激组和胰岛素组增加的ＧＬＵＴ４ｍｙｃ水 平的比较与对照组相比，胰岛素显著增加细胞膜 表面ＧＬＵＴ４ｍｙｃ（２．５倍，Ｐ＜０．００１）。与对照组相比， 随着电刺激时间的延长细胞表面ＧＬＵＴ４ｍｙｃ水平 逐渐升高，６０ ｍｉｎ后显著增加细胞膜表面 ＧＬＵＴ４ｍｙｃ水平（１．８倍，Ｐ＜０．０５），但电刺激增加细胞 表面的ＧＬＵＴ４ｍｙｃ水平低于胰岛素组，见图１。 ４ １ 一 籁 营 口 ＊ ０ 恒匪 莨 恩一 Ｏ ｎ＝３． Ｐ＜Ｏ．０５． 尸＜０．００１ 图１胰岛素和电刺激各组增加细胞表面ＧＬＵＴ４ｍｙｃ水平 Ｆｉｇ １ Ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ａｎｄ ＥＰＳ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ＧＬＵＴ４ｍｙｃ ２．２ 电刺激对Ａｋｔ和ＡＳ１６０磷酸化的影响胰岛 素刺激后显著激活了胰岛素信号通路，Ａｋｔ的两个 磷酸化位点（Ｔｈｒ３０８、Ｓｅｒ４７３）、Ｒａｂ—ＧＴＰａｓｅ激活蛋 白ＡＳ１６０的磷酸化水平均显著升高（１．７８倍，Ｐ＜ ０．０１），电刺激组中从２０ ｍｉｎ开始显著增加了Ａｋｔ 的两个磷酸化位点的磷酸化水平，３０ ｍｉｎ达最大 值，随着时间的增加Ａｋｔ—Ｓｅｒ４７３的磷酸化水平略有 下降但维持在与２０ ｍｉｎ相似的磷酸化水平，而 Ａｋｔ—Ｔｈｒ３０８的磷酸化水平随着时间的增加先下降 后升高（图２，表１）。ＡＳ１６０的磷酸化水平随着时间 的增加其磷酸化水平逐渐升高，３０ ｍｉｎ起与对照组 比较有显著性差异，在４０ ａｒｉｎ达最大值（１．６６倍，Ｐ＜ ０．Ｏ１），并且维持这一水平至６０ ｍｉｎ（图２，表１）。胰 岛素激活的Ａｋｔ及ＡＳ１６０磷酸化水平均高于电刺 激组（图２，表１）。 １０４ 天津医科大学学报 第２Ｏ卷 ｐ－ＡｋｔＴ３０８ ｐ－ＡｋｔＳ４７３ ｐ－ＡＳ１６０ Ｔ６４２ ＧＡＰＤＨ 图２胰岛素和电刺激各组对Ｌ６一ＧＬＵＴ４ｍｙｃ—ＡＳ１６０细胞Ａｋｔ和 ＡＳ１６０磷酸化的影响 Ｆｉｇ ２ Ｔｈｅ ｐｈｏｓｐｈＯｒｙｌａｔｊ０ｎ ｏｆ Ａｋｔ ａｎｄ ＡＳ１６０ ｅｆｆｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｎｓｕｌｉｎ ａｎｄ ＥＰＳ ｉｎ Ｌ６－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ－ＡＳ１６０ ｃｅｌｌ 表１各组中Ａｋｔ和ＡＳ１６０磷酸化水平增高倍数的比较（与对照组 比）（倍。ｘ＝ｅｓ￣） Ｔａｂ １ Ｔｈｅ ｃｏｍｐａｒｅ ｏｆ Ａｋｔ ａｎｄ ＡＳ１６０ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｆｏｌｄ ｉｎ— ｃｒｅａｓｅ（ｃｏｍｐａｒｅ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏ１）（ｆｏｌｄ， Ｐ＜０．０５， 尸＜０．０１． ０．００１， Ｐ＜０．０００ １ ３讨论 骨骼肌的收缩水平是底物代谢及转录事件的 重要的调节因子，然而调节这些反应的信号机制知 之甚少。电脉冲刺激是体外模拟收缩刺激的一种有 效的实验手段，但是不同的肌纤维类型、电刺激条 件和强度等都有可能对细胞产生不同的影ｎ￣［５－６１。本 研究以Ｌ６一ＧＬＵＴ４ｍｙｃ～ＡＳ１６０骨骼肌细胞株为细胞 模型，采用细胞刺激器给予细胞一定条件的电脉冲 刺激，体外模拟肌肉收缩，并对电刺激调节的 ＧＬＵＴ４ｍｙｃ转位和其相关的调节信号机制进行初步 研究。 此研究结果显示２４ ｍｓ、２０ Ｖ、１ Ｈｚ、１ ｈ的刺激 条件能够引起ＧＬＵＴ４ｍｙｃ转位，说明此细胞模型 及刺激条件是体外研究运动刺激对骨骼肌细胞 ＧＬＵＴ４ｍｙｃ转位影响的一个成功的细胞模型和 条件。 Ｌ６不具有收缩能力，因此在细胞接受电刺激时 不进行收缩同时也不会因收缩消耗能量， ＧＬＵＴ４ｍｙｃ的转位发生变化表明其它的分子机制发 挥作用。当电脉冲刺激骨骼肌细胞时，骨骼肌细胞 横小管去极化导致钙离子从肌浆网中释放出来，从 而引发肌动蛋白和肌球蛋白的相互作用。细胞中肌 动蛋白和肌球蛋白问的相互作用以及细胞为抵抗 细胞内增加的钙离子流，向细胞外泵出钙离子的过 程中消耗能量ＡＴＰ，ＡＴＰ转换为ＡＤＰ，即细胞内 ＡＭＰ／ＡＴＰ或ＡＤＰ／ＡＴＰ的比率增加，这一比率增加 激活ＡＭＰＫｌ７１。其它研究及此研究中发现电脉冲刺 激显著升高ＡＭＰＫ的磷酸化水平［１３Ｊ，说明此电刺激 有可能促进了Ｌ６细胞横小管去极化、胞浆内钙离 子升高进而消耗ＡＴＰ激活ＡＭＰＫ，最终导致 ＧＬＵＴ４ｍｙｃ转位。 有研究提出有关运动或收缩刺激对胰岛素受 体信号通路具有激活作用从而增强胰岛素作用的 信号机制 。但也有报道认为运动并不影响胰岛素 信号通路＿ｌｏｌ。因此，运动是否影响胰岛素信号通路还 存在争议。Ａｋｔ对多种细胞的生长、存活及代谢有重 要的调节作用，同时还是胰岛素信号通路的关键信 号分子，因此Ａｋｔ被认为是骨骼肌收缩刺激激活的 信号通路中一个重要的潜在信号分子。目前有研究 应用多种肌纤维类型，多个时间点和多种特定肌纤 维亚型抗体，通过体内刺激和在没有系统因素存在 的情况下体外刺激离体肌肉，发现Ａｋｔ磷酸化显 著、快速增加１５ ｍｉｎ后其磷酸化水平恢复到基础水 平『ｌ】１。本研究用培养的细胞模型，得出了相似的实 验结果，在本研究的电脉冲条件下２０ ａｒｉｎ开始显著 增加了Ａｋｔ的磷酸化水平，并且其下游与ＧＬＵＴ４转 位具有关键作用的ＡＳ１６０的磷酸化水平也显著增 加 ２】。胰岛素促进葡萄糖摄取的信号通路基本明 确，在此研究中胰岛素激活Ａｋｔ及磷酸化ＡＳ１６０，１ ｈ 电刺激增加了细胞表面的ＧＬＵＴ４ｍｙｃ水平，同时激 活Ａｋｔ和增加ＡＳ１６０的磷酸化水平，随着时间的延 长ＡＳ１６０的磷酸化水平逐渐升高的趋势与细胞表 面增加的ＧＬＵＴ４ｍｙｃ水平一致，这些结果都表明电 刺激引起的ＧＬＵＴ４转位可能与Ａｋｔ信号通路的激 活有关，但与肌肉的收缩无关。 综上所述，电刺激显著增加ＧＬＵＴ４的转位，Ａｋｔ 及其下游分子ＡＳ１６０磷酸化水平被提高。早期的报 道显示细胞内的钙离子水平升高或ｃＡＭＰ的激活 都可能激活Ａｋｔ，所以本研究中是否升高细胞内的 钙离子水平、Ａｋｔ的激活机制是否与细胞内钙离子 的升高有关、Ａｋｔ的激活机制是依赖ＰＩ３Ｋ的形式或 是不依赖ＰＩ３Ｋ的形式仍是未知的，对于电刺激激 活的Ａｋｔ是否对ＧＬＵＴ４转位起决定性作用还需要 以后通过其他实验手段如采用抑制剂、基因敲除或 基因突变等方法进行进一步地探讨。本研究为探讨 电刺激引起的ＧＬＵＴ４转位及其相关的调节信号通 路提供了初步结果、实验模型和刺激条件，有助于 （下转第１１５页） 第２期 段雯婷，等．ＱＲＳ碎裂波对行介入治疗的急性心肌梗死患者不良心血管事件的影响 １１５ 【３］中华医学会心血管病学分会、中华心血管病杂志编辑委员会． ｓｉｇｎ ｏｆ ａｃｕｔｅ ｏｒ ｒｅｃｅｎｔ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，２００６， 急性ｓＴ段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南［Ｊ１．中华心血管病 杂志，２０１０，３８（８）：６７５ １１４（１８ ｓｕｐｐ１）：５１２ ［１３］Ｏｍ Ｓ，Ｍａｎｈｅｎｋｅ Ｃ，Ａｎａｄ Ｉ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｉｒｅｕｌａｒ ｓｃａｒ ｓｉｚｅ，ｌｏｃａｔｉｏｎ，ａｎｄ ｔｒａｎｓｍｕｒａｌｉｔｙ ｏｎ ｌｅｆｔ ｖｅｎｔｉｃｕｌｒａｒ ｒｅｍｏｄｅｌｉｎｇ ｗｉｔｈ 【４】于会宁，张迎怡，丛洪良．冠心病患者糖耐量减低与冠状动脉 Ｇｅｎｓｉｎｉ评分的关系［Ｊ１．临床心血管病杂志，２０１０，１（２６）：１００１ ［５］Ｖａｒｒｉｌｅ Ｐ，Ｃｈｒａｙｓｓｏｓ Ｂ Ｅ．Ｔｈｅ ＲＳＲ’ｃｏｍｐｌｅｘ ｎｏｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｆｉｇｈｔ ｂｕｎｄｌｅ ｂｒａｎｃｈ ｂｌｏｃｋ：ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ａｓ ａ ｓｉｇｎ ｏｆ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎ— ｈｅａｌｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉｌａ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ，２００７，９９（８）：１ １０９ ［１４］Ｍａｈｅｎｔｈｉｒａｎ Ｊ，Ｋｈａｎ Ｂ Ｒ，Ｓａｗａｄａ Ｓ Ｇ，ｅｔ １．Ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ ａＱＲＳ ｃｏｒｎ－ ｐｌｅｘｅｓ ｎｏｔ ｔｙｐｉｃａｌ ｏｆ ａ ｂｕｎｄｌｅ ｂｒａｎｃｈ ｂｌｏｃｋ：ａ ｍａｒｋｅｒ ｏｆ ｇｒｅａｔｅｒ ｍｙ— ｆａｒｃｔｉｏｎ ｓｃａｒ［Ｊ］．Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ，１９９２，１２３（２）：３６９ ［６】Ｇａｒｄｎｅｒ Ｐ Ｉ，Ｕｒｓｅｌｌ Ｐ Ｃ，Ｆｅｎｏｇｌｉｏ Ｊ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃ ａｎｄ ａｎａｔｏｍｉｃ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ ｅｌｅｃｔｒｏｇｒａｍｓ ｒｅｃｏｒｄｅｄ ｆｒｏｍ ｈｅａｌｅｄ ｏｃａｒｄｉａｌ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ ａｂｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ｉｎ ｃｏｒｏｎａｒｙ ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓ－ ｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊ Ｎｕｃｌ Ｃａｒｄｉｏｌ，２００７，ｌ４ｆ３）：３４７ ［１５］Ｄａｓ Ｍ Ｋ，Ｍｉｃｈａｅｌ Ｍ Ａ，Ｓｕｒａｄｉ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｕｓｅｆｕｌｎｅｓｓ ｏｆ ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎ ｆａｃｔｓ［Ｊ］．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，１９８５，７２（３）：５９６ ［７】Ｌｅｓｈ Ｍ Ｄ，Ｓｐｅａｒ Ｊ Ｆ，Ｓｉｍｓｏｎ Ｍ Ｂ．Ａ ｃｏｍｐｕｔｅｒ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｏ— ＱＲＳ ｏｎ ａ １２一ｌｅａｄ ｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｇｒａｍ ｉｎ ａｃｕｔｅ ｃｏｒｏｎａｒｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ ｆｏｒ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ，２００９，１０４（１２）：１６３１ ［１６］Ｔｏｒｉｇｏｅ Ｋ，Ｔａｍｕｒａ Ａ，Ｋａｗａｎｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｌｅａｄｓ ｗｉｔｈ ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ ＱＲＳ ｉｓ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉａｃ ｄｅａｔｈ ｏｒ ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｒｉｏｒ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎ－ ｇｒａｍ：ｗｈａｔ ｃａｕｓｅｓ ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｌｅｃｔｒｏｃａｒｄｉｏｌ，１９８８，２１（ｓｕｐｐ１）： ６９ ［８】Ｖａｒｒｉａｌｅ Ｐ，Ｃｈｒｙｓｓｏｓ Ｂ Ｅ．Ｔｈｅ ＲＳＲ’ｃｏｍｐｌｅｘ ｎｏｔ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｒｉｇｈｔ ｂｕｎｄｌｅ ｂｒａｎｃｈ ｂｌｏｃｋ：ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｖａｌｕｅ ａｓ ａ ｓｉｇｎ ｏｆ ｍｙｏｃａｒｄｉｌ ｉａｎ— ｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ，２０１２，５９（１）：３６ ［１７］Ｇｕｏ Ｒ，Ｚｈａｎｇ Ｊ，Ｌｉ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｇｎｏｓｔｉｃ ｓｉｇｎｉｉｆｃａｎｃｅ ｏｆ ｒａｇｍｅｎｔｆｅｄ ＱＲＳ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｎｏｎ－ＳＴ ｅｌｅｖａｔｉｏｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ Ｒｅ— ｓｕｈｓ ｏｆ ａ １－ｙｅａｒ，ｓｉｎｇｌｅ－ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｌｌｏｗ—ｕｐ［Ｊ］．Ｈｅｒｚ，２０１２，３７（７）：７８９ ｆａｒｃｔｉｏｎ ｓｃａｒ［Ｊ］．Ａｍ Ｈｅａｒｔ Ｊ，１９９２，１２３（２）：３６９ ［９］郭继鸿．碎裂ＱＲＳ波［Ｊ】＿ｌ临床心电学杂志，２００８，１７（１）：６０ 【１０］Ｄａｓ Ｍ Ｋ，Ｅ１ Ｍａｓｒｙ Ｈ．Ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ ＱＲＳ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｄｅｐｏｌａｒｉｚａｔｉｏｎ ａｂ— ｎｏｒｍａｌｉｔｉｅｓ ａｓ ａ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ａｎｄ ｓｕｄｄｅｎ ｃａｒｄｉａｃ ｄｅａｔｈ［Ｊ］． Ｃｕｒｔ Ｏｐｉｎ Ｃａｒｄｉｏｌ，２０１０，２５（１）：５９ ［１８］Ｔｏｒｉｇｏｅ Ｋ，Ｔａｍｕｒａ Ａ，Ｋａｗａｎｏ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ｔｈｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｌｅａｄｓ ｗｉｔｈ ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ ＱＲＳ ｉｓ ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｌｙ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃａｒｄｉａｃ ｄｅａｔｈ ｏｒ ｈｏｓｐｉｔａｌｉｚａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｈｅａｒｔ ｆａｉｌｕｒｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｐｒｉｏｒ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎ— 【１ １］Ｄａｓ Ｍ Ｋ，Ｍａｓｋｏｕｎ Ｗ，Ｓｈｅｎ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ ＱＲＳ ｏｎ ａ １２－ｌｅａｄ ＥＣＧ：ａ ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ ｏｆ ｍｏｒｔａｌｉｔｙ ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ ｅｖｅｎｔｓ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｆａｒｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｃａｒｄｉｏｌ，２０１２，５９（１）：３６ （２０１３一ｌＯ一１４收稿） ａｒｔｅｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｈｅａｒｔ Ｒｈｙｔｈｍ，２００７，４（１ １）：１３８５ ［１２】Ｍｉｃｈａｅｌ Ｍ Ｋ，Ｄａｓ Ｍ Ｋ．Ｆｒａｇｍｅｎｔｅｄ ＱＲＳ ｏｎ ａ １２一ｌｅａｄ ＥＣＧ ｉｓ ａ ・＋一——卜“＋一＋ ＋“＋ ——卜一＋一＋“——卜一＋”＋－＋－－４－－＋－＋ 一—・ 一＋一＋－＋一＋－＋・ （上接第１０４页） 研究运动有益于胰岛素抵抗或糖尿病病人的分子 机制。 参考文献： 【１】Ｋｌｉｐ Ａ．Ｔｈｅ ｍａｎｙ ｗａｙｓ ｔｏ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｐｏｒｔｅｒ４［Ｊ１．Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｎｕｔｒ Ｍｅｔａｂ，２００９，３４（３）：４８１ ［７］Ｈａｒｄｉｅ Ｄ Ｇ．ＡＭＰＫ：Ａ ｔａｒｇｅｔ ｏｒｆ ｄｒｕｇｓ ａｎｄ ｎａｔｕｒａｌ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｗｉｔｈ ｅｆ－ ｆｅｃｔｓ ｏｎ ｂｏｔｈ ｄｉａｂｅｔｅｓ ａｎｄ ｃａｎｃｅｒ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０１３，６２（７）：２１６４ ［８］Ｗａｄｌｅｙ Ｇ Ｄ，Ｋｏｎｓｔａｎｔｏｐｏｕｌｏｓ Ｎ，Ｍａｃａｕｌａｙ Ｌ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ－ ｓｕｌｉｎ－ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ Ａｋｔ ｐＳｅｒ４７３ ａｎｄ ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ ＳＨＰ２ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｂｕｎ－ ｄａｎｃｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ ａｃｕｔｅ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ａｎｄ ｓｈｏｒｔ－ 【２］Ｆａｒｍａｗａｔｉ Ａ，Ｋｉｔａｊｉｍａ Ｙ，Ｎｅｄａｃｈｉ Ｔ，ｅｔ ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎ－ ｔｒａｃｔｉｏｎ—－ｉｎｄｕｃｅｄ ＩＬ—－６ ｕｐ——ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｕｓｉｎｇ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｌｅ Ｃ２Ｃ１２ ｍｙ－ ｔｅｒｍ ｔｒａｉｎｉｎｇ［川＿Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００７，１０２（４）：１６２４ ［９］Ｏｓｏｒｉｏ—Ｆｕｅｎｔｅａｌｂａ Ｃ，Ｃｏｎｔｒｅｒａｓ—Ｆｅｒｒａｔ Ａ Ｅ，Ａｈａｍｉｒａｎｏ Ｆ，ｅｔ ａ１． Ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌｉ ｒｅｌｅａｓｅ ＡＴＰ ｔｏ ｉｎｃｒｅａｓｅ ＧＬＵＴ４ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｏｔｕｂｅｓ［Ｊ］．Ｅｎｄｏｃｒ Ｊ，２０１３，６Ｏ（２）：１３７ ［３］Ｒｏｂｅｒｔｓ Ｃ Ｋ，Ｌｉｔｔｌｅ Ｊ Ｐ，Ｔｈｙｆａｕｈ Ｊ Ｐ．Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｎｓｉ－ ｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｇｌｙｃｅｍｉｃ ｃｏｎｔｒｏｌ ｂｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｅｘｅｒｃｉｓｅ叨．Ｍｅｄ Ｓｃｉ Ｓｐｏｒｔｓ ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅ ｖｉａ ＰＩ３Ｋ￣／－Ａｋｔ－ＡＳ１６０ ｉｎ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｉｌｓ【Ｊ１． Ｄｉａｂｅｔｅｓ，２０１３，６２（５）：１５１９ Ｅｘｅｒｃ，２０１３，４５（１０）：１８６８ ［４］Ｌｅｅ Ｓ，Ｋｉｍ Ｙ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ａｌｏｎｅ ｏｎ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ［１０】Ｗｏｊｔａｓｚｅｗｓｋｉ Ｊ Ｆ，Ｈａｎｓｅｎ Ｂ Ｆ，Ｇａｄｅ Ｊ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ａｆｔｅｒ ｅｘｅｒｃｉｓｅ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｋｅｌｅｔｌ ａｍｕｓｃｌｅ【Ｊｊ．Ｄｉａ－ ｂｅｔｅｓ，２０００，４９（３）：３２５ ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ ｉｎ ｏｂｅｓｅ ｙｏｕｔｈ［Ｊ］．Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｍｅｔａｂ Ｊ，２０１３，３７（４）： ２２５ ［１ １】Ｓａｋａｍｏｔｏ Ｋ，Ｈｉｒｓｈｍａｎ Ｍ Ｆ，Ａｓｃｈｅｎｂａｃｈ Ｗ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆＡｋｔ ｉｎ ｒａｔ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｍ．ＪＢＣ，２００２，２７７（１４）：１ １９１０ ［１２］Ｃａｒｔｅｅ Ｇ Ｄ，Ｆｕｎａｉ Ｋ．Ｅｘｅｒｃｉｓｅ ａｎｄ ｉｎｓｕｌｉｎ：Ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅ ｏｒ ｄｉｖｅｒ－ ［５］Ｂｕｒｃｈ Ｎ，Ａｒｎｏｌｄ ＡＳ，Ｉｔｅｍ Ｆ，ｅｔ １．Ｅｌａｅｃｔｒｉｃ ｐｕｌｓｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌ— ｔｕｒｅｄ ｒｏｕｔｉｎｅ ｍｕｓｃｌｅ ｃｅｌｌｓ ｒｅｐｒｏｄｕｃｅｓ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｃｈａｎｇｅｓ ｏｆ ｔｒａｉｎｅｄ ｍｏｕｓｅ ｍｕｓｃｌｅ［Ｊ１．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ，２０１０，５（６）：ｅ１０９７０ 【６】 Ｒａｎｅｙ Ｍ Ａ，Ｔｕｒｃｏｔｔｅ Ｌ Ｐ．Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ＦＡ ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ ｏｘｉｄａｔｉｏｎ ｂｙ ＡＭＰＫ ａｎｄ ＥＲＫ１／２ ｉｓ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｇｅｎｃｅａｔＡＳ１６０ａｎｄＴＢＣ１Ｄ１【Ｊ］．ＥｘｅｒｃＳｐｏｒｔＳｃｉＲｅｖ，２００９，３７（４）：１８８ ［１３］Ｊｅｎｓｅｎ Ｔ Ｅ，Ｓｃｈｊｅｄｉｎｇ Ｐ，Ｖｉｏｌｌｅｔ Ｂ，ｅｔ ａ１．ＡＭＰＫ ａｌｐｈａｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｏｒ ｓｔｆｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｏｓｅ ｕｐｔａｋｅ ｂｙ ｔｗｉｔｃｈ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ，ｂｕｔ ｉｎ ｒｏｄｅｎｔ ｍｕｓｃｌｅ【Ｊｊ．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ Ｍｅｔａｂ，２００６，２９１（６）： Ｅ１２２０ ｎｏｔ ｂｙ Ｈ２０２，ｉｎ ｍｏｕｓｅ ｓｋｅｌｅｔａｌ ｍｕｓｃｌｅ［Ｊ］．ＰＬｏＳ ｏｎｅ，２００８ ３（５）：ｅ２１０２ （２０１３—０９—２９收稿）