郝志勇等抗ＲＡＥＴ１Ｇ２单克隆抗体的研制和书Ｕ步鉴定第９期 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００—４８４Ｘ．２０１０．０９．０１３ ・免疫学技术与方法・ 抗ＲＡＥＴ１Ｇ２单克隆抗体的研制和初步鉴定① 郝志勇曹伟②马驰崔莲仙何维 （中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院，北京１００００５） 中国图书分类号Ｒ３９２ 文献标识码Ａ 文章编号１０００．４８４Ｘ（２ｏｉｏ）ｏ９．０８２１．０３ ［摘要］ 目的：制备鼠源抗ＲＡＥＴ１Ｇ２单克隆抗体，并对其特异性进行鉴定。方法：以原核表达的ＲＡＥＴ１Ｇ２蛋白为抗原 免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，运用Ｂ淋巴细胞杂交瘤技术制备抗ＲＡＥＴ１Ｇ２单克隆抗体；用免疫双扩散方法鉴定Ｉｇ业类；Ｗｅｓｔｅｎ ｒｂｌｏｔ鉴定 单克隆抗体的特异性。结果：获得了４株町分泌特异性抗ＲＡＥＴ１Ｇ２抗体的杂交瘤细胞株７Ａ１１、９Ｃ６、１０Ｐ９和１２Ｆ８，Ｉｇ亚类均为 ＩｇＧ１。结论：制备的杂交瘤细胞株能稳定分泌特异性的抗ＲＡＥＴ１Ｇ２抗体，并且所分泌的单克隆抗体都能识别天然的ＲＡＥＴＩＧ 蛋白，为进一步研究游离性的ＲＡＥＴ１Ｇ２分子与肿瘤进展的关系以及分析各种肿瘤细胞表面的ＲＡＥＴＩＧ表达情况创造了条件。 ［关键词］ＲＡＥＴ１Ｇ２；ＲＡＥＴ１Ｇ；ＮＫＧ２Ｄ；单克隆抗体；免疫荧光 Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｉｄｅｎｔｉｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌｆ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ｈｕｍａｎ ＲＡＥＴ１Ｇ２ ＨＡＯ Ｚｈｉ一 ，ｚｇ，ＣＡＯ Ｗｅｉ，ＭＡ Ｃｈｉ，ＣＵ１ Ｌｉａｎ—Ｘｉａｎ，ＨＥ Ｗｅｉ．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｂａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃｈｉｃｓｎｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｃｅｓ，Ｓｃｈｏｏｌｎ ｏｆＢａｓｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｐｅｋｉｎｇ Ｕｎｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ １００００５，Ｃｈｉｎａ ｌＡｂｓｔｒａｃｔ Ｊ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔ ＲＡＥＴ１ Ｇ２．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｈｕｍａｎ ＲＡＥＴＩＧ２ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ａｎｔｉｇｅｎ ｔｏ ｉｍｍｕｎｉｚｅ ＢＡＬＢ／ｃ ｍｉｃｅ，ａｎｄ ｐｒｅｐａｒｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｂｙ ｍｅａｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｂ ｌｙｍｐｈ（￣：ｙｔｅ ｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｉｇ ｓｕｂｃｌａｓｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｉｃｉｔｆｙ ｏｆ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｏｄｉｂｅｓ ｗａｓ ａｎａｌｙｓｅｄ ｂｙ ｄｏｕｂｌｅ ｉ￣ｎｕｎｏｄｉｆｕｓｉｏｎ ａｎｄ ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ： ４ ｈｙｂｆｉｄｏｍａ（：ｅｌｌ ｌｉｎｅｓ（７Ａ１ １，９Ｃ６，１０Ｆ９ ａｎｄ １２Ｆ８）ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ａｎｔｉ—ＲＡＥＴＩ Ｇ２ ｍＡｂｓ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ．１ｇ ｓｕｂｃｌａｓｓ ｏｆ ｍＡｂｓ ｌ￣ｌｏｎｇｅｄ ｔｏ ＩｇＧ１． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｗｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｎ１】ｒ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆｈｙｂｒｉｄｏｍａ ｅｅＨｓ ｓｅｃｒｅｔｉｎｇ ａｎｔｉ—ｔＬ￣ＥＴ１Ｇ２ ａｎｔｉｌｘｘｌｉｅｓ．Ａｌｌ ｏｆｔｈｅ ａｎｔｉｏｄｉｂｅｓ ｃｏｕｌｄ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅ ＲＡＥＴ１Ｇ ｅｘ— ｐｒｅｓｓｅｄ Ｏｎ ｔｈｅ ＣＨＯ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ．Ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎ ｏｔ ＲＡＥＴ１ Ｇ２ ｗｉｔｈ ｔｕｍｏｒ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｔｏ ｏｂｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＲＡＥＴ１Ｇ２ ｏｎ ｔｈｅ ｓｕｒｆａｃｅ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｅｅＨｓ． ［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］ＲＡＥＴ１Ｇ２；ＲＡＥＴ１Ｇ；ＮＫＧ２Ｄ；Ｍｏｎｏｃｌｏｎ￣ａｎｔｉｏｄｖ；ｂＩｍｍｕｎｏｌｆｕｏｒｅｓｅｅｎｅｅ ＮＫＧ２Ｄ是一种激活性的Ｃ型凝集素受体，由同 源二聚体构成，表达于多种淋巴细胞。通过ＮＫＧ２Ｄ 途径可以直接激活ＮＫ细胞，诱导其分泌细胞因子 和发挥细胞毒性，但只能辅助激活Ｔ细胞ｌ】 ｊ。 ＲＡＥＴ１分子（或称为ＵＬＢＰ）是最近几年被发现的人 类ＮＫＧ２Ｄ配体家族成员［６－ｔ２ ３。其中，ＵＬＢＰ１—３为糖 基磷脂酰肌醇连接的膜蛋白，而ＵＬＢＰ４和ＲＡＥＴ１Ｇ 则为含跨膜区域和胞内区域的膜蛋白。除此以外， ①本文为困家重点基础研究发展规划（９７３）项目（２００４ＣＢ５１８７０６）、国 家自然科学基金面上项目（３０８７２３６２） ＲＡＥＴ１Ｇ还含有无跨膜区域和胞内区域的剪切变体 ＲＡＥＴ１Ｇ２。ＤＮＡ序列分析结果显示，其与ＮＫＧ２Ｄ的 另一个配体ＭＩＣＡ较为相似，且都属于延伸的ＭＨＣ Ｉ类分子家族，但只含ａ１和 功能域且不能呈递 小肽。 ＲＡＥＴ１可表达于多种正常细胞表面，病毒感染 或恶性转化能显著增强其表达，提示ＲＡＥＴ１分子在 感染免疫和肿瘤免疫中具有潜在的作用＿６，１０，１２， 。 然而，值得注意的是，在细胞培养过程中或肿瘤患者 体内都能检测到游离的ＵＬＢＰ２ Ｅ ，１ 。此外，ＲＡＥＴ１Ｇ ②同为第一作者 作者简介：郝志勇（１９７１年一），男，丰要从书细胞免疫学研究； 通讯作者及指导教师：何“ 维（１９５５年一），男，博士，教授，丰要从事 Ｔ细胞抗肿瘤免疫作Ｊ｛｛”和“氧化应激 还含有无跨膜区域和胞内区域的剪切变体 ＲＡＥＴ１Ｇ２，以上提示，肿瘤细胞本身可能通过产生游 离性的ＲＡＥＴ１分子来达到免疫逃逸的目的。 为了进一步研究游离性ＲＡＥＴ１Ｇ２分子与肿瘤 ｊ老化免疫”两方面的研究。 进展的关系以及分析各种肿瘤细胞表面ＲＡＥＴ１Ｇ的 中国免疫学杂志２０１０年第２６卷 表达情况，我们制备了抗ＲＡＥＴ１Ｇ２分子的单克隆抗 次，并用含２％ＢＳＡ的ＰＢＳ于３７℃下封闭２小时，再 体并进行了初步的鉴定。 次以含５％ｄＦｗｅｅｎ。２０的ＰＢＳ洗涤５次。加入待测的 １材料与方法 细胞培养ｊ：清，３７ 孵育１小时，再次以含５‰ Ｔｗｅｅｎ一２０的ＰＢＳ洗涤５次。加入ＨＲＰ酶标记的羊 １．１实验动物和细胞株 ＢＡＬＢ／ｃ近交系小鼠（８ 抗鼠ＩｇＧ二抗，３７℃孵育１小时，再次以含５％ｏＴｗｅｅｎ． 周，雌性），购白中国药品和生物制品鉴定所啮齿类 ２０的ＰＢＳ洗涤５次，并用重蒸水再洗涤３次。ＯＰＤ。 实验动物中心。ＳＰ２／０细胞为本室自存。 Ｈ２Ｏ，底物显色系统显色５到１０分钟，测定ＯＤ值。 １．２ 主要试剂ＤＭＥＭ和ＲＰＭＩ１６４０培养基购自 １．５．２间接免疫荧光法检测抗体分别将ＣＨＯ细 Ｇｏｂｃｏ公司。弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂、ＨＡＴ 胞和稳定表达ＲＡＥＴ１Ｇ的ＣＨＯ细胞接种２４孔板， 和ＨＴ、ＰＩ（碘化 啶）为Ｓｉｇｍａ公司的产品。谷氨酰 ３７￣Ｃ、５％ＣＯ，培养４８小时后，ＰＢＳ洗涤５次，用２％ 胺和ＰＥＧ４０００购自华美公司。免疫和实验用的 多聚甲醛冰上固定３０分钟。以含５％ＢＳＡ的ＰＢＳ于 ＲＡＥＴＩＧ２蛋白为本实验室基因工程产物。培养板 ４℃封闭过夜。次日，ＰＢＳ洗涤５次后加入待测样 为Ｃｏｓｔａｒ公司产品。ＨＲＰ和ＦＩＴＣ标记的羊抗鼠二 品，３７％孵育１小时，再次以ＰＢＳ洗涤５次。加人羊 抗均购自中山公司。 抗鼠Ｉ 的ＦＩＴＣ酶标二抗，３７ ｏ【＝孵育３０分钟，再次 １．３杂交瘤细胞株的制备取５０ ｆｉｇ原核表达蛋 以ＰＢＳ洗涤５次，并用重蒸水再洗涤３次。加入ＰＩ 白ＲＡＥＴ１Ｇ２和弗氏完全佐剂混合后皮下多点沣射 细胞核染液，３７￣Ｃ孵育ｌ０分钟，再次以ＰＢＳ洗涤５ 小鼠，分别仵初次接种后１４、２ｌ、２８天使用同样量的 次，于荧光显微镜下分析。 抗原和弗氏不完全佐剂混合物于小鼠皮下多点注 １．５．３抗体Ｉｇ亚型鉴定应用免疫双扩散法检测 射。融合前３灭，静脉加强注射抗原１次（不加佐 抗体亚 ，结果是４株单克隆抗体均为Ｉ ｌ。 剂）。取免疫小鼠的脾细胞和ＳＰ２／０骨髓瘤细胞存 １．５．４ Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ检测单克隆抗体的特异性表达产 ５０％ＰＥＧ４０００的作用下进行细胞融合，在ＨＡＴ选择 物经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ后转移至纤维素膜上进行Ｗｅｓｔｅｍ 性培养基中进行筛选，并经有限稀释克隆化培养获 Ｈｏｔ分析。以７Ａ１ ｌ 克隆抗体为一抗，ＨＲＰ标记的羊 得杂交瘤细胞株。 抗鼠ｋＧ作为二抗，使用化学发光底物显影。 １．４ 小鼠抗ＲＡＥＴＩＧ２多克隆抗体的制备 取 ＲＡＥＴＩＧ２免疫的小鼠经眼球放血，离心后获得血清 ２结果 保存备用。 ２．１筛选到４株分泌抗ＲＡＥｑ、１Ｇ２的单克隆抗体 １．５抗ＲＡＥＴ１Ｇ２单克隆抗体的特性鉴定 分别标记为７Ａｌ １、９Ｃ６、１０Ｆ９和１２Ｆ８。杂交瘤细胞系 １．５．１ 问接ＥＬＩＳＡ法检测抗体 以１ ｇ（每孔） 经过数次冻存、复苏过程，均能稳定分泌目的抗体。 ＲＡＥＴＩＧ２抗原包被９６孑Ｌ板，并设立空白、阴阳对 ２．２特异性鉴定经过检验，４株细胞系所分泌的 照，３７℃包被过夜 以含５％ｄｌ＼ｖｅｅｎ一２０的ＰＢＳ洗涤５ 抗体均能识别天然ＲＡＥＴ１Ｇ分子（冈１），即它们能识 一一●一 ●一●一 图１免疫荧光镜检证明所制备的４株单克隆抗体均能识别天然的ＲＡＥＴ１Ｇ分子 Ｆｉｇ．１ Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｉｎｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｇａｉｎｓｔ ＲＡＥＴ１Ｇ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｂｙ ｉ 郝志勇等抗ＲＡＥＴＩＧ２单克隆抗体的研制和初步鉴定第９期 ２ ｋＤ 一一 ６４３１ 图２ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测单克隆抗体７Ａｌｌ的特异性 Ｆｉｇ．２ Ｔｈｅ ｓｐｅｃｉｉｆｃｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ７Ａｌｌ ａｇａｉｎｓｅ ＲＡＥＴ１Ｇ ｉｎ ＣＨＯ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｉｄｅｎｔｉｉｆｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 别表达于ＣＨＯ细胞表面的ＲＡＥＴ１Ｇ分子，但不与 ＣＨＯ细胞表面的其他膜蛋白分子结合。此外，７ＡＩ １ 所分泌的抗体还能用于Ｗｅｓｔｅｍ ｂｌｏｔ检测变性的 ＲＡＥＴ１Ｇ２分子（图２）。 ２．３单克隆抗体的亚型 所制备的４株单克隆抗 体均为ＩｇＧ１。 ３讨论 肿瘤在发生发展过程中可通过多种机制来逃避 机体的免疫攻击，包括免疫选择和抗原调变、肿瘤细 胞表面抗原封闭、肿瘤细胞漏逸和免疫刺激、肿瘤细 胞表面分子表达改变、肿瘤抗原加工、递呈功能障 碍、Ｆａｓ／ＦａｓＬ反击、肿瘤细胞分泌抑制因子、抑制性 Ｔ细胞及Ｔ细胞信号转导缺陷等因素。最近一些研 究显示，在某些肿瘤患者体内可以检测到高水平的 游离性ＭＩＣＡ，它们通过诱导肿瘤浸润和外周血免疫 细胞表达ＮＫＧ２Ｄ受体的内吞和降解来破坏效应细 胞的杀伤效应［１５－１Ｓ￣。鉴于ＵＬＢＰ与ＭＩＣＡ的相似性， 我们拟分析游离性ＲＡＥＴ１Ｇ２水平的高低与肿瘤患 者病情进展之问的关系。既往我们在进行的裸鼠试 验中已经提示，游离性ＲＡＥＴ１Ｇ２能促进肿瘤的生 长。为此，制备了抗ＲＡＥＴ１Ｇ２特异性单克隆抗体进 行相关研究。本次制备的单克隆抗体都能识别天然 ＲＡＥＴ１Ｇ分子，此外，我们初期的预实验提示，某些 肿瘤细胞培养上清液中存在游离性ＲＡＥＴ１Ｇ２。最 近有文献报道，通过ＧＰＩ连接的ＵＬＢＰ２还可以通过 蛋白剪切方式来产生游离性ＵＬＢＰ２ １４ｊ，因此，我们 所制备的抗体为研究ＲＡＥＴ１Ｇ其他可能的脱落机制 创造了条件。 鉴于ＲＡＥＴ１Ｇ在肿瘤细胞表达的相对特异 性 ，不仅可以分析游离性ＲＡＥＴ１Ｇ２水平与肿瘤 患者病情进展情况之问的关系，还可能开发出具有 治疗肿瘤功能的抗体。 ・８２３ ４参考文献 １ Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈ Ａ． ｍａｓｅｌｌｏ Ｅ．Ｌｕｃａｓ Ｍ ｅｔ ｃｔｆ．Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｓｉｇ— ｎａｌｉｎｎ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｄｅｔｅｍｆｉｎｅ ｓｔｉｍｕｔａｔｏｒｖ ＶｅｌｋＳＵＳ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＮＫＧ２ＤｌＪ Ｊ．Ｎａｔ Ｉｎｕｎｕｎｏｌ，２００２；３（１２）：１１４２—１１４９． ２ ｌｉｆｌｌｎａ Ｓ．Ｈｏ Ｅ Ｌ．Ｃｅｌｉａ Ｍ ｅｔ ａｌ ＮＫＧ２Ｄ ｒｅｃｒｕｉｔｓ ｔｗｏ ｄｉｓｔｉｎｃｔ ａｄａｐｔｅｒｓ ｔｏ ｔｒｉｇｇｅｒ ＮＫ ｃｅ１１ ａｃ，ｔｉｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｏｓｔｉｎｍｌａｔｉｏｎ ｌ Ｊ ｊ．Ｎａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００２；３ （１２）：ｌ１５Ｏ一１１５５． ３ Ｇｒｏｈ Ｖ．Ｒｈｉｎｅｈａｎ Ｒ．Ｒａｎｄｏｌｐｈ—Ｈａｂｅｃｋｅｒ Ｊ Ｔ ｅｔ ｕ，．Ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ８ａｌｐｈａｂｅｔａ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ＮＫＣ２Ｄ ｖｉａ ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ ｂｙ ＭＩＣ ｉｎｄｕｃｅｄ ｏｎ ｖｉｒｕｓ－ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｃｅｌｌｓ［Ｊ Ｊ．Ｎａｔ ｌｍｍｕｎｏｌ，２００１；２（３）：２５５—２６０． ４ Ｍａａｓｈｏ Ｋ．Ｏｐｏｋｕ—Ａｎａｎｅ Ｊ．Ｍａｒｕｓｉｎａ Ａ Ｉ ｅｔ ａ１．ＮＫ（ Ｄ ｉｓ ａ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏＵ ｒｅｃｅｐｔｏｒｆｏｒ ｈｕｍａｎ ｎａｉｖｅ ＣＤ８ Ｔ ｃｅｌｌｓｌ Ｊ Ｊ．Ｊ Ｉｎｌｍｕｎｏｌ，２ｏｏ５；１７４（８）： ４４８０．４４８４． ５ Ｍａｒｋｉｅｗｉｃｚ Ｍ Ａ．Ｃａｒａｖａｎｎｏｌｍｕｌｏｓ Ｌ Ｎ．Ｎａｉｄｅｎｋｏ Ｏ Ｖ Ｐ，ａｌ Ｃｏｓｔｉｎｍｌａ． ｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕ曲ＮＫＧ２Ｄ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｉｎｕｒｉｎｅ ＣＤ８ ＣＴＩ ｆｕｎｏｔｉｏｎ：ｓｉｎｆｉｌｍｉｔｉｅｓ ｎａｄ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＮＫＧ２Ｄ ａｎｄ ＣＤ２８ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ Ｊ』．Ｊ ｂｍｎｕｎｏｌ， ２００５；１７５（５）：２８２５．２８３３． ６ ｒ．￣ｓｍａｎ Ｄ，Ｍｕｌｌｅｂｒｇ Ｊ，Ｓｕｔｈｅｒｌａｎｄ Ｃ Ｌ ｅｌ ａｆ．ＵＩ ＢＰｓ，ｎｎｖｅｌ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ ｌ— ｒｅｌａｔｅｄ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ．ｂｉｎｄ ｔｏ ＣＭＶ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ＵＬ１６ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｅ ＮＫ 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ａ１．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｒｅ— ｌｅａｓｅ ｏｆ ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｎｇ ｉｎｍｍｎｏｒｅｅｅｐｔｏｒ ＮＫＧ２Ｄ ｉｎ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｌ Ｊｊ．Ｂｌｏｏｄ，２ｏ０３；１０２（４）：１３８９．１３９６． １８ Ｊｉｎｕｓｈｉ Ｍ． Ｉ ｅｈａｒａ Ｔ，Ｔａｔｓｕｍｉ Ｔ ｅｔ ａＺ．Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ ｏｆ ｎａｔｕ ｋｉｌｌｅｒ ｃｅｌ１ ｎａｄ ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅｌｌ ｆｕｎｏｔｉｏｎｓ ｂｙ山ｅ ｓｏｌｕｂｌｅ ｆｏ１ＴＩ１ ｏｆ ＭＨＣ ｃｌａｓｓ １－ｒｅｌａｔｄｅ ｃｈａｉｎ Ａ ｉｎ ａｄＶａｌｌＣｅｄ ｈｍｎａｎ ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌｍ＂ｃａｒｃｉｎｏｎｌｓａ ｌ Ｊ Ｊ．Ｊ Ｈｅｐａｌｏｌ， ２ｏｏ５；４３（６）：ｌ０１３—１０２０． ［收稿２０１０—０４—２９］ （编辑许四平）
