复方泛影葡胺注射液细菌内毒素检查法研究

Journal of Harbin University of Commerce (Natural Sciences Edition)

哈尔滨商业大学学报（自然科学版）

Vol. 35 No. 2Apr. 2019

复方泛影葡胺注射液细菌内毒素检查法研究

唐先明，刘建辉，宋丽阳，王姝

(哈尔滨市食品药品检验检测中心，哈尔滨150525)

摘要

:探讨采用鲎试剂法代替家兔法进行复方泛影葡胺注射液热原物质检查的可行性.根据临床

最大给药剂量计算细菌内毒素限值，按《中国药典》2015年版四部进行实验和结果判断.实验结果表 明复方泛影葡胺注射液稀释20倍时对细菌内毒素检查无干扰，细菌内毒素限值为1.25 EU • mL — 1. 对3批复方泛影葡胺注射液进行常规检查，结果均符合规定.本项研究建立的复方泛影葡胺注射液细 菌内毒素检查法可以替代原有的家兔热原检查法.

中图分类号：R927. 1

文献标识码：A

文章编号：1672 -0946(2019)02 -0134 -04

关键词：复方泛影葡胺注射液；细菌内毒素；凝胶法；干扰实验；鲎试剂；可行性

Study on bacterial endotoxins testing method for compound meglumine diatrizoate injection

TANGXian-ming，LIUJian-hui，SONGLi-yang，WANG Shu

(Harbin Food and Drug Inspection Center , Harbin 150525 , China)

Abstract：To investigate the feasibility of replacing pyrogen test with tachypleus amebocyte

lysate test for compound meglumine diatrizoate injection. According to the maximum dosage of the drug

prescribed，the limiting value

of

bacterial endotoxin

in

the

experiment was carried on and the results were judged according to Chinese Pharmacopeia

dr

2015 edition Vol IV. The experimental results showed that the interference on bacterial endo­

toxin test could be excluded when the sample was diluted 20 times. The limit value of the bacterial endotoxin was 1.25 EU ■ mL 1. According to the established standard，the results of bacterial endotoxin test in 3 batches of samples were conformed to the required stipulation.The established bacterial endotoxin test bacterial endotoxin test can be used for compoundmeglumine diatrizoate injection to replace pyrogen test.ference test ; tachypleus amebocyte lysate ; feasibility

Key words ： compound meglumine diatrizoate injection ； bacterial endotoxin ； gel method; inter­

复方泛影葡胺注射液为泛影酸钠i份与泛影

葡胺6. 6份加适量氢氧化钠制成的灭菌水溶 液[1-3]，在临床诊断中是一种应用广泛的离子型造 影剂[4-].该品种已被2015年版《中国药典》收 录，是以家兔法进行热原物质检查，通过文献检索 发现已有文献对复方泛影葡胺注射液细菌内毒素 检查法进行了报道[6]，但是其在进行方法学研究 时细菌内毒素限值是根据该品种的热原检查剂量

收稿日期：018-08-21.作者简介:唐先明（

作为M值推算出来的，这种方法会造成i值计算

错误[-8].当确定的限值大于耐受量时，临床应用 就可能引起发热反应，带来安全风险[9-10].因此， 有必要根据2015年版《中国药典》四部中规定的 细菌内毒素限值的确定方法重新计算复方泛影葡 胺注射液的细菌 ， 复方泛影葡胺注射液细菌内毒素检查方法，保证其临床用药安全.

1978 -)男，硕士,副主任药师;研究方向:药检药理

第2期刘玉婕,等:复方泛影葡胺注射液细菌内毒素检查法研究■ 135 ■

1材料与仪器

湛江安度斯生物有限公司（A&C公司），标示

1.5仪器

1C型超级恒温水浴，IKA.

1.1鲎试剂（TAL)

灵敏度0.25 EU ■ mL — 1，批号：1709071;湛江博康 海洋生物有限公司（Bokang Marine公司），标示灵 敏度0.25 EU ■ mL — 1，批号：1806052,标示灵敏度0.06 EU ■ mL — 1，批号：1702272.1.2内毒素检查用水（BET)

A&C公司，规格：30 mL •瓶_ 1，批号： 1802070;Bokang Marine 公司，规格:50 mL ■瓶_1， 批号：1807130.

1.3细菌内毒素工作标准品（WSE)

中检院，规格：0 EU • Amp — 1，批号：150601 -201784.

1.4复方泛影葡胺注射液

湖南汉森制药股份有限公司批号:1701101，

规格：0 mL:15.2 g;批号：1703102,规格：0 mL:

I5. 2 g;西安汉丰药业有限责任公司，批号：

2方法与结果

2.1鲎试剂灵敏度复核

根据选择的鲎试剂的标示灵敏度A，用

7水将稀释成2A、、0. 5A、0. 25A 4个质量浓度

的细菌内毒素标准溶液，每个质量浓度的标准溶液 进行了 4个重复，按照《中国药典》2215年版四部 进行操作[11]，结果见表1.结果显示两个厂家的鲎 试剂灵敏度测得值均与标示灵敏度一致，可以用于 细菌内毒素检查.

2.2样品内毒素限值i的确定

2015年版《中国药典》四部中规定:细菌内毒 素限值(i)的计算公式为i = K/M.根据复方泛影 葡胺注射液使用说明书成人最大剂量为225 mL， 小儿最大剂量为4 mL • kg-1，小儿最大剂量大于 成人最大剂量，所以M值取4 mL •( kg • h) _1，注 射剂K =5 EU • ( kg • h)—因此计算出本品的i = 1.25 EU • mL-.

表1

1610191 1，规格：0 mL: 15. 2 g.

TAL灵敏度复核结果

NC - - - - - -

AcAEU.mL — 1)

0.250.250.06

批号

细菌内毒素质量浓度/ (EU • mL-)

A(EU ■ mL—) --------------------------------------------------------------------------------------------

2A A 0.5A 0.25A

1709071 1806052 1702272

0.25 0.25 0.06

+ + + + + + + + + + + +

+ + + + + + + + + + + +

2.3最大有效稀释倍数(MW3)的确定

在国内，药品检验常用到的鲎试剂灵敏度A 为0.03~0.5瓦。，[_1，由“2.2”结果，利用公式

MW) = C • i/A对应计算出复方泛影葡胺注射液 MW)为 2.5 ~40 倍.

射液用BET水稀释20倍作为供试液，用该供试液 及BET水分别将WSE制成2\\、、0. 5\\、0. 25\\的溶液，每一质量浓度进行4次重复，用两个不同厂 家的鲎试剂进行干扰试验，结果见表3. £s Q 0. 5 ~2A之间，且3批样品尽均在0. 5〜2 £s之间（£s 为用BET水制成的内毒素标准溶液的反应终点质 量浓度的几何平均值，尽分别供试品溶液制成的 细菌内毒素标准溶液反应终点质量浓度的几何平

均值[2])，即当复方泛影葡胺注射液稀释20倍时 对两个不同厂家的TAL与WSE无干扰作用.2.6样品内毒素检测

按照以上建立的方法，取3个不同批次的复方 泛影葡胺注射液，用灵敏度为0.06 EU • mL-的鲎 剂进行

的

检 ，

4.

明3批样品均符合规定.

2.4干扰试验预试验

根据“2. 3”计算出来的最大有效稀释倍数的 结果，用BET水按步骤制成2. 5、、10、20、40倍的供试液，记为NPC;根据所用鲎试剂的灵敏度供试 液将细菌内毒素工作品制成2A的系列内毒素溶 液，记为PPC.使用来源于两个不同厂家的鲎试剂

进行干扰预试验，结果见表2.由表2初步判定，复 方泛影葡胺注射液的最大不干扰稀释倍数为 20 倍.

2.5正式干扰试验

根据“2.4”得到结果，取3批复方泛影葡胺注

• 136 •哈尔滨商业大学学报（自然科学版）

表2

干扰试验预试验结果

样品溶液稀释倍数

第35卷

TAL批号 样品批号 组别

---------------------------------------------------------------------------------------------1 2.5 15 1 10 1 20 1 40

NCPC

1701101

1709071

170310216101911 70 0

1806052

17031026 0 9

NPC

PPCNPCPPCNPCPPCNPCPPCNPCPPCNPCPPC

表3

干扰试验结果

鲎试剂批号 组别

70907

806052

BET 水 1701101 1703102 16101911 BET 水 1701101 1703102 16101911

细菌内毒素质量浓度/(EU • mL-1 )

----------------------------------------------------------------------------------------------------

2\\ X 0.5入 0.25入+ + + + + + + + ----------- ----------- + + + + + + + + ----------- ----------- + + + + + + + + ----------- ----------- + + + + + + + + ---------- ----------- + + + + + + + + ----------- ----------- + + + + + + + + ----------- ----------- + + + + + + + + ----------- ----------- + + + + + + + + ----------- -----------

NC —

- - - - ---- — - - - - - -

结果/(EU.mL-1 )

£s:0.25Et -0.25E -0.25Et -0.25Es:0.25Et :0.25Et -0.25E 二0.25

表4

样品批号

样品管

样品内毒素检查结果

阳性对照管

供试品阳性管

阴性对照管

1701101 1703102 16101911 - - - - - - ++ ++ ++ ++ ++ ++ ------

3结论

复方泛影葡胺注射液用BET水稀释20倍时

4讨论

细菌内毒素检查法质量标准制定时，限值确定

对TAL与WSE反应无干扰.可以使用0. 06 EU •

mL -或者更高灵敏度的鲎试剂进行细菌内毒素检

是其核心内容[9].首先要结合临床最大用量确定 M值，得到人每千克体重每小时的最大供试品剂 量，然后根据公式求出i值[13]. M值应根据品种的 使用说明书或临床用药须知获得[4].通过公式计 算得到限值后，还需查阅国外药典是否已收载该品 种，参考已有的限值，选择其中最为严格的作为该 品种的限值.如为特殊用药、联合用药时，可对限值 进行适当的调整，如抗感染、抗肿瘤、治疗心血管疾

查.其细菌内毒素检查质量标准为：

取本品用0.06 EU • mL-1及以上的高灵敏度 鲎试剂，依法检查（中国药典2015年版四部通则 1143)，每1 mL中含细菌内毒素的量应小于 1.25 EU.

第2期刘玉婕,等:复方泛影葡胺注射液细菌内毒素检查法研究

(4)56 -58.

■ 137 ■

病等重症用的药品、需联合用药的药品，可严格至

计算值的1/2或1/3[14].明确规定了限值的计算方 法及特殊情况下的调整原则，对细菌内毒素检查法 质量标准制定具有科学性、规范性、标准性作用.热原检查剂量一般为人用每千克体重每小时 最大供试品剂量的2 ~ 5倍（中药为3 ~ 5倍）[15]， 直接以热原检查剂量作为M值推算i值，这种方 法会造成i值计算错误[_8].相对于文献报道复方 泛影葡胺注射液按热原检查剂量计算得到细菌内 毒素限值为1.7 EU ■ mlT1，本研究按照药典的要 求，根据人用最大剂量，计算出复方泛影葡胺注射 液的i为1.25 EU ■ mL _1，并规定了进行细菌内毒 检查 为

用 、

剂的

， 严

质量

，

的复方泛影葡胺注射液细菌

[]安敬美.复方泛影葡胺注射液致严重过敏性休克，呼吸抑制，

室颤1例[J] •临床医药文献杂志，015，9(2) :757 - 178.[]张巍巍，徐炳欣，菅书明.复方泛影葡胺注射液在直肠癌术后

吻合口瘘治疗中的应用研究[J].河南医学研究，2017,26(11)1938 -1920.

[]张红军，张秀芹，黄建东，等.复方泛影葡胺注射液细菌内毒

素检查法中国药品标准，006,7(3) :56 -58.

[]国明，祝清芬，郑力真.无菌、微生物限度及细菌内毒素检

查方法学验证中常见问题及分析[].中国药品标准，2008， 9(1):46 -49.

[]李萍，苏军.细菌内毒素检查限值的确定[J].山东医药

工业，2002,21(3) :0 -41.

[]祝清芬，魏霞.药品细菌内毒素检查法质量标准研究存在

问题及对策[].食品与药品，2017，19(4) ：87 -291.[10] 唐元泰.关于注射剂细菌内毒素检查限值的确定[J].中国

药品标准，2003,4(4):5 -6.

[11] 国家药典委员会.中国药典[S]. 2015年版.四部:1 -157.

[M].北京：中国医药科技出版社，210.方法[J].中国医药导报，2011，32(8) :159 -162.中国医药科技出版社，2017.

[15] 国家药典委员会.中国药典[S].2015年版•四部：00 -402.

素检查方法提供了试验依据.参考文献：

[]国家药典委员会.中国药典[S].215年版.二部：05.[]杨丽英，张鸿升.复方泛影葡胺引起严重过敏反应1例[].

中国临床药学杂志,1999,8(4) ：51.

[3]都艳梅，李素飞,桂士良，等.复方泛影葡胺注射液治疗乳癌

改良根治术后腋窝区淋巴瘘[J].黑龙江医药科学,2010,33

[12] 中国药品生物制品检定所.中国药品检验标准操作规范

[13] 肖贵南，孙清萍，盛英美.如何建立新药的细菌内毒素检查

[14] 国家药典委员会.中国药典分析检测技术指南[M].北京：

(上接133页）

综上所述，我们推测格列美脲极有可能是通过对血糖良好且稳定的控制作用而延缓了糖尿病小鼠学习记忆能力的减退，然而格列美脲改善糖尿病所致空间学习记忆能力减退的其他机制尚不明确，还需进一步实验证明.参考文献：

[1] OGURTSOVA K, DAR FJ，HUANG Y，et al. IDF Diabetes

Atlas： Global estimates for the prevalence of diabetes for 2015 and 2040 [J]. Diabetes Research & Clinical Practice， 2017, 128:40.

[2] GIRAULT F M, SONNAY S, GRUETTER R, et al Alterations

of Brain Energy Metabolism in Type 2 Diabetic Goto - Kakizaki Rats Measured In Vivo by 13 C Magnetic Resonance Spectrosco- py[J]. Neurotoxicity Research, 2017(3) :1 -11.

[3] DUARTE J M. Metabolic Alterations Assciated to Brain Dys­

function in Diabetes [J]. Aging & Disease，2015，6(5) ：:04.[4] MOHEET A，MANGIA S，SEAQUIST E R. Impact of diabetes

on cognitive function and brain structure [J]. Annals of the New York Academy of Sciences, 2015，1353(1) ：60.[5] MARTINS I J，HONE E，FOSTERJ K，eal. Apolipoprtein

E，cholesterol metabolism, diabetes, and the convergence of risk factors for Alzheimer’s disease and cardiovascular disease [ J ]. Molecular Psychiatry, 2006，11(8) ：721 -736.

[6] PASQUIER F，BOULOGNE A，LEYS D，et al Diabetes mel-

litus and dementia [ J ]. Diabetes & Metabolism， 2006， 32

(5 Pt 1) ：403 -414.

[7] WHITMER R A . Type 2 diabetes and risk of cognitive impair­

ment and dementia [ J ]. Curr Neurol Neurosci Rep， 2007， 7 (5) ：373 -380.

[8 ] NONE. Glucose Levels and Risk of Dementia[ J]. New England

Journal of Medicine, 2013, 369(19) ： 1863 - 18.

[9] COXDJ，KOVATCHEVB P，GONDER - FREDERICK L A，

et al Relationships Bet^veen Hyperglycemia and Cognitive Per­formance Among Adults With Type 1 and Type 2 Diabetes [ J ]. Diabetes Care, 2005, 28(1) ：71 -77.

[0] 潘正国.格列美脲治疗2型糖屎病的临床效果与药理作用

分析[]•临床合理用药杂志，2016, 30(9)10-11.

[1] 于全山.格列美脲治疗2型糖屎病的有效性和药理作用

中国卫生标准管理，2016, 15(7)98 -99.

[12] CHO N H , SHAW J E , KARURANGA S , et al IDF Diabe­

tes Atlas ： Global estimates of diabetes prevalence for 2017 and projections for 2045 [ J]. Diabetes Research and Clinical Prac­tice, 2018：S0168822718302031.

[13] MA F，WU T，MIAO R, et al Conversion of Mild Cognitive

Impairment to Dementia among Subjects with Diabetes ： A Pop­ulation-Based Study of Incidence and Risk Factors with Five Years of Follow-up[ J] • Journal of Alzheimers Disease，2015， 43(4)1441 -1449.

[14] 秦嗣龙.格列美脲治疗新发老年2型糖屎病的疗效和安全

性评价河北医药，2014，（1):104 -105.[5]邹小娟，李帆，郑恒，等.复方盐酸吡格列酮格列美脲

片在健康人体的药动学[].中国医院药学杂志，212, 32 (21)1704 -1708.