化妆品的检验

化妆品是指以涂抹、喷洒或其它类似方法，施于人体表面（表皮、毛发、指甲、口唇等），起到清洁、保养、美化或消除不良气味，并对使用部位具有缓和作用的物质。一般来讲，化妆品可分为护肤化妆品、美容化妆品、发用化妆品、和专用化妆品等。

作为一种特殊的商品，化妆品的消费与一般的商品不同，它具有强烈的品牌效应，消费者更注重化妆品生产企业的形象、更注重化妆品产品的质量。具体来讲，化妆品的质量特征离不开产品的安全性（确保长期使用的安全）、稳定性（确保长期的稳定）、有用性（有助于保持皮肤正常的生理功能和容光焕发的效果）和使用性（使用舒适、使人乐于使用），甚至还包括消费者的偏爱性。其中最重要的安全性和稳定性必须通过微生物学和生物化学的理论及方法来保证。

8.1 化妆品检验规则及稳定性试验

8.1.1 化妆品的检验规则

1．基本术语

（1）常规检验项目。指每批产品必检的项目，包括理化指标、感官指标、卫生指标中细菌总数、重量指标和外观要求。

（2）非常规检验项目。指非逐批检验的项目，如卫生指标中除细菌总数以外的其它项目。

（3）适当处理。指不破坏销售包装，从整批化妆品中剔除个别不合格品的挑拣过程。 （4）样本。指每批抽样量的全体。

（5）单位产品。指单件化妆品，以瓶、支、袋、盒为计件单位。

2．检验分类

（1）交收检验

产品出厂前由生产厂的检验部门按产品标准逐批进行检验，符合标准方可出厂，每批出厂产品都应附有合格证。

收货方可以交货批为批量，按标准规定进行检验。 交收检验项目为常规检验项目。

（2）型式检验

一般情况下，每年不得少于一次。有下列情形之一时，也应进行型式检验。 1）当原料、工艺、配方有重大改变，可能影响产品性能时。 2）产品长期停产后（6个月以上）恢复生产时。 3）出厂检验结果与上次型式检验有较大差异时。 4）国家质量监督机构提出进行型式检验要求时。

型式检验的项目包括常规检验项目和非常规检验项目。

3．抽样

工艺条件、品种、生产日期相同的产品为一批。收货方也可按一次交货产品为一批。

（1）交收检验抽样

包装外观检验项目的抽样按GB/T 2828.1-2003的二次抽样方案抽样。其中不合格（缺陷）分类分类检查水平（IL）、合格质量水平（AQL）见表8-1规定。

表8-1 检验水平

不合格（缺陷）分类 B类 （重）不合格 C类 （轻）不合格 检查水平（IL） II II 合格质量水平（AQL） 2.5 10.0

属破坏性试验的项目按GB/T 2828.1-2003二次抽样方案抽样，其中IL＝S－3，AQL＝4.0。

包装外观检验项目的内容见表8-2规定。

表8-2 外观检验项目

检验项目 瓶 盖 袋 盒 软管 喷雾罐 锭管 化妆笔 外盒 商标、说明书、 盒头（贴）、合格证

B类不合格 冷爆、破碎、泄漏、滑牙松脱、（毛口）毛刺 破碎、裂纹、爆裂、漏放内盖 封口开口、漏液、穿孔 毛口、开启松紧不宜、镜面和内容物与盒粘结脱落、严重瘪听 封口开口、漏液、滑牙、破碎 喷头不畅、凸听 松紧不当、旋出推出不灵活 笔杆开胶、漆膜开裂、笔套配合不当 错装、漏装 字迹模糊、漏贴、倒贴、错贴 除B类不合格外的外观缺陷 ①①C类不合格 除B类不合格外的外观缺陷 标志不清晰、表面不光洁 注意： ①该项目为破坏性试验。 感官理化指标和卫生指标检验的抽样，按检验项目随机抽取相应的样本，作各项感官理

化指标和卫生指标的检验。

质量（容量）指标检验，随机抽取10份单位样本，按相应的产品标准试验方法，称取其平均值。

（2）型式检验抽样

型式检验中的常规检验项目以交收检验结果为依据，不再重复抽样。 型检验的非常规检验项目可从任一批产品中抽取2~3单位样品，按产品标准规定的方法检验。

4．判定规则

（1）交收检验判定规则

当卫生指标不符合相应标准时，该批产品即判为不合格批，不得出厂。 当感官理化指标中任一项不符合相应的产品标准时，允许对该项目指标进行复验，由供需双方共同抽样，若仍不合格，则判该批产品为不合格批，不得出厂。

当质量（容量）指标不符合相应的产品标准时，允许进行加倍复验，仍不合格时，该批产品判为不合格批。

（2）型式检验判定规则

型式检验中常规检验项目的判定与交收检验判定规则相同。

型式检验中的非常规检验项目中有一项不符合产品标准规定时，即判整批产品为不合格。

（3）仲裁检验

当供需双方对产品质量发生争议时，由双方共同按本标准进行抽样检验，或委托上级质监站进行仲裁检验。

5．转移规则

（1）除非另有规定，在检查开始时应使用正常检查。

（2）从正常检查到加严检查。当正常检查时，若在连续5批中有2批经初次检查（不包括再次提交检查批）不合格，则从下一批转到加严检查。

（3）从加严检查到正常检查。当进行加严检查时，若连续5批经初次检查（不包括再次提交检查批）合格，则从下一批检查转入正常检查。

6．检查的停止和恢复

加严检查开始后，若不合格批数（不包括再次提交检查批）累计到5批，则暂时停止产品交收检查。

暂停检查后，若生产方确实采取了措施，使提交检查批达到或超过标准要求，则经主管部门同意后，可恢复检查。一般从加严检查开始。

7．检查后处置

质量（容量）不合格批和B类不合格批，允许生产厂经适当处理后再次提交检查。再次提交按加严抽样方案进行检查。

C类不合格批，生产方经适当处理后再次提交检查，按加严抽样方案进行检查或由供需双方协商处理。

8.1.2 化妆品稳定性试验法

1．耐热试验

耐热试验是膏霜、乳液和液状化妆品重要的稳定性试验项目，如发乳、唇膏、润肤乳液、护发素、染发乳液、洗发膏、浴液、洗面奶、发用摩丝、雪花膏、香脂等产品均需进行耐热试验。

因为各类化妆品的外观形态各不相同，所以各类产品的耐热要求和试验操作方法略有不同。但试验的基本原理相近，即：先将电热恒温培养箱调节到（40±1）℃，然后取两份样品，将其中一份置于电热恒温培养箱内保持24 h后，取出，恢复室温后与另一份样品进行比较，观察其是否有变稀、变色、分层及硬度变化等现象，以判断产品的耐热性能。

2．耐寒试验

同耐热试验一样，耐寒试验也是膏霜、乳液和液状等类产品的重要的稳定性试验项目。 同样，因为各类化妆品的外观形态各不相同，所以各类产品的耐寒要求和试验操作方法略有不同。但试验的基本原理相近，即：先将电冰箱调节到（-5 ~ -15）℃±1 ℃，然后取两份样品，将其中一份置于电冰箱内保持24 h后，取出，恢复室温后与另一份样品进行比较，观察其是否有变稀、变色、分层及硬度变化等现象，以判断产品的耐寒性能。

3．离心试验

离心试验是检验乳液类化妆品货架寿命的试验，是加速分离试验的必要检验法，如洗面

奶、润肤乳液、染发乳液等均需作离心试验。其方法是：将样品置于离心机中，以（2000~4000）r/min的转速试验30 min后，观察产品的分离、分层状况。

4．色泽稳定性试验

色泽稳定性试验是检验有颜色化妆品色泽是否稳定的试验。由于各类化妆品的组成、性状等各不相同，所以其检验方法也各不相同。如发乳的色泽稳定性试验采用紫外线照射法，香水、花露水的色泽稳定性试验采用干燥箱加热法。

8.2 化妆品通用检验方法

8.2.1 pH值的测定

人体皮肤的pH值一般都在4.5~6.5，偏酸性，这是由于皮肤表面分有皮肤和汗液，其中含有乳酸、游离氨基酸、尿酸和脂肪酸等酸性物质。根据皮肤这一生理特点，制成的膏霜类和乳液类化妆品应有不同的pH值，以满足不同的需要。因此，pH值是化妆品一项重要的性能指标。

称取试样一份（精确至0.1 g）,分数次加入蒸馏水10份，并不断搅拌，加热至40 ℃，使其完全溶解，冷却至此（25±1）℃或室温，待用。

如为含油量较高的产品可加热至（70～80）℃，冷却后去掉油块待用；粉状产品可沉淀过滤后待用。

按照pH计说明书的要求进行pH值测定，具体测定原理和测定步骤见本书第2章2.8介绍。

8.2.2 粘度的测定

流体受外力作用流动时，在其分子间呈现的阻力称为粘度（或称粘性）。粘度是流体的一个重要的物理特性，是膏霜类和乳液类化妆品的重要质量指标之一。粘度一般用旋转式粘度计测定，具体测定原理和测定步骤见本书第2章2.10介绍。

8.2.3 浊度的测定

香水、头水类和化妆水类制品或由于静止陈化时间不够部分不溶解的沉淀物尚未析出完全，或由于香精中不溶物如浸胶和净油中的含蜡量度过高，都易使产品变混浊，混浊是这些化妆品的主要质量问题之一。浊度的测定主要用目测法。

1．基本原理

目测试样在水浴或其它冷冻剂中的清晰度。

2．试剂

冰块或冰水（或其它低于测定温度5 ℃的适当冷冻剂）

3．测定步骤

在烧杯中放入冰块或冰水，或其他低于测定温度5 ℃的适当冷冻剂。 取试样两份，分别倒入两支预先烘干的φ2㎝×13㎝玻璃试管中，样品高度为试管长度的1/3。将其中一份用串联温度计的塞子塞紧试管口，使温度计的水银球位于样品中间部分。试管外部套上另一支φ3㎝×15㎝的试管，使装有样品的试管位于套管的中间，注意不使两支试管的底部相接触。将试管置于加有冷冻剂的烧杯中冷却，使试样温度逐步下降，观察到达规定温度时的试样是否清晰。观察时用另一份样品作对照。

重复测定一次，两次结果应一致。

4．结果的表示

在规定温度时，试样仍与原样的清晰程度相等，则该试样检验结果为清晰，不混浊。

5．注意事项

⑴ 本方法适用于香水、头水类和化妆水类制品的浊度测定。

⑵ 不同的样品规定的指标温度不同。例：香水5 ℃、花露水10 ℃。

8.2.4 相对密度的测定

相对密度是指一定体积的物料质量与同体积水的质量之比。它是液状化妆品的一项重要性能指标。相对密度的测定方法常用密度计法，具体测定原理和测定步骤见本书第2章2.1介绍。

8.2.5 色泽稳定度的测定

色泽是化妆品的一项重要性能指标，色泽的稳定性则是化妆品的主要质量问题之一。色泽稳定度测定的方法主要是目测法。

1．基本原理

比较试样加热一定温度后颜色的变化。

2．测定步骤

取试样两份分别倾入两支φ2×13㎝的试管中，试样高度约为管长的2/3，塞上软木塞，把其中一支放入预先调节到（48±1）℃的恒温箱内，1 h后打开塞子，然后又仍旧塞好，继续放入恒温箱内，经24 h取出和另一份试样进行比较，颜色应无变化。

3．结果表示

在规定温度时，试样仍维持原有色泽不变，则该试样检验结果为色泽稳定，不变色。

8.2.6 香水、花露水中香精的测定

香精是赋予化妆品一定的香气，带给使用者优雅舒适感。几乎所有化妆品都使用香精，所以香精是化妆品的主要基质原料之一。化妆品中香精的测定常用的方法是乙醚萃取法。

1．基本原理

利用香精混溶于乙醚的原理，用乙醚将香精从试样中提取出来，除去醚后称重，以此得到香精的含量。

2．试剂

（1）乙醚、无水硫酸钠

（2）氯化钠溶液：饱和氯化钠溶液加入等容量蒸馏水。

3．测定步骤

准确称取（20~50）g待测试样（精确至0.000 2 g）于1 L的梨形分液漏斗中，再加入300 mL氯化钠溶液。然后加入70 mL乙醚，振摇，静置分层，共进行3次萃取，将三次乙醚萃取液一起置于一个1 L的梨形分液漏斗中，加入200 mL氯化钠溶液，振摇洗涤，静置分层，弃去氯氢化钠溶液，将乙醚萃取液转移至500 mL具塞锥形瓶中，加入5 g无水硫酸钠，振摇，干燥脱水。将溶液过滤至干燥洁净的300 mL烧杯中，用少量乙醚淋洗锥形瓶，将淋洗液并入烧杯中，将烧杯置于50 ℃水浴中蒸发。待溶液蒸发至20 mL时，将溶液转移至一预先称重的50 mL烧杯中，继续蒸发至除去乙醚，将烧杯置于干燥器中，抽真空减压至（6.67×10³）Pa，放置1 h，称重。

4．结果计算

乙醚萃取物的质量分数w按式（8-1）计算。

w＝（m1－m0）／m （8-1） 式中：m0——烧杯质量，g；

m1——烧杯和乙醚萃取物的质量，g； m——试样质量，g。

5．注意事项

（1）本方法适用于香水、古龙水和花露水等化妆品。 （2）平行试验的结果允许误差为0.5 %。

8.3 化妆品产品质量检验

8.3.1 膏霜和乳液类化妆品的质量检验

膏霜和乳液类化妆品包括雪花膏、冷霜、奶液和香粉密、润肤霜、清洁霜等。这些产品主要是由水和水溶性物质、脂质（油脂和蜡）、乳化剂等三类物质组成的乳化体，乳化体的乳化类型主要是水包油型（O/W）和油包水型（W/O），也有油包水水包油型（O/W/O）、水包油油包水型（W/O/W）等多重乳化体系。

1．润肤膏霜的质量检验

润肤膏霜有水包油型（O/W型）和油包水型（W/O型）两种类型，为适用于人体皮肤的具有一定稠度的乳化型膏霜，其感官指标及理化指标见表8-3

表8-3 雪花膏感官指标及理化指标

指 标 名 称 感官指标 香 气 外观 pH值 理化指标 耐热 指 标 要 求 符合规定香型 膏体细腻，均匀一致 4.0～8.5（含有粉质雪花膏≤9.0） （40±1）℃，24 h，恢复室温后膏体无油水分离现象 （40±1）℃，24 h，恢复室温后，渗油率≤3％ （－5～－10）℃，24 h，恢复室温后与试验前无明显差异 O/W型 W/O型 耐 寒 以上指标中，pH值、耐寒、耐热等项目已在本章8.1和8.2中进行了介绍，在此仅介绍稳定性检验和乳化体类型检验。

（1）感官检验

色泽检验及膏体检验用目测法在室内无阳光直射处观察。香气凭嗅觉鉴定。

（2）渗油率的检验

先将恒温箱调节至（40±1）℃，在已称量的培养皿中称取样品约10 g（约占培养皿面积1/4），刮平，精密称量。再将培养皿斜放在烘箱内的15º 角架上保持24 h后取出，放入干燥器内冷却后再称重，如有油渗出，则将渗油部分小心揩去，留下膏体部分，然后将培养皿连同剩余的膏体部分进行称量，按式（8-2）计算样品渗油率w。

w＝（m1－m２）／m （8-2）

式中：m——样品质量，g；

m1——24 h失水后样品和培养皿的质量，g；

m２——渗油部分揩去后，培养皿和膏体的质量，g。

（3）乳化体类型检验

对膏霜、乳液等乳化状化妆品，必须进行乳化体类型检验。检验方法有：染料法、溶解法、导电性测定等方法。

1）染料法

将产品涂抹在表面皿上形成约1.6 mm厚、面积为6.5 m2的薄膜，在薄膜的不同部位，分别洒上少量油溶性染料（如D&C红N0．18）和水溶性染料（如FD&C蓝N0．1），用显微镜观察染料扩展情况。如果油溶性染料扩展，表明乳化体为油包水型；如果水溶性染料扩展，则乳化体为水包油型。 2）溶解法

取少量产品观察，如易与矿物油相混合为油包水型；如易与水相混合为水包油型。 3）导电性测定法

用导线将一只30000 Ω、0.5 W的电阻、供测样品用的电器触点、一只无阻氖灯（1/4 W，104 V ~120 V）和一只按钮开关串联起来，组成测定装置。将样品放在两触点之间并接通电路，如氖灯发亮，表明是水包油型，如氖灯不亮则为油包水型。此外，凡发生灯光暗淡，或在连续通电的情况下，灯才亮起来的现象通常表明是一种复合乳化体，或是乳化体正在逐渐地转化过程中。但是，如果乳化体中含有电解质，特别是当电解质浓度较高时，油包水型乳化体也会导电。

2．润肤乳液质量检验

润肤乳液是具有流动性的水包油型化妆品。主要用于滋润人体皮肤。根据乳液的色泽、香型、包装形式的不同，可分为多种规格。润肤液的感官及理化指标见表8-5。

表8-5 润肤液感官指标及理化指标

指 标 名 称 色 泽 感官指标 香 气 结 构 pH值 理化指标 耐 热 耐 寒 离心试验 指 标 要 求 符合企业规定 符合企业规定 细 腻 4.5～8.5（果酸类产品除外） 40 ℃，24 h，恢复室温后无油水分离现象 （-5～~ -15）℃，24 h，恢复室温后无油水分离现象 2000 r/min，30 min不分层（含不溶性粉质颗粒沉淀物除外） 以上指标中，pH值、耐寒、耐热等项目已在本章8.1和8.2中进行了介绍，在此仅介绍稳定性检验和离心试验。

（1）感官检验

色泽：取样品在非阳光直射条件下目测。 香气：用辨香纸蘸取试样，用嗅觉进行辨别。

结构：取试样擦于皮肤上，在室内和非阳光直射条件下观察。

（2）离心试验

在离心管中注入试样约2/3高度并装实，用软木塞塞好。然后，放入调节至（38±1）℃的电热恒温培养箱内，保温1 h后，立即移入离心机中，并将离心机调整到2000 r/min，30 min后观察现象。

4．洗面奶质量检验

洗面奶是乳液类化妆品，主要用于清洁面部皮肤，具有去除表皮污物、油脂等功能，同时有利于皮肤的柔软、润滑和生成保护层，尤其适用于干性皮肤的人使用。

根据洗面奶产品结构、添加剂的不同，洗面奶可分普通型、磨砂型和辅助功效型。洗面奶的感官及理化指标见表8-6。

表8－6 洗面奶感官指标及理化指标

指 标 名 称 指 标 要 求 色 泽 感官指标 香 气 膏 体 pH值 耐 热 理化指标 耐 寒 离心试验 粘度（25 ℃ Pa.S） 符合规定色泽 符合规定香型，无异味 细腻，有一定的流动性 4.5～8.5 （40±1）℃，24 h，恢复室温无分层、变稀、变色现象 （-10 ± 1）℃，24 h，恢复室温无分层、泛粗、变色现象 2000 r/min，30 min无油水分离（颗粒沉淀除外） 标准值±2.0 以上指标中，pH值、耐热、耐寒、离心试验、粘度等项目的测定方法在本章8.1和8.2中已经介绍，在此仅介绍感官检验和质量（容量）允差测定。

（1）感官检验

1）色泽：取试样与标准样在非阳光直射下，用目测对比，应与规定色泽一致。 2）香气：用辨香纸蘸取样品，用嗅觉辨别，应符合规定香型，且无异味。 3）膏体：取试样与标样在非阳光直射下，用目测对比，应符合规定。

（2）质量（容量）允差

1）质量允差

随机取样10瓶，用分析天平分别称得质量m1、m2、m3••••m10，则总质量为：

m总 = m1+ m2+ m3+••••+ m10

然后将以上样品全部倒出，洗净、烘干，分析天平分别称得空瓶质量m/1、m/2、m/3••••m/10，则空瓶总质量为：

m空 = m/1+ m/2+ m/3+•+ m/10 (8-3)

则样品的平均质量（g）为

m = （ m总—m空）/10 (8-4)

检查m是否在允差范围内。 2）容量允差

随机取样10瓶，用量筒分别加入V1、V2、V3••••V10mL至瓶满为止，则得装满10瓶样品所需蒸馏水体积为：

V=V1+V2+V3+•+V10

然后将以上样品全部到出，，洗净、阴干，用量筒分别加入V/1、V/2、V/3••••V/10mL的蒸馏水，则得装满10瓶空样品瓶所需蒸馏水体积为：

V/=V/1+V/2+V/3+••••+V/10 (8-5)

则样品的平均容量（mL）为：

Vx =（V/—V）/10 (8-6)

检查Vx 是否在允差范围内。

8.3.2 液体洗涤类化妆品的质量分析

液体洗涤类化妆品主要包括香波、沐浴液和洁面产品等。对液体洗涤类化妆品的基本要求是必须具有去污能力、起泡能力，并具有一定护理（护发、护肤）能力。

液体洗涤类化妆品的代表产品是液体香波，本章仅对以表面活性剂为主体复配而成的、能清洁头发并保持其美观作用的发用香波。香波的感官及理化指标见表8-7。

表8－7 洗发香波感官、理化、卫生指标

指标名称 感官指标 香气 pH值 有效物含量（%） 理化指标 耐热 耐寒 泡沫力 (40 ℃,mm) 透明性 非透明性 儿童产品 外观 色泽 要 求 无异物 符合规定色泽 符合规定香型 4.0－8.0 成人产品≥10.0 儿童产品≥8.0 ≥100 ≥50 ≥40 （40±1）℃，24 h，恢复室温后无分离现象 （－5～－10）℃，24 h，恢复室温后无分离析水现象 以上指标中，pH值、耐热、耐寒、粘度等项目的测定方法在本章8.1和8.2中已经介绍，在此仅介绍感官检验和质量（容量）允差测定。

1．感官检验

（1）外观、色泽：取样品在非阳光直射条件下进行目测。 （2）香气：用辨香纸蘸取样品，用嗅觉辨别。

2．表面活性剂类型的判断

除一些低泡表面活性剂外，表面活性剂都具有丰富的泡沫，试样中是否存在表面活性剂组分，最简便的方法是取少量试样的水溶液置于有塞试管中，盖上塞子，剧烈摇动后观察是否有泡沫产生，如果有泡沫产生，即可认为试样含有表面活性剂组分。若需进一步区别试样含有肥皂或其它类型的表面活性剂，可于上述试样水溶液中加入（2～3）mL稀盐酸溶液，再次摇动，观察泡沫是否消失。如果泡沫消失，试样只含有肥皂而无其它类型的表面活性剂；如果泡沫依然保留，表明有其它类型的表面活性剂存在。

如果泡沫继续保持，则表明有烷基（芳基）磺酸盐离子型表面活性剂、阳离子型或非离子型表面活性剂，或表面活性剂的混合物存在。

3．泡沫力的测定

泡沫力的测定采用罗氏-米尔法。

将超级恒温仪预热至（40±1）℃，使罗氏泡沫仪在（40±1）℃恒温。称取香波2.5 g样品，加入150 mg／kg硬水100 mL，再加入蒸馏水900 mL。加热至（40±1）℃搅拌，使样品均匀溶解。用200 mL定量漏斗吸取部分样液沿泡沫仪管壁冲洗一下。然后取样液放入泡沫仪底部对准刻度至50 mL，再用200 mL漏斗吸取样液。固定漏斗中心位置，放下样液。过5 min记下泡沫高度。

4．表面活性剂含量的测定

表面活性剂是洗发香波的主要成分，它的含量决定洗发香波的质量，国产洗发香波按原轻工部部颁标准，表面活性剂含量要求大于10％。其测定方法有乙醇溶解法，对甲基苯胺法和阳离子快速滴定法等。本文主要介绍国家标准方法——乙醇溶解法。该方法的原理是利用洗发香波中的表面活性剂能溶解于乙醇中与不溶解物分离，但其中氯化物也能随之溶解，因此，应测出乙醇溶液溶解的氯化物，然后由总量中减去乙醇不溶物、氯化物和水分及挥发物等成分的含量，余下的量即是表面活性剂的含量。

详细测定原理与测定步骤见本书第6章6.1.4介绍。

8.3.3 指甲油的质量分析

指甲是由上皮细胞角化后重叠堆积而成的一种半透明状的硬板，供保护手指尖用。指甲油是用来修饰和增加指甲美观的化妆用品，染指甲已成为近代美容不可缺少的一个重要部分。指甲油的感官及理化指标见表8-8。

表8－8 指甲油感官及理化指标

指标名称 色泽 干燥时间 /min 牢固度 指标 符合企业规定 ≤10 无脱落 指标名称 净含量允差 /g或mL （10瓶平均计） 指标 ≤ 10，±1

1．牢固度的检验

用指甲油笔刷蘸指甲油涂在马口铁皮上，涂一层后放置24 h，用绣花针划成横五条、竖五条，每条距离间隔lmm，指甲油无显著脱落现象为合格。

2．干燥速度的检验

测定步骤：室温20 ℃，或放置在20 ℃恒温箱的指甲油，用指甲油笔刷蘸指甲油涂在马口铁皮上，再放置在20 ℃的恒温箱中，干燥时间小于15 min为合格。

3．抗水性的检验

因手经常要接触水，故要求指甲油有一定的抗水性。

测定步骤：取经过干燥速度检验的马口铁皮，在室温下放置24 h后，将马口铁皮浸入水中，指甲油涂层表面无气泡和脱落现象为合格。

4．不挥发物的测定

拿掉指甲油瓶中的刷子，盖好瓶盖称量。将（1.0～1.2）g指甲油倒进质量已恒定的高65 mm、直径45 mm的称量瓶中，再称量指甲油瓶，两次称量的质量差就是样品质量。打开称量瓶盖，用手转动称量瓶，使指甲油以膜状覆盖称量瓶的内壁。然后在105 ℃烘箱中加热2h，冷却，称量，即为不挥发物与称量瓶质量。不挥发物的质量分数w按式（8-7）计算：

w＝（m2－m1）/m （8-7）

式中：ｍ1——空称量瓶质量，g；

ｍ2——称量瓶质量+不挥发物质量，g； ｍ——样品质量，g。

大多数市售指甲油中的不挥发组分为：硝化纤维素、有机沉淀色素、无机颜料（如二氧化钛）、邻苯二甲酸二正丁酯和氨磺酰芳基-甲醛树脂等。

8.3.4 染发剂的质量分析

目前市售染发的染发剂大多是由合成染料制得，外观上多为乳状和膏状，按类型又可分为染发膏、染发香波、染发水等。按染料分子能否进入毛发的内部，染发剂又可分为暂时性、半永久性及永久性染发剂。除染料外，在染发剂中还有表面活性剂、溶剂、分散剂、整理剂等。这类产品的检测项目主要有：外观、香气、pH值、染色能力、氧化剂浓度、耐热、耐寒等，其指标见表8-9。

表8－9 染发剂感官、理化、卫生指标

指标名称 要 求 氧化型染发剂 染发粉 单剂型 外观 香气 pH值 染剂 氧化剂 染色能力 氧化剂浓度 （%） 耐热 － － 7.0－11.5 4.0－9.0 8.0－12.0 两剂型 粉－粉型 粉－水型 符合规定要求 符合规定香型 7.0－11.0 8.0－11.0 1.8－5.0 将头发染至标志规定的颜色 ≤12.0 － （40±1）℃，6 h，恢复室温后无油水分离现象 （－10±2）℃，24 h，恢复室温后无油水分离现象 7.0－11.0 4.5－8.0 染发水 染发膏 非氧化型 染发剂 耐寒 －

1．染色能力的测定

1）氧化型染发剂

按产品说明书中的使用方法取适量试样，搅拌均匀，将放置在玻璃平板上的头发用试样涂抹均匀。按产品说明书中规定的方法和时间停留后，用水漂洗干净，晾干后在非阳光直射的明亮处观察。

2）非氧化型染发剂

按产品说明书中的使用方法，将放置在玻璃平板上的头发用试样涂抹均匀达到饱和状态。涂抹时应使试样均匀覆盖所有的发丝，但又不至引起粘连。然后按产品说明书中规定的方法和时间停留后，用水漂洗干净，晾干后在非阳光直射的明亮处观察。如产品说明书中未规定等候时间，应停留15min后观察。

2．氧化剂浓度的测定

准确称取试样约1g于150mL三角烧瓶中，然后加10 mL蒸馏水和10 mL体积比为1∶1的硫酸，摇匀，用0.1mol／L的高锰酸钾溶液滴定至显粉红色，30s不褪色为终点。氧化剂含量按式(8-8)计算。

氧化剂含量（％）Vc0.01701100

m (8-8)

式中：ｃ——高锰酸钾标准溶液的实际浓度，mol／L Ｖ——滴定所用高锰酸钾标准溶液的体积，mL

0.01701——与1mL高锰酸钾标准溶液[ｃ(1/5KMnO4)＝0.1mol／L]相对的以克（g）表示的双氧水的质量，单位为g／mmol m——试样的质量，g。

8.3.5 气雾和喷雾类化妆品的质量分析

气雾和喷雾类化妆品主要产品有发用摩丝和定型发胶。摩丝是以高分子聚合物为主要原料的发泡定型护发剂，用于头发整理定型，补充头发的水分和油分，修饰美化发型。发胶为胶状定发用品，是一种透明非流动性的凝胶体，在头发上形成胶膜，增加头发光泽。

气雾和喷雾类化妆品主要检测项目有感官检验（外观、香气）、稳定性检验（耐热试验、耐寒试验）、通用检验（pH值测定）、喷出率、起喷次数、泄漏试验、内压力、总固体、残留物等。

1．泄漏试验

泄漏试验是检验气压式化妆品是否存在喷射剂外泄的问题。本试验适用于发用摩丝和定型发胶的泄漏试验。

预先将恒温水浴箱调节至50 ℃，然后放入产品，3 min内以每分钟冒出气泡不超过5个为合格。

2．内压力试验

内压力试验是检验气压式化妆品的瓶内压力是否超过规定压力。本试验适用于发用摩丝和定型发胶的内压力试验。

取试样一瓶，除去帽盖套，拔去喷头，装上金属接管和压力表（0～1.0 MPa，精度1.5），然后置于已恒温至25 ℃水浴箱中30 min，将压力表朝下压，读出指针稳定后的压力表读数。发用摩丝和定型发胶的内压力＜0.8 MPa。

3．喷出率试验

本试验是检验定型发胶的喷出率。

取试样一瓶称量后，按罐上标注的正确喷射方法，喷出剂液，喷毕称量，将包装罐打开倒出余液擦干净后称量空罐。按式（8-9）计算喷出率w。喷出率大于95％为合格。

w＝（m1－m2）／（m1－m3） （8-9）

式中：m1——喷液前罐的质量，g； m2——喷液后罐的质量，g；

m3——倒出余液后空罐的质量，g。

4．残留物试验参照

本试验是检验发用摩丝喷完后的残留物。

按使用说明将已称量的产品内容物全部喷出，然后称量，再将包装罐打开，倒出残留物擦干净后再称量空罐。按式（8-10）计算残留物质量分数w，残留物小于5 ％为合格

w＝（m1－m2）／（m3－m2） （8-10）

式中：m1——摩丝喷出后残留物和空罐质量，g；

m2——空罐的质量，g；

m3——样品和空罐的质量，g。

5．起喷次数试验

本试验适用于检验定型发胶的起喷次数。

将泵式喷发胶按动，至开始喷出液体止，计算按动次数。小于5次为合格。

8.3.6 化妆品粉块的质量分析

化妆品粉块包括胭脂、眼影和粉饼等，一般由颜料、粉体、胶合剂和香料等混合后经压制而成的粉饼状。其感官、理化指标见表8-10。

表8－10 胭脂感官、理化指标

指 标 名 称 涂擦性能 理化指标 跌落试验，份 pH 值 疏水性 感官指标 外观 技 术 要 求 油块面积≤1/4粉块面积 破损≤1 6.0～9.0 粉质浮在水面保持30min不下沉 颜料和粉质分布均匀，无明显斑点 香 气 块 型 符合规定香型 表面应完整，无缺角、裂缝等缺陷

1．涂擦性能

将试样盒打开，置于（50±1）℃的恒温箱中，保持24 h后取出，恢复室温后，用产品所附粉扑或粉刷在块面不断轻擦，随时吹去擦下的粉粒。每擦拭10次除去粉扑或粉刷上附着的粉，继续擦拭，工擦拭100次，观察块面的油块大小。

2．疏水性

从粉饼表面将粉轻轻刮下，用80目筛子筛过，称取0.1 g过筛物于100 mL水中，观察30min，应无下沉。

3．跌落试验

取试样5份。依次将粉盒从花盒里取出，打开粉盒，再取出盒内的附件，如刷子等，然后合上粉盒。将粉盒置于50cm高度，粉盒底部朝下，水平地自由跌落到正方形（30cm×30cm）木板。打开粉盒观察。依次逐份记录粉盒、镜子等的破碎、脱落情况（简装粉盒除外）、粉块碎裂情况。当出现破损不大于1份时则为合格。

8.3.7 冷烫液的质量分析

这类产品的检验指标主要有：外观、气味、pH、游离氨含量、疏基乙酸铵含量等，见表8-11所示。

表8－11 冷烫液感官、理化、卫生指标

指标名称 热敷型 外观 规定 优级品 不热敷型 热敷型 水剂：清晰透明，无杂质沉淀 乳剂：无杂质微有沉淀 略有氨味 8.5～9.5 ≥8 一级品 不热敷型 水剂：清晰透明，无杂质沉淀 乳剂：无杂质微有沉淀 略有氨味 8.5～9.5 ≥8 水剂：清晰透明， 水剂：清晰透明，无杂质沉淀 乳剂：无杂质沉淀 无杂质，微有沉淀 乳剂：无杂质沉淀 略有氨味 8.5～9.5 ≥8 气味 pH 游离氨浓度 （g/L） 巯基乙酸铵浓度 (g/L) 略有氨味 8.5～9.5 ≥8 85～139 85～139 85～139 85～13.9

1．游离氨含量测定

用移液管吸取冷烫液10 mL于100 mL容量瓶中用水稀释至刻度，再用移液管吸取10 mL

放入300 mL锥型瓶中，加50 mL水，准确加入25 mL c(1/2H2SO4)＝0.l mol／L的硫酸标准溶液。加热至沸（1～2）min，冷却后加入2～3滴0.1 ％的溴甲酚绿-甲基红混合指示剂。用c(NaOH)＝0.l mol／L的氢氧化钠标准溶液滴定至溶液由红变绿为终点。

游离氨的质量浓度ρ（NH3）按式（8-11）计算。

ρ（NH3）＝（25×c1－V×c2）×17.03×10/（1000×10）

＝（25×c1－V×c2）×17.03 （8-11）

式中：c1——硫酸标准溶液的实际浓度，mol/L V——氢氧化钠标准溶液的体积， mL

c2——氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L 17.03——游离氨的摩尔质量，g/mol

2．巯基乙酸铵含量的测定

精确吸取冷烫液2 mL，置锥型瓶中，加水60 mL，体积比为1∶10的硫酸10 mL，l ％的淀粉指示剂2 mL，以c(1/2I2)＝0.1 mol/L的碘标准溶液滴定至溶液呈稳定的蓝色即为终点。巯基乙酸铵质量浓度ρ按式（8-12）计算：

Vc109.2 （8-12）

1000V0式中： V——碘标准滴定溶液的体积， mL

c——碘标准溶液的实际浓度，mol／L 109.2——巯基乙酸铵的摩尔质量，g／mol

V0——测定所用试样体积， L

8.3.8 香水、花露水的质量分析

香水类化妆品包括香水、古龙水和花露水，其主要作用是散发香气，它们之间只是香精的香型和用量、酒精的浓度等不同而已，主要成分都是香精、酒精和水等。表8-12列出了香水和花露水的感官指标、理化指标等。

表8-12 香水和花露水的感官指标、理化指标

指标名称 色泽 感官指标 香气 清晰度 密度(g/ mL, 20 ℃) 理化指标 浊度 色泽稳定性 指标 香水 符合规定色泽 符合规定香型 水质清晰，不得有明显杂质和黑点 规定值±0.02 5 ℃水质清晰，不浑浊 10 ℃水质清晰，不浑浊 花露水 （48±1） ℃，24h维持原有色泽不变

以上指标中，密度、浊度和色泽稳定性已在本章8.2中介绍，在此仅介绍感官检验。

1．色泽

取样于25 mL比色管内，在室温和非阳光直射下目测。

2．香气

先将等量的试样和规定试样分别放在相同的容器内，然后按下列程序进行鉴定。

用（0.5～1.0）cm宽，（10~15）cm长的吸水纸作为评香纸，分别蘸取试样和标样约（l～2）cm（两者须接近），用嗅觉来鉴定。除辨其当时的香气外，还要鉴别其在挥发过程中的全部香气应与规定相符，无异杂气味。

3．清晰度

原瓶在室温和非阳光直射下距观察者30cm处观察。

8.3.9 香粉、爽身粉、痱子粉

香粉系人的面部护肤品，由粉体基质、护肤物和芳香物等组成。具有抵御风沙扑打，减弱高温刺激及紫外线伤害，遮蔽或弥补面部瑕疵，芳肌等作用。爽身粉系人的体部护肤卫生品，由粉体基质、吸汗剂等组成。浴后使用，具有吸汗、爽肤、芳肌等作用。痱子粉系人的体部护肤卫生品，由粉体基质、吸汗剂、杀菌剂等组成。具有吸汗杀菌、防痱、止痱等作用。

在此，介绍适用于以粉体原料为基质，添加其他辅料成分配制而成的香粉、爽身粉和痱子粉检验的技术要求、试验方法。表8-13规定了三种产品的感官指标和理化指标。

表8-13 香粉、爽身粉、痱子粉的感官指标和理化指标

指标名称 粉体 感官指标 色泽 香气 理化指标 pH值 细度（120目，%） 指标要求 洁净，无明显杂质黑点 符合规定色泽 符合规定香型 4.5～10.5 ≥95

1．感官检验

（1）粉体

取适量粉样，置于白色衬物上，在室内光亮处，用肉眼观察粉体。 （2）色泽

取适量粉样，置于白色衬物上，在室内光亮处，用肉眼观察粉体。 （3）香气

取适量粉样，涂抹在皮肤上，用鼻子嗅察。

2．细度测定

称取约5g粉体，置于120目筛内，用软毛刷刷落粉体，称取筛出物质量。测试两次，取平均值。粉体细度w按式（8-13）计算：

w＝ｍ1／ｍ0 （8-13）

式中：ｍ0——粉体质量，g

ｍ1——筛出物质量，g

8.4 化妆品中有害元素含量分析

近代医学研究表明，微量元素与人体的健康有着密切的关系、微量元素可分为有益元素、非必须元素和有害元素，其中砷、汞、铅等元素被认为是有害元素。因此，在化妆品、食品等产品的质量指标中均规定了这些元素的最高允许含量，并作为主要检测指标之一。

8.4.1 砷含量的测定

测定砷的方法有斑点比色法、银盐比色法、原子荧光光谱法和原子吸收光谱法等。常用的有银盐比色法和斑点比色法，斑点比色法在第4章中已进行介绍，在此仅介绍二乙氨基二硫代甲酸银分光光度法。

1．测定原理

经灰化或消解后的试样，在碘化钾和氯化亚锡的作用下，样液中五价砷被还原为三价砷。三价砷与新生态氢生成砷化氢气体。通过用乙酸铅溶液浸泡的棉花除去硫化氢干扰，然后与溶于三乙醇胺、氯仿中的二乙氨基二硫代甲酸银作用，生成棕红色的胶态银，可进行比色定量。钴、镍、汞、银、铂、铬和钼可干扰砷化氢的发生，但正常情况下，化妆品中这些物质的含量不会产生干扰。锑对测定有明显干扰。

2．试剂

（1）去离子水或同等纯度的水：将一次蒸馏水经离子交换净水器净化，贮存于全玻璃瓶或聚乙烯瓶中。

（2）、硫酸、氧化镁、无砷锌粒、氯仿、三乙醇胺。 （3）硫酸：体积比为1∶1。

（4）硫酸：ｃ(1/2 H2SO4)＝l mol／L。 （5）氢氧化钠：ρ(NaOH)＝20 ％。

（6）酚酞指示剂：ρ(酚酞)＝0.1 ％。称取0.1 g酚酞，溶于50 mL 95 ％乙醇，加水至100 mL。

（7）镁溶液：ρ(MgNO3)＝10 ％。 （8）盐酸：体积比为1∶1。 （9）碘化钾：ρ(KI)＝5 ％。

（10）40％氯化亚锡溶液：ρ(SnCl2)＝40 ％。称取40 g氯化亚锡溶于40 mL浓盐酸中，加水至100 mL，溶液中可放入金属锡粒数颗。 （11）乙酸铅溶液：ρ(CH3COOPb)＝10 ％。

（12）乙酸铅棉花：将脱脂棉浸入10 ％乙酸铅溶液，2 h后取出。晾干，并使膨松。 （13）二乙氨基二硫代甲酸银（DDTC－Ag）溶液：称取0.25 g DDTC－Ag，用少许氯仿溶解，加入1.0 mL三乙醇胺，再用氯仿稀释至100 mL。必要时可过滤。置于棕色瓶内，于冰箱中存放。

（14）砷标准贮备液：称取0.660 0 g经105 ℃干

燥2 h的三氧化二砷（As2O3，分析纯），溶于5 mL 20 ％

的氢氧化钠溶液中，以酚酞作指示剂，用ｃ(1/2 H2SO4)

的硫酸溶液中和至中性后，再加入15 mL ｃ(1/2 H2SO4)

的硫酸溶液，并用水定容至50 mL。此溶液1.00 mL含

1.00 mg砷。

（15）砷标准溶液：移取砷标准贮备液1.00 mL置

于100 mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，临用时吸取此

溶液10.0 mL，加水定容至100 mL，混匀，此溶液1.00

mL含1.00 μg砷。

3．仪器

1）凯氏定氮瓶（250 mL）、锥形瓶（125 mL）。 2）瓷蒸发皿（30 mL）。

3）砷测定装置：如图8-1所示。

4）分光光度计。

图8-1 砷测定装置

1-125mL锥形瓶；2-导气管；3-乙酸铅棉花； 4-10mL刻度试管；5-DDTC－Ag溶液。

4．测定步骤

（1）样品前处理：可任选下列一种处理方法。 1）HNO3-H2SO4湿式消解法

试样如含有乙醇等溶剂，则应预先使溶剂挥发（不得干涸）。如含甘油特别多的试样，消解时应特别注意安全。

称取约（1.00～2.00）g经充分混匀的试样，同时做用试剂做空白试验。置于250 mL定氮消解瓶或125 mL锥形瓶中，加入数颗玻璃珠。然后加5 mL水，（10～15）mL，放置片刻，小火缓缓加热，待反应作用缓和，放冷。沿瓶壁加入5 mL或10 mL 硫酸继续加热消解，若消解过程中溶液出现棕色，可加少许继续消解。如此反复，直至溶液澄清或

微黄。放置冷却后加20 mL水，继续加热煮沸至产生白烟、如此处理两次，将消解液定量转移至50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，备用。此溶液每10 mL相当于体积比为1∶1的硫酸2 mL。

2）干灰化法

称取约（1.00～2.00）g经充分混匀的试样，置于50 mL瓷蒸发皿中，同时做用试剂做空白试验。加入10 mL 10 ％的镁溶液，1 g氧化镁粉末。将试样及灰化助剂充分混匀，在水浴上蒸干水分，然后在小火上炭化至不冒烟，移入箱形电炉，在600 ℃下灰化4 h，冷却取出，向灰分加水少许，使润湿，然后用20 mL体积比为1∶1的盐酸分数次加入以溶解灰分及洗蒸发皿。并加水定容至50 mL，备用。此溶液每10 mL相当体积比为1∶1的盐酸（已除去中和消耗量）2.0 mL。

(2) 测定

移取0 mL，0.50 mL，1.00 mL，2.00 mL，4.00 mL，6.00 mL，8.00 mL，10.0 mL砷标准溶液，适量样液和空白溶液，分别置于砷化氢发生瓶中，样品采用湿式消解法处理者，加入硫酸使总酸量相当体积比为1∶1的硫酸10 mL；样品采用干灰化法处理者，加入体积比为1∶1的盐酸使总酸含量为10 mL。然后加水至总体积为50 mL。

各加2.5 mL 15 ％的碘化钾溶液及2.0 mL 40 ％氯化亚锡溶液，摇匀。放置10 min后，加入（3～5）g锌粒，立即接上塞有乙酸铅棉的导气管，并将其插入已加有5.0 mL二乙氨基二硫代甲酸银溶液的吸收管，室温（25 ℃）下反应l h。反应完毕，若吸收液体积减少，则用氯仿补至5.0 mL。将部分吸收液移入1 cm比色皿中，以氯仿为参比，在分光光度计上，于波长515 nm处，测量吸光度。

绘制工作曲线，从曲线上查出测试液中砷含量。

5．结果计算

样品中砷的质量分数w按式（8-14）计算，单位为mg/kg。

w(m1m0)V （8-14）

mV1式中：ｍ0——从工作曲线上查得用试剂做空白试验的砷量，μg； ｍ——称样量，g；

Ｖ1——分取样品溶液体积， mL； Ｖ——样品溶液总体积， mL。

6．注意事项

(1) 方法适用于化妆品中总砷的测定，最低检出量为0.5 μg砷，若取1 g样品测定，最低检测浓度为0.5 mg/kg。

(2)如果样品为含油、蜡质高的样品，应加入1 g固体镁。

8.4.2 铅含量的测定

测定铅的方法有分光光度法、原子吸收光谱法、极谱法等。常用的有火焰原子吸收分光光度法和双硫腙萃取分光光度法，在此介绍双硫腙萃取分光光度法

1．测定原理

样品经预处理后，在弱碱性下样液中的铅与双硫腙作用生成红色鳌合物，用氯仿提取，比色定量。有大量锡存在时干扰测定。

2．仪器

（1）分液漏斗：125 mL，预先用稀酸浸泡，并经去离子水清洗。 （2）分光光度计。

3．试剂

（1）去离子水或同等纯度的水：将一次蒸馏水经离子交换净水器净化，贮存于全玻璃瓶或聚乙烯瓶中。

（2）氨水：体积比为1∶1。

（3）盐酸：体积比为1∶1。

（4）酚红指示剂：质量分数为0.1 ％的乙醇溶液。

（5）盐酸羟胺溶液：质量分数为20 ％的溶液。取盐酸羟胺20 g，加50 mL水溶液，加2滴酚红指示剂，加体积比为1∶1的氨水调至pH 8.5～9.0，用双硫腙氯仿溶液提取，直至氯仿层绿色不变，再用氯仿洗水层两次。此水层以体积比为1∶1盐酸调至酸性，加水至100 mL，备用。

（6）柠檬酸铵溶液：ρ(柠檬酸铵)＝200 g/L。取柠檬酸铵50 g，溶于100 mL水中，加2滴酚红指示剂溶液，加体积比为1∶1的氨水调至pH 8.5～9.0，用双硫腙氯仿溶液提取数次，每次（10～20）mL，直至氯仿层绿色不变为止。水层再用氯仿萃取数次至氯仿无色为止。弃除氯仿层，水层加水稀释至250 mL。

（7）溶液：质量分数为10 ％。如试剂含铅需纯化时，应先将10 g溶于20 mL水中，以下按试剂（6）所述方法纯化后再稀释至100 mL。 （8）氯仿：不应含氧化物。

（9）双硫腙贮备液：ρ(双硫腙)＝1 g/L的双硫腙-氯仿溶液，保存在阴暗处，必要时按下述方法纯化。称取0.5 g研细的双硫腙，溶于50 mL氯仿中，如不全溶，可用滤纸过滤于250 mL分液漏斗中，用体积比为1∶99的氨水提取三次，每次100 mL，合并提取液，再用10 mL氯仿洗氨水溶液二次，用ｃ(HCl) ＝6 mol／L 的盐酸调至酸性，将沉淀出的双硫腙用氯仿提取(2～3)次，每次100 mL，合并氯仿层，加氯仿至总体积为500 mL。 （10）双硫腙工作液：ρ(双硫腙)＝0.1g/L双硫腙-氯仿溶液。 （11）：质量分数为1 ％。

（12）无铅脱脂棉：医用脱脂棉，必要时用双硫腙氯仿液去除铅。 （13）铅标准溶液：同火焰原子吸收分光光度法。

4．测定步骤

（1）样品预处理

1）湿式消解法

称取约（1.00～2.00）g试样置于消化管中，同时用试剂进行空白实验。 含有乙醇等有机溶剂的化妆品，先在水浴或电热板上将有机溶剂挥发。若为膏霜型样品，可预先在水浴中加热使瓶颈上样品熔化流入消化管底部。入数粒玻璃珠，然后加入10 mL，加热消解，当消解液体积减少到（2～3） mL，移去热源，冷却。然后加入（2～5） mL高氯酸，继续加热消解，不时缓缓摇动使均匀，消解至冒白烟，消解液呈淡黄色或无色溶液，浓缩消解液至l mL左右。

冷却至室温后定量转移至10 mL(若为粉类样品，则至25 mL）具塞比色管中，以去离子水定容至刻度，如样液混浊，离心沉淀后，取上层清液进行测定。

2）干湿消解法

称取约（1.00～2.00）g试样，置于瓷坩埚中，在小火上缓缓加热直至炭化。移入箱形电炉中，500 ℃下灰化6 h左右，冷却取出。

向瓷坩埚中加入混合酸约（2～3）mL，同时用试剂做空白实验。小心加热消解，直至冒白烟，但不得干涸。若有残存炭粒，应补加（2～3）mL混合酸，反复消解，直至样液为无色或微黄色。微火浓缩至近干。然后，定量转移至10 mL刻度试管（如为粉类，则至25 mL刻度试管）中，用水定容至刻度。必要时离心沉淀。

（2）测定

取适量已处理的样液，置于125 mL分液漏斗中，加水至总体积为50 mL，另取0 mL，0.10 mL，0.20 mL，0.30 mL，0.40 mL，0.50 mL铅标准溶液分别置于125 mL分液漏斗中，各补加1 ％溶液至总体积为50 mL。然后向样品溶液、用试剂做空白试验及铅标准溶液中各加2 mL 20％的柠檬酸铵，l mL盐酸羟胺溶液，2滴酚红指示液，用氨水调节至红色出现，然后向各分液漏斗中加入2 mL 10 ％的溶液，混匀。准确加入5 mL双硫腙工作液。剧烈振摇提取1分钟，静置分层，在分液漏斗下颈部塞入少许无铅脱脂棉，然后将氯仿层滤入比色杯中，以氯仿调零，在波长510 nm下测定吸光度，并绘制标准曲线。

5．结果计算

样品中铅的质量分数w按下式计算，单位为mg/kg。

w(m1m0)V1 （8-15）

mV式中：ｍ1——从标准曲线查得样液的Pb含量，μg；

ｍ0——从标准曲线查得的用试剂做空白试验的铅含量，μg； ｍ——样品质量，g； Ｖ——样液总体积， mL；

Ｖ1——测定时样液取用量， mL。

6．注意事项

（1）本方法适用于化妆品中铅的测定，最低检出量为1.0 μg，若取1 g样品测定，则最低检出浓度为1 mg/kg。

（2）高氯酸如使用不当，有爆炸危险。安全使用高氯酸，应注意以下几点： 1）洒溅出的高氯酸要立即用水冲洗；

2）通风橱、导气管和其它排除高氯酸蒸气的装置，应由化学惰性物质制成，并在消化完成后，用水冲洗擦净，排气系统应安装在安全的位置；

3）避免在使用高氯酸消化的通风橱中使用有机物或其它产烟物质；

4）应使用护目镜、防护板及其它个人防护设备。用聚氯乙烯手套，不能用橡胶手套； 5）用高氯酸湿法氧化，除非另有说明，应将样品首先用破坏易氧化的有机物，并注意避免烧干；

6）高氯酸在浓度为72 ％（恒沸混合物，沸点203 ℃）时，是稳定的。如果高氯酸被脱水（如与强脱水剂接触）、形成无水高氯酸等，其稳定性显著下降，此时遇热、撞击或遇有机物、还原剂（如纸、木屑或橡皮）就会发生爆炸。

8.4.3 汞含量的测定

在化妆品中汞的含量一般都很低，现在常用的测定方法有冷原子吸收分光光度法和汞斑法等，在此主要介绍冷原子吸收分光光度法。

1．测定原理

汞蒸气对波长253.7nm的紫外光具有特征吸收，在一定的浓度范围内，吸收值与汞蒸气浓度成正比。样品经消解、还原处理，将化合态的汞转化为元素汞，再以载气带入测汞仪，测定吸收值。与标准系列比较定量。

2．仪器

（1）比色管：50 mL；锥形瓶：100 mL；250 mL圆底烧瓶：250 mL；玻璃磨口球形冷凝管：40 cm长；水浴锅。 （2）冷原子吸收测汞仪。

3．试剂

（1）去离子水或同等纯度的水：将一次蒸馏水经离子交换净水器净化，贮存于全玻璃瓶或聚乙烯瓶中。

（2）、硫酸、盐酸：优级纯。

（3）过氧化氢：质量分数为30 %。 （4）五氧化二钒、氯化汞：分析纯。 （5）硫酸：质量分数为10 %。

（6）氯化亚锡溶液：质量分数为20 %。称取20 g氯化亚锡（分析纯）置于250 mL烧杯中，加20 mL浓盐酸，加水稀释至100 mL。

（7）重铬酸钾溶液：质量分数为10 %。称取10g重铬酸钾（分析纯）溶于100 mL水中。

（8）重铬酸钾溶液：取5 mL重铬酸钾溶液，加入50 mL，用水稀释至1000 mL。 （9）汞标准溶液：

① 称取0.13 g氯化汞置于100 mL烧杯中，加入重铬酸钾溶液溶解。移入1000 mL容量瓶中，再用重铬酸钾溶液稀释至刻度，此溶液每毫升含汞100 μg。 ② 移取10.0 mL汞标准溶液①置于l00 mL容量瓶中。用重铬酸钾溶液稀释至刻度。此溶液每毫升含汞10.0 μg。此溶液临用前配制。

③ 移取汞标准溶液②10.0 mL至100 mL容量瓶中，用重铬酸钾溶液稀释至刻度。此溶液每毫升含汞1.00 μg。

④ 移取10.0 mL汞标准溶液③至100 mL容量瓶中，用重铬酸钾溶液稀释至刻度。此溶液每毫升含汞0.10 μg。

4．测定步骤

（1） 样品预处理 1）湿式回流消解法 称取约1.00 g试样，置于250 mL圆底烧瓶中，样品如含有乙醇等有机溶剂，先在水浴或电热板上低温挥发（不得干涸）。随同试样做用试剂做空白试验。加入30 mL（样品中含有碳酸钙等碳酸盐类的粉剂，在加酸时应缓慢加入，以防二氧化碳气体产生过于猛烈）、5 mL水、5 mL硫酸及数粒玻璃珠，置于电炉上，接上球形冷凝管，用冷凝水循环冷凝。加热回流消解2 h，消解液一般呈微黄或黄色。从冷凝管上口注入10 mL水，继续加热回流10 min，放置冷却。用预先用水湿润的滤纸过滤消解液，除去固形物。对于含油脂蜡质多的试样，可预先将消解液冷冻使油脂蜡质凝固。用蒸馏水洗过滤器数次，合并洗涤液于滤液中，定容至50 mL，备用。

2）湿式催化消解法

称取约1.00 g试样，置于100 mL锥形瓶中(样品如含有乙醇等有机溶剂，先在水浴或电热板上低温挥发，不得干涸)。随同试样做用试剂做空白试验。加入50 mg五氧化二钒、7 mL浓。置水浴或电热板上微火加热至微沸。取下冷却，加5 mL硫酸，于锥形瓶口放一小玻璃漏斗，在（135～140）℃温度下继续消解，并于必要时补加少量，消解至溶液呈现透明蓝绿色或橘红色。冷却后，加少量水继续加热煮沸约2 min以驱赶二氧化氮。定容至50 mL，备用。

（2）测定

移取0 mL，0.10 mL，0.30 mL，0.50 mL，0.70 mL，1.00 mL，1.50 mL，2.00 mL汞标准溶液、适量样品溶液和空白溶液，置于100 mL锥形瓶中，用10 ％硫酸定容至一定体积。按仪器说明书调整好测汞仪。将标准系列、用试剂做空白试验和样品逐个倒入汞蒸气发生瓶中，加入2 mL氯化亚锡溶液迅速塞紧瓶塞。开启仪器气阀，待指针至最高读数时，记录其读数。绘制工作曲线，从曲线上查出测试液中汞含量。

5．结果计算

按式（8-16）计算样品中汞的质量分数w，单位为mg/kg。

w(m1m0)V （8-16）

mV1式中：ｍ0——从工作曲线上查得用试剂做空白试验的汞质量，μg； ｍ1——从工作曲线上查得样品测试液中的汞质量，μg； ｍ——称样质量，g；

Ｖ1——分取样品溶液体积， mL；

Ｖ——样品溶液总体积， mL。

8.5 化妆品微生物检验方法

化妆品中，特别是一些高级的护肤膏等含有蛋白质、氨基酸、维生素以及各种植物的提取液等营养成分较高的物质，为霉菌、细菌等微生物的滋生、繁殖提供了良好的生长条件，影响化妆品的质量和并危害人体健康。在国外，许多国家所制定的化妆品微生物控制标准相当严格。欧美一些国家要求化妆品的杂菌数每克（或每毫升）控制在（100～1000）个，不允许有致病菌。我国药品微生物检验法规定，乳剂或外用液体每克（或每毫升）含杂菌数按品种不同控制在（500～1000）个。

在此，主要讨论化妆品微生物检验时样品的采集，细菌总数测定，粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的测定。

8.5.1 化妆品微生物标准检验方法总则

化妆品微生物标准检验方法总则按国家标准（GB 7918.1-87）执行，该总则提供了样品的采集及注意事项，供检样品的制备，不同类型的样品的检样制备的统一标准。

1．样品的采集及注意事项

（1）所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。检验时，应分别从两个包装单位以上的样品取10 g或10 mL；包装量小的样品，取样量可酌减。

（2）供检样品，应严格保持原有的包装状态。容器不应有破裂，在检验前不得启开，以防再污染。

（3）接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。

（4）若只有一个样品，而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其它分析。

（5）如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。

2．供检样品的制备

（1）培养基和试剂 1）生理盐水：称取8.5 g氯化钠溶解于1000 mL蒸馏水中，分装入加玻璃球的三角瓶中，每瓶90 mL，在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min。 2）SCDLP液体培养基：配方如表8-14所示。

表8-14 SCDLP液体培养基配方 物质 用量（g） 酪蛋白胨 17 大豆蛋白胨 3 氯化钠 5 磷酸氢二钾 2.5 物质 用量（g） 葡萄糖 25 卵磷脂 1 吐温80 7 蒸馏水 1000 制备方法：将上述成分混合后，加热溶解，调节pH为7.2～7.3，分装后，在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25 ℃左右使用。

3）灭菌液体石蜡和吐温80。

（2）仪器

1）天平、水浴箱、灭菌研钵及灭菌研棒、均质器； 2）灭菌三角瓶：内含玻璃球及90 mL稀释液； 3）灭菌刻度吸管：10 mL、5 mL；

（3）不同类型样品制备

1）水溶性的液体样品：可量取10 mL加到90 mL灭菌生理盐水中，如样品少于10 mL，仍按10倍稀释法进行。如为5 mL，则加45 mL灭菌生理盐水，混匀后，制成（1∶10）的稀释液。

2）油性液体样品：取样品10 mL，先加5 mL灭菌液体石蜡混匀，再加10 mL灭菌吐温80，在（40～44）℃水浴中振荡混合10 min，加入灭菌的生理盐水75 mL（在40～44 ℃水浴中预温），在（40～44）℃水浴中乳化，制成（1∶10）的悬浮液。

3）亲水性半固体样品：称取10 g样品，加到已加有90 mL灭菌生理盐水并带玻璃球的经过灭菌的三角瓶中，充分振荡混匀，放入32 ℃水浴静置15 min。用其上清液作为（1∶10）的稀释液。

4）疏水性半固体样品：称取10 g样品，放到经灭菌的研钵中，加10 mL灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加10 mL灭菌吐温80，研磨，等溶解后，加70 mL灭菌生理盐水，在（40～44）℃水浴中充分混合，制成（1∶10）的稀释液。

如有均质器，上述水溶性膏霜、半固体样品、粉剂固体样品，可称取10 g加90 mL灭菌生理盐水，均质（1～2）min；疏水性膏霜及眉笔、口红笔等，称取10 g加90 mL SCDLP

液体培养基或1 g样品加l mL灭菌液体石蜡、l mL灭菌吐温80、7 mL灭菌生理盐水，均质（3～5）min。

8.5.2 细菌总数测定

细菌总数系指1 g或1 mL化妆品中所含的活菌数量。测定细菌总数可用来判断化妆品被细菌污染的程度，以及生产单位所用的原料、工具设备、工艺流程、操作者的卫生状况，是对化妆品进行卫生学评价的综合依据。这里主要介绍标准平板计数法。

1．测定原理

化妆品中污染的细菌种类不同，每种细菌都有它一定的生理特性。培养时对营养要求、培养温度、培养时间、pH、需氧性质等均有所不同。在实际工作中，不可能做到满足所有菌的要求。因此测定的结果，只包括在本方法所使用的条件下（在卵磷脂、吐温80营养琼脂上，于37 ℃培养48 h）生长的一群嗜中温的需氧及兼性厌氧的细菌总数。

2．仪器

（1）三角烧瓶、量筒、高压消毒锅、试管、酒精灯、恒温培养箱、放大镜、pH计或精密pH试纸。

（2）灭菌平皿：直径9 cm；灭菌刻度吸管：10 mL。

3．培养基和试剂

（1）生理盐水：见供检样品的制备。

（2）卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基：配方见表8-15所示。

表8-15 卵磷脂、吐温80-营养琼脂培养基配方

物质 质量 /g 蛋白胨 20 牛肉膏 3 NaCl 5 蒸馏水 1000 物质 质量 /g 卵磷脂 1 吐温80 7 琼脂 15

制备方法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐温80，将其它成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中溶解，将已溶解的卵磷脂和吐温80混匀，调pH为7.1～7.4，加入琼脂在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min，储存于冷暗处备用。

4．测定步骤

用灭菌吸管，吸取按1∶10稀释的检样2 mL分别注入到两个灭菌平皿内，每皿l mL，另取l mL注入到9 mL灭菌生理盐水试管中（注意勿使吸管接触液面），更换一支吸管，并充分混匀，使成1∶100的稀释液，吸取2 mL，分别注入到两个灭菌平皿内，每皿l mL。如样品含菌量高，还可再稀释成1∶1000、1∶10000……等，每种稀释度应换1支吸管。 将熔化并冷至（45～50）℃的卵磷脂、吐温80、营养琼脂培养基倾注平皿内，每皿约15 mL，另倾注一个不加样品的灭菌空平皿，作空白对照，随即转动平皿，使样品与培养基充分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置37 ℃培养箱内培养48 h。

5．菌落计数方法

先用肉眼观察，对菌落数进行计数，然后再用放大5～10倍的放大镜检查，以防遗漏。记下各平皿的菌落数后，求出同一稀释度各平皿生长的平均菌落数，若平皿中有连成片状的菌落或花点样菌蔓延生长时，该平皿不宜计数。若片状菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半个平皿菌落计数后乘2，以代表全皿菌落数。

6．菌落计数及报告方法

（1）首先选取平均菌落数为30～300的平皿，作为菌落总数测定的范围。当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，即以该平皿菌落数乘其稀释倍数（见表8-16，例1）。 （2）若有两个稀释度，其平均菌落数均为30～300个，则应求出两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于或等于2，应报告其平均数，若大于2则报告其中较小的菌数（见表8-16，例2及例3）。

（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300个，则应按稀释度高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表8-16，例4） （4）若所有稀释度的平均菌落数均少于30个，则应按稀释度的最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表8-16，例5）。

（5）若所有稀释度的平均菌落数均不是30～300个，其中一个稀释度大于300个，而相邻的另一稀释度小于30时，则以接近30或300平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表8-16，例6）。

（6）若所有的稀释均无菌生长，报告数为每克或每毫升小于10个。

（7）菌落计数的报告，菌落数在10以内时，按实有数值报告之；大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，应以四舍五入法计算。为缩短数字后面零的个数，可用10的指数来表示（见表8-16报告方式栏）。在报告菌落数为“不可计”时，应注明样品的稀释度。

表8－16 细菌计数结果及报告方式

例次 1 2 3 4 5 6 不同稀释度的平均菌落数 10-1 / 2760 20 不可计 27 不可计 10-2 1 295 271 4650 11 305 10-3 20 46 60 513 5 12 两稀释度菌数之比 / 1.6 2.2 / / / 菌落总数 (个/g或个/ mL) 100 38000 27100 513000 270 30500 报告方式 （个/g或个/ mL） 16000或1.6×104 38000或3.8×104 27000或2.7×104 510000或5.1×105 270或2.7×102 31000或3.1×104

8.5.3 粪大肠菌群的检验

粪大肠菌细菌来源于人和温血动物的粪便。检出粪大肠菌群表明该化妆品已被粪便污染，有可能存在其它肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。因此粪大肠菌被列为重要的卫生指标菌。

1．测定原理

检验方法是根据粪大肠菌群所具有的生物特征，如革兰氏阴性无芽孢杆菌在44 ℃培养（24～48）h能发酵乳糖产酸并产气，能在选择性培养基上产生典型菌落，能分解色氨酸产生靛基质。

2．仪器

恒温水浴、温度计、显微镜、载玻片、接种环、电炉、三角瓶、试管、小倒管、pH计或pH试纸、高温消毒锅、灭菌吸管、灭菌平皿。 3．培养基和试剂

（1）乳糖胆盐培养基：配方见表8-17所示。

表8-17 乳糖胆盐培养基配方 物质 用量 蛋白胨 20 g 猪胆盐 5 g 蒸馏水 1000 mL 物质 用量 0．4 ％溴甲酚紫水溶液 2.5 mL 乳糖 5 g 制备方法：将蛋白胨、胆盐及乳糖溶于蒸馏水中，调pH到7.4，加入指示剂，混匀、分装试管（每支试管中加一个小倒管），在69 kPa压力下灭菌20 min。 （2）双倍浓度乳糖胆盐培养基

按上述乳糖胆盐培养基成分，蒸馏水量不变，其它成分加倍。 （3）伊红美兰（EMB）琼脂：配方见表8-18所示。

表8-18 伊红美兰（EMB）琼脂配方

物质 用量 蛋白胨 10 g 乳糖 10 g 磷酸氢二钾 10 g 蒸馏水 1000 mL 物质 用量 2 ％伊红水溶液 20 mL 0.5 ％美红水溶液 13 mL 琼脂 20 g 制备方法：先将琼脂加到900 mL蒸馏水中，加热溶解，然后加磷酸氢二钾、乳糖及蛋白胨混匀，使之溶解。再以蒸馏水补足至1000 mL，校正pH为7.2～7.4。分装于烧瓶内。在0.1 MPa压力下高压灭菌15 min，备用。临用时加入乳糖并加热熔化琼脂。冷却至60 ℃左右，以无菌方式加入经灭菌的伊红美兰溶液，摇匀，倾注平皿备用。

（4）蛋白胨水（作靛基质试验用）：配方见表8-19所示。

表8-19 蛋白胨水配方 物质 用量 蛋白胨（或胰蛋白胨） 20 g 蒸馏水 1000 mL 物质 用量 氯化钠 5 g 制备方法：将上述成分加热熔化，调pH为7.0～7.2，分装小试管，在0.1 MPa压力下高压灭菌15 min。

（5）靛基质试剂 柯凡克试剂：将5 g对二甲氨基苯甲醛溶解到75 mL戊醇中，然后缓缓加入浓盐酸25 mL。 试验方法：接种细菌于蛋白胨水中，于44 ℃培养（24～48）h。沿管壁加柯凡克试剂（0.3～O.5）mL，轻摇试管。阳性者于试剂层显深玫瑰红色。

蛋白胨应含有丰富的色氨酸，每批蛋白胨买来后，应先用已知菌种鉴定后方可使用。 （6）革兰氏染色法

1） 染液制备：按表8-20制备染液。

表8-20 染液的制备方法

成分 A、结晶紫染色液 B、革兰氏碘液 C、脱色液 D、复染液 a．沙黄复染液 制备方法 将结晶紫1 g溶于20 mL 95 %的乙醇中，然后与80 mL 1 %的草酸铵溶液混合 先将1 g碘和2 g碘化钾进行混合，加入少许蒸馏水，充分振荡。待完全溶解后，再加蒸馏水至300 mL。 95%乙醇 将0.25 g沙黄溶于10 mL 95 %的乙醇，然后用90 mL蒸馏水稀释。 称取碱性复红10 g，研细，加95 %乙醇100 mL，放置过夜，滤纸过滤。b．稀石炭酸复红液 取滤液10 mL，加5 %石炭酸水溶液90 mL，即为石炭酸复红液。再取此液10 mL，加水90 mL，即为稀石炭酸复红液。

2）染色法

① 将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染l min，水洗。 ② 滴加革兰氏碘液，作用l min，水洗。

③ 滴加95 ％酒精脱色，约30 s，或将酒精滴满整个涂片，立即倾去，再用酒精滴满整个涂片，10 s后水洗。

④ 滴加复染液，复染l min，水洗。待干，镜检。 3）染色结果

革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。如用1∶10稀释石碳酸复红染色液作复染液，复染时间仅需10 s。 4．测定步骤

（1）取10 mL 1∶10稀释的样品，加到10 mL双倍浓度的乳糖胆盐培养基中，置44 ℃培养箱中培养（24～480h。如不产酸也不产气，则报告为粪大肠菌群阴性。

（2）如产酸产气，则划线接种到伊红美兰琼脂平板上，在37 ℃培养（18～24）h，同时取该培养液（1～2）滴接种到蛋白胨水中，在44 ℃培养24 h。经培养后，在上述平板上观察有无典型菌落生长，大肠菌群在伊红美兰琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色，不带或略带金属光泽，或粉紫色，中心较深的菌落，亦常为大肠菌群，均应注意挑选。 （3）挑选上述可疑菌落，涂片做革兰氏染色镜检。

（4）在蛋白胨水培养液中，加入靛基质试剂约0.5 mL，观察靛基质反应，阳性者液面呈玫瑰红色；阴性反应液面呈试剂本色。 5．检验结果

平板上有典型菌落，并经证实为革兰氏阳性短杆菌，靛基质试剂验阳性，则可报告被检样品中检出粪大肠菌群。

8.5.4 绿脓杆菌的检验方法

绿脓杆菌在自然界分布甚广，空气、水、土壤中均有存在。它对人体致病，常引起人皮肤化脓感染，特别是烧伤、烫伤、眼部疾病者被感染后，常使病情恶化，并可引起败血症。因此，在化妆品标准中规定不得检出绿脓杆菌。

1．检验原理

其检查方法是根据绿脓杆菌生物学特征：革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，能产生绿脓菌素。此外，还能液化明胶，还原盐为亚盐，在42 ℃下生长等。可与类似菌相区别。 2．

仪器

培养箱、三角烧瓶、试管、灭菌平皿、灭菌刻度吸管、显微镜、载玻片、接种针或接种环、电炉、高压消毒锅。 3．培养基和试剂

（1） SCDLP液体培养基

制备方法与前述SCDLP液体培养基制备一致。

（2） 十六烷基三甲基溴化铵培养基：配方见表8-21所示。

表8-21 十六烷基三甲基溴化铵培养基配方 物质 用量 牛肉膏 3 g 蛋白胨 10 g NaCl 5 g 物质 用量 十六烷三甲基溴化铵 0.3 g 琼脂 20 g 蒸馏水 1000 mL 制备方法：除琼脂外，将上述物质混合加热溶解，调pH为 7.4～7.6，加入琼脂，在69 kPa压力下灭菌20 min后，制成平板，备用。。

（3）乙酰胺培养基：配方见表8-22所示。

表8-22 乙酰胺培养基配方 物质 用量 乙酰胺 10.0 g K2HPO4 1.39 g KH2PO4 0.73 g 琼脂 20 g 物质 用量 NaCl 15.0 g 酚红 0.012 g MgSO4·7H2O 0.5 g 蒸馏水 1000 g 制备方法：除琼脂和酚红外，将其它成分加到蒸馏水中，加热溶解，调pH为7.2，加入琼脂、酚红，在0.1 MPa压力下高压灭菌20 min后，制成平板，备用。

（4）绿脓菌色素测定用培养基：配方见表8-23所示。

表8-23 绿脓菌色素测定用培养基配方 物质 用量 蛋白胨 20 g MgCl2 1.4 g K2SO4 10 g 物质 用量 琼脂 18 g 甘油（化学纯） 10 g 蒸馏水 1000 mL 制备方法：将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中，加温使之溶解，调pH至7.4，加入琼脂和甘油，加热溶解，分装于试管内，在69 kPa压力下高压灭菌20 min后，制成斜面，备用。

（5）明胶培养基：配方见表8-24所示。

表8-24 明胶培养基配方 物质 用量 牛肉膏 3 g 明胶 120 g 物质 用量 蛋白胨 5 g 蒸馏水 1000 mL 制备方法：取各成分加在蒸馏水中浸泡20 min，随时搅拌加温使溶解，调pH至7.4，分装于试管内，经在69 kPa压力下灭菌20 min后，直立制成高层，备用。

（6）盐蛋白胨水培养基：配方见表8-25所示。

表8-25 盐蛋白胨水培养基配方

物质 用量 蛋白胨 10 g 酵母浸膏 3 g 蒸馏水 1000 g 物质 用量 亚钠 0.5 g 钾 2 g 制备方法：将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中，加温使溶解，调pH值为7.2。煮沸过滤后补足液量，加入钾和亚钠，溶解混匀，分装到加有小倒管的试管中，在69 kPa压力下灭菌20 min后，备用。

（7）普通琼脂斜面培养基：配方见表8-26所示。

表8-26 普通琼脂斜面培养基配方 物质 用量 蛋白胨 10 g 琼脂 15 g 牛肉膏 3 g 物质 用量 NaCl 5 g 蒸馏水 1000 mL 制备方法：除琼脂外，其余成分溶解于蒸馏水中，调pH为7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，分装试管，在0.1 MPa压力下高压灭菌15 min后，制成斜面,备用。

4．检验步骤

（1）增菌培养：取1∶10样品稀释液10 mL加到90 mL SCDLP液体培养基中，置42 ℃培养箱中，培养（18～24）h，如有绿脓杆菌生长，培养液面会有一层薄菌膜，培养液呈黄绿色或蓝绿色。如无SCDLP液体培养基时，可用普通肉汤培养基。检验含防腐剂的化妆品时，在每1000 mL普通肉汤中加1 g卵磷脂，7 g吐温80。

（2）分离培养：从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上。置37 ℃培养（18～24）h。凡绿脓杆菌在此培养基上，其菌落为扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延。表面湿润，菌落呈灰白色。菌落周围培养基常有水溶性色素扩散。此培养基选择性强，大肠艾希氏菌不能生长，革兰氏阳性菌生长较差。也可以用乙酰胺培养基进行分离，将菌液划线接种于平皿中，放37 ℃培养24 h，绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其它菌不生长。

（3）染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阳性者进行氧化酶试验。

（4）氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的10 g／L二甲基对苯二胺试液，在（15～30）s内出现粉红色或紫红色，为氧化酶试验阳性；若培养物不变色，氧化酶试验阴性。

（5）绿脓菌素试验：取可疑菌落（2～3）个，分别接种在绿脓菌素测定用培养基上，37 ℃培养24 h，加入氯仿（3～5）mL，充分振荡，使培养物中的绿脓菌素溶解于氯仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中，并加入l mol／L的盐酸 l mL左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。

（6）盐还原产气试验：挑取被检的纯培养物，接种在盐胨水中，于37 ℃培养24 h，观察结果。凡在盐胨水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原盐，并将亚分解产生氮气。

（7）明胶液化试验：取绿脓杆菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基中，于37 ℃培养24 h，取出放入冰箱（10～30）min，如仍是溶解状即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者为阴性。 （8）42 ℃生长试验：提取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在（41～42） ℃培养箱中，培养（34～48）h，绿脓杆菌能生长，为阳性。近似的荧光假单胞菌则不能生长。 （9）检验结果报告：被检样品经增菌分离培养后，经证实为革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性者，即可报告被检样品中检出有绿脓杆菌；如绿脓菌素试验阴性而液化明胶，盐还原产气和42 ℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被检样品中有绿脓杆菌。

8.5.5 金黄色葡萄球菌检验

金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄菌有重要意义。

1．检验原理

美国CTFA和FDA检验化妆品中的金黄色葡萄球菌时，不经增菌直接接种到Vogel-Johnoson琼脂培养基上；日本方法则先用SCDLP或SCD液体培养基增菌后，再接种Vogel-Johnoson琼脂培养基。经试验证明增菌后检出效果好。故我国采用先增再分离方法。分离金黄色葡萄球菌的培养基很多，如Vogel-Johnoson琼脂、Baird-Parker琼脂、血琼脂、卵黄高盐琼脂、TMP琼脂等。考虑到国内的习惯应用，可采用Baird-Parker琼脂或血琼脂。下一步的检验各国都相同。

根据本菌特有的形态及培养特性，用Baird-Parker平板进行分离，该平板中的氯化锂可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高检出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征来鉴别。

2．培养基和试剂

（1）SCDLP液体培养基 制备方法与前述SCDLP液体培养基制备一致。 （2）7.5 %氯化钠肉汤培养基：配方见表8-27所示。

表8-27 7.5 %氯化钠肉汤培养基配方

成分 组成 成分 组成 蛋白胨 牛肉膏 10g 3% 氯化钠 蒸馏水 75% 1000mL 制备方法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121 ℃，1.5 min高压灭菌 （3）Baird-Parker平板：配方见表8-28所示。

表8-28 Baird-Parker平板配方 成分 胰蛋白胨 牛肉膏 酵母浸膏 甘氨酸 组成 10 g 5 g 1 g 12 g 成分 氯化锂（LiCl·6H2O） 琼脂 蒸馏水（pH 7.0±0.2） 组成 5 g 20 g 950 mL 增菌剂的配制：30 %卵黄盐水50 mL与除菌过滤的1 %亚碲酸钾溶液10 mL混合，保存于冰箱内。

Baird-Parker平板制备方法：将各成分中到蒸馏水中，加热煮佛完全溶解，冷至25 ℃校正pH。分装每瓶95 mL高压灭菌15 min。临用时热溶化琼脂，每95 mL加入预热至50 ℃

的卵黄亚碲酸钾增菌剂5 mL，摇匀后倾注于平板。培养基应的致密不透明的。使用前在冰箱贮存不得超过48 h。

（4）血琼脂培养基：配方见表8-29所示。

表8-29 血琼脂培养基配方

成分 营养琼脂 组成 100 mL 成分 脱纤维羊血（兔血） 组成 10 mL 制备方法：将营养琼脂加热溶化，待冷至50 ℃左右以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。

（5）甘露醇发酵培养基：配方见表8-30所示。

表8-30 血琼脂培养基配方 成分 组成 成分 组成 蛋白胨 氯化钠 甘露醇 10 g 5 g 10 g 牛肉膏 0.2 %溴香草酚蓝溶液 蒸馏水 5g 10mL 1000 mL 制备方法：将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，115 ℃灭菌20 min，备用。

（6）兔（人）血浆制备

取3.8柠檬钠溶液（121 ℃灭菌30 min）1份加兔（人）全血4分，混匀静置，（2000～3000）r/ min离心（3～5）min。血球下沉，取上面血浆。

3．仪器

（1）显微镜、培养箱、离心机、灭菌试管、载玻片。 （2）灭菌吸管：1 mL，5 mL，10 mL

4．测定步骤

(1)增菌

取1∶10稀释的的样品10 mL接种到90 mL SCDLP液体培养基中（如无此培养基也可用7.5 %氯化钠肉汤培养基），置37 ℃培养箱，培养24 h。

注：如无此培养基地也可用7.5 %氯化钠肉汤培养基，检验含防腐剂的化妆品时，可在1000 mL此培养基中加1 g卵磷脂，7 g吐80。

(2)分离

自上述增菌培养液中，取（1～2）接种环，划线接种在Baird-Parker氏培养基，如无此培养基地也可划线接种到血琼脂平板，置37 ℃培养（24～48）h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为（2～3）mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37 ℃培养24 h。

(3)染色镜检

挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为（0.5～1）μm。

(4)甘露醇发酵试验

取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置37 ℃培养24 h。，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。

(5)血浆凝固酶试验

玻片法：到清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在5 min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性，主玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。

试管法：吸取1∶4的新鲜血浆0.5 mL。混匀，放37 ℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24 h之内如于现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5 mL，分别加入灭菌小试管内0.5 mL 1∶4的血浆混匀，做为对照。

5．检验结果

凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可报告被检样品检出金黄色葡萄球菌。