一、实验目的
旋光度的测定
1、了解旋光仪的构造和旋光度的测定原理 2、掌握旋光仪的使用方法和比旋光度的计算方法
二、预习要求
理解旋光度的定义;了解影响旋光度的因素;了解旋光度的测定意义;了解碳水化合物的变旋光现象;思考本实验中如何保护旋光仪。
三、实验原理
当一束单一的平面偏振光通过手性物质时,其振动方向会发生改变,此时光的振动面旋转一定的角度,这种现象称为旋光现象。物质的这种使偏振光的振动面旋转的性质叫做旋光性,具有旋光性的物质叫做旋光性物质或旋光物质。许多天然有机物都具有旋光性。由于旋光物质使偏振光振动面旋转时,可以右旋〔顺时针方向,记做“+〞〕,也可以左旋〔逆时针方向,记做“—〞〕,所以旋光物质又可分为右旋物质和左旋物质。
由单色光源〔一般用钠光灯〕发出的光,通过起偏棱镜〔尼可尔棱镜〕后,转变为平面偏振光〔简称偏振光〕。当偏振光通过样品管中的旋光性物质时,振动平面旋转一定角度。调节附有刻度的检偏镜〔也是一个尼可尔棱镜〕,使偏振光通过,检偏镜所旋转的度数显示在刻度盘上,此即样品的实测旋光度α。其旋光原理如图10-1所示。
图10-1 旋光原理
旋光度的大小除了取决于被测分子的立体构造外,,还受到待测溶液的浓度、偏振光通过溶液的厚度〔即样品管的长度〕以及温度、所用光源的波长、所用溶
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剂
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等因素的影响,这些因素在测定结果中都要表示出来。常用比旋光度来表示物质的旋光性,比旋光度和旋光度的关系如下:
纯液体的比旋光度[]溶液的比旋光度[]ttdl
cl
上两式中,[]t表示旋光性物质在温度为t℃、光源的波长为λ时的比旋光度;α为旋光仪所测得的旋光度;l为液层厚度〔dm〕;d 为纯液体的密度;c为溶液的浓度〔g/ml〕;t为测定时的温度〔℃〕;λ为所用光源的波长〔nm〕。例如25℃用波长为5nm的钠灯〔D线〕作光源测定某样品的旋光度为右旋38°,那么比旋光度记作[α]25D=+38°。
比旋光度是旋光性物质的物理常数之一。通过测定旋光度,可以鉴定物质的纯度、测定溶液的浓度、密度和鉴别光学异构体。
四、仪器和试剂
旋光仪、洗瓶、胶头滴管、滤纸;
蒸馏水、5%葡萄糖溶液、未知浓度的葡萄糖溶液
五、实验内容
1.旋光仪的构造
旋光度可以由旋光仪来测定。旋光仪有两种:一种是数字自动显示测定结果的自动旋光仪,另一种是目测刻度而得结果圆盘旋光仪,如图10-2所示。
图10-2 WXG-4圆盘旋光仪
2.旋光度的测定 〔1〕样品溶液的配制
准确称取一定量的样品,在50ml的容量瓶中配成溶液。通常可以选用水、乙
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醇、氯仿作溶剂。假设用纯液体样品直接测试,那么测定前只需确定其相对密度即可。
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由于葡萄糖溶液具有变旋光现象,所以待测葡萄糖溶液应该提前24小时配好,以消除变旋光现象,否那么测定过程中会出现读数不稳定的现象。
〔2〕预热
翻开旋光仪电源开关,预热5~10分钟,待完全发出钠黄光前方可观察使用。 〔3〕调零
在测定样品前,必须先用蒸馏水来调节旋光仪的零点。洗净样品管后装入蒸馏水,使液面略凸出管口。将玻璃盖沿管口边缘轻轻平推盖好,不要带入气泡,旋紧〔随手旋紧不漏水为止,旋得太紧,玻片容易产生应力而引起视场亮度发生变化,影响测定准确度〕上螺丝帽盖。将样品管擦干后放入旋光仪,合上盖子。开启钠光灯,将刻度盘调在零点左右,会出现大于或小于零度视场的情况。如图10-3中a和b所示。旋动粗动、微动手轮,使视场内三局部的亮度一致,即为零点视场,如图10-3c所示。记下刻度盘读数,重复调零4~5次取平均值。假设平均值不为零而存在偏差值,应在测量读数中将其减去或者加上。
a.大于或小于零度视场 b.零度视场 c.小于或大于零度视场
图10-3 三分视场的不同情况
〔4〕测定
样品的测定和调零方法一样。每次测定之前样品管必须先用蒸馏水清洗1~2遍,再用少量待测液润洗2~3次遍,以免受污物的影响,然后装上样品进展测定。旋动刻度盘,寻找较暗照度下亮度一致的零度视场。假设读数是正数为右旋;读数是负数为左旋。读数与零点值之差,即为样品在测定温度时的旋光度。记下测定时样品的温度和样品管长度。测定完后倒出样品管中溶液,用蒸馏水把管洗净,擦干放好。
按以上方法测定5%葡萄糖溶液的旋光度4~5次,测定值填入下表相应位置。再测定未知浓度的葡萄糖溶液的旋光度4~5次,测定值填入下表相应位置。
〔5〕数据记录与处理
按表中设计的工程进展相应处理,最终求出未知浓度葡萄糖溶液的浓度。
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零点值 零点平均值 5%葡萄糖的旋光度 旋光度平均值 差值* 比旋光度 未知浓度葡萄糖的旋光度 旋光度平均值 差值* 葡萄糖溶液浓度 * 差值 = 旋光度平均值 - 零点平均值 六、本卷须知
1.对观察者来说,偏振光的振动平面假设是顺时针旋转,那么为右旋〔+〕,这样测得的+α,也可以代表α ±〔n×180〕°的所有值。如读数为+38°,实际上还可以是218°、398°、-142°等角度。因此,在测定未知物的旋光度时,至少要做一次改变浓度或者液层厚度的测定。如观察值为+38°,在稀释五倍后,所得读数为+7.6°,那么此未知物的旋光度α应该为+7.6°×5=+38°。
2.仪器应放在空气流通和温度适宜的地方,并不宜低放,以免光学零部件、偏振片与受潮发霉及性能衰退。
3. 试管使用后,应及时用水或蒸馏水冲洗干净,揩干藏好。 4. 镜片不能用不洁或硬质布、纸去揩,以免镜片外表产生道子等。 5. 仪器不用时,应将仪器放入箱内或用塑料罩罩上,以防灰尘侵入。 6. 仪器、钠光灯管、试管等装箱时,应按规定位置放置,以免压碎。 7. 不懂装校方法,切勿随便拆动,以免由于不懂校正方法而无法装校好。
七、思考题
1.旋光度的测定具有什么实际意义?
2.浓度为10%的某旋光性物质,用1dm长的样品管测定旋光度,如果读数为 -6°,那么如何确定其旋光度是-6°还是+3°?
3.为什么在样品测定前要检查旋光仪的零点?通常用来做零点检查液的溶剂
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应符合哪些条件?
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4.使用旋光仪有哪些本卷须知?
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