【doc】用台盼蓝做活体染色时引起某些器官的组织变化

用台盼蓝做活体染色时引起某些器官的组

织变化

一 g

佳木斯医学院1993年l6卷4期

用台盼蓝做活体染色时引起某些器官丑织变化 cj) 重高德臣..

(佳木斯市师专生柏系)(依兰高级中学)足44'-占

提要通过不同途径向小鼠和家兔体内引入台盼蓝的试验证实,.在单植吞噬细胞系统

中,尚有少部分吞噬细胞不能吞噬台盼蓝颗粒.并观察到在含有孔毛细血管的器官.台盼蓝易

穿过毛细血管壁引起器官内出血及细胞连接侧面疏离等组织结构的改变(证实了台盼蓝的毒

理)i在舍有连续毛细血管的器官.它不易穿过毛细血管壁,不能引起其组织结构的改变.

关键词尘和家兔:丝缓童土匕;趱

台盼蓝(Trypanblue甥Ⅱ名:曲利本蓝,锥蓝,分子式:cH20NS;Na,ENaO3S)c1.H (OH)(NHz)N:NCH(CH)一]:即,双(甲苯基偶氮氨基萘酚二磺酸钠).分子量i960.83,结 构式:(略)

它常用于活体染色.并用于鉴定动物体内吞噬细胞的存在及吞噬能力的较理想染料.特别

是用于显示疏松结缔组织中的组织细胞的活体染色,在活体染色z后肾脏,肾上腺,肝,脾,骨

髓等着色较深,呈深蓝色『】.但是,在活体染色之后台盼蓝在器官车分布及是否能引起器官

的组织结构变化,对活体的毒性如何.及其毒理,尚未见报道,为此开展这项研究. l材料与方法

取台盼蓝(北京化工厂产品.号770715)2.5g溶予5GOn:盐:.滤过.备用.角前 在水涪中煮}{}}lO分钟.

取小自鼠4只.每只各向腹腔注射消毒的0.5白盼蓝生理盐水溶液iml,隔天注射一次'

共注射三跃.取家兔8是.雌雄不拘,体重在:0g～:,2kg.分4组.每组2只.第一组按体重

每100g腹腔注射1.:.隔泛王耵一次.共三.:第二按同样剂量耳静脉注射,隔天注射一.

农.着三次{第三组按于洋剂量颈动脉缓慢注射一砍;第四组按同样剂量口服,每天腚一沉.共

三次.最后一次注射(或口鼹)4—6h后.各组击毙,剥皮观察斑松结缔组织,剔骨时观察骨骼

肌,深筋膜及骨膜色译.锯署股骨观察骨髓.其中第4组剖开食管,胃,肠,洗掉其内容物观察

牯膜邑泽.剖开腹腔.取小鼠垒肾,肾上腺,胭淋巴结,肝(约O.5cm).取家兔肾,肾上腺,脑

巴结,肝(各约0.5cm).中性固定,按石蜡切片程序制成7um厚的蜡片,展片,贴片,

干燥,脱蜡后快速观察台盼蓝组织中的分布(二甲苯不垒挥发为限);然后按HE染色程序继

续制完切片.封藏后观察组织垒貌.取小白鼠及l一3组家兔的股骨骨体,横断.按制骨磨片的

方法磨成l5.um～20.IJ,m的骨磨片,用95酒精和无水酒精脱月目后封藏观察. 2结果

小自鼠及家兔在注射后不久,眼结膜及巩膜,耳尖及皮肤均呈现蓝色,颈动脉注射

出现的

最快(约2—3分钟);耳静脉注射出现的较快(约4—5分钟).其中第一组有一只患肺炎的兔发

生排蓝尿现象.皮下疏松结缔组织呈蓝色,深筋膜,骨膜及骨髓呈深蓝色.骨密质呈淡蓝灰色.

腹膜,肝,肾,肾上腺,淋巴结呈深蓝色,尤肾脏的蓝色最深,并略有肿胀(切面外翻). 组织学变化:蜡片脱蜡后没染色之前见到下述组织中有台盼蓝颗粒(多个小颗粒附在一

起.似细线穿成簇团状物):肝静脉,小叶阉动,静脉及肝细胞索之问;肾小囊内及肾小管周

围的血管中,患肺炎兔的肾小管内亦有;淋巴结的淋巴窦中;肾上腺皮质束状带细胞之间;骨磨

片的哈佛氏管(Ha'~crsiancana1)及浮克曼氏营(Volkmannscana1)中H,E染色之后,见副下

佳术斯医学院1993年16卷4期?7?

述器官发生出血及组织结构发生变化:肝静脉及小叶间静脉周国有较多的血细胞充填在

肝细胞索及门管区内,使正常的肝细胞索疏离及肝细胞萎缩(图1～图3)}肾小体内的血管球

充血肿胀,有血细胞附于肾小囊的脏层或壁层上(图4,图5),血浆蛋白从脏层滤过出进入近曲

小管中(图6),肾小管周围及肾间质内有较多的血细胞,致使肾小管之间出现空隙(图7,图

8);肾上腺皮质束状带之间有血细胞,使束状带细胞之间出现狭空隙(图9,图10);膪淋巴结淋

巴窦内充满血细胞.股骨横膳中在较多的哈佛氏管及浮克曼氏管中有血细胞及多量的血红蛋 白沉积(图ll,图l2).

上述出血及组织结构的变化以静动脉注射台盼蓝最明显;耳静脉注射较明显;腹腔注射墩

之;口服者只在口腔,食管,胃肠等牯膜有蓝色,其他器官无蓝色(没被胃肠吸收),故没做切片 与骨磨片观察. 讨论

我们分别由多种途径将台盼蓝引入体内证实,在单核吞噬细胞系统所包括的细胞中,并不

是都能吞噬台盼蓝,能够吞噬台盼蓝的细胞有:结缔组织中的组织细胞.肝的Kupffer细胞,淋

巴结和脾脏的游走和固有巨噬细胞,浆腹腔的巨噬细胞.骨髓中的巨噬细胞,骨组织中的破骨

细胞在外周皿液中的单棱细胞,肺泡隔的巨噬细胞.神经组织中的小胶质细胞不能吞噬台盼

蓝(专人认为后者可能不是单核吞噬细胞系统中的细胞:).至于后三者不能吞噬台盼蓝的原 田尚不明了

器官组织本身不一吞噬细瞻的并不是都能引起出血及细胞连接侧面的疏离等变化-如三

种肌组织,致密结缔组织,脑,车,甲状腺,性腺,胰腺.前述组织结构的变化以排毒器官肾脏最

明显.解毒器官肝脏较町显.j腺中的肾上腺和外分泌腺中的唾液腺受害较重 综上事实分析.台盼蓝:所以能引起器官组织的结构改变.并不在于该器官的吞噬细胞有

无与多少而是取决于台野苣慧否穿过该器官组织的毛细血管壁.在有孔的毛细血管和血窦容

易i过.如碍血管球及肝血窦f在身体发生变时更容易通过.例如前进的一只患肺支免);在

连续毛细血管不能通过,如三尊肌组织,结缔组织.中枢神经和肺组织等毛细血管

(这些组织均

没呈蓝色).其原因可能与连续毛细血管壁含吞饮小泡有关.

我们将台盼蓝生理盐水溶液置于载片上用高倍镜观察少部分呈分散的小颗粒状态,太部

分呈大小不等的簇团状(两者我们统称台盼蓝颗粒),在吞噬细胞中只见到其小颗粒,没见到簇

团状物.而在毛细血管外的台盼蓝多呈簇团状态.可见台盼蓝形成簇团状物并穿出毛细血管外

是其主要的毒理.这是因为它和血浆中Mg+及水中的Mg均可形成,Mg\"为配位中L-,形成

■配位化台物(络台物).多个配位化合物分子粘附在一起形成了簇团状物因为肾脏形成的终

最厦尿{Mg在终尿中浓缩了5倍,故肾眭簇团状物最多受损害最严重

台盼蓝强能被体内部分吞噬细胞吞噬,不能进入其他细胞内,故不能与细胞内Mg结

音.不舍影啊细胞的代谢,所以注射台盼蓝溶液不会引起明显的病理变化,临床上似乎无毒

皇晒蓝液放置愈久,其簇团状物形成的愈多愈大,用此可以解释《生物显微技术》一书中

记;的\"放置时间长久,其毒性增强\"的原因.常温和低温保存此溶液.都会形成簇团状物(可能

和:中存在的微量Mg缓慢反应所致).我们把在冰箱中低温保存一个多月之久的该溶液,

水浴煮沸15分钟,再滴到载片观察,仍有大量簇团状物存在,可见冷藏及煮沸对消除其毒性 的作用不大.

台盼蓝不仅能引起部分器官组织结构发圭变化,而且在体内存在时间较久,我们对耳静脉

注射台盼蓝的兔,一个多月之后捕杀,其肾,肝等组织切片上,仍有台盼蓝颗粒及上

述的毒害作

8?佳术斯医学院1993年l6卷4期

用由于它在身体中存在时问较长,排出缓慢,故此溶谴绝不能引入人体.至于台盼蓝配成多

大浓度?用多少剂量?能达到既显示出吞噬细胞的吞噬作用,不仅损害器官的组织结构,有待 今后摸索试验. 参考文献

l国:生转显氍挂术,九民最f出社l978;l52一l65 2听{组织学与胚胎华,意北大出版社l987}1l5 l_f'白腹腔注射台聍蓝il起肝-I叮的变化.400X. 茎z.1I.白鼠腹膛注射台崎蓝il是肝门管垦曲变化-400X. 罡3.免静辟注射古畸蓝引起肝.正扭曲壹:匕lOOOX, 蔓4.1?白鼠嗄腔注射台竹蓝引起肾小体的变化-lO00X 5免静酿往射台睁蓝起肾-l'体的雯化.1O00X.

E6免静晾注射台时苴引起肾一1悼近由1管时变化.400X. 7.免静肄注和台畸蓝引起',1管周围的变亿.400X.

翟8.?1一白越嘘胜注射台睁蓝引起肾小舌用固畸变化,lO00X. 至9.兔静脉往射台畸蓝起肾二臃盅履束装昔的变化,4OOX. 臣l0.为囤9的l000X.

墨l】.兔动脉谊|÷台畸苴5I越肢骨骨害盾的变化(横蘑片).4OO3: 墨12.为囤l1的1000X.

空莆去乏表示台峙蓝掰拉.窑箭击芝表示细胞问的出血 血抽胞)噩其连接侧面的硫离t善中囤6.苫11,囤l2王表示 士血后肚虹细胞游出曲血王:蛋目). (1992一10—06眭稿) 豳'

Changesinthetissuesofsomeorganscaused

bylivingthingdyeingwithtrypanblue ZhaoQingshi,etal

Theexperimentsofgivingtrypanblueintowhitemiceandrabbitsbydifferentways provedthatstillasmallnumberofphagocytesinmoncytesystemfailedtoengulftrypanblue andthatinorganscontainingthefenestratedcapillay,trypanbluepassedthroughcapillary walteasilytoeffusechangesinthetissuestructureoftheorgans[orexamplehaemorrhage insjdetheorgansandloosenessolthelateria[sidesofthecellconnection(showingthepoison theoryoftrypanblue)andintheorganscontainingthecontinuouscapillary,trypanbluedidn tpassedthroughcapillarywalIeasilytofailtocausethechangesinitstissuestructure- Keywords:trypanblue~whitemiceandrabbits:tissuechange;poisontheory