３３０・实验研究・ Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１３，Ｖｏ１．１１，Ｎｏ．２８ 表１重量差异检查结果 Ｉｘ Ｈ第一法）测定。样品１２０８２４中水分占４．２％，样品３０１１３１中水分 占４．４％，样品３０５２８１中水分占４ ９％。药典规定水丸水分含量不得过 ９．０％，从表中可见本品水分含量符合要求。 Ｌ４微生物限度检查：按照中国药典２０１０年版一部附录ⅫＩ微生物限 度检查法，检查ｊ批样品，样品１２０８２４￣杂菌３４０个／克，样品３０１１３１ 中杂菌３２０个／克，样品３０５２８１中杂菌３１０＋／克。三批样品霉菌均为每 克小于１０个，均未检测出大肠杆菌 】。结果表明：三批样品均符合中 国药典一部附录）ⅢＩ微生物限度检查法规定。 ３．２重量差异：按（《中国药典》２０１０年版一部附录Ｉ Ａ）样品标示为 每１０丸重２ｇ，重量差异限度为±８，即１．８４—２．１６ｇ。检查结果见表１。 从表中可见本品重量差异符合要求。 ３．３溶散时限：按（《中国药典 ２０１０年版一部附录Ｉ Ａ）检查，样品 １２０８２溶散时间为２３ｍｉｎ，样品３０１１３１溶散时间为２５ｍｉｎ，样品３０５２８１ 溶散时间为２８ｍｉｎ…。药典规定水丸溶散时限不得过１ｈ，本品溶散时限 符合要求。 参考文献 ［１】 肖培根，李大鹏，杨世林，等．新编中药志［Ｍ］一Ｅ京：化学工业出版 社，２００１：１２． ［２］ 吕武清，龙新华．中成药中的药材薄层色谱鉴别［Ｍ】．北京：人民卫 生出版社，１９９６． 纳米羟基磷灰石／胶原蛋白复合骨结合血管内皮生长因子／骨形态发生 蛋白一７修复骨缺损的实验研究 顾晓东 李 雪 （齐齐哈尔医学院第一附属医院骨三科，黑龙江齐齐哈尔１６１０４１） 【摘要】目的探讨血管内皮生长因子（ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ，ＶＥＧＦ）联合骨形态发生蛋白一７（ｂｏｎｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ ７， ＢＭＰ一７）复合纳米羟基磷灰石／胶原蛋白复合骨（ｎａｎｏ—ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ／ｃｏｌｌａｇｅｎ，ＮＨＡＣ）修复骨缺损的效果。方法将纳米羟基磷灰石粉末 和胶原蛋白粉末混合制备ＮＨＡＣ人工骨，再将混合粉末与含ＶＥＧＦ、ＢＭＰ一７的蒸馏水调和，制备ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７、ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ人 工骨。建立大鼠桡骨缺损模型，按随机原则分为３组，ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组植入ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７，ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ组植入ＮＨＡＣ／ ＶＥＧＦ，ＮＨＡＣ组植入ＮＨＡＣ人工骨。术后２、４、８周行组织学及免疫组织化学检查，观察材料成骨及血管化情况。结果各时间点组织 学评分ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组高于其他两组，ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ组高于ＮＨＡＣ植入组。在４周内，血管计数以ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组最多。 结论血管内皮生长因子联合骨形态发生蛋白一７能更好的促进成骨，比单纯应用血管内皮生长因子能更好的修复骨缺损。 【关键词】纳米羟基磷灰石；血管内皮生长因子；骨形态发生蛋白一７；骨缺损 中图分类号：Ｒ６８７．３ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１－８１ ９４（２０１３）２８－０３３０一Ｏ２ 骨缺损是临床常见的病症，近年来组织工程技术的发展为骨缺损 的修复提供了新的思路。其中，支架材料和成骨活性因子联用修复骨 ＢＭＰ一 ７ ３００ｎｇ。 １．２．２动物分组、骨缺损的制备及材料植入：２７只大鼠按随机数字表 法分为３组，ＮＨＡＣ组、ＮＨＡｃ，ｖＥＧＦ组、ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组，每 组９只（１８０１１桡骨），制备双侧桡骨中段０．５ｃｍ骨缺损模型，依据分组 情况分别植入相应材料，关闭切口，不做内外固定。 缺损也成为中的一个研究热点。骨形态发生蛋白一７有很强的诱导成骨 作用…。血管内皮生长因子能促进人工骨的早期血管化和成骨 ｊ，本实 验应用血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）联合骨形态发生蛋白一７（ＢＭＰ一７） 复合纳米羟基磷灰石／胶原蛋白复合骨（ＮＨＡＣ）修复骨缺损，初步探 讨两种生长因子联合应用修复骨缺损效果。 １．２＿３主要观察指标：术后２、４、８周各组随机选取３只动物处死，截 取桡骨缺损区骨段，常规制作石蜡标本，行苏木精一伊红染色，光镜下 观察骨形成及塑型情况，并采用Ｌａｎｅ—Ｓａｎｄｈｕ法组织学评分标准评分。 石蜡切片脱蜡水化后，一抗采用ＣＤ３１抗体，行免疫组织化学染色。 １材料与方法 １．１材料 １．１．１动物：ＳＰＦ级雄性Ｗｉｓｔａｒ大鼠２７只，体质量１８０～２２０ｇ。 １．１．２试剂：纳米羟基磷灰石粉末，胶原蛋白粉末，ＶＥＧＦ及ＢＭＰ一７， ＣＤ３ｌ抗体。 １．２方法 阳性染色表现为棕黄色或棕褐色颗粒着色于血管内皮细胞浆，每张切 片随机选取３个１００倍视野计数，取平均值。 １．３统计学分析 实验数据以均数±标准差（ ±Ｓ）表示，采用ＳＰＳＳ１３．０统计学软 １．２．１ ＮＨＡＣ及含有ＶＥＧＦ及ＢＭＰ一７人工骨的制备：纳米羟基磷灰石 粉末和胶原蛋白粉末按８：２的比例混合，制备ＮＨＡＣ人工骨。再将 混合粉末与含ＶＥＧＦ、ＢＭＰ一７的蒸馏水按１：１．８的质量比调和，制备 ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７、ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ人工骨 ，其中含ＶＥＧＦ ３００ｎｇ， 件进行数据处理，多个样本均数之间的比较采用单因素方差分析，Ｐ ＜Ｏ．０５表示差异有统计学意义。 ２结果 ２．１一般情况 术后各组大鼠活动及进食良好，双前肢肿胀，约１周左右肿胀消 退，实验过程中无大鼠死亡。 ￥通讯作者：Ｅ—ｍａｉｌ：ｈｅｎｒｙｇｘｄ＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｎｒ 国匪｜豳—圈同２０１３年１Ｏ月第１ １卷第２８期 ・临床研究・３３１ 小儿腹泻的临床诊治体会 程少晖 （江西省上饶市横峰县铺前中心卫生院江西上饶３３４０００） 【关键词】小儿；腹泻；诊治；体会 中图分类号：Ｒ７２５ 文献标识码：Ｂ 文章编号：１６７１－８１ ９４（２０１３）２８－０３３１－０２ 小儿腹泻病是基层医院中最常见的疾病之一” ，在我国，小儿腹 泻病是卫生部重点防治的儿童四病之一。临床上主要表现为排便次数 病因对合理应用药物治疗至关重要。现将我院近３年来收治的１７３例病 例分析报道如下。 ． １资料与方法 增加，质地变稀薄，严重时为水样便，严重危害小儿健康，及时明确 ２．２苏木精一伊红（ＨＥ）染色 ＢＭＰ一７是一类具有促进成骨细胞生长、增殖作用的蛋白质或多 术后２周：各组有较多的炎性细胞浸润，并有新生的岛状骨组 织，部分区域分化形成透明软骨，ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ．７组中软骨细胞 的生成较其它两组多；４Ｎ：各组均可见软骨成骨过程，并且可见大 肽，能在体内外诱导未分化的间充质细胞分化成软骨细胞，通过骨诱 导作用促进新骨快速生成 。血管生成对骨修复至关重要，ＶＥＧＦ不但 能促进血管再生，还能促进成骨细胞的分化，迁移，扩增 。ＶＥＧＦ￣ 量的成骨细胞，其中ＮＨＡｃ，ｖＥＧＦ／ＢＭＰ一７组软骨细胞量最多，部分区 域有规则排列的骨小梁生成，８Ｎ：ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ组、ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ ＢＭＰ一７组成骨过程活跃，新生骨组织的形成量明显高于ＮＨＡＣ组， 可见成熟的板层骨，两组人工骨材料大部分已经降解，其￣ＮＨＡＣ／ ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组新骨形成量在各组中最多，皮质骨和髓腔的正常关系 恢复。 ２．３ Ｌａｎｅ—Ｓａｎｄｈｕ法组织学评分 各时间点组织学评分ＮＨＡｃ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ－７组高于ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ组 及ＮＨＡＣ组，ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ组高于ＮＨＡＣ组，差异有统计学意义（Ｐ ＜Ｏ．０５），见表１。 促进人工骨的早期血管化过程，并ＲＶＥＧＦ￣ＩＪ量的增加，血管的生成 也增加 。 本实验研究显示在术后２周ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组就有大量的 软骨细胞生成，４Ｎ时人工骨材料明显降解，有规则排列的骨小梁生 成， ， 周时人工骨材料几乎降解完成，可见成熟的板层骨，皮质骨和 髓腔的正常关系恢复。各时间点组织学评分ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组均 高于ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ组及ＮＨＡＣ组，差异有统计学意义 免疫组织化学 染色表明，ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ组及ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组在两周时血管生 长旺盛，在４周时，血管数量达到高峰。随着骨组织的成熟和改建， 不成熟的毛细血管逐渐被少数主要血管取代，血管数量减少。实验结 果表明ＢＭＰ－７亦具有促血管生成作用，ＶＥＧＦ和ＢＭＰ一７联合应用达到 了比单纯使用ＶＥＧＦ有更强的骨修复能力，两者对骨缺损的修复具有 协同作用。 表１各组组织学骨塑形评分比较（叉±Ｓ，ｎ＝６） 参考文献 ［１］Ｋｏｈ ＪＴ，Ｚｈａｏ Ｚ，Ｗａｎｇ Ｚ，ｅｔ ａ１．Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｗｉｔｈ 注： ＜０．０５，ＶＳ．ｔｈｅ ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＮＨＡＣ ｇｒｏｕｐ； ＢＭＰ２／７ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｃｒａｎｉａｌ ｂｏｎｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ Ｄｅｎｔ Ｒｅｓ，２００８， ＜０．０５．ＶＳ．ｔｈｅ ＮＨＡＣ ｇｒｏｕｐ ８７（９）：８４５—９１６． ２．４免疫组织化学血管计数 ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ组及ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组在２周即有大量的毛细血 ［２］孙勇，肖建德．纳米陶瓷人工骨复合血管内皮生长因子修复完全 性骨缺损［Ｊ］．中国组织工程研究与临床康复，２００９，１３（３４）：６６５９： ６６６２．－ 管生成，明显多于ＮＨＡＣ组；随着人工骨材料的不断降解，新生毛细 血管的数量逐渐增多，因此在４周内各组血管逐渐增多；其￣ＮＨＡＣ／ ［３］宋坤修，何爱咏，谢求恩．纳米羟基磷灰石／胶原复合材料结合血 管内皮生长因子修复兔桡骨缺损［Ｊ】．中国组织工程研究与临床 康复，２００９，１ ３（３４）：６６２４—６６２８． ［４】Ａ１一Ｓａｌｌｅｅｈ Ｆ，Ｂｅａｔｔｙ Ｍｗ Ｒｅｉｎｈａｒｄｔ ＲＡ，ｅｔ ａ１．Ｈｕｍａｎ ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎ－－１ ｉｎｄｕｃｅｓ ｏｓｔｅｏｇｅｎｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ａｄｉｐｏｓｅ－－ｄｅｒｉｖｅｄ ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组血管数量在各组中最多；随着新生骨组织的成熟，不 成熟的毛细血管逐渐被少数主要血管所取代，因此ＮＨＡｃ／ｖＥＧＦ组及 ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ／ＢＭＰ一７组在第８周时血管数量减少，见表２。 表２各时间点各组血管计数（ ±Ｓ，ｎ＝６） ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ｆｒｏｍ ｍｉｃｅ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｏｒａｌ Ｂｉｏｌ，２００８，５３（１０）： ９２８—９３６． ［５】Ｌｉ Ｒ，Ｓｔｅｗａｒｔ ＤＪ，ｙｏｎ Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ ＨＲｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｅｌｌ—ｂａｓｅｄ ＶＥＧＦ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ ｏ１３ ｈｅａｌｉｎｇ ｏｆ ａ ｓｅｇｍｅｎｔａｌ ｂｏｎｅ ｄｅｆｅｃｔ［Ｊ］．Ｊ Ｏｒｔｈｏｐ ．注：ａＰ＜０，０５，ＶＳ．ｔｈｅ ＮＨＡＣ／ＶＥＧＦ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ＮＨＡＣ ｇｒｏｕｐ； ＜Ｏ．０５．ＶＳ．ｔｈｅ ＮＨＡＣ ｇｒｏｕｐ Ｒｅｓ，２００９，２７（１）：８－１４． ［６】顾晓东，梁庆威．纳米羟基磷灰石／胶原蛋白复合骨结合ＶＥＧＦ修 复骨缺损的实验研究［Ｊ］中国医科大学学报，２０１１，４０（１０）：９０２—９０５． ３讨论
