葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖

【实验原理】

葡萄糖可由葡萄糖氧化酶氧化成葡萄糖酸并产生过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，能与苯酚及4-氨基安替比林作用产生红色醌化合物。醌的产量与葡萄糖量成正比。醌化合物呈红色，其颜色深浅与葡萄糖含量成正比，在500nm出测定其吸光度，对照标准科计算出葡萄糖的含量。 【实验准备】 一、材料 （1）血清

（2）血浆：以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆 二、试剂

（1）试剂R1：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，苯酚10mmol/L。 （2）试剂R2：磷酸盐缓冲液100mmol，pH7.5，葡萄糖氧化酶16 000U/L，过氧化物酶1 000U/L，4-氨基安替比林2.0mmol/L。

（3）葡萄糖校准液：5.550mmol/L（1mg/ml） （4）生理盐水。 （5）工作试剂（酶酚混合液）：取R1试剂4.5ml与R2试剂0.5ml混合在10ml试管中。三、器材

（1）试管和试管架 （2）移液

（3）722型分光光度计 （4）酶标仪 （5）恒温水浴箱 （6）酶标板 （7）板条

（8）生化培养箱 【实验步骤】

（1） 取酶标板一块，板条一条，设定空白孔A1，标准孔A2、A3，测定孔A4、A5，按

下表加入试剂。 血清或血浆/μl 葡萄糖标准液/μl 生理盐水/μl 工作试剂/μl A1 - - 2 200 A2 - 2 - 200 A3 - 2 - 200 A4 2 - - A5 2 - - 200 200 【实验结果】

葡萄糖（GLU）浓度（mmol/L）=（A测定孔平均值/A校准孔平均值）×5.55 参考值：3.~6.11mmol/L

测得数据为 A2 A3 A4 A5 0.085 0.05 0.03 0.037

(0.037+0.030)/2

——×5.55 ﹦2.75mmol/L

（0.085+0.050/2 【实验讨论】

① 移液操作熟练程度直接影响测定结果，吸样前需多练习 ② 测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。

③ 由于尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，会干扰过氧化物酶反应，出现结果假性偏低，因

此葡萄糖氧化酶法不能直接测定尿液葡萄糖含量，但可直接测定脑脊液葡萄糖含量。 ④ 本法测定葡萄糖原理中反应式第一步是特异反应，第二步特异性较差，所以第二步易引

起误差。

【】

⑤ 葡萄糖氧化酶法测定血清（浆)葡萄糖的反应15min达不到反应终点，应延长到25min1。 ⑥ 新生儿高胆红素血对葡萄糖氧化酶法测定血糖有负干扰影响,除去胆红素后可以较准确

【】

测定血糖2。 【参考文献】

1. 王彦明，实用医技杂志，2008（05）

2. 邹焕荣；何国坚；叶有玩，江西医学检验，2004（03）