大肠杆菌培养方法

大肠菌群测定的操作细则

大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(mpn)表示。1设备和材料1.1温箱：36±1℃。1.2冰箱:0～4℃。

1.3恒温水浴:44.5±0.5℃。1.4天平。1.5显微镜。1.6均质器或乳钵。1.7平皿:直径为90mm。1.8试管。1.9液体。

1.10广口瓶或三角烧瓶:容量为500ml。1.11玻璃珠:直径约5mm。1.12载玻片。1.13酒精灯。1.14试管架。2培养基和试剂

2.1乳糖胆盐蒸煮管:按gb47.28中4.9规定。2.2伊红美绿琼脂平板:按gb47.28中4.25规定。

2.3乳糖发酵管:按gb47.28中4.10规定。2.4ec肉汤:按gb47.28中4.11规定。 2.5磷酸盐缓冲器稀释液:按gb47.28中3.22规定。2.6生理盐水。 2.7革兰氏染色液:按gb47.28中2.2规定。3操作步骤3.1检样稀释

3.1.1以无菌操作将检样25ml(或g)置于存有225ml杀菌生理盐水或其他稀释液的杀菌玻璃瓶内(瓶内予置适度数量的玻璃珠)或杀菌乳钵内,经充份振摇或研磨制成1:10的光滑稀释液。固健康检查样最出色用均质器,以8000-10000r/min的速度处置1min,制成1:10的光滑稀释液。

3.1.2用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml,注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。

3.1.3另挑1ml杀菌液体,按上条操作方式依次搞10倍递减稀释液,每递减吸收一次,改用1两支1ml杀菌液体。

3.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。3.2乳糖发酵试验

将等待检样品注射于乳糖胆盐蒸煮管内,注射量在1ml以上者,用双料乳糖胆盐蒸煮管,1ml及1ml以下者,用单料乳糖胆盐蒸煮管。每一吸收度注射3管,复置36±1℃温箱内,培育24±2h,例如所有乳糖胆盐蒸煮管及都不产气,则可以报告为大肠菌群阴性,例如存有产气者,则按以下程序展开。3.3拆分培育

将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置36±1℃温箱内,培养18-24h,然后取出,观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。 3.4证实试验

在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置36±1℃温箱内培养24±2h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌,即可报告为大肠菌群阳性。3.5报告

根据证实为大肠菌群阳性的管数,查mpn检索表中,报告每100ml(g)大肠菌群的mpn值。4粪大肠菌群(faecalcoliform)

4.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物(见3.2条)转种于ec肉汤管内,置44.5±0.2℃水浴箱内(水浴箱内的水面应高于ec肉汤液面),培养24±2h,经培养后,如所有ec肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的ec肉汤管分别转种于伊红美蓝琼脂平板上,置培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。4.2结果报告

根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查mpn检索表中,报告每100ml(g)粪大肠菌群的mpn值。