C8和C18柱

C8和C18都是反相色谱柱的一种，适用于分析弱极性的物质，而C8在弱极性较强的一侧，C18在极性较弱的一侧。也就是说，C8适合分析弱极性物质里极性稍强的一类物质，C18适合分析弱极性物质里极性更弱的物质。这是他们极性上的差别，但是差别并不是特别明显，一般能用C8分析的物质，在C18上也能分离。

C8碳键短,会有助于对非极性吸附过强的样品的洗脱,随着碳链增长,会增加键合相的非极性作用的面积,对保留值和选择性都有一定影响,随烷基碳链的增长对溶质分离的选择性也会增强。因此C8就更适合分析大分子类的物质，比如一些球蛋白等，都用C8和缓冲盐洗脱剂来配合使用。相反，分子量较小的物质，经常用C18来进行分析和分离。不过对单一或简单组分C8和C18柱没有太大区别

如果遇到性质差别比较大的样品，也就是说比较容易分离的样品，C8比C18的效率高。

对于一些非常大的分子量的非极性物质，用C18由于强保留而使物质不能被正常的洗脱，而用C8柱子就很容易洗脱出来，而又有一些物质出峰过于靠前时用C8柱子很难实现分离，这时如果用C18柱子就有相对更好的分离效果啦。

通常，我们检测样品首先选用C18柱；如果样品的分子量较大，就选C8；如果分子量再大，就选C4。

碳含量

载碳量实际就是指键合相的多少。一般来讲，反相色谱柱含碳量越高，说明硅胶上键合有机相越多，溶质的K值越大，保留越强，分离度越高。但同时，保留强也可能造成拖

尾等峰畸变的可能。

碳含量即填料中的含碳量。填料含碳量用元素分析来测量。可以通过增加碳键的长度或增加键合密度来增加碳含量。在相同的硅胶基质上，相同的键合度，配基分子量越大，碳量越大；因此，C18固定相比C1固定相有更高碳量。相同配基，相同硅胶；覆盖率越高，碳量越大。对于相同配基，相同的表面覆盖率；填料的碳量随孔径的增加而减少，因为比表面积下降了。

键合度

也叫做表面覆盖率。键合度是键合相表面组成的一个非常重要的量，也是决定填料的选择性的一个重要的参数。

键合相是用有机硅烷与硅胶表面进行化学反应而产生的，目的是获得均匀的单分子层。在键合反应中可使用单功能基、双功能基和三功能基的硅烷，多功能基的硅烷可以获得更高的键合密度。填料的选择性决定于键合的密度。尤其是在分离碳水化合物时，不同键合密度表现出不同的选择性。多数商品键合柱属于单功能基的，单功能基的键合覆盖率更容易预测，因为不会有第二功能基产生复杂的副反应，用单功能基硅胶可以得到高的重现性，但是，硅胶表面键合单功能基硅烷比键合多功能基的更容易水解。对于在高或低pH，易于水解的流动相中，最好使用耐用的多功能基键合硅胶。

对于许多反相填料，要进行二次键合以覆盖硅胶表面未被反应的硅醇基。通常使用小分子硅烷，如三甲基氯基硅烷（TMCS），以便获得最大的覆盖率。这个步骤称为封端（end capped）。没有封端的反相色谱填料通常比封端的有复杂多样的选择性。但是，碱性物质在不封端的填料上，容易产生拖尾。三甲基硅烷基（封端基团）在酸性条件下容易水解。

因此，对于不同的被分析物要按实际情况选择封端或者不封端的填料，封端的填料也不能在pH<2的条件下使用。